CC BY
30
Выводы. При физиологическом течении беременности, в венозной крови, взятой из дистального отрезка пуповины после ее пересечения при рождении ребенка, обнаруживаются высокое содержание иммуноглобулинов классов О и следовые концентрации 1§ А и М, не имеющих способность проникать трансплацентарно от матери к плоду в отличие от 1§ О. Осложненное развитием гестоза течение беременности сочетается с увеличением содержания иммуноглобулинов классов А, М, О в пуповинной крови новорожденных, коррелирующее с тяжестью клинических проявлений указанного осложнения беременности. Активация иммунопоэза у матери и плода при гестозе может быть одним из косвенных признаков значения иммуноаллергического фактора в механизмах индукции и прогрессирования гестоза.
Литература
1. Архангельский С.М. Прогноз течения и исхода тяжелого гестоза при оперативном родоразрешении: Дис...д-ра. мед. наук.-Саратов., 2002.
2. Глухова Т.Н. Патогенез расстройств системной гемодинамики, регионарного кровотока и микроциркуляции при гестозе. Патогенетическое обоснование принципов их медикаментозной коррекции: Дис.д-ра. мед. наук.- Саратов., 2004.
3. Глухова Т.Н. и дрН Успехи совр. естествознания.- 2002.-№ 2.- С. 56-61.
4. Елютин Д.В. и др.// Анестезиол. и реаниматол.- 2001.-№6.- С. 60-63.
5. Ледванов М.Ю., Киричук В.Ф. Введение в клиническую иммунологию.- М., 1996.
6. Петрищев Н.Н. Дисфункция эндотелия. Причины, механизмы, фармакологическая коррекция.- СПб., 2003.
7. Рева Н.Л. // Вятский мед. вестник.- 2004.- № 2.- С. 31.
8. Садчиков Д.В. и др. Гестоз.- Саратов, 1999.
9. Сидорова И.С. Поздний гестоз.- М: Медицина, 1996.
10. Сидорова И.С. Гестоз.- М, 2003.
11. Сидорова И.С. и др. // Акушерство и гинекология.-2006.- №6.- С.10-12.
12. Токова З.З.// Пробл. репродукции.- 2004.- № 2.- С. 461.
13. Чеснокова Н.П. и др. Инфекционный процесс.- М., 2006.
УДК 535.379: 616-053.31-07
ПРИМЕНЕНИЕ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНЫХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В НЕОНАТОЛОГИИ
Л.Д.ПАНОВА*
В последние годы отмечается повышенный интерес к выяснению общих закономерностей и молекулярных механизмов развития различной перинатальной патологии.
По современным представлениям, многие физиологические и метаболические процессы, протекающие в организме ребенка и взрослого, связаны со свободно-радикальным окислением (СРО) [1-3]. Скорость свободно-радикального окисления и содержание свободных радикалов в организме поддерживается на определенном уровне многоступенчатой системой регуляции [4]. При действии неблагоприятных факторов внешней среды, метаболическом превращении вводимых в организм лекарственных препаратов и окислении чужеродных соединений, в ходе заболеваний, скорость свободно-радикального окисления и содержание свободных радикалов в тканях и органах значительно изменяется [5, 6]. В этом случае нарушение свободно-радикального окисления становится неспецифической причиной и молекулярной основой патогенеза заболеваний, причем изменение СРО в организме предшествует появлению симптомов заболевания [7].
В то же время нестабильность радикалов, быстрый распад и включение в метаболизм продуктов окисления, предъявляет повышенные требования к методам исследования. Они должны обладать высокой чувствительностью, надежностью, быть удобными в эксплуатации, простыми, доступными и нетрудоемкими, исключать возможность изменения СРО во время приготовления материала к анализу. Перспективным способом изучения СРО является регистрация сверхслабого свечения, возникающего при взаимодействии радикалов. С помощью хемилюминесцентных
методов удается выявить наиболее реакционно-способные корот-ко-живущие радикалы, которые другими способами не регистрируются [8]. Хемилюминесценция (ХЛ) сопровождает свободнорадикальные реакции перекисного окисления липидов (ПОЛ) и образования радикалов кислорода, получивших обобщенное название - активные формы кислорода (АФК). О возможностях использования ХЛ в научной и практической работе говорят материалы исследований, регулярно излагаемые на Международных конференциях и в публикациях, однако данные об использовании данного метода в неонатологии малочисленны [9, 10, 11].
Цель исследования - обобщение опыта применения хеми-люминесцентных методов исследования в неонатологии.
Материалы и методы. Методом хемилюминесценции изучалось СРО фагоцитирующих клеток крови, функциональное состояние почек новорожденных с перинатальными нефропатиями на фоне инфекционной патологии, а также влияния различных препаратов, применяемых при лечении перинатальных инфекций и нефропатий на процессы СРО in vitro.
В клинической части работы основную группу составили 316 новорожденных детей с инфекционно-воспалительными заболеваниями (ИВЗ), находившихся на лечении в неонатальном центре РДКБ г.Уфы, имевших сопутствующей патологией различные заболевания органов мочевой системы (ОМС). Критерии включения в основную группу: наличие ИВЗ в сочетании с перинатальной патологии почек, согласие родителей с учетом этических аспектов проведения клинических испытаний с участием детей. Критерии исключения из основной группы: отсутствие ИВЗ, отсутствие перинатальной патологии почек, несогласие родителей. В зависимости от характера патологического процесса в почках новорожденные дети основной группы были распределены на 6 подгрупп. В первую подгруппу включены 49 новорожденных с инфекционно-воспалительными заболеваниями органов мочевой системы (ИОМС), во вторую - 36 младенца с дисмета-болической нефропатией (ДМН), в третью - 31 ребенок с гипок-сической нефропатией (ГН), в четвертую - 30 детей с интерстициальным нефритом (ИН), в пятую - 14 новорожденных с развитием острой почечной недостаточности (ОПН) и в шестую подгруппу - 156 детей с врожденными пороками развития почек.
В группу сравнения с учетом принципов доказательной медицины включено 217 младенца из неонатального центра с различными ИВЗ, но без патологии органов мочевой системы. Контрольную группу, сформированную методом случайной выборки, составили 44 здоровых доношенных новорожденных, из физиологического отделения родильного дома, родившихся от здоровых матерей без осложненного течения беременности и родов. Наряду с общепринятыми методами исследования функций почек и иммунологического статуса (общеклинические и биохимические показатели крови и мочи, УЗИ почек с допплерографией, структуропостроение мочи с Литос-реагентом, иммунограмма и др.) проводилось исследование ХЛ крови и мочи.
Сверхслабое свечение мочи изучали в межвузовской лаборатории технических систем медико-экологических исследований Башкирского государственного медицинского и Уфимского государственного авиационного технического университетов на установке для регистрации хемилюминесценции - ХЛ-003 [12]. Методика определения ХЛ мочи была модифицирована нами для изучения состояния почек у новорожденных. Ее суть заключалась в следующем: отбирали пробу утренней мочи в количестве 10 мл, помещали в светоизолированную камеру прибора, в течение одной минуты регистрировали темновой ток, затем открывали шторку прибора и одну минуту измеряли спонтанное свечение мочи. Для инициирования реакций, сопровождающихся ХЛ, к пробе добавляли при постоянном перемешивании 0,5 мл раствора сернокислого железа. Индуцированное свечение измеряли в течение 5 минут. Вся процедура исследования ХЛ мочи занимала не более 5-7 минут. Светосумму свечения мочи определяли как площадь под кривой записи ХЛ в 1 см2 и выражали в условных единицах. Величина спонтанного свечения (Сп) характеризовала интенсивность процессов свободно-радикального окисления в естественных условиях, амплитуда быстрой вспышки (А) зависела от содержания перекисных продуктов в моче, а светосумма свечения (S) являлась интегральным показателем, зависящим от состояния концентрационной и выделительной функций почек.
Исследование люминол-зависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ) цельной крови проводилось на том же приборе по стан-
* Башкирский ГМУ
дартной методике [13]. Рассчитывали максимальную амплитуду свечения (Асп) в усл.ед. и светосумму - 8. Величина пика ХЛ зависит от фагоцитарной активности клеток, а светосумма является интегральным показателем генерации активных форм кислорода. Интенсивность ХЛ в присутствии люминола коррелирует с потреблением клетками кислорода и степенью завершенности фагоцитоза [3]. Для изучения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанного с кислород-зависимыми процессами, регистрировали стимулированную зимозаном ЛЗХЛ крови. Для оценки емкости резерва функциональной активности фагоцитов крови применяли формулу:
ФЕФ = (Аст - Асп) / Асп,
где Асп - амплитуда спонтанной ХЛ, Аст - амплитуда стимулированной ХЛ. Для традиционной оценки состояния ПОЛ проводилось изучение содержания малонового диальдегида (МДА) в крови по определению конечных продуктов липоперок-сидации (ТБК-активных продуктов ПОЛ).
Экспериментальная часть работы заключалась в исследовании влияния ряда препаратов, применяемых для лечения ИВЗ (антибиотики различных групп) и патологии ОМС (ксидифон, тиосульфат натрия), а также БАД лецитин на процессы СРО в модельных системах, генерировавших АФК и в субстратах, в которых протекали реакции перекисного окисления липидов (ПОЛ). Были использованы следующие антибиотики: полусинте-тические пенициллины третьего поколения - амоксицил-лин/клавулановая кислота (амоксициллина тригидрат с клавула-новой кислоты калиевая соль), макролиды первого (эритромицин) и нового поколения - вильпрафен (джозамицин), цефалос-порины 1-го поколения - цефазолина натриевая соль, цефалос-порины 2-го поколения - цефуроксима натревая соль, цефалос-порины 3-го поколения - цефотаксима натриевая соль, цефопера-зона натриевая соль, аминогликозиды - гентамицина сульфат, амикацина сульфат, нетилмицина сульфат.
В качестве модели, где генерировались АФК, использовали систему цитрат-фосфат-люминол и фагоцитирующие клетки цельной крови, вырабатывающие АФК в процессе фагоцитоза [14]. Препараты, в концентрациях, соизмеримых с дозой, создаваемой в организме при введении препаратов внутрь, добавляли в цитрат-фосфатный буфер с люминолом. Генерацию АФК инициировали введением раствора сернокислого железа (модель 1). Появление радикалов оценивали методом ХЛ. Дополнительно изучали влияние препаратов на образование АФК в фагоцитирующих клетках нативной гепаринизированной крови новорожденных детей с неонатальной инфекцией и нефропатией нуждающихся в антибактериальной терапии (модель 2). Наработка АФК фагоцитами сопровождается свечением, которое усиливается в присутствии люминола. Влияние препаратов на ПОЛ изучали в модельной системе липосом (модель 3). При введении ионов железа идет окисление ненасыщенных жирных кислот, входящих в состав липидов, и образуются молекулярные продукты в возбужденном состоянии. При переходе их в основное состояние излучаются кванты света, которые регистрировали с помощью хемилюминесцентного метода.
Антиокислительная активность исследуемых веществ определялась по степени угнетения ХЛ в присутствии исследуемых веществ и пересчитывалась в % от контроля по формуле:
[100 - (8 ХЛ контроль - 8 ХЛ с препаратом)] х 100%.
8 ХЛ контроль
Статистическую обработку результатов исследования проводили в операционной среде Windows ХР с использованием программы «8ТАТІ8ТІСА 6.0».
Результаты. Интегральными показателями хемилюмино-граммы мочи являются спонтанное свечение (Сп), амплитуда быстрой вспышки (А) и светосумма свечения (8). Известно, что спонтанного свечения характеризует интенсивность процессов СРО в естественных условиях без вмешательства извне. Амплитуда быстрой вспышки зависит от содержания перекисных продуктов в моче. Светосумма свечения является интегральным показателем, свидетельствующим о возможности протекания процессов СРО в моче под воздействием инициатора. Параметры свечения мочи с момента рождения и в течение раннего неонатального периода практически не изменялись, увеличивалась интенсивность свечения после переходного периода, оставаясь ниже по сравнению с младенцами и детьми раннего возраста в 10-15 раз. При этом характер ХЛ мочи не зависел от пола новорожденного ребенка. Полученные результаты свидетельствовали
о сниженной функциональной активности почек в неонатальном периоде, поскольку установлено, что изменение выделительной функции даже без органических поражений почек отражается на характере ХЛ мочи [14]. Изучение показателей ХЛ мочи у здоровых новорожденных контрольной группы, подтвердили ранее полученные результаты интегральных показателей ХЛ мочи, которые рекомендованы, как норма в неонатальном периоде.
Исследование корреляционных связей между указанными переменными ХЛ с определением коэффициента линейной и ранговой корреляции выявило наличие слабой положительной взаимосвязи между светосуммой излучения и амплитудой быстрой вспышки (г= 0,49, р= 0,019), что свидетельствовало о том, что каждый из показателей является самостоятельным и несет определенную информацию, характеризует различные стороны и механизмы развития свечения.
Результаты проведенного корреляционного анализа с другими показателями, характеризующими функцию почек, позволили выявить обратную взаимосвязь интенсивности ХЛ с уровнем мочевины крови (г= -0,441, р= 0,046) и лейкоцитурии (г = -
0,436, р = 0,048). Не установлена истинная связь между параметрами свечения и биохимическими показателями мочи, а также удельным весом мочи. Очевидно, это связано с тем, что колебания нормальных показателей биохимических исследований как крови, так и мочи в периоде новорожденности значительные, а параметров хемилюминограммы мочи - малые. Светосумма ХЛ мочи коррелировала с концентрационной и выделительной функцией почек.
Таблица 1
Показатели ХЛ мочи у младенцев с перинатальной патологией ОМС
Наблюдаемые группы Показатели ХЛ мочи, усл.ед.
А 8
Контрольная группа (п=44) 12,7±1,4 2,5±0,2
Основная группа (п=316) 1,1±0,3 3,4±0,4
Группа сравнения (п=217) 0,7±0,1 2,2±0,3
р 1-2 <0,05 <0,05
р1-3 <0,05 > 0,05
р?-3 > 0,05 <0,05
Примечание: р^ - достоверность различий показателей основной и контрольной групп, рю - достоверность различий показателей контрольной группы и группы сравнения, р2-3 - достоверность различий показателей основной группы и группы сравнения.
Как видно из табл.1, у новорожденных детей основной группы в сравнении с группой здоровых детей и с младенцев с ИВЗ по показателям ХЛ мочи установлена достоверная активация процессов СРО в моче. Содержание перекисных продуктов в моче младенцев основной группы было более высокое при сепсисе, чем при локальных формах и пневмониях, о чем свидетельствовало достоверное различие в показателях интенсивности ХЛ мочи (р <0,015). У 85% детей, рожденных от матерей с хроническим пиелонефритом и у 51% новорожденных на фоне применения нефротоксических антибиотиков (гентамицин, амикацин) с учетом чувствительности микрофлоры выявлено достоверное повышение интенсивности ХЛ мочи (р<0,05). В последующем, после углубленного клинико-лабораторного обследования у этих детей была диагностирована перинатальная нефропатия (врожденная и лекарственная). Изменение интенсивности ХЛ мочи в наших наблюдениях предшествовало увеличению клиренса креа-тинина, мочевины, появлению мочевого и отечного синдромов, что подтверждало высокую чувствительность метода регистрации ХЛ мочи в диагностике перинатальных нефропатий различного генеза. ХЛ мочи изменялась при любой нефропатии, не зависела от нозологической формы. Чувствительность метода составила 92,8%, специфичность - 68,9%, точность - 83,6%.
Метод регистрации ХЛ мочи является информативным, неинвазивным, доступным экспресс-методом оценки функционального состояния почек у новорожденных и может быть рекомендован для широкого применения в неонатологической практике с целью контроля безопасности применения антибиотиков, выявления перинатальных нефропатий на доклинической стадии.
Хемилюминесценция клеток крови. Поскольку одной из причин, приводящих к инфекционной патологии, считают иммунологические нарушения, с целью оценки кислородзависимого метаболизма фагоцитирующих клеток крови, наряду с традиционным иммунологическим обследованием, нами исследовалась ЛЗХЛ крови. Показатели ЛЗХЛ крови в неонатальном периоде
имеют возрастные особенности: средние показатели А свечения составляли 1,76±0,13 отн.ед., 8 - 6,13±0,46 отн.ед. Корреляционный анализ позволил выявить наличие высокодостоверной зависимости между А быстрой вспышки хемилюминограммы и уровнем конечных продуктов ПОЛ, а так же 8 ХЛ, что подтверждает возможность с различных сторон охарактеризовать состояние ПОЛ в крови. Поскольку в норме ПОЛ и система АОЗ находится в определенном равновесии, поддерживая гомеостаз организма, существует прямая корреляционная зависимость между А и 8 хемилюминограммы. Не выявлено значимых корреляций показателей фагоцитоза, НСТ-теста и 8 ЛЗХЛ, что, согласуясь с данными [3, 12], подтверждает то, что состояние кислородзависимого метаболизма фагоцитирующих клеток крови является процессом, наиболее достоверно регистрируемым с помощью метода ХЛ крови и требующим целенаправленной коррекции.
Таблица 2
Показатели ХЛ ЛЗХЛ крови и конечных продуктов ПОЛ у младенцев с перинатальной патологией ОМС
Наблюдаемые группы Показатели ХЛ крови (М ± m) TБК- акт.пр., ед.опт.плотн. (М ± m)
A S ФЕФ
Контроль (n=44) 1,8±0,1З б,13±0,5 4,05±0,75 0,07±0,001
Основная группа(п=31б) 5,02±0,8 18,З±2,9 3,59±0,б 1,2б±0,17 п=108
Группа сравнения (п=217) 2,79±0,54 10,4±2,1 3,42±0,б4 1,07±0,2б
рі-2 0,012 0,011 > 0,05 0,0001
рі-з > 0,05 > 0,05 > 0,05 0,0001
р?-З > 0,05 0,045 > 0,05 > 0,05
Примечание: р1_2 - достоверность различий показателей основной и контрольной групп, р1_э - достоверность различий показателей контрольной группы и группы сравнения, р2-3 - достоверность различий показателей основной группы и группы сравнения.
Функциональная емкость фагоцитов коррелировала как с А спонтанной и стимулированной ХЛ, так и со 8 стимулированного свечения, что указывает на возможность изменения функционального резерва фагоцитирующих клеток как результата ускорения генерации активных форм кислорода, так и с ингибированием данного процесса. Обратная корреляционная зависимость между уровнем 1§А и 8 ЛЗХЛ объясняется особенностями иммунологического статуса новорожденных, а именно физиологическим снижением уровня 1§А. Возрастание иммуноглобулинов данного класса обычно говорит об антигенной стимуляции организма ребенка на фоне снижения фагоцитарной активности при бактериальной инфекции.
Как видно из табл.2, у новорожденных детей основной группы в сравнении с группой здоровых детей и с младенцев с ИВЗ установлена достоверная активация процессов СРО фагоцитов крови. Усиление процессов ПОЛ, выявленное по содержанию вторичных продуктов пероксидации, характерно как для всех групп. Однако в основной группе содержание ТБК-акт.пр. было повышено в 18 раз, а в группе сравнения - в 15 раз по отношению к контролю. Полученные результаты свидетельствуют о том, что интенсификация свободнорадикальных процессов может являться одним из патогенетических звеньев перинатального поражения почек.
Рост интенсивности ЛЗХЛ крови, свидетельствующее об усилении процессов СРО фагоцитов, наблюдалось при всех клинических формах нефропатий неонатального периода: в минимальной степени в 1,7 раза по отношению к группе контроля - при ДМН, в 2,6 раза по отношению к группе контроля и в 1,7 раза по отношению к группе сравнения - при ГН и ВПР почек, и в максимальной в 8,7 раза и 5,8 раз соответственно - при ИОМС. При ИОМС установлено статистически значимое выраженное снижением ФЕФ (-0,75±0,001 против 3,4±0,06 в группе сравнения и 4,1± 0,08 в группе контроля)(р<0,05), что может являться одним из патогенетических звеньев развития данной патологии. Установлены достоверные различия в показателях 8 ЛЗХЛ крови при ИОМС, ДМН, ГН и ВПР. Показатели индуцированной ХЛ крови были в обратной зависимости от степени недоношенности и ЗВУР (р<0,05). Отмечена взаимосвязь между уровнем ТБК-акт.пр, ФЕФ и сепсисом у младенцев (г=-0,311, р=0,015 и г=0,284, р=0,039 соответственно). Выявлена прямая корреляционная зависимость между показателями функционального состояния печени: тимоловой пробы, АЛТ, ГГТ и интенсивностью ЛЗХЛ крови (г=+0,441, р=0,019; г=+0,338, р=0,035; г=+0,490,
р=0,021 соответственно). Итоги корреляционного анализа говорили о негативном влиянии ОПН на пероксидацию липидов. Люминолзависимое свечение крови в основном связано с генерацией активных форм кислорода клетками при фагоцитозе и характеризовало состояние гуморально-клеточного иммунитета Изменение интенсивности ХЛ предшествует появлению клинических симптомов заболевания, позволяет выявить ранние стадии нарушения защитно-приспособительных реакций организма, диагностировать состояние предболезни [1, 13].
Хемилюминесценция модельных систем. При проведении экспериментальной части работы интегральным и наиболее информативным показателем ХЛ являлась величина светосуммы свечения (8). Как видно из табл. 3, при добавлении антибиотиков, в той или иной степени уменьшалось свечение по отношению к контролю во всех субстратах, что подтверждало антиокис-лительные свойства препаратов. В большинстве случаев с увеличением концентрации препарата не отмечалось нарастания угнетения ХЛ в модельных системах 1 и 3. В модели 1 амикацин и цефуроксим почти не изменили значение светосуммы (94,5-96% от контроля). Несколько значительнее подавлял ХЛ цефоперазон (до 72,2%). При добавлении макролидов - эритромицина и джо-замицина светосумма уменьшилась примерно в 2 раза. Угнетение свечения вызывали амоксициллин/квалулановая кислота, цефо-таксим в максимальной концентрации и аминогликозиды - ген-тамицин и нетилмицин. В системе липосом, моделирующей реакции ПОЛ, изменение светосуммы ХЛ было менее выражено, чем в предыдущей системе. Снижение свечения в большинстве наблюдений составило в процентном отношении <30%. Лишь цефоперазон уменьшил контрольное значение свечения в 2 раза.
Таблица 3
Влияние антибиотиков на хемилюминесценцию модельных систем
Кон- Модель 1 (АФК) Модель 2 (фагоцитоз) Модель 3 (ПОЛ)
Препарат цен- трация, мг/мл светосумма свечения % от контроля свето- сумма свечения % от контроля свето- сумма свечения % от контроля
Контроль 0 Зб±1,7 100 51,7 100 49,8 100
Амокси- 0,25 5,8±0,0б 16,1* 4б±3,5 89* З2,З±1,5 64,9*
циллинI 0,1 5,8±0,0б 16,1* - - З4,1±1,5 68,5*
клавула- новая кислота 0,025 12,8±0,7 35,5* З5,8±1,7 71,9*
Эритро- 0,1 1б,4±0,2 45,5 42,1±2,2 84,5*
мицин 0,05 25,8±1,1 71,7* 1б,9±0,2 32,7* 44,1±2,З 88,5*
Джозами- 0,25 15,9±0,б 44,2* - - 40,1±2,1 80,5*
цин 0,1 22,0±0,8 61,1* 4б.1±1,7 89,2* 44,2±2,б 84,3*
0,5 12,8±0,7 35,6* - - 42,1±2,2 84,5*
Цефазолин 0,1 27,5±1,4 76,4* - - 45±2,7 90,4*
0,05 2З,7±1,З 65,8* 23,б±0,9 45,6* 47±З,З 94,3*
Цефурок- 0,25 34,б±2,2 96,1* - - З9±1,8 78,3*
0,1 28,2±1,2 78.6* - - 41,1±2,1 82,5*
сим 0,025 40,9±2,б 113,6 49,5±2,8 95,7
Цефотак- 1,0 2,8±0,02 7,8* - - ЗЗ,2±1,З 66,7*
0,5 9,7±0,05 26,9* - - 35,б±1,5 71,5*
сим 0,1 20,8±0,9 57,8* 4б,8±2,8 90,5 40,б±2,1 81,5*
Цефопера- 1,0 0,5 2б±1,2 29,2±1,З 72,2* 81,1* - - 24,4±1,2 49*
зон 0,1 З0,7±2,0 85,2* 20,б±0,9 39,8 31,5±1,б 63,3*
Гентами- 0,2 14,8±0,б 41,1* - - З8,4±2,З 77*
цин 0,1 15,З±0,7 42,5* 27,0±0,б 52,2* 40,5±81,З 81,3*
Амикацин 0,25 27,9±1,9 77,5* - - Зб,9±1,8 74,1*
0,1 З4±2,1 94,5* 41,5±2,2 80,2* З8,8±1,5 77,1*
Нецилми- 0,2 12,8±0,б 35,6* - - З4,9±2,1 70*
цин 0,1 1З,9±0,8 38,6* 40,5±2,1 78,3 Зб,8±2,2 73,9
Примечание: приведены средние значения 10 измерений. * - p<0,05
В нашем эксперименте снижение интенсивности ХЛ ин-тактных клеток отмечалось в присутствии антибиотиков «старого» поколения - эритромицина и цефазолина, а также цефопера-зона. Гентамицин на 50% оказывал ингибирующее действие на кислородный взрыв при инкубации с интактными фагоцитами цельной крови. Этим, возможно, объясняется иммуносупрессив-ное действие данных антибиотиков. Антибиотики нового поколения - цефуроксим, цефотаксим, амикацин, нетилмицин, джо-замицин и амоксициллин/квалулановая кислота незначительно угнетали генерацию АФК фагоцитами крови, в меньшей степени подавляя функциональную активность фагоцитов. Усложнение пространственной химической структуры, наличие дополнительных гидроксильных и аминогрупп усиливало антиокислительную активность аминогликозидов и цефалоспоринов in vitro в сравнении с другими антибиотиками. Антиоксидантное действие анти-
биотиков объяснялось их свойством нейтрализовать АФК и блокировать свободно-радикальные реакции. Ксидифон является активным комплексоном, регулирует кальциевый обмен, предотвращает кристаллообразование в мочевыводящих путях. Натрия тиосульфат - десенсибилизирующее, дезинтоксикационное, противовоспалительное средство. Лецитин - это комплекс фосфолипидов, разрешен для использования в качестве пищевых добавок в России (Е322, Сан.ПиН 2.3.2.1078-01).
Изучаемые препараты и лецитин вызывали угнетение свечения в модельной системе (табл. 4), генерирующей АФК, причем степень угнетения свечения увеличивалась с увеличением концентрации препарата. В модельной системе ПОЛ были получены разнообразные результаты. Ксидифон в максимальной концентрации вызывал достоверное снижение А и 8 свечения в системе АФК в 1,3 раза по сравнению с контролем, значительно не влияя на ПОЛ. Натрия тиосульфат в системе АФК достоверно интенсивнее снижал ХЛ во всех разведениях, а в системе ПОЛ угнетал свечение лишь в максимальных концентрациях. Лецитин достоверно подавлял ХЛ в системе АФК прямо пропорционально концентрации в системе. Воздействие лецитина на ПОЛ зависело от его концентрации: в больших дозах он проявлял антиоксидантную активность, в средних - прооксидантную, а в малых -недостоверное незначительное угнетение ХЛ. Наибольший анти-оксидантный эффект в модельных системах, генерирующих АФК и ПОЛ, проявил натрия тиосульфат, наименьший - ксидифон. Действие лецитина на СРО зависит от концентрации препарата, что надо учитывать при его назначении.
Таблица 4
Влияние ряда лекарственных препаратов и лецитина на хемилюми-несценцию модельных систем
Кон- Система АФК
Препарат центр., (цитрат - фосфат - люминол)
мг!мл S % от А % от
системы контроля контроля
Контроль 0 41,1 ±4,5 100 2З,0±4,0 100
1,0 б,0±0,б* -85,4 б,3±1,2* -72,5
Ксидифон 0,1 29,4±4,1 -28,3 17,2±2,9 -25,2
0,01 Зб,1±4,4 - 12,2 19,1±3,8 -17,0
Натрия тиосульфат 1,0 1,9±0,01* -95,4 0,7±0,01* -97,0
0,1 0,01 7,8±2,1* 18,З±З,5* -81,0 -55,5 3,б±0,б* 9,1±1,б* -84,5 -б0,б
1,0 12,З±2,2* -70,0 5,8±1,1* -74,9
Лецитин 0,1 ЗЗ,4±4,З* -18,7 18,0±З,0 -21,7
0,01 28,2±З,9* -31,4 14,3±2,б -37,8
Кон- Система ПОЛ
Препарат центр., (липосомы из яичного желтка)
мг!мл S % от А % от
системы контроля контроля
Контроль 0 18,2±З,5 100 8,З±1,7 100
1,0 24,0±4,1 31,8 б,1±1,1 -25,9
Ксидифон 0,1 21,0±З,9 15,2 7,б±2,1 -8,0
0,01 2б,3±4,2 44,1 12,1±2,2 145,7
Натрия тиосульфат 1,0 0,00б±0,0* -99,7 3,5±0,б* -58,0
0,1 0,01 11,9±2,1 14,б±2,2 -34,7 -19,8 5,З±0,9 б,б±1,2 -Зб,1 -20,0
1,0 9,1±1,б* -50,1 3,2±0,б -б2,0
Лецитин 0,1 40,0±4,5* 119,4 2З,4±4,* 182,4
0,01 21,1±З,9 15,8 10,9±1,9 31,0
Примечание: приведены средние значения 10 измерений.* - достоверность различий показателей с контролем (р<0,05)
Для исследования влияния препаратов на генерацию АФК клетками крови конкретного больного использовали цельную гепаринизированную кровь новорожденного ребенка. В концентрациях, близких к терапевтическим, все испытываемые препараты in vitro подавляли фагоцитарную активность клеток крови. В большей степени антиоксидантная активность проявилась у лецитина, что указывает на возможность применения данной аминокислоты при гиперэргических фагоцитарных реакциях с избыточной продукцией АФК. Выявлено нарушение процессов СРО у новорожденных с заболеваниями ОМС на фоне ИВЗ Интенсификация СРО может являться одним из патогенетических звеньев перинатального поражения почек. Изменение характера свечения мочи и крови не являются специфичными. Оно в той или степени меняется при нарушении функции почек, независимо от этиопатогенеза заболевания. Исследование ХЛ можно рекомендовать к широкому применению в неонатальной практике для оценки состояния процессов СРО фагоцитирующих клеток крови и мочи, как средство скрининга антиокислительной активности препаратов и мониторинга изменения СРО при медикаментозных
воздействиях на организм. ХЛ мочи позволяет диагностировать перинатальные нефропатии на доклинической стадии.
Литература
1. Акбашев А.Р. Состояние свободно-радикального окисления при хроническом пиелонефрите и оценка антиокислительной активности препаратов, используемых в терапии воспалительных заболеваний почек и мочевыводящих путей (клиникоэкспериментальные исследования): Дис. ... к. мед. н.- Уфа, 2005.
2. Голиков А.П. и др. // Лечащий врач.- 2003- № 4.- С. 70.
3.Фархутдинова Л.В., Хайбуллина Г.А. // Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и болезни человека-Смоленск, 2003.- С. 72-73.
4.Ланкин В.З. Окислительный стресс.- М., 2002.
5Alien K.G., TresiniМ. // Free Radic. Biol. Med- 2000.- Vol.28.-P.463-499.
6.Панова Л.Д. и др. // Педиатрия.- 2004.- №1.- С.33-38.
I.Беликова Е.Э. Современные технологии в педиатрии и детской хирургии.- М., 2004- С. 265-266.
8.Фархутдинов Р.Р., Тевдорадзе С.И. // Методы оценки ан-тиокислительной активности биологически активных веществ лечебного и профилактического назначения.- М., 2005.- С. 147.
9. Портнягина Э.В. и др. Современные технологии в педиатрии и детской хирургии .- М., 2005- С. 453.
10. Панова Л.Д. и др. Нерешенные проблемы перинатоло-гии.- Екатеринбург - Нижневартовск, 2005- С. 128.
II. Панова Л.Д. и др Ребенок, врач, лекарство.- С-Пб., 2007- С. 113-115.
12. Фархутдинов Р.Р., Лиховских ВА. Методы оценки ан-тиокислительной активности биологически активных веществ лечебного и профилактического назначения.- М., 2005.- С.155.
13.Фархутдинов, Р.Р., Фархутдинова Л.В. // Клин. лаб. диагностика.- 2000- № 2.- С.13-16.
!4.Панова Л.Д., Фархутдинов Р.Р. // Эфферентная терапия-Т. 12, №3- 2006- С.30-35.
\5.Панова Л.Д., Ахмадеева Э.Н. // Омский научный вестник- Вып. 19- С.127-129.
APPLICATION OF CHEMILUMINESCENT METHODS IN
NEONATOLOGY
L.D. PANOVA Summary
Application experience of chemiluminescent methods in neonatology for an estimation of processes FRO blood cells and urine, as means of screening of antioxidizing activity of drags and as FRO change monitoring at various medicamental influences upon an organism, and also diagnostics l pathology of kidney on preclinical stages.
Key words: antioxidizing activity, chemiluminescent methods
УДК 618.3-008.6:612.015.39
ИЗМЕНЕНИЯ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА У БЕРЕМЕННЫХ С ГЕСТОЗОМ
О.В. ПОРШИНА, А.Н. КИЛЬДЮШОВ, Л.В. ЛЕДЯЙКИНА,
Е.П. ТЮРИНА, А.П. ВЛАСОВ, Т.В. ТАРАСОВА *
Одной из проблем акушерства является гестоз, который рассматривается как системная воспалительная реакция [3, 5]. Важную роль в патогенезе гестоза играет интенсификация пере-кисного окисления липидов (ПОЛ) [4, 7]. ПОЛ, являясь одним из важных биологических процессов в организме, позволяет определить выраженность патологических реакций при гестозе и выявить возможный переход обратимых изменений в необратимые [4]. Дестабилизация биологических процессов при гестозе происходит при накоплении в организме вторичных продуктов ПОЛ, обладающих токсическим действием, основным из которых является малоновый диальдегид [1]. По содержанию этого мета-
* Мордовский госуниверситет им. Н.П. Огарева, каф. факультетской хирургии, 430000 г. Саранск, ул. Большевистская, 68
