CC BY
16УДК 636:611.018:577.114:57.083.16
ПРИМЕНЕНИЕ КОМБИНИРОВАННОГО ГИСТОХИМИЧЕСКОГО МЕТОДА ОКРАСКИ ДЛЯ ПОЛИСАХАРИДОВ И ПРОТЕИДОВ В ВЕТЕРИНАРИИ
Неврова Е.В., студент 2 курса спец. «Ветеринария» Научный руководитель: к.в.н., доцент Клейменова Н.В. ФГБОУ ВПО Орел ГАУ
АННОТАЦИЯ
Преимущество методов - выявление на одном срезе различных химических компонентов. Комбинированный метод выявления полисахаридов (по Риттеру-Олессону) представляет собой сочетание двух методов - ШИК-реакции и метода Гале, что дает возможность выявлять в одном и том же срезе кислые мукополисахариды и мукопротеиды.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА
Методы, красители, гистохимический, полисахариды, протеиды, заболевания, гликопротеиды.
ABSTRACT
The advantage of this method is identification of different chemical components on one slice. Combined method of polysaccharides detection (according to Ritter-Olesson) is a combination of two methods - Schiff (PAS)-reaction and method of Gale that makes the detection of acid mucopolysaccharides and acid mucoproteids in the same slice possible.
KEY WORDS
Method, dyes, histochemical, polysaccharide, proteids, disease, glycoproteids.
Длительное время для изучения химического состава клеток и тканей пользовались исключительно классическими биохимическими методами, в основе которых лежит суммарное определение химических веществ в размельченной ткани (гомогенате). Однако, несмотря на свои положительные качества, эти методы не обеспечивали полного представления о локализации тех или иных химических веществ в различных структурных компонентах клеток и тканей. Поиски методов, с помощью которых можно было бы определять локализацию химических веществ в целостных микроструктурах органов и тканей, привели к созданию гистохимического метода, объединяющего в себе гистологический и биохимический методы.
При гистохимических реакциях неорганические и органические вещества, входящие в состав клеток, вступают в химическую реакцию с различными реактивами (красителями) и образуют окрашенные продукты реакции. По степени интенсивности окраски этих продуктов можно до некоторой степени судить и о количественном содержании химического вещества в той или иной структуре.
Результаты и их обсуждение
В основе большинства гистохимических реакций лежат общие принципы:
- определенные химические группировки окрашиваются тем или иным красителем;
- краситель растворяется в определенном субстрате, входящем в состав клеточных структур;
- некоторые химические компоненты клеток, такие, как ДНК, полисахариды, неспособны реагировать с красителями. В таких случаях прибегают к превращению их химических группировок в реакционно-активное состояние (гидролиз ДНК
хлористоводородной кислотой, окисление полисахаридов йодной кислотой). При этом освобождаются или создаются вновь химические группировки, которые способны реагировать с соответствующими реактивами, в результате чего образуется окрашенный продукт реакции;
- при выявлении локализации некоторых компонентов клетки прибегают к многоступенчатым промежуточным реакциям и переводу неокрашенного продукта реакции в окрашенный.
Новый метод получил широкое распространение в исследовательской практике. В настоящее время ни одна морфологическая лаборатория не обходится без применения гистохимических методик.
Занимаясь в Студенческом научном кружке по патологии животных на базе ИНИИЦ ФГБОУ ВПО «Орел ГАУ», для выявления в тканях кислых мукополисахаридов и мукопротеидов, использовали метод комбинированной гистохимической окраски для полисахаридов и протеидов.
Комбинированный метод выявления полисахаридов (по Риттеру-Олессону) представляет собой сочетание двух методов - ШИК - реакции и метода Гале, что дает возможность выявлять в одном и том же срезе кислые мукополисахариды и мукопротеиды.
Мукополисахариды - это природные полисахариды, состоящие из двух или нескольких различных моносахаридов, а также остатков уроновых кислот, аминосахаров. Биологическое значение кислых мукополисахаридов:
• они являются опорным материалом;
• играют активную роль в процессах взаимодействия организма с инфекционными агентами;
• нейтральные мукополисахариды входят в состав многих ферментов и гормонов;
В организме мукополисахариды находятся в виде соединений с белками -мукопротеидов.
При недостатке мукополисахаридов возникают группы метаболических заболеваний соединительной ткани, связанных с нарушением обмена кислых гликозаминогликанов (МПС). Эти заболевания связаны с наследственными аномалиями обмена, проявляются в виде «болезни накопления» и приводят к различным дефектам костной, хрящевой, соединительной тканей.
Мукопротеиды (гликопротеиды) - это сложные белки, состоящие из ковалентно связанных между собой пептидного (белкового) и углеводного компонентов. Гликопротеиды обнаружены в организме животных, бактерий; они входят в состав клеточной оболочки и внутриклеточных мембран, циркулируют в кровяном русле в качестве транспортных молекул (трансферрин, церуплазмин).
К гликопротеидам относятся: некоторые гормоны (гонадотропный и фолликулостимулирующий); ферменты; иммуноглобулины.
Гликопротеиды содержатся в различных слизях животного организма, выполняя защитную функцию, играют роль в межклеточных взаимодействиях, участвуют в ионном обмене клетки, иммунологических реакциях, дифференцировке тканей, явлениях межклеточной адгезии.
В клинической практике распространено суммарное определение гликопротеидов в биологических жидкостях химическими и электрофоретическими методами. Результаты определения гликопротеидов имеют важное дифференциально - диагностическое значение при некоторых заболеваниях.
Вывод
Благодаря методу комбинированной гистохимической окраски для полисахаридов и протеидов обеспечиваются существенные преимущества в изучении морфофункциональной организации животных тканей, т.к. выявленное химическое вещество можно связать с определенной тканевой или клеточной структурой, т.е. установить его локализацию.
Гистохимические методы находят широкое применение в гистологии, цитологии, эмбриологии, патологической анатомии, экспериментальной и клинической морфологии. С помощью разнообразных методов современной гистохимии можно судить об особенностях функционирования различных тканевых и клеточных структур, определять характер и темп обменных процессов в клетках и тканях, обнаруживать ранние проявления заболеваний.
Библиография
1. Гиляров, А. В. Основы гистологической техники / А. В. Гиляров, Д. Э. Коржевский; Изд-во. : СецЭлит, 2010. - 96 с.
2. Данилова, Р. К. Руководство по гистологии / Р. К. Данилова; Изд-во СецЭлит, 2010. - 328 с.
3. Клейменова, Н. В. Гистохимические методы исследования тканей животных / Н. В. Клейменова, И. С. Клейменов; м-лы III Междунар. Интернет-конф. «Инновационные фундаментальные и прикладные исследования в области химии -сельскохозяйственному производству». - Орел. - 2010. - С. 91-93.
4. Клейменова, Н. В. Лабораторные животные в экспериментальной физиологии и работа с ними в условиях вивария [метод. реком. ] / Н. В. Клейменова, И. С. Клейменов. - Изд-во Орел ГАУ. - 2011. - 59 с.
5. Клейменова Н. В. Основы гистологического исследования тканей животных: учеб.-метод. пособие / Н. В. Клейменова [и др.]. - Изд-во ОрелГАУ. - 2013. -95 с.
