CC BY
70
4. Zinchenko, V. A. Energy of miscanthus / V. A. Zinchenko, M. Yashin // LesPromlnform. - 2011. -№ 6 (80). - P. 134-140.
5. The latest technology of bioenergo-conversion / Ya. B. Blum, H. H. Geletukha, I.P. Grigoryuk et al. // Agrar Media Group. - 2010. - 326 p.
6. A new form of miscanthus Chinese (vernica Chinese Miscanthus sinensis Anders.) as a promising source of cellulosic raw material / V.K. Shumny, S. G. Veprev, N. N. Nechiporenko et al. / / Vestnik VOGiS. - 2010. - Vol. 14, No. 1. - P. 122 - 126.
7. New dedicated energy crops for solid biofuels [Electronic resource]. URL: //http://www. aebiom. org (accessed 20.02.17).
8. Varfolomeyev, S. D. Biofuels / S. D. Varfolomeyev, E. N. Yefremenko, L. P. Krylova // Uspekhi khimii. - 2010. - Vol. 79, No. 6. - P. 544-564.
9. Walker, D. A. Biofuels, facts, fantasy, and feasibility / D. A. Walker, J. Appl. // Phycol. - 2009. - V. 21. - P. 509-517.
10. Vadim Yakovlev (IC SB RAS) on the prospects of biofuels [Electronic resource]. URL: //http://old. computerra. EN/interactive/584522/ (accessed 1.03.17).
11. Dospekhov, B. A. Methods of field experience / B. A. Dospekhov - M.: Kolos, 1989. - 335 p.
12. Methods of state strain testing of crops / I. I. Baksheva et al. - M.: Kolos, 1971. - 239 p.
13. Gushina, V. A. Herbicides in cultivation technology of growing miscanthus giant / V. A. Gushina, Ye. N. Borisova // Participation of young scientists in solving actual issues of agrarian and industrial complex of Russia: collection of articles of All-Russian scientific-practical conference / Penza state agricultural academy. - Penza: EPD PSAA, 2016. - P. 78-81.
14. Gushina, V. A. Responsiveness of miscanthus to the plant protection means from weeds / V. A. Gushina, Ye. N. Borisova, M. V. Lyulina // The contribution of young scientists to the innovative development of agrarian and industrial complex of Russia: materials of International scientific-practical conference of young scientists. Volume I / Penza state agricultural academy. - Penza: EPD PSAA, 2015. -P. 30-32.
15. Borojevich, S. Principles and methods of plant breeding / S. Borojevihc. - M.: Kolos, 1984. -344 p.
УДК663.15+ 57.083.13 582.84
ПРИЕМЫ СЕЛЕКЦИИ ОЛЕАГЕННЫХ ШТАММОВ ГРИБОВ
Г. В. Ильина, доктор биол. наук, профессор; Д. Ю. Ильин, канд. биол. наук, доцент; С. А. Сашенкова, канд. биол. наук, доцент
ФГБОУ ВО Пензенский ГАУ, Россия, e-mail: g-ilyina@yandex.ru
Статья содержит информацию о возможностях и приемах селекции штаммов мицели-альных грибов - продуцентов полиненасыщенных жирных кислот, а также ксилотрофных базидиальных макромицетов с олеагенным потенциалом. Исследования, положенные в основу работы, касались разработки и использования приемов индуцированного мутагенеза. Определены величины генетической гетерогенности клеточных популяций изучаемых видов грибов после проведенной процедуры индуцированного мутагенеза. Определены наиболее эффективные дозы мутагенных факторов и концентрации мутагенных веществ, способствующие получению материала для искусственного отбора. Разработаны системы скрининга для ускоренного отбора генетических форм с ожидаемыми продуктивными характеристиками. Работа проводилась с использованием штаммов мицелиального гриба Aspergillus terreus Thom, а также базидиомицета Serpula lacrymans (Wulf.: Fr.) Schroet., выделенных в культуру из базидиом. Определен олеагенный потенциал мицелия исходных родительских и мутант-ных изолятов. Установлены штаммы - потенциальные продуценты жиров и липоидов. Отмечается целесообразность проведения селекционной работы, в результате которой возможно получение наиболее продуктивных изолятов.
Ключевые слова: олеагенные культуры, полиненасыщенные жирные кислоты, биотехнология, индуцированный мутагенез.
Введение
На протяжении последних полутора столетий человеческая цивилизация реализовала масштабную техническую революцию. Работа большинства созданных человеком технических средств предпола-
гает использование внешних источников энергии (электрической, химической, ядерной и т. д.). При этом одной из наиболее удобных и относительно недорогих с практической точки зрения является энергия, заключенная в химических связях углево-
дородов ископаемого топлива (главным образом нефти). Особой привлекательностью обладает углеводородное топливо, которое при нормальных параметрах внешней среды находится в жидком агрегатном состоянии. Применительно к такому топливу было сконструировано множество типов двигателей, идущих на оснащение разнообразных механизмов. Наличие таких свойств, как текучесть и отсутствие склонности к образованию избыточного давления в нормальных условиях, делает несложным процесс хранения, перевозки и перекачки. Кроме того, высокая удельная калорийность, а также относительная легкость смешивания с воздухом для эффективного сгорания определяют особую востребованность такого топлива для различных видов транспорта, приводимого в движение двигателями внутреннего сгорания. Наиболее эффективным способом решения проблем дефицита энергетических ресурсов может быть переход на другие виды жидкого топлива, получаемого из возобновляемых источников, например растительных [1]. Примерами таких альтернативных видов топлива, созданных на основе растительных ресурсов и способных практически без ограничений применяться в созданных к настоящему времени двигателях, являются биоэтанол и биодизель [2, 3]. Первый тип топлива получают на основе сбраживаемого в этанол подходящего растительного сырья (сахарный тростник, зерно злаков, клубни картофеля и др.). Второй тип топлива получают на основе масел, продуцируемых масличными культурами. Однако эти способы осложняются рядом проблемных аспектов, например, низкий удельный выход целевого продукта (жира или этанола) из используемого сырья при соотнесении с общей массой растения. Решением этих проблем могут быть биотехнологические приемы переработки общей растительной биомассы микроорганизмами с выраженным одновременно целлюлозолитическим и олеагенным потенциалом. В настоящее время в мире проводятся исследования с целью определения возможности использования грибов различных систематических и эколого-трофических групп, обладающих олеаген-ным потенциалом, в практике получения липидов [4, 5]. Таким образом, может быть использован естественный потенциал микроорганизмов, участвующих в процессах биологической трансформации углеродсо-держащих веществ.
Целью настоящей работы была разработка и осуществление приемов индуцированного мутагенеза для отбора штаммов
грибов с высокой олеагенной активностью. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи: определение наиболее эффективного мутагенного фактора; установление эффективной дозы или концентрации мутагена, обеспечивающей максимальную генетическую гетерогенность клеточных популяций продуцентов; разработка систем скрининга отбора наиболее продуктивных вариантов; количественная оценка продуктивных характеристик селекционированных штаммов.
Методика исследований
Исследования были проведены на базе лаборатории биотехнологии ФГБОУ ВО Пензенский ГАУ. В экспериментах были изучены возможности использования штаммов гриба Aspergillus terreus Thom, а также базидиомицета Serpula lacrymans (Wulf.: Fr.) Schroet., обладающих целлю-лозолитической активностью, и в разной степени выраженным олеагенным потенциалом, в качестве исходного материала для получения мутантных форм. Использованы штаммы, хранящиеся в коллекции мицелиальных культур технологического факультета Пензенского ГАУ: A. terreus, штаммы At-09, Ater-12, предоставленные кафедрой микологии и альгологии МГУ им. Ломоносова, а также штамм Ater (Pnz)-12, выделенный из лесной почвы на территории Пензенской области. Включенные в исследование штаммы S. lacrymans -Sl-1 и Sl-2 выделены в культуру из бази-диом в 2013 году.
Культивирование штаммов и изучение особенностей развития мицелиальных культур проводили по общепринятым методикам [6].
В качестве индукторов мутагенеза использовали бромистый этидий (cas: 123945-8), метилметансульфонат (cas:66-27-3). Водными растворами указанных веществ (в концентрации 0,001 %) обрабатывали споры и фрагменты мицелия, время экспозиции 120 мин. После обработки бромистым этидием использовали УФ-излучение с длиной волны 254 нм.
Экстракцию липидов проводили по методу Фолча с модификациями [7]. Для экстракции липидов использовали следующие системы растворителей: система А - хлороформ-этанол (1:2); система B - хлороформ-этанол (2:1). Содержание реакцион-носпособных для трансэтерификации жирных кислот в массе субстрата, обросшего мицелием, определяли хроматографически на хроматографе «Кристалл-2000 М» с пламенно-ионизационным детектором, оснащённым набивной колонкой с насадкой -5 % SE-30, нанесенной на носитель «Инер-
Нива Поволжья № 2 (43) май 2017 19
тон»[8]. При отборе культур грибов по ли-пидогенной активности критерием служило значение суммарного содержания жирных кислот. Липидогенная активность культур оценивалась как отношение содержания этерифицируемых жирных кислот к биомассе высушенного до постоянной массы мицелия. Полученные результаты позволили отобрать из всех изученных культур наиболее перспективные, которые были включены в дальнейшие эксперименты. При культивировании мицелия на лигно-целлюлозном субстрате определяли сумму жирных кислот, потенциально способных к трансэтерификации в метиловые эфиры. Для этого материал (мицелиально-суб-стратный комплекс) высушивали до постоянной массы, затем заливали 5,0 %-ным раствором хлороводорода в метаноле, после чего проводили экстракцию метиловых эфиров в гексан. В результате упаривания гексанового экстракта в токе азота получали целевой продукт.
Все эксперименты проводились в трехкратной повторности. Статистическая обработка проводилась с помощью программы для обработки и анализа данных <^а-^юа 6.0». Оценка достоверности влияния на продуктивные параметры со стороны различных факторов осуществлялась с помощью дисперсионного анализа полученного массива данных (ANOVA). Для оценки значимости полученных данных использовался ^критерий Стьюдента при уровне значимости 0,95 [9].
Результаты.
Селекционная работа, осуществляемая в отношении микроорганизма-продуцента, как и любого другого биологического объекта, проводится с целью улучшения его продуктивных свойств и направлена на преобразование его генетической программы [10,11,12]. Следствием этого является изменение как общей метаболической активности, так и ее направленности, что с определенной долей вероятности может привести к получению формы, соответствующей целям селекционера. В контексте методологии эта цель может быть достигнута посредством соответствующих воздействий на геном соответствующего организма. Как правило, здесь принято обозначать три основных группы воздействий на геном, в результате которых достигается его перестройка. Таковыми подходами может быть гибридизация, мутагенез и транс-генез. В нашей работе в качестве приема использовался индуцированный мутагенез, осуществляемый химическими агентами, в отдельных случаях - в комплексе с физи-
ческими факторами [13]. С его помощью было получено существенное увеличение генетической гетерогенности популяции клеток микроорганизма-продуцента, что непосредственно обеспечило материал для проведения отбора потенциально перспективных форм. Следует отметить, что получение устойчивого генетического изменения является непростой задачей. С одной стороны, это может быть обусловлено тем, что в клетках живых объектов естественным образом функционируют различные репарационные механизмы, нивелирующие возникающие мутационные эффекты. С другой стороны (особенно при использовании больших доз мутагенов), возможна гибель клеток. По этой причине поиск оптимальных концентраций и доз имеет первостепенное значение. Установление эффективных концентраций или доз мутагена констатируется по соотношению между относительной величиной выживших клеток и количеством полученных фе-нотипических классов. В нашей работе эта величина для обоих веществ находилась на уровне 0,001 %. В ходе исследований были использованы следующие концентрации химических мутагенов (бромистый этидий, метилметансульфонат): 1*10-1-1х10-5 % от массы среды.
0,00001 0,0001 0.001 0,01 0,1 е
о
Концентрации мутагенов. % от массы среды ^ ^т Бромистый этидий ^■Метилметансульфонат — Бромистый этидий -Метилметансульфонат
Рис. 1. Эффект использования химических мутагенов на фенотипическую диссоциацию
изолятов родительского штамма АМ9 А. terreus: столбцы - количество полученных фенотипических классов; линии графика -доля жизнеспособных спор в мутантном поколении (повторность трехкратная, р<0,05, планки погрешностей -ошибка средней)
Рис. 2. Эффект использования химических мутагенов на фенотипическую диссоциацию
изолятов родительского штамма Sl-1 S. lacrymans: столбцы - количество полученных фенотипических классов; линии графика -доля жизнеспособных спор в мутантном поколении (повторность трехкратная, р<0,05, планки погрешностей -ошибка средней)
Таким образом, наиболее эффективной, «компромиссной» концентрацией мутагенов является 1*10-4 % от массы среды для метилметансульфоната и 1*10-3 % от массы среды для бромистого этидия. Эффективность же последующих этапов селекции зависит от адекватности систем быстрого «просеивания» (т. н. скрининга) массы разнообразных генотипических вариантов на предмет обозначения положительных по продуктивным характеристикам форм. Под понятием «положительные формы» следует подразумевать уклоненные от исходного состояния варианты, обладающие набором определенных параметров [14,15]. Так, помимо общей продуктивности (в нашем случае липидной) важным критерием для получаемого продуцента является определенная качественная характеристика признака. Проведение селекционной работы на предмет одновременного выявления как количественных, так и качественных характеристик представляет собой трудоемкую процедуру, предусматривающую параллельное использование нескольких систем отбора. Основным элементом этих систем являются соответствующие дифференциально-диагностические питательные среды, позволяющие по культурально-морфологическим и физио-
лого-биохимическим критериям осуществлять селекционный отбор штаммов с ожидаемыми свойствами [16,17].
Генетические изменения, возникающие, в частности, в митохондриях клеток, неизбежно отражаются на морфологических, физиологических и биохимических параметрах культур [18]. В частности, у них отмечается кислородная недостаточность и, как следствие, угнетение обменных процессов, а также скорости роста, что выражается в низкой интенсивности накопления биомассы в глубинных условиях. Полученные нами данные свидетельствуют о наличии обратной корреляции между средними скоростями роста мицелия и показателями продукции общих липидов. Изоляты, обладающие относительно невысокими показателями скоростей роста, были изучены на предмет содержания общих липидов и суммарное содержание жирных кислот, причем полученные данные были сопоставлены с показателями олеагенной активности родительских штаммов (таблица).
Накопление биомассы и синтетическая продуктивность жирных кислот мицелием мутантных изолятов A. terreus при глубинном культивировании (среда Чапека, 5 суток, 26°С, повторность трехкратная, р<0,05)
Штамм Биомасса воздушно- сухого мицелия,г Содержание общих липидов, мг/г воздушно-сухого мицелия Суммарное содержание жирных кислот, мг/г воздушно-сухого мицелия
At-09 (контроль) 7,13±0,12 230,1±14,6 148,2±4,0
Lip 1 5,04±0,11 432,8±34,4 212,8±8,5
Lip 2 6,33±0,21 422,1±27,4 291,3±9,9
L ip 3 7,71±0,77 409,3±21,3 239,3±12,3
Lip 4 5,40±0,55 384,1±26,7 315,6±14,4
L ip 5 3,41±0,75 474,4±23,3 319,8±18,8
Lip 6 5,51±0,90 427,4±30,3 259,8±25,2
Подобные данные получены при исследованиях олеагенной активности мутант-ных штаммов S. lacrymans, потенциал которых, как выяснилось, оказался на порядок ниже мицелиального гриба A. terreus. Однако проведенные эксперименты выявили целесообразность приемов индуцированного мутагенеза штаммов грибов с имеющимся олеагенным потенциалом. В дальнейшем планируется проведение исследований с использованием комбинаций химических и физических мутагенных факторов.
Нива Поволжья № 2 (43) май 2017 21
Вывод
В результате проведенных исследований была установлена целесообразность использования приемов индуцированного мутагенеза в целях селекции изолятов грибов с высоким олеагенным потенциалом. Были разработаны и успешно испытаны системы скрининга, позволяющие осуществлять отбор по количественным и качественным параметрам наиболее перспек-
тивных в биотехнологическом отношении генотипических вариантов. Экспериментальная проверка показала, что выбранные подходы являются обоснованными. После подтверждения генетической стабильности полученных мутантных штаммов станет возможным позиционирование их в качестве объектов для создания регламентированных технологий получения сырья для биодизеля.
Литература
1. Липиды мицелиальных грибов как основа для получения биодизельного топлива / Я. Э. Сергеева, Л. А. Галанина и др. // Прикладная биохимия и микробиология. - 2008. - Т. 77, № 5 - С. 576-581.
2. Уханов, А. П. Исследование свойств биологических компонентов дизельного смесевого топлива / А. П. Уханов, Д. А. Уханов, И. Ф. Адгамов // Нива Поволжья. - 2014. - № 1 (30). - С. 92-98.
3. Сидоров, Е. А. Экспериментальная оценка влияния сурепно-минерального топлива на показатели рабочего процесса дизеля / Е. А. Сидоров, А. П. Уханов // Нива Поволжья. - 2012. -№ 4. - С. 71-74.
4. Влияние лигнина и кислорода на рост и липидообразование Lentinus tigrinus / А. А. Ива-шечкин, Я. Э. Сергеева, В. В. Лунин и др. // Прикладная биохимия и микробиология. - 2014. Т. 50, № 3.- С. 318-324.
5. Kumar, A. K. Production of Lipid and Fatty Acids during Growth of Aspergillus terreus on Hydrocarbon Substrates / A. K. Kumar, P. Vatsyayan, P. Goswami// Applied Biochemistry and Biotechnology.- 2010. - Vol. 160, Issue 5. - Р. 1293-1300.
6. Бухало, А. С. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре / А. С. Бухало. -Киев: Наукова думка, 1988. - 144 с.
7. Folch, I. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tisshes / I. Folch, M. Lace, G. N. S. Stomley // J. Biol. dem. - 1957. - Vol. 246, № 3. - Р. 479-509.
8. Гёрёг, Ш. Количественный анализ стероидов / Ш. Гёрёг; пер. с англ. - М.: Мир, 1985. - 504 с.
9. Халафян, А. А. Statistica 6. Статистический анализ данных / А. А. Халафян. - М.: Изд-во ООО «Бином-Пресс», 2007. - 512 с.
10. Инге-Вечтомов, С. Г. Генетика с основами селекции: учебник для студентов высших учебных заведений / С. Г. Инге-Вечтомов. - СПб.: Изд-во Н-Л, 2010. - 720 с.
11. Лось, Д. А. Структура, регуляция экспрессии и функционирование десатураз жирных кислот / Д. А. Лось //Успехи биологической химии. - 2001. - Т. 41.- С.163-198.
12. Иванов, А. И. Дикорастущие популяции астрагала нутового (Astragalus cicer L.) как исходный материал для селекционной работы / А. И. Иванов, Т. В. Разживина // Нива Поволжья. -2012. - № 1. - С. 9-13.
13. Егоров, Н. С. Биотехнология. Книга 2: Современные методы создания промышленных штаммов микроорганизмов / Н. С. Егоров. - М.: Изд-во «Высшая школа», 1988. - 208 с.
14. Овчинников, Ю. А. Биоорганическая химия / Ю. А. Овчинников. - М.: Просвещение, 1987. -815 с.
15. Егоров, Н. С. Биотехнология. Книга 1: Проблемы и перспективы / Н. С. Егоров, В. Д. Самуилов. - М., 1987. - 159 с.
16. Беляева, Т. В. Оптимизация биосинтеза антибиотика фузидина с помощью комплекса генетических и физиологических методов: дис. ...канд. биол. наук / Т. В. Беляева. - М.: Изд-во «НИИПМ», 1984. - 170 с.
17. Ильин, Д. Ю. Приемы селекции штаммов микромицетов - перспективных продуцентов жиров / Д. Ю. Ильин, Н. В. Шкаев // Материалы Международной научно-практической конференции, посвященной Дню российской науки, «Образование, наука, практика: инновационный аспект». - Пенза, 2015. - С. 168-169.
18. Ильина, Г. В. Эколого-физиологический потенциал природных изолятов ксилотрофных базидиомицетов: дисс... докт. биол. наук / Г. В. Ильина. -Саратов, СГУ, 2011. - 432 с.
UDK663.15+ 57.083.13 582.84
METHODS OF OLEAGENIC FUNGAL STAMPS SELECTION
G. V. Ilyina, doctor of biological sciences, professor; D. Yu. Ilyin, candidate of biological sciences, assistant professor; S. A. Sashenkova, candidate of biological sciences, assistant professor
FSBEE HE Penza SAU, Russia, e-mail: g-ilyina@yandex.ru
The article deals with the possibilities and methods of selection of strains of mycelial fungi which are producers of polyunsaturated fatty acids, as well as xylotrophic basidiomacromycetes with oleagenic potential. The research, which was the basis of the work, concerned the development and use of methods of induced mutagenesis. The values of genetic heterogeneity of the cell populations of the examined fungal species were determined after the induced mutagenesis procedure. The most effective doses of mutagenic factors and the concentrations of mutagenic substances that contribute to obtaining material for artificial selection are determined. Screening systems for the accelerated selection of genetic forms with expected productive characteristics have been developed. The research work was carried out using strains of the mycelial fungus Aspergillus terreus Thom, as well as the basidiomycetes Serpula lacry-mans (Wulf.: Fr.) Schroet., introduced to culture which is extracted from the basidioms. The oleagenic potential of the mycelium of the original parent and mutant isolates is determined. Strains - potential producers of fats and lipoidsare are identified. The expediency of carrying out selection work is proved, as a result of this work it is possible to obtain the most productive isolates.
Key words: oleaginous cultures, polyunsaturated fatty acids, biotechnology, induced mutagenesis.
References:
1. Lipids of mycelial fungi as a basis for obtaining biodiesel fuel / Ya. E. Sergeyeva, L. A. Galanina, et. al. // Applied Biochemistry and Microbiology. - 2008. - Volume 77, № 5 - P. 576-581.
2. Ukhanov, A. P. Investigation of the properties of biological components of diesel mixed fuel / A. P. Ukhanov, D. A. Ukhanov, I. F. Adgamov // Niva Povolzhya. - 2014. - № 1 (30) - P. 92-98.
3. Sidorov, Ye. A. Experimental evaluation of the influence of the rapeseed-mineral fuel on the performance of the diesel engine / Ye. A. Sidorov, A. P. Ukhanov // Niva Povolzhya. - 2012. - № 4 - P. 71-74.
4. Influence of lignin and oxygen on the growth and lipid formation of Lentinus tigrinus / A. A. Ivashechkin, Ya. E. Sergeyeva, V. V. Lunin et al. / Applied Biochemistry and Microbiology. - 2014. Vol. 50, № 3 - P. 318-324.
5. Kumar, A. K. Production of Lipid and Fatty Acids during Growth of Aspergillus terreus on Hydrocarbon Substrates / A. K. Kumar, P. Vatsyayan, P. Goswami, Applied Biochemistry and Biotechnology. -2010. - Vol. 160, Issue 5. - P. 1293-1300.
6. Bukhalo, A. S. Higher edible basidiomycetes in pure culture / A. S. Bukhalo. - Kiev: Naukova Dumka, 1988. - 144 p.
7. Folch, I. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues / I. Folch, M. Lace, G. N. S. Stomley // J. Biol. Chem. - 1957. - Vol. 246, № 3. - P. 479-509.
8. Gyorog, S. Quantitative analysis of steroids / Sh. Gyorog; transl. from English. - Moscow: Mir, 1985. - 504 p.
9. Khalafyan, A. A. Statistica 6. Statistical analysis of data / A. A. Khalafyan - M.: Publishing house of «Binom-Press» Ltd., 2007. - 512 p.
10. Inge-Vechtomov, S. G. Genetics with Bases of Breeding: a textbook for students of higher educational institutions / S. G. Inge-Vechtomov. - St. Petersburg: Publishing House of NL, 2010. - 720 p.
11. Los, D. A. Structure, regulation of expression and function of desaturase fatty acids / D.A. Los // Uspekhi biologicheskoy khimii. - 2001. - Vol. 41. - P. 163-198.
12. Ivanov, A. I. Wild populations of Astragalus nuta (Astragalus cicer L.) as a source material for breeding work / A. I. Ivanov, T. V. Razzhivina // Niva Povolzhya. - 2012. - No. 1. - P. 9-13.
13. Yegorov, N. S. Biotechnology. Book 2: Modern methods of creating industrial strains of microorganisms / N. S. Yegorov. - M.: Publishing house «Vysshaya shkolaa», 1988. - 208 p.
14. Ovchinnikov, Yu. A. Bioorganic chemistry / Yu. A. Ovchinnikov. - Moscow: Prosvesheniye. 1987. - 815 p.
15. Yegorov, N. S. Biotechnology. Book 1: Problems and perspectives / N. S. Yegorov, V. D. Samuilov. - M., 1987. - 159 p.
16. Belyaeva, T. V. Optimization of biosynthesis of fusidine antibiotic using a complex of genetic and physiological methods: dis.... cand. biol. sciences / T. V. Belyayeva. - Moscow: Publishing house «NIIPM», 1984. - 170 p.
17. Ilyin, D. Yu. Methods of selection of strains of micromycetes - promising producers of fats / D. Yu. Ilyin, N. V. Shkayev // Materials of the International Scientific and Practical Conference dedicated to the Day of Russian Science, «Education, Science, Practice: Innovative Aspect». - Penza, 2015. - P. 168-169.
18. Ilyina, G. V. Ecological and physiological potential of natural isolates of xylotrophic basidiomycetes: diss... doc. biol. sciences / G. V. Ilyina. - Saratov, SSU, 2011. - 432 p.
Нива Поволжья № 2 (43) май 2017 23
