CC BY
44
УДК 619:578.823.2
Ключевые слова: антиген, блютанг, твердофазный иммуноферментный анализ
Key words: antigen, bluetongue, enzyme-linked immunosorbent assay
Ажибаев А. Ж., Кошеметов Ж. К., Мамадалиев С. М., Нурабаев С. Ш., Бурабаев А. А., Абдураимов Е. О., Жугунисов К. Д.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ КУЛЬТУРАЛЬНОГО АНТИГЕНА ВИРУСА БЛЮТАНГА ДЛЯ НЕПРЯМОГО ВАРИАНТА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА
bluetongue viral cultural antigen preparation for indirect enzyme-linked immunosorbent assay
РГП «НИИ проблем биологической безопасности» КН МОН РК Адрес: 080409, Республика Казахстан, Жамбылская область, пгт Гвардейский
RGE «Research Institute for Biological Safety Problems» SC MES RK Address: 080409, Republic of Kazakhstan, Zhambylskaya oblast, Gvardeiskiy
Ажибаев Азамат Жасуланович, ст. научный сотрудник / Azhibayev Azamat Zh., Senior Scientific Officer Кошеметов Жумагали Каукарбаевич, к.б.н., зав. лаборатории Koshemetov Zhumagali K, Ph.D. in Biology Science, The Laboratory Chief Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич, д.в.н., профессор, гл. научный сотрудник Mamadaliyev Seidigapbar M., Doctor of Veterinary Sciences, Professor, Head Scientific Officer Нурабаев Сергазы Шуратбаевич, ст. научный сотрудник / Nurabayev Sergazy Sh., Senior Scientific Officer Бурабаев Асылбек Амирбекович, к.б.н., ст. научный сотрудник Burabayev AssilbekA.— Ph.D. in Biological Sciences, Senior Scientific Officer Абдураимов Ергали Орынбасарович, к.в.н., главный технолог Abduraimov Ergali o., Ph.D. in veterinary Sciences, Head Technologist Жугунисов Куандык Даулетбаевич, научный сотрудник / Zhugunisov Kuandyk D., Scientific Officer
Аннотация. В работе представлены результаты исследований по приготовлению культурального антигена вируса блютанга для непрямого варианта ТФ-ИФА с целью выявления группоспецифических антител и оценка чувствительности и специфичности данного метода на основе приготовленного антигена при исследовании различных (гомологичных, гетерологичных и нормальных) сывороток крови овец.
Summary. Study results on the bluetongue viral cultural antigen preparation for indirect variant of the ELISA and the sensitivity and specificity assessment of this method on the basis ofprepared antigen in the study of different (homologous, heterologous and normal) sera are presented in this work.
Введение
Группа возбудителей блютанга («синий язык», катаральная лихорадка овец) входит в состав рода Orbivirus семейства Reoviridae. В настоящее время известны 24 серотипа вируса блютанга, вызывающие сходную клиническую картину у инфицированных восприимчивых животных, к которым относятся овцы, крупный рогатый скот, олени, ламы и некоторые виды диких жвачных [5].
Наиболее значительный экономический ущерб эпизоотии блютанга наносят при возникновении болезни среди овец или некоторых видов диких жвачных на ранее благополучных территориях, когда заболеваемость достигает до 90 %, а летальность -70-90 %. Однажды возникнув в регионе, болезнь приобретает стационарный характер и в настоящее время зарегистрирована
на всех континентах [13, 9]. Южные и юго-восточные регионы нашей республики, где сосредоточено основное поголовье овец, граничат с неблагополучными по блютангу странами (Республика Таджикистан и Кыргызская Республика), где по данным мониторинговых исследований, проведенных в 2009 году сотрудниками РГП «Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности» КН МОН РК, из проб патологических материалов был выделен вирус блютанга, а в сыворотках крови обнаружены антитела против данного вируса [1]. С учетом эпизоотологии инфекции, наличия восприимчивого поголовья и переносчиков можно сделать предположение о более масштабном распространении заболевания на территории соседних государств, что обусловливает необходимость проведения исследований по
конструированию средств лабораторной диагностики и специфической профилактики данной болезни.
В лабораторной диагностике блютанга важное место занимают методы, основанные на обнаружении специфических к данному вирусу антител в сыворотке крови больных и переболевших животных [12, 14, 10]. Одним из таковых является непрямой твердофазный иммуноферментный анализ (ТФ-ИФА), который отвечает основным требованиям, предъявляемым к средствам и методам лабораторной диагностики инфекционных болезней (высокая чувствительность, специфичность, достоверность и воспроизводимость результатов, стоимость исследований, универсальность и безопасность) [4].
Массовое применение иммунофермент-ных наборов для серологической диагностики данной инфекции, выпускаемых многими зарубежными фирмами, такими как «VMRD», «Veterinary Diagnostic Technology» и «Diagxotics» (США), а также «ID-VET» (Франция), ограничено высокой стоимостью [3, 7]. Поэтому создается необходимость в разработке отечественных диагностических тест-систем на основе непрямого ТФ-ИФА для выявления и количественной оценки уровня группоспецифических антител к вирусу блютанга. В свою очередь выявление антител данным методом требует получения очищенного антигена данного вируса, который, безусловно, является одним из основных диагностических компонентов им-муноферментных наборов.
При блютанге в качестве антигенсодер-жащего материала используют хорионаллан-тоисные оболочки (ХАО) и желточные мешки куриных эмбрионов (КЭ), мозг и сердце мышат-сосунов, инфицированных вирусом блютанга. Однако антигены, приготовленные из данного вида вируссодержащих материалов, являются слабоактивными. Поэтому большинство исследователей предпочитают проводить работы по диагностике блютанга с культуральными антигенами, которые выгодно отличаются низкой антикомплемен-тарностью, технологичностью и хорошей активностью, а главное - пригодностью для постановки всех известных иммунологи-
ческих реакций при данной инфекции [2]. В связи с чем необходимость разработки метода приготовления культурального антигена данного возбудителя представляется весьма актуальной.
Исходя из этого, целью настоящих исследований являлось получение культурального антигена вируса блютанга для разработки отечественных диагностических тест-систем на основе непрямого ТФ-ИФА, позволяющих обнаруживать в сыворотке крови овец антитела, обусловливающие серогрупповую (для всех серотипов) специфичность возбудителя.
Материалы и методы
Вирус. В работе использовали вирус блютанга: штаммы «Хуросон-07/04» и «RT/ RJBSP-07/16», полученные в перевиваемых линиях клеток почки сайги (ПС) и зеленой африканской мартышки (Vero) с биологической активностью 7,00 и 6,75 lg ТЦД50/см3 соответственно.
Культура клеток. Для получения вирус-содержащей суспензии с целью приготовления культурального антигена вируса блю-танга использовали соответственно перевиваемые линии клеток ПС и Vero. Заражение культур клеток, а также выращивание вируса проводили согласно отработанным ранее условиям [6].
Проверка стерильности культуральных суспензий вируса блютанга. Стерильность полученных культуральных суспензий вируса блютанга определяли путем высева на бактериологические среды: мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА) и мясопептонный печеночный бульон под маслом (МППБ), Сабуро (жидкое и твердое) и тиогликолевая. Посевы выдерживали при 37 °С в течение 10 дней. По окончании времени инкубирования из пробирок проводили пересевы на свежие питательные среды и выдерживали дополнительно в течение 10 дней. Стерильными считали культураль-ные суспензии, высевы которых не давали роста посторонней микрофлоры.
Инактивация культуральных суспензий вируса блютанга. Полученные культураль-ные суспензии вируса блютанга инактиви-ровали 98 % бета-пропиолактоном (БПЛ)
фирмы NATALEX S.A. (Польша) согласно условиям, отработанным в лаборатории Биотехнологии культивирования вирусов НИИПББ.
Проверка полноты инактивации культу-ральных суспензий вируса блютанга. Проверку полноты инактивации вируса блютанга проводили путем его 3-кратного пассирования в культурах клеток ПС и Vero соответственно. Наблюдение за испытуемыми культурами клеток вели в течение 6 суток. Если после этого в монослое данных клеток ЦПД вируса отсутствовало, то инактивацию считали 100 %.
Очистку и концентрирование вируса блютанга из культуральных суспензий проводили по методике, предложенной Vervo-erd D.W. [15] в нашей модификации, состоящей из концентрирования и частичной очистки вируса в супернатанте (после осветления) путем осаждения его с помощью ПЭГ-6000 в конечной концентрации 5 %.
Реакция диффузионной преципитации. Активность и специфичность приготовленных антигенов вируса блютанга оценивали в реакции диффузионной преципитации (РДП), которую ставили по общепринятой в вирусологической практике методике, исследуя сыворотки крови к гетерологичным возбудителям вирусных болезней мелкого рогатого скота (оспы и контагиозной эктимы овец, а также чумы мелких жвачных) и нормальную сыворотку, полученные в НИИПББ.
Непрямой ТФ-ИФА для выявления груп-поспецифических антител к вирусу блютан-га ставили согласно условиям, отработанным в лаборатории Диагностики и индикации вирусных инфекций НИИПББ.
Приготовление антигена вируса блютанга. Для приготовления антигена вируса блютан-га концентрированные и очищенные препараты данного вируса подвергали различным физико-химическим воздействиям:
1) однократный термолизис (замораживание при минус 70 °С и оттаивание при комнатной температуре) с последующим осветлением при 1395 g в течение 30 минут при 4 °С;
2) двукратный термолизис;
3) трехкратный термолизис;
4) обработка фреоном-113: для этого суспензию смешивали с равным объемом фре-она-113 и интенсивно встряхивали в течение 10-15 минут при 25 °С, затем центрифугировали при 545 g в течение 20-30 минут при 4 °С и отбирали верхнюю водную фазу для исследования в качестве антигена вируса;
5) обработка эфиром: к 2 мл суспензии добавляли 0,5 мл эфира и встряхивали в плотнозакрывающейся пробирке в течение 1 часа при 25 °С, затем эфир отделяли низкоскоростным центрифугированием при 785 g в течение 30 минут при 4 °С, из водной фазы удаляли остатки эфира продуванием воздуха и центрифугировали при 109368 g в течение 60 минут при 4 °С, осадок ресуспендировали в объеме 1/100 0,002М раствора трис-буфера, рН 7,5 от исходного;
6) обработка ферментом in vitro: к суспензии добавляли трипсин до конечной концентрации 0,1 мг/мл и выдерживали в течение 1 часа при 37±0,5 °С, действие трипсина прекращали добавлением соевого ингибитора (1 мг ингибитора на 1 мг трипсина), который растворяли в 0,05М фосфатно-буферном растворе (ФБР), рН 7,8, затем центрифугировали при 109368 g в течение 60 минут при 4 °С, осадок ресуспендировали в объеме 1/100 0,002М раствора трис-буфера, рН 7,5 от исходного;
7) обработка хлороформом: для этого суспензию смешивали с равным объемом хлороформа, интенсивно встряхивали в течение 10-15 минут при 25 °С, затем смесь центрифугировали при 545 g в течение 20-30 минут при 4 °С и отбирали верхнюю водную фазу для исследования в качестве антигена вируса;
8) обработка дезоксихолатом натрия (ДХН): к 10 мл суспензии добавляли сухой ДХН до концентрации 0,1; 0,5 и 1 %. Смесь и контрольную пробу выдерживали в течение 30 минут при 37 °С, затем пробы немедленно разводили 0,05М ФБР, рН 7,8 для прекращения действия детергента и исследовали в качестве антигена вируса.
Результаты исследований
Активность и специфичность культуральных антигенов вируса блютанга, приготовленных различными способами, оценивали
Таблица 1.
Оценка активности и специфичности в РДП и ТФ-ИФА культуральных антигенов вируса блютанга, приготовленных различными способами
Номер способа приготовления Аг Активность и специфичность Аг в РДП Активность в ТФ-ИФА Аг серотипов
СС к вирусу блю-танга серотипов СС к вирусу оспы овец СС к вирусу КЭО СС к вирусу чумы МЖЖ СН
4 16 4 16
1 1 : 4 1 8 - - - - 1 : 64 1 : 128
2 1 : 4 1 4 - - - - 1 : 256 1 : 512
3 1 : 8 1 8 - - - - 1 : 256 1 : 512
4 1 : 16 1 : 32 - - - - 1 : 512 1 : 1024
5 1 : 2 1 : 4 - - - - 1 : 64 1 : 64
6 1 : 32 1 : 64 - - - - 1 :2048 1 :2048
7 1 : 2 1 : 2 - - - - 1 : 32 1 : 32
8 1 : 2 1 : 2 - - - - 1 : 32 1 : 32
АгН (контрольные), приготов. вышеуказанными способами - - - - - - - -
Примечание: 1. «СС/СН» - специфическая/нормальная сыворотка. 2. «КЭО» - контагиозная эктима овец. 3. «Чума МЖЖ» - чума мелких жвачных животных. 4. «АгН» - антиген нормальный. 5. «-» - не активен.
в РДП и ТФ-ИФА. Полученные результаты представлены в таблице 1.
Как видно из данных, представленных в таблице 1, культуральные антигены вируса блютанга 4 и 16 серотипов положительно реагируют только с сывороткой против вируса гомологичного ряда, активность которых в РДП составила от 1 : 2 до 1 : 32, а ТФ-ИФА от 1:32 до 1:2048. Неспецифическая реакция с гетерологичными и нормальной сыворотками отсутствовала. Во всех случаях нормальные антигены, приготовленные аналогичными способами из неинфицированных клеток ПС и Vero, реагировали отрицательно.
Чувствительность и специфичность непрямого варианта ТФ-ИФА на основе приготовленного культурального антигена вируса блютанга исследовали, используя специфические к данному вирусу (от овец, привитых инактивированными образцами вакцин против блютанга 4 и 16 серотипов, приготовленными лабораторией Биотехнологии культивирования вирусов НИИПЬБ), гетерологичные (оспы и контагиозной экти-мы овец, чумы мелких жвачных) и нормальные (контрольные) сыворотки крови овец. Результаты данных исследований представлены в таблице 2.
Результаты тестирования показали, что культуральный антиген вируса блютанга в непрямом варианте ТФ-ИФА положительно связывался только с гомологичными антителами при отрицательной реакции с гетеро-логичными и нормальными (контрольными) сыворотками, что указывает на специфичность приготовленного антигена. В сыворотках крови овец, привитых инактивированны-ми БПЛ и ДЭИ вакцинами против блютанга 4 и 16 серотипов в комплексе с различными адъювантами (Montanide КА-71 VG, ГОА и сапонин), группоспецифические антитела выявляли в титрах от 1 : 100 до 1 : 12800.
Обсуждение результатов
Полученные результаты указывают на то, что наиболее пригодным антигеном вируса блютанга для постановки непрямого варианта ТФ-ИФА является антиген, приготовленный 6-м способом (обработка трипсином). Антигены, приготовленные другими способами, проявляли меньшую активность в РДП и ТФ-ИФА (от 2 до 8-64 раз соответственно меньше по сравнению с таковым, приготовленным по способу № 6).
Некоторое увеличение антигенной активности препаратов после обработки фрео-
Таблица 2.
Чувствительность и специфичность непрямого варианта ТФ-ИФА на основе приготовленного культурального антигена вируса блютанга при исследовании гомологичных, гетерологичных и нормальных сывороток крови овец
№ п/п Наименование исследуемых проб сывороток крови Взятие сывороток крови после вакцинации, сут. Титр в непрямом ТФ-ИФА
I Гомологичные
1 Сыворотки крови овец, привитых инактивиро-ванной бета-пропиолактоном вакциной против блютанга 4 серотипа в комплексе с адъювантом Montanide КА-71 VG 0 -
7 -
14 1:200
21 1:800
28 1:1600
40 1:6400
60 1:12800
2 Сыворотки крови овец, привитых инактивиро-ванной бета-пропиолактоном вакциной против блютанга 16 серотипа в комплексе с адъювантом Montanide КА-71 VG 0 -
7 -
14 1:100
21 1:200
28 1:800
40 1:6400
60 1:12800
3 Сыворотки крови овец, привитых инактивиро-ванной димеромэтиленимина вакциной против блютанга 16 серотипа в комплексе с адъювантом Montanide ISA-71 VG 0 -
7 -
14 1:100
21 1:800
28 1:1600
40 1:1600
60 1:3200
4 Сыворотки крови овец, привитых инактивиро-ванной бета-пропиолактоном вакциной против блютанга 16 серотипа в комплексе с адъювантами гидроокись алюминия + сапонин 0 -
7 -
14 1:200
21 1:800
28 1:800
40 1:400
60 1:200
5 Сыворотки крови овец, привитых инактивиро-ванной бета-пропиолактоном вакциной против блютанга 4 серотипа в комплексе с адъювантами гидроокись алюминия + сапонин 0 -
7 -
14 1:200
21 1:800
28 1:800
40 1:400
II Гетерологичные
6 Сыворотки крови овец, инфицированных возбудителями: оспы Контагиозной эктимы чумы мелких жвачных
- - -
- - -
- - -
III Нормальные (контрольные)
7 Сыворотки крови здоровых овец -
Примечание: 1. «0» - до вакцинации. 2. «-» - отрицательный результат.
ном-113 (4-й способ) мы склонны объяснить либо снятием «псевдооболочек», окружающих некоторые вирусные частицы, либо удалением ингибиторов вируса липопротеидной природы [8]. Обработка же очищенных препаратов вируса блютанга 4 и 16 серотипов хлороформом, эфиром и ДХН приводила к частичной потере его антигенной активности, что подтверждает результаты, полученные Studdert М. J. [11], свидетельствующие о чувствительности данного вируса к липид-ным растворителям.
Результаты оценки чувствительности и специфичности непрямого варианта ТФ-ИФА на основе приготовленного культу-рального антигена вируса блютанга, где были исследованы различные сыворотки крови овец (гомологичные, гетерологич-ные и нормальные), показали, что непрямой вариант ТФ-ИФА позволяет получать достоверные данные о наличии антител, обладающих специфичностью к полипептиду УР7 внутреннего капсида вируса блютанга, который является общим для всех сероти-пов возбудителя. При этом было отмечено, что наиболее активный иммунитет формировался у овец после вакцинации образцами инактивированных вирусвакцин в комплексе с адъювантом на основе масляной эмульсии МоПяшёе 18Л-71 УО фирмы «Беррю» (Франция), в то время как образцы вирус-вакцин с адъювантным комплексом ГОА + сапонин вызывали образование низких титров антител.
Из этого следует, что культуральный антиген вируса блютанга, приготовленный для непрямого варианта ТФ-ИФА, может быть использован как альтернатива антигену, полученному из ХАО КЭ или мозга мышат-сосунов. Внедрение в лабораторную практику нашей страны подобных диагностических тест-систем позволит сократить время постановки диагноза, свести к минимуму срок ка-рантинирования животных и предотвратить занос возбудителей особо опасных инфекций с импортированным скотом. Применение же данного иммуноферментного набора в перспективе будет способствовать углублению научных исследований по изучению риска распространения вируса блютанга.
Заключение
Приготовленный культуральный антиген вируса блютанга вполне пригоден для постановки непрямого варианта ТФ-ИФА, который может быть использован при проведении диагностических исследований, серологического мониторинга, а также для изучения формирования и оценки напряженности поствакцинального иммунитета.
Список литературы
1. Абдураимов, Е. О. Результаты мониторинга катаральной лихорадки овец в Центральной Азии и Казахстане / Е. О. Абдураимов, Е. М. Раманкулов, С. М. Мамадалиев, Ж. К. Кошеметов, З. Д. Ершебулов // Сбор. матер. междунар. науч.-практ. конф. «Перспективы сотрудничества государств-членов ШОС в противодействии угрозе инфекционных болезней» (14-15 мая 2009 г., Новосибирск, Россия). - Новосибирск : ЦЭРИС, 2009. - С. 49-52.
2. Абелян, К. Е. Катаральная лихорадка овец (блю-танг, синий язык) / К. Е. Абелян. - Ереван. - 2001. - 56 с.
3. Верховский, О. А. Иммуноферментный анализ для выявления антител к вирусу блютанга в сыворотке крови жвачных / О. А. Верховский, Т. И. Алипер // Ветеринария. - 2008. - № 12. - С. 7-10.
4. Матвеева, В. М. Разработка сэндвич-метода твердофазного иммуноферментного анализа для диагностики вируса гриппа А / В. М. Матвеева, Ж. К. Кошеметов, А. Ж. Ажибаев и др. // Вестник науки Казахского агротехнического университета им. С. Сейфуллина. - № 1. - Т. 52. - С. 164-171.
5. Стрижаков, А. А. Сэндвич-метод твердофазного иммуноферментного анализа на основе монокло-нальных антител для обнаружения антигенов вируса блютанга / А. А. Стрижаков, М. Б. Новикова, Б. Б. Ку-ринов, А. В. Луницын // Сельскохозяйственная биология. - 2003. - № 4. - С. 114-120.
6. Таранов, Д. С. Определение оптимальных параметров культивирования вируса катаральной лихорадки овец / Д. С. Таранов, Е. О. Абдураимов, С. М. Мамадалиев, К. Д. Жугунисов, З. Д. Ершебулов // Биотехнология. Теория и практика. - 2010. - № 4. -С. 18-22.
7. http://www.oie.int/fr/normes/mmanual/A_00033.htm
8. Fantoni, V Influenzamento del fluorocarbonio sull'attivita patogena del virus MHV - 3 / V. Fantoni, E. Lakegas, V. Coto, F. Coraggio // Boll. Soc. Ital. Biol. sperim. - 1964. - Vol. 40. - № 11. - P. 556-557.
9. Sellers, R. F. Bluetongue and related diseases. In: Virus diseases of food animals / Ed. E. P. J. Gibbs. N. Y. : Academic Press Inc., 1981. - № 11. - P. 567-584.
10. Stott, J. L. Simple procedure for preparation of bluetongue virus and epizootic hemorrhagic disease virus antigens for agar gel immunodiffusion / J. L. Stott, B. J. Osbum // J. Clinical. Microbiol. - 1983. - № 18. -Vol. 6. - Р. 1310-1313.
11. Studdert, M. J. Sensitivity of Bluetongue virus to ether and Sodium deoxyxolate // Proc. Soc. Exptl. Biol. Med. - 1965. - Vol. 118. - № 4. - P. 1006-1009.
12. Jochim, M. M. Identification of BT and EHD viruses by immunofluorescence with monoclonal antibodies / M. M. Jochim, C. J. Suzzane // Am. Assoc. Vet. Lab. Diagnost; 26th Ann. Proc. - 1983. -P. 277-286.
13. Osbum, B. The current world status of bluetongue / B. Osbum // Bovine-Practitione, 1990. - № 25. - P. 12-14.
14. Pearson, J. E. Protocol for the immunodiffusion tests for bluetongue / J. E. Pearson, M. M. Jochim // Am. Assoc. Vet. Lab. Diagnost; 22th Ann. Proc. - 1979. - P. 531-544.
15. Verwoerd, D. W. Purification and characterization of bluetongue virus / D. W. Verwoerd // Virology. - 1969. -Vol. 38. - № 2. - P. 203-212.
АППАРАТ ДЛЯ ИМПУЛЬСНОЙ БИОСИНХРОНИЗИРОВАННОЙ ЭЛЕКТРОМАГНИТНОЙ ТЕРАПИИ «УМИ-05»
На протяжении многих лет клиника БНПЦ ЧИН и Институт Ветеринарной Био логии (Санкт-Петербург) использует в своей практике уникальный прибор - генератор низкочастотного магнитного импульсного излучения большой мощности «УМИ-05» (ранее «УИМТ-2», «УИМТ-3»),
Данный прибор применяется для моно- или комплексной терапии целого ряда заболеваний, которые ранее считались неизлечимыми или очень тяжело поддавались лечению. /
Основные направления применения «УМИ-05» С *
• Заболевания мочевой системы: мочекаменная болезнь, / пиелонефрит, поликистоз, цистит /
• Желчекаменная болезнь
• Заболевания опорно-двигательного аппарата: остеохондроз позвоночника, дископатия, артрозо-артриты, бурсит, растяжение связок, ушибы, контрактуры суставов, миозит
• Купирование эпилептических приступов и эпилептического статуса
• Гипертензия
• Отит гнойный
• Отит аллергический
Стандартный курс лечения
• 10 сеансов по 30-50 импульсов на одну патологическую область. Мощность 50-80 % . Курс можно повторить с перерывом в 10 дней.
• Профилактический курс для животных группы риска (остеохондроз, МКБ и пр.) - 7-10 сеансов с интервалом 6 месяцев.
• Применение прибора не вступает в противоречие с использованием фармакологических и хирургических методов лечения.
• Магнитотерапию не следует проводить на области тела, содержащей металлоконструкции (например, штифты или пластины для остеосинтеза).
Экономика
• Быстрая окупаемость прибора.
• Минимальная затрата рабочего времени: длительность одного сеанса на одну патологическую зону - 2-3 минуты.
• Высокая эффективность лечения, полное излечение или введение животного в стойкую ремиссию по всем перечисленным заболеваниям гарантируют значительное увеличение рейтинга клиники в целом и приток новых клиентов.
Стоимость прибора 17500 руб. Заказать УМИ-05 для ветеринарии можно по телефаксу: (812) 232-55-92, 927-55-92; по e-mail: virclin@mail.ru Наш почтовый адрес: 196657, Санкт-Петербург, Колпино-7, а/я 36 Сайт: www.invetbio.spb.ru
