Научная статья на тему 'Преаналитический этап при измерении концентрации каталитической активности ферментов: особенности и задачи стандартизации'

Преаналитический этап при измерении концентрации каталитической активности ферментов: особенности и задачи стандартизации Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

CC BY
700
778
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Область наук
Ключевые слова
СТАНДАРТИЗАЦИЯ / СТАНДАРТЫ / ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ / ПЕРВИЧНЫЙ ОБРАЗЕЦ / ВТОРИЧНЫЙ ОБРАЗЕЦ / АНАЛИТИЧЕСКАЯ ПРОБА / ПЛАЗМА / СЫВОРОТКА КРОВИ / АНТИКОАГУЛЯНТЫ / ГЕПАРИН / ЦИТРАТЫ / ОКСАЛАТЫ / ЭДТА / ФЕРМЕНТ / КОНЦЕНТРАЦИЯ КАТАЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТА / А-АМИЛАЗА / АЛАНИНАМИНОТРАНСФЕРАЗА / АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗА / γ-ГЛУТАМИЛТРАНСФЕРАЗА / А-ГИДРОКСИБУТИРАТДЕГИДРОГЕНАЗА / КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА / КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА ПРОСТАТИЧЕСКАЯ / КРЕАТИНКИНАЗА / КРЕАТИНКИНАЗА-МВ / ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗА / ЛИПАЗА / ХОЛИНЭСТЕРАЗА / ИНТЕРФЕРЕНЦИЯ / ИНДЕКСЫ СЫВОРОТКИ И ПЛАЗМЫ / ГЕМОЛИЗ / ИКТЕМИЯ / ЛИПЕМИЯ / STANDARDIZATION / STANDARDS / PREANALYTICAL STAGE OF LABORATORY RESEARCH / PRIMARY SAMPLE / SECONDARY SAMPLE / ANALYTICAL PROBE / PLASMA / BLOOD SERUM / ENZYME / CONCENTRATION / ACID PHOSPHATASE / CREATINE KINASE / LACTATE DEHYDROGENASE / LIPASE / INTERFERENCE / INDICES OF SERUM AND PLASMA / HEMOLYSIS / ANTICO-AGULANT / CHOLINE ESTERASE / HYPERLIPEMIA

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Лукичева Татьяна Ивановна, Меньшиков В. В.

The article explains the importance of standardization, the development and main-tenance of rules and recommendations regulating the conditions and order of im-plementation of particular parts of preanalytical stage. The order of these condi-tions is noted including the rules stated and published in such normative docu-ments as national standards GOST R 15 189-2009, GOST R 53079.4-2008, GOST R ISO 6710-209 and in the recommendations of foreign National societies of clini-cal chemistry and laboratory medicine. These requirements concern all the ana-lytes, enzymes included. The cited data have a practical significance for acquisition of reliable results in everyday functioning of laboratories. Enough to mention data concerning the anticoagulants influence on catalytic concentration of enzymes, the most often measured concentrations of a-amylase, lipase, amynotransferase, alka-line and acid phosphatase, creatine kinase, lactate dehydrogenase, choline esterase, hemolysis impact, the increased concentration of bilirubin andhyperlipemia in samples and significance of measurement of indices of serum and plasma as well. The possible mechanisms of impact of these interferents on the results of meas-urement of catalytic concentration of enzymes are discussed

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Лукичева Татьяна Ивановна, Меньшиков В. В.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

THE PREANALYTICAL STAGE OF UNDER MEASURING OF CONCENTRATION OF CATALYTIC ACTIVITY OF ENZYMES: THE CHARACTERISTICS AND TASKS OF STANDARDIZATION

The article explains the importance of standardization, the development and main-tenance of rules and recommendations regulating the conditions and order of im-plementation of particular parts of preanalytical stage. The order of these condi-tions is noted including the rules stated and published in such normative docu-ments as national standards GOST R 15 189-2009, GOST R 53079.4-2008, GOST R ISO 6710-209 and in the recommendations of foreign National societies of clini-cal chemistry and laboratory medicine. These requirements concern all the ana-lytes, enzymes included. The cited data have a practical significance for acquisition of reliable results in everyday functioning of laboratories. Enough to mention data concerning the anticoagulants influence on catalytic concentration of enzymes, the most often measured concentrations of a-amylase, lipase, amynotransferase, alka-line and acid phosphatase, creatine kinase, lactate dehydrogenase, choline esterase, hemolysis impact, the increased concentration of bilirubin andhyperlipemia in samples and significance of measurement of indices of serum and plasma as well. The possible mechanisms of impact of these interferents on the results of meas-urement of catalytic concentration of enzymes are discussed

Текст научной работы на тему «Преаналитический этап при измерении концентрации каталитической активности ферментов: особенности и задачи стандартизации»

© Т. и. лукичева, в. в. меньшиков, 2012

УДК 616.153.1-074:006

Т. И. Лукичева, в. в. Меньшиков

преаналитический этап при измерении концентрации каталитической активности ферментов: особенности и задачи стандартизации

Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова, Москва

В статье обосновывается важность стандартизации, разработки и соблюдения правил и рекомендаций, регламентирующих условия и порядок выполнения отдельных звеньев преаналитического этапа. Отмечается соблюдение этих условий и правил, изложенных и опубликованных в ряде нормативных документов - национальных стандартах ГОСТ Р-15 189-2009, ГОСТ Р 53079.4-2008, ГОСТ Р ИСО 6710-2009, а также рекомендациях зарубежных национальных обществ клинической химии и лабораторной медицины. Эти требования касаются всех аналитов, в том числе и ферментов. Приведенные данные имеют практическое значение для получения достоверных результатов при повседневной работе лабораторий: данные о влиянии антикоагулянтов на каталитическую концентрацию ферментов, наиболее часто измеряемых в практической работе клинико-диагностических лабораторий медицинских учреждений: а-амилазы, липазы, аминотрансфераз, щелочной и кислой фосфатаз, креатинкиназы, лактатдегидрогеназы, холинэстеразы, влиянии гемолиза, повышенной концентрации билирубина и липемии в образцах, а также значение измерения индексов сыворотки и плазмы. Обсуждаются возможные механизмы влияния этих интерферентов на результаты при измерении каталитической концентрации ферментов.

Ключевые слова: стандартизация, стандарты, преаналитический этап лабораторных исследований, первичный образец, вторичный образец, аналитическая проба, плазма, сыворотка крови, антикоагулянты, гепарин, цитраты, оксалаты, ЭДТА, фермент, концентрация каталитической активности фермента, а-амилаза, аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза, у-глутамилтрансфераза, а-гидроксибутиратдегидрогеназа, кислая фосфатаза, кислая фос-фатаза простатическая, креатинкиназа, креатинкиназа-МВ, лактатдегидрогеназа, липаза, холинэстераза, интерференция, индексы сыворотки и плазмы, гемолиз, иктемия, липемия

T.I. Lukitcheva, V.V. Menshikov THE PREANALYTICAL STAGE OF UNDER MEASURING OF CONCENTRATION OF CATALYTIC ACTIVITY OF ENZYMES: THE CHARACTERISTICS AND TASKS OF STANDARDIZATION The article explains the importance of .standardization, the development and main-tenance of rules and recommendations regulating the conditions and order of im-plementation ofparticular parts ofpreanalytical stage. The order of these condi-tions is noted including the rules stated and published in such normative docu-ments as national standards GOST R 15 189-2009, GOST R 53079.4-2008, GOSTR ISO 6710-209 and in the recommendations of foreign National societies of clini-cal chemistry and laboratory medicine. These requirements concern all the ana-lytes, enzymes included. The cited data have a practical significance for acquisition of reliable results in everyday functioning of laboratories. Enough to mention data concerning the anticoagulants influence on catalytic concentration of enzymes, the most often measured concentrations of a-amylase, lipase, amynotransferase, alka-line and acid phosphatase, creatine kinase, lactate dehydrogenase, choline esterase, hemolysis impact, the increased concentration of bilirubin and hyperlipemia in samples and significance of measurement of indices of serum and plasma as well. The possible mechanisms of impact of these interferents on the results of meas-urement of catalytic concentration of enzymes are discussed.

Key words: standardization, standards, preanalytical stage of laboratory research, primary sample, secondary sample, analytical probe, plasma, blood serum, antico-agulant, enzyme, concentration, acid phosphatase, creatine kinase, lipase, lactate dehydrogenase, choline esterase, interference, indices of serum and plasma, hemo-lysis, hyperlipemia.

Наибольшая доля погрешностей, 70-80%, с которыми сталкивается клинико-диагностическая лаборатория, при выполнении лабораторных анализов возникает внутри внеа-налитических сфер исследования, особенно при проведении преаналитических процессов вручную. В последние годы разработан ряд нормативных документов и рекомендаций, содержащих требования к преаналитическим процедурам, которые необходимо соблюдать для правильного ведения преаналитического этапа: ГОСТы [1-3], рекомендации ВОЗ [7], рекомендации национальных обществ специалистов лабораторной медицины - Немецкой рабочей группы по качеству преаналитического этапа [4] и рабочей группы по

Для корреспонденции:

Лукичева Татьяна Ивановна, канд. мед. наук, вед. науч. сотр. лаб.

проблем клин. лаб. диагностики

Адрес: 119991, Москва, ул. М. Трубецкая, 8, стр. 1

Телефон: (495) 622-97-61

Е-таП:1аЫпБэ@тта.га

внеаналитической вариабельности итальянских обществ клинической биохимии и клинической молекулярной биологии, Итальянского общества по лабораторной медицине, Итальянского комитета по стандартизации гематологических и лабораторных методов [8]. Они, несомненно, способствуют стандартизации фаз и процедур преаналитического этапа.

Большая часть ошибок на преаналитическом этапе возникает из-за недостатков в системах подготовки пациента, подготовки операторов, занятых процессом сбора биоматериала и ответственных за обработку образцов, что ведет к неприемлемости ряда непригодных образцов из-за нарушений их идентификации, из-за гемолиза in vitro, недостаточных объемов первичной и аналитической пробы, из-за свертывания, ошибки в контейнере или загрязнения образца инфузионным материалом при проведении инфузий. Обнаружение и менеджмент этих образцов необходимы для преодоления соответствующих источников ошибок и гарантии надежности результатов.

При измерении каталитической концентрации ферментов требования к подготовке пациентов, требования ко взятию биоматериалов. ведению документации, указанные в ГОСТе

Р 53079.4-2008, в частях 5.4.1.-5.4.11, те же, что и для других аналитов, важно знание и соответствующий правильный подход к влиянию на нее неустранимых и устранимых факторов. В отношении ферментов это учет возраста, пола пациента, следовательно, обязательная их фиксация при регистрации образцов, влияния алкоголя, мышечной нагрузки, длительности наложения жгута и т. д., а также обязательный учет их при интерпретации результатов.

Международная рабочая группа экспертов по преана-литическому качеству из Германии и Италии подготовила "Рекомендации по образцам и стабильности аналитов". Они поддержаны Немецким обществом по клинической химии и Немецким обществом по лабораторной медицине, одобрены Форумом европейских обществ по клинической химии (FESCC) и размещены на сайте http://www.diagnosticsample. com/introduction.php3?lang=en/ [6] в разделе "The Quality of Diagnostic Samples" ("Качество диагностических образцов"), в котором приводятся рекомендации по критериям качества преаналитического этапа для пользователей. С появлением новой информации сведения в существующем к настоящему времени банке данных для 430 аналитов, определяемых в крови, сыворотке, плазме при биохимических исследованиях, 79 аналитов мочи и 10 аналитов спинно-мозговой жидкости, обновляются более чем на 10 языках мира с указанием источника информации. Эксперты вносят новые сведения об антикоагулянтах, условиях хранения образцов и стабильности аналитов при разных условиях. Специалисты лабораторной медицины из разных стран мира могут задать вопросы и получить на них ответы. Ниже приведен перевод отрывка со страницы для лактатдегидрогеназы, взятый из раздела "The Quality of Diagnostic Samples" ("Качество диагностических образцов") указанного сайта (см. таблицу).

Биоматериал. В каком биоматериале измерять каталитическую концентрацию ферментов? В клинико-диагностических лабораториях России первичным образцом, в повседневной практике для большинства ферментов, чаще всего измеряемых в практической работе, является венозная или капиллярная кровь. Для а-амилазы может быть использована моча, дуоденальное содержимое и плевральная жидкость. Аналитический пробой, в которой проводится измерение, т. е. вторичным образцом, является сыворотка или плазма. Есть точка зрения [6], что выбор между сывороткой и плазмой для лаборатории в настоящее время - в значительной степени решение, основанное на требовании и приоритетах отдельных лабораторий. Если приоритетом является сокращение времени оборота пробы (ТАГ*), то используют плазму. Она обладает преимуществом, так как ее можно получить при центрифугировании крови тотчас после взятия крови. Там же, где время между взятием крови и достижением образцом лаборатории превышает рекомендуемое время свертывания образца или лаборатория не может держать иным способом образцы на преаналитическом этапе, трудно соблюдать ТАТ при использовании плазмы. Для ферментов очень важно знать особенности их соотношения в сыворотке крови и плазме.

Виды и концентрации антикоагулянтов, используемых при взятии проб крови для получения плазмы, установлены национальным стандартом ГОСТ Р ISO 6710-2009 [3] и в Рекомендациях ВОЗ [7]. Они являются основой стандартизованного получения проб при лабораторных исследованиях. Механизм помех при использовании некоторых антикоагулянтов различен и часто зависит от используемого аналитического метода. Для получения плазмы для анализа большинства клинически значимых ферментов чаще всего используют соли гепарина. Аммониевые соли гепарина мешают определению АСТ, вмешиваясь в аналитический процесс, поскольку аммиак будет участвовать в реакции с глутаматдегидрогеназой, содержащейся в плазме, в ходе которой будет расходоваться

*ТАТ (turnaround time) - время оборота пробы с момента от назначения анализа до результата анализа образца.

НАДН, входящий в состав используемого реактива для АСТ. Соли ЭДТА, оксалаты, цитраты связывают ионы магния и кальция и вызывают снижение результатов при измерении активности а-амилазы, липазы, а некоторые соли гепарина вызывают помутнение реакционной смеси при измерении каталитической концентрации у-ГТ [12]. ЭДТА связывает важный для проявления активности щелочной фосфатазы кофактор цинк и поэтому тоже вызывает занижение результатов. Цитраты, оксалаты, фториды вызывают занижение результатов при измерении активности холинэстеразы. Плазма, полученная с гепарином, предпочтительна для измерения АСТ, щелочной фосфатазы (общей активности), нейрон-специфической эно-лазы, а-гидроксибутиратдегидрогеназы и, особенно, ЛДГ, активность которой в сыворотке больше, чем в плазме за счет содержимого не только эритроцитов, но и тромбоцитов, поступающего в сыворотку при свертывании крови.

Контейнеры и пробирки, предназначенные для сбора венозной или капиллярной крови, используемые для измерения каталитической концентрации ферментов те же, что рекомендуются их производителями для биохимических исследований:

- пробирки с соотношением диаметра и высоты 13 и 75 мм;

- вакуумные пробирки без добавочных компонентов или с добавочными компонентами с цветными закрывающими их пробками, кодированными в соответствии со стандартом ГОСТ Р 53079-2008 [2]; и ГОСТ Р ИСО 6710-2009 [3];

- пустая пробирка без добавок для сыворотки с цветом кода красный/белый;

- пробирка с гепарином 12-30 Ед/мл для получения плазмы для биохимических исследований с цветом кода зеленый/ оранжевый;

пример характеристики качества образца для измерения концентрации каталитической активности лактатдегидрогеназы (цит. http://www.diagnosticsample.com/introduction.php3?lang-en/ [6]

Кровь — код анализа 269 Лактатдегидрогеназа (ЛДГ)

Сыворотка Может быть использована с ограничениями Завышенные результаты с рекомендуемым образцом

Плазма Гепаринизиро-ванная ЭДТА Рекомендуемый образец

Цитратная Может быть использована с ограничениями (принимать во внимание разведение цитратом) (109*)

Цельная кровь Гепаринизиро-ванная ЭДТА Цитратная

Биологический период полужизни 10—54 ч ЛДГ 5 < ЛДГ 1,2

Стабильность в крови (20—25°С) 1 ч |(Увеличивается через этот период времени)

-20°С 6 нед

Стабильность в сыворотке/плазме 4—8°С 4 дня

20—25°С 7 дней

Стабилизатор

Замечания/комментарии ЛДГ зависима от тромбоцитов в сыворотке [69*, 122*, 201*]

* — Ссылка на источник литературы, приведенная авторами сайта [6].

- вакуумные пробирки с гелем и активатором образования сгустка, цвет кода красный для биохимических исследований;

- соответствующие микрокюветы.

Очень важно, чтобы эти сосуды были прозрачны для того, чтобы при регистрации образцов в лаборатории можно было быстро оценить их пригодность для анализа. Для того чтобы распознать интерференцию в материале пробы, следует провести дополнительные исследования. Идентификация эндогенного интерферента только на основе анализа значений результатов, уже полученных в образцах, очень трудна и во всех отношениях малоэффективна и нецелесообразна. Уже при поступлении образца необходимо выявить дефектный, неприемлемый для анализа, образец вследствие интерференции: гемолиза in vitro, липемии, гипербилирубинемии, образования сгустков и др.

Визуальный анализ, который используется в большинстве отечественных лабораторий, позволяет выявить непригодную для анализа пробу, когда концентрация интерферента уже довольно велика: для гемолиза in vitro - это наблюдается при концентрации гемоглобина в плазме или сыворотке более 300 мг/л (18,8 ммоль/л), липемии (мутности) - соответствующей концентрации триглицеридов более 300 мг/100 мл (более 3,4 ммоль/л) в сыворотке или плазме, а визуальное выявление иктеричных проб и вовсе представляется ненадежным. для чего рекомендуется фотометрическое измерение билирубина на длинах волн 450 и 575 нм.

В настоящее время в инструкциях к наборам реактивов их изготовители, как правило, для каждого аналита указывают интерферирующие вещества и концентрации, которые оказывают влияние на результат. Гемолиз in vitro - наиболее частый вид интерференции, по данным М. Plebani и Р. Car-raro [9], 3,3% всех образцов, полученных лабораторией, были гемолизированы. По данным ООО "Независимая лаборатория ИНВИТРО" [5], преаналитические ошибки результатов вследствие гемолиза составляли 8,9%. Гемолиз вызывает завышение результатов измерения активности ЛДГ, АЛТ, АСТ, креатинкиназы и липазы и занижение результатов для щелочной фосфатазы, у-ГТ [12]. Увеличение или уменьшение каталитической концентрации зависит от фермента, его каталитической концентрации, метода измерения.

Влияние интерферента считается достоверным, если концентрация или активность аналита изменяется после добавления интерферента более чем на ± 10% по сравнению с уровнем до его добавления [11]. Анализ изучения влияния гемолиза на результаты измерения концентрации каталитической активности ферментов при использовании различных реактивов позволяет заключить, что даже в тех случаях, когда гемолиз невидим невооруженным глазом и концентрация свободного гемоглобина в сыворотке или плазме меньше 300 мг/л, например 10 мг/дл, уже отмечается завышение результатов концентрации каталитической активности простатической кислой фосфатазы, а-ГБДГ, ЛДГ, тутаматдегидрогеназы, КК-МВ. Далее, при повышении концентрации свободного гемоглобина в сыворотке и плазме до 20-60 мг/дл отмечается повышение активности КК, АЛТ, АСТ [11]. При этом линейной зависимости между концентрацией свободного гемоглобина и концентрацией каталитической активности ферментов не отмечается.

Из механизмов интерференции, вызванной гемолизом, обсуждаются следующие:

- увеличение во внеклеточном пространстве аналитов, которые обычно содержатся в клетках крови, например наблюдается увеличение в 10 раз и более, аспартатаминотранс-феразы, лактатдегидрогеназы;

- оптическая интерференция вследствие сильного свето-поглощения гемоглобином при длине волны 415 нм;

- химическая интерференция содержимого клеток крови, например эритроцитов, которая может быть прямой или непрямой. Так, высвобождение аденилаткиназы из эритроцитов, которая повышает активность креатинкиназы и креатинкиназы-МВ и действие которой тормозится специаль-

ным ингибитором, обычно добавляемым в рабочий реактив для измерения каталитической концентрации креатинкиназы оптическим тестом, ведет к ложнозавышенным результатам в случае гемолиза, особенно, если ингибитора аденилаткина-зы в реактиве недостаточно [10]. Это пример непрямой интерференции - влияние на результат разведения сыворотки или плазмы содержимым клеток крови при гемолизе.

Окончательный результат будет суммарным от воздействия указанных факторов. Из механизмов интерференции липемии следует отметить спектральную интерференцию, связанную с увеличением светорассеяния под различными углами при измерениях в мутных пробах, что мешает измерению светопоглощения в них. Интерференция может быть и позитивной (как в случае а-амилазы), и негативной, с занижением результатов (как в случае с лактатдегидрогеназой), в зависимости от процедуры поправки на холостую пробу. При высокой мутности измерение вообще оказывается невозможным вследствие превышения пределов линейности спектрофотометра; так называемый эффект перемещения растворителя, который характерен для липопротеинов. В результате объем воды доступной водорастворимым аналитам в пипетируемой пробе сыворотки или плазмы сижается и результаты занижены. В тех случаях, когда речь идет об анали-тах, растворимых в липидах, - наоборот, завышены.

Билирубин обладает высоким светопоглощением в диапазоне длин волн 340-500 нм, и это может привести к высоким значениям холостых проб и несоблюдению линейности. Чаще всего это сопровождается занижением активности ферментов при высоких (например, 60 мг/дл) концентрациях конъюгиро-ванного или неконъюгированного билирубина, а кислая фос-фатаза, простатическая и непростатическая, дает занижение активности уже при более низких концентрациях билирубина. Химическая интерференция билирубина в большей степени выражена в ферментативных методах измерения метаболитов вследствие окисления билирубина в биливердин и билипур-пурин в оксидазных-пероксидазных реакциях с образованием перекиси водорода ( в реакции Триндера) [11].

Визуальная оценка эндогенных интерферентов в образцах требует продолжительного времени, субъективна и не-стандартизованна. Индивидуальные и зависящие от времени дня различия в освещении вносят большие колебания в этот процесс. Даже если она выполнена опытным и квалифицированным персоналом, она ненадежна и ее, если есть возможность, заменяют объективными методами, к которым относятся спектрофотометрические ручные и автоматические методы, последние используют измерение и расчет индексов сыворотки или плазмы.

Индексы сыворотки рассчитываются на основе измерения светопоглощения проб, это значения, представляющие полуколичественные или количественные уровни желтушности, гемолиза и липемии проб с неизвестной концентрацией аналита. И таким образом преаналитическое качество образцов в отношении этих эндогенных интерферентов оценивается на некоторых автоанализаторах в то же время, что и выполнение анализа. Измерение индексов сыворотки/плазмы на анализаторах было введено впервые фирмой "Roche Diagnostics" в 80-х годах прошлого столетия. В качества реагента используется 9% раствор хлорида натрия, а объем образца очень мал (6 мкл). Далее следует биохроматическое измерение для индекса билирубина при длинах волн 480 и 505 нм (диапазон 1), гемолиза 570 и 600 нм (диапазон 2) и липемии 660 и 700 нм (диапазон 3).

Спектральное перекрытие корригируется с помощью специальных формул. Такие автоматические платформы используются на многих автоанализаторах ("Hitachi Systems", "COBAS INTEGRA", Cobas c501, Cobas 6000, фирмы "Roche Diagnostics Synchron" LX20PR0 фирмы "Beckman Coulter Inc.", анализаторы AU-400, AU-460 фирмы "Olympus" и др. Таким образом для каждого исследуемого образца эти индексы автоматически измеряются и автоматически сообщаются вместе с результатом, распечатывается соответствующий

"флаг", если превышаются заложенные для каждого анали-та, в том числе и для ферментов, пределы индексов липемии, гемолиза, иктемии L, Н, I. Эта технология позволяет стандартизовать преаналитический этап, улучшить качество сообщаемых результатов. Изготовители анализаторов и реагентов в инструкциях сообщают значения индексов сыворотки/ плазмы и пределы значений их для каждого аналита в зависимости от используемого прибора и реагента.

Что касается других интерферентов, например кароти-ноидов, лекарств или их метаболитов, в тех случаях, когда они изменяют внешний вид образца, то сведений относительно визуальной оценки их присутствия в образцах, в том числе и при измерении каталитической активности ферментов, практически нет. Влияние лекарственных веществ на лабораторные исследования активности ферментов широко распространено из-за многочисленности как лекарственных средств, так и лабораторных тестов. Аналитическое влияние происходит в результате воздействия лекарственного средства или его метаболита на ход реакции, лежащей в основе принципа аналитической технологии. Чаще всего это воздействия гепатотоксических, нефротоксических, противосу-дорожных средств, пероральных контрацептивов. Возможны другие механизмы влияния лекарств. Например, биологическое влияние in vivo циклофосфамида на холинэстеразу проявляется через механизм торможения фермента в плазме, что вызывает занижение результатов. Фенитоин вызывает завышение результатов при измерении каталитической концентрации у-ГТ в плазме, что связано с индукцией фермента.

Сведения о влиянии различных лекарств представлены в Приложении Д упомянутого ГОСТа Р 53079-4.2008 [2].

Сведения об условиях хранения и стабильности ферментов в крови с различными антикоагулянтами, сыворотке и плазме представлены в Приложении Б [2] этого национального стандарта.

Особенности преаналитического этапа для каждого фермента для повседневного и экстренного анализа должны быть отражены в стандартных операционных процедурах в каждой лаборатории, так же как рекомендации по менеджменту образцов, в которых выявлена неправильно оформленная документация, интерференция и др.

Таким образом, для выполнения преаналитического этапа при измерении концентрации каталитической активности ферментов, позволяющего получить точные результаты, объективно отражающие состояние пациента, необходимо следо-

вать правилам и рекомендациям указанных выше стандартов, касающихся каждого звена этого этапа, необходима разработка стандартных операционных процедур для этих звеньев, стандартных инструкций для пациентов и врачей, планирующих анализы, стандартных операционных процедур для персонала, ответственного за взятие биоматериала, его обработку, транспортировку и хранение до лаборатории и внутри лаборатории, пособий с описанием факторов, влияющих на результаты при выполнении конкретных аналитических технологий и использовании конкретных анализаторов, критериев и подходов к выявлению дефектных образцов и их выбраковке.

ЛИТЕРАТУРА

1. ГОСТ Р ИСО 15189 - 2009. Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности. П. 5.4. Преаналитиче-ские процедуры. - М.: Стандартинформ, 2010.

2. ГОСТ Р 53079.4 - 2008. Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Ч. 4. Правила ведения нреаналитического этана. - М.: Стан-дартинформ, 2009.

3. ГОСТ Р ИСО б710 - 2009. Контейнеры для сбора образцов венозной крови одноразовые. Технические требования и методы испытаний. - М.: Стандартинформ, 2009.

4. ГудерВ. Г., Нарайанан С., ВиссерГ., ЦавтаБ. Диагностические пробы: от пациента до лаборатории. Влияние преаналитических факторов на качество результатов лабораторных исследований: Пер. с англ. В. В. Меньшикова. - М., 2010.

5. КондрашеваЕ. А. // Клин. лаб. диагн. - 2010. - № 9. - С. 41.

6. DaFonseca-WollheimF., Guder W., Schmitt Y. M. et al. http://www. diagnosticsample.com/introduction.php3?lang=en/...

7. Guder W. G., Schmitt Y. et al. Применение антикоагулянтов в клинических лабораторных исследованиях: Пер. с англ. В. В. Меньшикова. - М., 2002.

8. Lippi G., Banfo G., Buttarello M. et al. // Clin. Chem. Lab. Med. -2007. - Vol. 45. - P. 728-73б.

9. PlebaniM., CarraroP. // Clin. Chem. - 1997. - Vol. 43. - P. 13481351.

10. Schumann G., Cannalias F., Jorgensen P. et al. // Clin. Chem. Lab. Med. - 2010. - Vol. 48. - P. 5.

11. Serum Indices: Reduction of clinical errors in laboratory medicine. Going straight for the answer. Roche Diagnostics GmbH. 2007. www.roche.com.

12. Thomas L. // Clinical laboratory diagnostics / Ed. L. Thomas. -Franfkurt/Main, 1998. - P. 29-100.

Поступила 07.12.11

© коллектив авторов, 2012

УДК 616.33/.34-036.12-053.2-092:612.015.31]-074

Н. А. Соколова, м. И. Савина, Г. Л. Карян, Ю. Г. мухина

изменение концентрации эссЕнцидльных микроэлементов в плазме крови у детей с хроническими заболеваниями желудочно-кишечного тракта, имеющих различную массу тела

ГОУ БПО Российский государственный медицинский университет, москва

Цель исследования — изучить особенности изменений показателей минерального обмена при хронических заболеваниях желудочно-кишечного тракта у детей различного возраста с нормальной и избыточной в разной степени массой тела. Обследовано 127 детей в возрасте от 6 до 15 лет, у которых были выявлены хронические гастродуоденит, панкреатит, холецистит. Концентрацию биоэлементов в плазме крови определяли методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой. В ходе исследования установлено повышение концентрации молибдена в 4,3 раза, хрома в 8,4 раза и селена в 1,36 раза. Выявленный биоэлементный дисбаланс оказывает влияние на общее состояние здоровья детей, течение заболевания и должен учитываться при проведении терапии, направленной на коррекцию минерального обмена.

Ключевые слова: хром, молибден, селен, масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой, хронические заболевания желудочно-кишечного тракта, дети

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.