CC BY
61
36
'6 (30) ноябрь 2008 г.
рекламой в средствах массовой информации и устоявшимися стереотипами применения его в педиатрической практике. Спорным остается вопрос о необходимости применения антигистаминных средств при респираторной инфекции и обструктивном синдроме, поскольку они могут усугубить состояния ребенка, и в ряде случаев замедлить процесс выздоровления.
Таким образом, терапия аллергических и инфекционно-воспалительных заболеваний с применением АГП на сегодня представляет одну из актуальных проблем. С учетом этого, представленные выше данные свидетельствуют о недоста-
точно обоснованном подходе в использовании антигистаминных средств на всех уровнях медицинских служб. Возникает необходимость более широкого изучения существующей практики назначения и потребления АГП. Наиболее реальным способом устранения типичных ошибок в назначении их в области педиатрии на сегодняшний день следует признать проведение фармакоэпидемиологического мониторинга, и на основе его результатов организацию образовательных программ для работников лечебных учреждений с целью повышения эффективности и безопасности оказания помощи детям.
Применение коротких интерферирующих РНК для снижения экспрессии клеточных белков, необходямых для репликации ВИЧ-1
Е. В. ГОЛОВИН, В. А. АНОХИН, А. А. РИЗВАНОВ, А. А. АБРОСИМОВА, Е. А. МАРТЫНОВА ГОУ ВПО «Казанский ГМУ Росздрава», ГОУ ВПО Казанский государственный университет им. В. И. Ульянова-Ленина.
УДК 616-097
В работе изучалась значимость для клетки человека клеточных белков, используемых вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) на этапе ядерного импорта преинтеграцион-ного комплекса ВИЧ-1.
Преинтеграционный комплекс ВИЧ-1 — одна из наименее изученных молекулярных структур в патогенезе ВИЧ-инфекции. РНК-интерференция — новый, но уже получивший мировое признание, инструмент для изучения межмолекулярных процессов. Короткие интерферирующие РНК (киРНК) позволяют избирательно заблокировать синтез любого белка в клетке на посттранскрипционном уровне. Гены ВИЧ склонны к частым мутациям и сильно изменчивы, что препятствует стабильному эффекту блокирования их экспрессии. Гены человека достаточно стабильны, поэтому при применении РНК-интерференции следует ожидать более стойкий эффект подавления экспрессии генов клетки-хозяина по сравнению с генами вируса. Оригинальность данной работы заключается в применении для изучения патогенеза ВИЧ-инфекции метода РНК-интерференции, направленного не на вирусные гены, как в большинстве исследований в этой области, а на гены, кодирующие клеточные белки, взаимодействующие с белками вируса.
Цель: определить принципиальную возможность безопасного для клетки человека применения препаратов киРНК для прерывания цикла внутриклеточного развития ВИЧ-1 на этапе ядерного транспорта преинтеграционного комплекса ВИЧ-1.
Методы: разработка киРНК с использованием базы данных GeneBank и он-лайн программного обеспечения The Whitehead siRNA Selection Web Server. Верификация специфичности киРНК с помощью встроенного поиска с использованием алгоритма BLAST и геномной библиотеки человека. Культивирование клеток HeLa в среде RPMI-1640 с добавкой
10% фетальной коровьей сыворотки (FBS) и пенициллина-стрептомицина (пенстреп) в инкубаторе при 37 0С и 5% содержании СО2 в атмосфере. Трансфекция киРНК с использованием электропоратора Gene Pulser II Electroporation System (контроль — плазмида pEGFP-N2). Оценка уровня экспрессии генов-мишеней с использованием ПЦР в реальном времени. Подсчет количества и оценка жизнеспособности клеток HeLa до и после электропорации с использованием набора CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay. Статистический анализ проводился с использованием Т-теста Стьюдента в программе Microsoft Excel 2007.
Результаты: разработаны 6 препаратов киРНК специфичных к последовательностям генов MHGA, INI-1 и PML. Установлена высокая специфичность препаратов киРНК к генам-мишеням. Электропорация киРНК приводила к снижению уровня специфичных мРНК до 5-20% по сравнению с контролем. При электорпорации EGFP-контроля эффективность трансфекции составила 50%, жизнеспособность клеток — 40%. После электропорации киРНК, подавляющих Ini1, HMGA и PML, жизнеспособность клеток HeLa была выше (р<0,05) по сравнению с контролем.
Выводы: трансфекция разработанных препаратов киРНК эффективно подавляет экспрессию генов Ini1, HMGA и PML, при этом культура клеток человека сохраняет жизнеспособность.
Полученные результаты доказывают перспективность использования данных препаратов киРНК для дальнейшего изучения патогенеза ВИЧ-инфекции на молекулярном уровне с целью разработки принципиально новых способов лечения и профилактики ВИЧ-инфекции.
