CC BY
70
УДК 57.045; 616-092
DOI: 10.24411/1816-1863-2020-11015
ПОВРЕЖДЕНИЯ ДНК КЛЕТОК КРОВИ ВОЛОНТЕРОВ ЮНОШЕСКОГО ВОЗРАСТА, ВЫЗВАННЫЕ ПОТРЕБЛЕНИЕМ ФАСТФУДА И ПОСЕЩЕНИЕМ СОЛЯРИЯ
И. Н. Калашников, к. б. н.,
доцент кафедры биологии
ФГБОУ ВО «Приволжский
исследовательский медицинский
университет»,
ilia17ne@mail.ru,
Нижний Новгород, Россия,
И. А. Чернигина, зав. лабораторией
молекулярной биологии кафедры биологии
ФГБОУ ВО «Приволжский
исследовательский медицинский
университет»,
chernigina.i@mail.ru,
Нижний Новгород, Россия,
Т. Г. Щербатюк, доктор биологических
наук, профессор, ведущий научный
сотрудник группы бактериологии
отдела лабораторных исследований
НИИ профилактической медицины
университетской клиники
ФГБОУ ВО «Приволжский
исследовательский медицинский
университет»,
ozone_stg@mail.ru,
Нижний Новгород, Россия,
Н. И. Зазнобина, кандидат биологических
наук, доцент кафедры экологии
Института биологии и биомедицины
ФГАОУ ВО «Национальный
исследовательский Нижегородский
государственный университет
им. Н. И. Лобачевского»,
dis212.166.12@gmail.com,
Нижний Новгород, Россия
СП
х
О
О -1
Здоровье человека является достаточно сложной категорией и представляет собой результат взаимодействия организма с окружающей средой. По оценкам экспертов ВОЗ, удельный вес влияния образа жизни на состояние здоровья населения составляет 49—53 %. Целью нашей работы являлось изучение методом ДНК-комет («dna-comet assay») уровня спонтанных повреждений ДНК лейкоцитов периферической крови сорока пяти добровольцев, вызванных еженедельным посещением солярия и длительным потреблением фастфуда. Проводили оценку повреждений ДНК лейкоцитов периферической крови молодых людей. Исследование показало, что в образцах волонтеров, ведущих условно здоровый образ жизни, в 99 % случаев содержатся ДНК-кометы характерные для нуклеотидов жизнеспособных клеток. В образцах волонтеров, питающихся фастфудом, в 90 % случаев присутствуют ДНК-кометы, свойственные ассиметричным нукле-оидам, которые чаще всего образуются после воздействия гетерогенных стрессоров. В образцах волонтеров, посещающих солярий, в 89 % случаев формируются ДНК-кометы с выраженными, ярко флуоресцирующими головой и хвостом, в 11 % — нуклеоиды погибающих клеток. Установлено, что питание фастфудом вызывает повышение уровня спонтанных мутаций ДНК в пять раз (ТДНК% = 13 ± 0,5), а посещение солярия в четыре раза (ТДНК% = 11 ± 0,7) по сравнению с величиной этого показателя молодых людей, ведущих условно здоровый образ жизни (ТДНК% = 2,5 ± 0,2). Полученные результаты не дают возможности сделать окончательные выводы о силе разрушительного действия данных факторов образа жизни на организм человека, но позволяют предложить экспресс-метод оценки функционального состояния организма. C помощью метода ДНК-комет возможно проведение массового скрининга для выявления групп риска и разработки персональных рекомендаций по ортобиозу.
15
Human health is a complex concept and is the result of the interaction of the organism with the environment. A healthy person is not the one who does not have abnormalities, but who can perform his/her ¡^ biological and social functions without restrictions. According to experts the share of lifestyle influence ^ on the health of the population is 49—53 %. The purpose of our research is to study the level of spon-§ taneous damages of leukocyte DNA of peripheral blood of forty-five volunteers caused by a weekly visit lO to the solarium and long consumption of fast food by DNA-comet assay. The DNA comet method was used to evaluate the damage to leukocytes from peripheral blood of young people. The study showed that the samples of volunteers, leading a healthy lifestyle, in 99 % of cases contain DNA comets characteristic of nucleoids of viable cells. In the samples of fast food volunteers, in 90 % of cases there are DNA comets peculiar to asymmetric nucleoids, which are most often formed after exposure to heterogeneous stressors. In the samples of volunteers visiting the solarium, in 89 % of cases DNA comets with pronounced, brightly fluorescent head and tail are formed, and in 11 % nucleoids of dying cells are formed. The study showed that eating fast food causes an increase in the level of spontaneous mutations of DNA by 5 times (TDNA% = 13 ± 0,5) and visiting the solarium causes a four-fold increase (TDNA% = 11 ± 0,7) compared with the values of the conditionally healthy (TDNA% = 2.5 ± 0,2). The obtained results do not give an opportunity to draw definitive conclusions on the destructive effect of the lifestyle factors on the human body, but allow us to offer the express method for assessing the functional state of the organism. Mass screening is possible to identify risk groups and develop personal recommendations for orthobiosis by DNA comet assay.
Ключевые слова: метод ДНК-комет; солярий; фастфуд; повреждения ДНК. Keywords: DNA-comet assay; solarium; fast food; DNA damage.
16
Введение
Здоровье человека является достаточно сложной категорией и представляет собой результат взаимодействия организма с окружающей средой. Оформилась новая здоровье-центрическая парадигма: здоровый ч еловек не тот, у кого нет отклонений от нормы, а тот, кто без ограничений может выполнять свои биологические и социальные функции [1]. По оценкам экспертов ВОЗ, удельный вес влияния отдельных факторов на состояние здоровья составляет:
• образ жизни — 49—53 %;
• генетические и биологические факторы — 18—22 %;
• окружающая среда — 17—20 %;
• состояние здравоохранения — 8—10 % [2].
Состояние здоровья молодежи является важнейшим показателем потенциала всего общества. Многие подростки уже в школе приобретают вредные привычки: курение, употребление фастфуда и алкоголя, посещение солярия и др., которые негативным образом влияют на состояние здоровья данной возрастной категории.
Широкий ассортимент продуктов питания, фастфуда ведет к изменению привычек питания: молодые люди все чаще пропускают завтрак и употребляют в пищу закуски, изредка едят вместе с семьей. Также в ежедневном рационе повышается доля сахара и жиров [3]. Потребление фастфуда связано с высоким риском ожирения [4], а также может провоцировать
возникновение таких заболеваний, как гастрит, язва, сахарный д иабет, атеросклероз, онкологические заболевания, бесплодие [5]. Необходимо отметить, что отрицательные привычки питания обычно коррелируют с такими факторами риска, как курение и употребление алкоголя [6].
Солярий позволяет получить искусственный загар, однако ультрафиолетовое излучение вызывает фотостарение кожи и фотоканцерогенез, развивающиеся при неоднократных воздействиях на кожу УФ-излучения спустя несколько месяцев или лет [7].
В результате около 75 % учащихся выпускных классов имеют хронические заболевания, а показатель первичной заболеваемости среди подростков в России за 1995—2012 гг. увеличился на 95 % [8]. Уровень же смертности российской молодежи в 4—8 раз выше, чем в странах Европы [9].
В связи с этим одной из насущных задач является поиск методов скрининг-диагностики состояния для выявления групп риска и разработки персональных рекомендаций по ортобиозу. Интерес представляет метод DNA-comet assay — ДНК-комет, или «комета-тест», информативный и востребованный в различных областях от генетической токсикологии до эпидемиологии [10—12]. Этот метод был впервые предложен на Международной конференции по гармонизации технических требований для регистрации лекарственных средств для человека (ICH) и ре-
комендован Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (FDA) и Европейским агентством по лекарственным средствам (EMA) для мутагенного анализа лекарств [13].
В связи с вышеизложенным целью нашей работы являлось изучение методом ДНК-комет уровня спонтанных повреждений ДНК лейкоцитов периферической крови добровольцев, вызванных длительным потреблением фастфуда и еженедельным посещением солярия.
Материалы и методы
В исследовании приняли участие сорок пять семнадцатилетних волонтеров, которые предварительно прошли анкетирование. По результатам анкетных данных были исключены добровольцы, курящие на момент исследования, имеющие заболевания и употребляющие лекарственные препараты. После обработки анкетных данных волонтеров разделили на три группы: 15 питались фастфудом (3-ра-зовое питание в сутки, с энергетической ценностью более 1500 ккал/раз) — в дальнейшем будем называть группой «фаст-фуд», 15 еженедельно посещали солярий — в дальнейшем будем называть группой «солярий» (два раза в неделю по 12 минут в солярии использовались лампы низкого давления, мощностью 160 Вт, спектр л амп составлял 97—99 % UVA-лучей и 1—3 % UVB-лучей), 15 вели условно здоровый образ жизни — в дальнейшем будем называть группой « здоровые». Исследование было проведено в соответствии с Хель-синской декларацией Всемирной медицинской ассоциацией (1964 г.), с изменениями и дополнениями от 2013 г. (Форта-леза, Бразилия). От каждого волонтера было получено информированное согласие.
Методом ДНК комет («DNA-comet assay») проводили оценку повреждений ДНК лейкоцитов периферической крови молодых людей. Аликвоты крови (объемом 20 мкл) собирали в эппендорфы, содержащие 0,5 % раствор легкоплавкой агарозы (500 мкл) (37 °С). Конечная концентрация лейкоцитов в растворе составляла 500 000 кл/мл. Далее готовили слайды с индивидуальными клетками в ага-розном геле [14, 15]. Слайды подвергали электрофорезу в стандартной горизонтальной электрофоретической камере SE-2 («Хеликон», Россия). Окрашивание про-
водили флуоресцентным красителем SYBR Green I (Sigma, USA). Слайды анализировали прямым микроскопом Nikon Eclipse Ni-U (Nikon Corporation, Япония). Фотографирование ДНК-комет проводили цифровой камерой серии DS, модель DS-Fi2 (Nikon Corporation, Япония). Полученные изображения обрабатывали с помощью специализированного программного обеспечения Comet.exe, разработанного для регистрации и анализа отображений В. Н. Степановым [16]. Для каждого образца крови готовили стекло с двумя слайдами. Анализировали кометы со слайдов и из полученных данных с каждого стекла рассчитывали среднее значение для каждой экспериментальной точки. Таким образом, были получены средние значения уровня повреждений ДНК после анализа 50 комет для каждого волонтера. Для количественной оценки уровня повреждений ДНК использовали параметр ТДНК% (Т от англ. «tail» — хвост, процент повреждения ДНК) [17]. Все данные имели нормальное распределение (по критерию Колмогорова — Смирнова), поэтому дальнейший статистический анализ проводили по параметрическому критерию Стьюден-та с поправкой Бонферрони при множественных сравнениях. Все данные представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка. Данные обрабатывали с помощью пакета программы Microsoft Office Excel и STATISTICA 8.
Результаты и обсуждение
Нами выявлены следующие особенности в морфологии «комет» крови добровольцев.
В образцах волонтеров, ведущих условно здоровый образ жизни (рис. 1), в 99 % случаев содержатся ДНК-кометы, характерные для нуклеоидов жизнеспособных клеток. Они имеют вид сферы со светящимся «гало» вокруг комровой части. Сфера содержит центральное ядро — пустота в агарозном геле, оставшаяся после лизиса клетки, заполненная нитями перепутавшейся ДНК. «Гало» представляет собой петли ДНК, прикрепленные к белкам ядерного матрикса. Тронов и соавторы называют такие частицы ДНК-сферами [18].
Еженедельное посещение солярия и питание фастфудом приводят к формированию «комет» с ярко флуоресцирующими выраженными хвостами, образован-
сп s
О
О -1 S
17
О ш
Рис. 1. Микрофотография нуклеоидов
лейкоцитов периферической крови волонтеров, ведущих условно здоровый образ жизни (увеличение х 200)
18
Рис. 2. Микрофотография нуклеоидов лейкоцитов периферической крови волонтеров, питающихся фастфудом (увеличение х200): 1 — асимметричные «кометы», обычно формирующиеся после генотоксического воздействия; 2 — «кометы», характерные погибающим клеткам после воздействия
ными мигрирующими при электрофорезе повреждениями ДНК.
В образцах волонтеров, питающихся фастфудом (рис. 2), в 90 % случаев присутствуют ДНК-кометы, характерные для ассиметричных нуклеоидов, которые чаще всего образуются после воздействия гетерогенных стрессоров. В 10 % случаев ДНК-кометы были представлены нуклео-идами, которые характерны для погибающих клеток. У д анного типа «комет» фраг-ментированные участки ДНК мигрируют в «хвост» кометы, в то время как не фрагментированные представляют собой ее «голову». У «комет» такого типа наблюдаются хвосты со слабой флуоресценцией. Это обусловлено глубокой деградацией ДНК и экскрецией ее низкополимерных фрагментов из клетки [19].
В образцах волонтеров, посещающих солярий (рис. 3), в 89 % случаев формируются ДНК-кометы с выраженными, ярко флуоресцирующими головой и хвостом, в 11 % — нуклеоиды погибающих клеток.
Количественный анализ повреждений ДНК лейкоцитов периферической крови семнадцатилетних добровольцев показал, что у волонтеров, относящихся к группе «здоровые» уровень спонтанных повреждений, соответствует ТДНК% = 2,5 ± 0,2, что не превышает ранее установленных контрольных значений (до 10 %) [20].
Питание фастфудом вызывает повышение уровня спонтанных мутаций ДНК в пять раз (ТДНК% = 13 ± 0,5), а посещение солярия — в четыре раза (ТДНК% = = 11 ± 0,7) по сравнению со значениями условно здоровых (ТДНК% = 2,5 ± 0,2).
Значительное (в пять раз) повышение уровня спонтанных мутаций ДНК волонтеров, питающихся фастфудом, мы связываем с ростом содержания во многих продуктах фастфуда акриламида. Акриламид СИ2=СИСМИ2 с химической точки зрения представляет собой амид акриловой кислоты. Исследователи полагают, что образование специфических аддуктов ДНК, таких как 2-карбамоил-2-гидроксиэтил гуанин и глицидамид, представляет собой путь, лежащий в основе генотоксичности и канцерогенности акриламида [18]. В м о-дельных экспериментах на трансгенных мышах, было показано значительное увеличение частот мутантных аллелей репор-терного гена gpt, а также значительное увеличение количества трансверсий ОС-ТЛ и делеций одиночных оснований после воздействия акриламида. 2-карбамоил-2-гид-роксиэтил гуанин обнаруживали у всех
Рис. 3. Микрофотография нуклеоидов лейкоцитов периферической крови волонтеров, посещающих солярий (увеличение х200)
обработанных акриламидом мышей, причем содержание этого вещества было прямо пропорционально дозе акриламида, которую получали мыши. Общие данные ясно показывают причинную связь между аддуктами ДНК, индуцируемыми акрила-мидом и мутациями гена на канцерогенных сайтах-мишенях [18].
Сходные данные о генотоксичности и мутагенности некоторых продуктов питания и готовых к употреблению закусок были показаны в Финляндии [21]. Уровень мутагенной активности некоторых продуктов был в 2,5—13 раз выше, чем у контрольных образцов.
Повышение уровня спонтанных повреждений ДНК у добровольцев, посещающих солярий, вероятно, связано с гено-токсическим эффектом УФ-излучения. Похожие результаты о повреждении ДНК УФ-излучением были получены и другими исследователями. Так, в работе [22] было показано, что ароматическое кольцо основания ДНК подвергается непосредственной прямой атаке УФ-излучения, вызывая генные мутации в виде трансверсий пиримидиновых оснований (тимин и цито-зин), в результате которых появляются так называемые горячие точки (hot spots) — индуцированные УФ повреждения и мутации ДНК. Также необходимо отметить, что УФ-излучение спектра А (УФА; диапазон 320—400 нм) в отличие от спектра В (УФВ; диапазон 280—320 нм) не абсорбируется непосредственно основаниями ДНК, а вступает в реакцию предположительно с другими эндогенными фотосен-
сибилизаторами, образуя активные формы кислорода: синглетный, супреоксидные и гидроксильные радикалы, перекись водорода, которые, в свою очередь, приводят к значительным повреждением ДНК [23].
Заключение
Методом ДНК-комет установлено, что питание фастфудом и посещение солярия вызывают повышение уровня спонтанных повреждений ДНК лейкоцитов периферической крови волонтеров в пять и четыре раза, соответственно, по сравнению со значениями условно здоровых волонтеров.
Полученные на немногочисленных данных результаты не дают пока возможности делать окончательные выводы о силе разрушительного действия подобных стрессоров на организм, но позволяют предложить экспресс-метод оценки функционального состояния организма, что является основой персонализированной медицины. Методом «DNA-comet assay» возможно проведение массового скрининга для выявления групп риска и разработки персональных рекомендаций по орто-биозу.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Благодарности
Авторы благодарны Сироте Н. П. и Кузнецовой Е. А., сотрудникам ИТЭБ РАН, за помощь, оказанную на этапе освоения метода DNA-comet assay.
en s
О
О -i S
Библиографический список
1. Швецов А. Г., Швецов Д. А. Новый концептуальный подход к оценке физического здоровья взрослого населения // Гигиена и санитария. — 2012. — № 4. — С. 90—94.
2. Величковский Б. Т. Социальный стресс, трудовая мотивация и здоровье // Российский медицинский журнал. — 2006. — № 6. — С. 8—14.
3. Walther J., Aldrian U., Stüger H.P., Kiefer I., Ekmekcioglu C. Nutrition, lifestyle factors, and mental health in adolescents and young adults living in Austria // Int. J. Adolesc. Med. Health. — 2014. — 26 (3). — pp. 377—86.
4. Aranceta-Bartrina J., Pérez-Rodrigo C. Determinants of childhood obesity: ANIBES study // Nutr. Hosp. - 2016. — № 12. — 33 (4). — pp. 17—20.
5. Михалева М. А., Воблая И. Н. Фастфуд как основная проблема формирования здорового образа жизни студента // Материалы межвузовской научно-практической интернет-конференции «Здоровый образ жизни как условие устойчивого развития государства и фактор формирования конкурентоспособной личности» / Новороссийск: МГЭИ АНО ВПО НФ. — 2015. — С. 76—82.
6. Azeredo C.M., de Rezende L.F., Canella D.S. Dietary intake of Brazilian adolescents // Public Health Nutr. - 2015. — № 18 (7). — pp. 1215—1224.
7. Олисова О. Ю., Владимирова Е. В., Бабушкин А. М. Кожа и солнце // Российский журнал кожных и венерических болезней. — М.: Изд-во «Медицина». — 2012. — № 6. — С. 57—62.
19
IK S
О
8. Кондакова Н. А. Здоровый образ жизни молодого поколения // Вопросы территориального развития. — 2013. — № 8 (8). — 3 с.
9. Зимина Л. А., Боева А. В. Характеристика некоторых факторов, влияющих на здоровье молодежи // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. — 2016. — № 1. —
s С. 347—351.
LO
10. Araldi R., de Melo T., Mendes T., de Sá Júnior P., Nozima B., Ito E., de Carvalho R., de Souza E., de Cassia Stocco R. Using the comet and micronucleus assays for genotoxicity studies: A review // Biomed. Pharmacother. — 2015. — № 72. — pp. 74—82.
11. Plotnikov E., Zhuravkov S., Gapeyev A., Plotnikov V., Martemianova I., Martemianov D. Comparative study of genotoxicity of silver and gold nanoparticles prepared by the electric spark dispersion method // Jour. Appl. Pharm. Sci. — 2017. — № 7 (7). — pp. 35—39.
12. Gapeyev A. B., Lukyanova N. A., Gudkov S. V. Hydrogen peroxide induced by modulated electromagnetic radiation protects the cells from DNA damage // Cent. Eur. J. Biol. — 2014. — № 9 (10). — pp. 915—921.
13. Hobbs C., Swartz C., Maronpot R., Davis J., Recio L., Hayashi S. Evaluation of the genotoxicity of the food additive, gum ghatti // Food Chem. Toxicol. — 2012. — № 50. — pp. 854—860.
14. Дурнев А. Д., Жанатаев А. К., Анисина Е. А. и др. Применение метода щелочного гель-электрофореза изолированных клеток для оценки генотоксических свойств природных и синтетических соединений. — М.: Полиграфсервис, 2006. — 27 с.
15. Speit G., Hartmann A. The comet assay: a sensitive genotoxicity test for the detection of DNA damage and repair // Methods Mol. Biol. — 2006. — № 314. — pp. 275—286.
16. Степанов B. H. Методы и программные средства автоматизации анализа изображений медико-биологических микрообъектов // дис. канд. техн. наук: 05.13.11, Москва. — 2005. — 124 с.
17. Сирота Н. П., Кузнецова Е. А. Применение метода «комета тест» в радиобиологических исследованиях // Радиационная биология. Радиоэкология. — 2010. — Т. 50. — № 3. — С. 329—339.
18. Ishii Y., Matsushita K., Kuroda K., Yokoo Y. Acrylamide induces specific DNA adduct formation and gene mutations in a carcinogenic target site, the mouse lung // Mutagenesis. — 2015. — № 12. — 30 (2). — pp. 227—235.
19. Tronov V. A., Nikol'skaya T. A., Konoplyannikov M. A. DNA comet as a marker of cell death // Bio-flzika. — 1999. — № 2. — Vol. 44. — pp. 288—295.
20. Collins A. R. Measuring oxidative damage to DNA and its repair with the comet assay // Biochimica et Biophysica Acta. — 2014. — № 1840. — pp. 794—800.
21. Omoruyi I. M., Pohjanvirta R. Genotoxicity of processed food items and ready-to-eat snacks in Finland // Food chemistry. — 2014. — № 162. — pp. 206—214.
22. Сметанина Н. М., Пустовалова М. В., Осипов А. Н. Влияние инкубации в гипертонических растворах хлорида натрия на повреждаемость ДНК лимфоцитов крови человека длинноволновым УФ-излучением // Радиационная биология. Радиоэкология. — 2008. — Т. 53. — № 6. — С. 620—624.
23. Снарская Е. С. Фотоканцерогенез, и профилактика рака кожи // Российский журнал кожных и венерических болезней. — М.: Изд-во «Медицина». — 2012. — № 5. — С. 10—13.
DAMAGE OF DNA OF BLOOD CELLS IN YOUNG AGE VOLUNTEERS CAUSED BY CONSUMPTION OF FAST FOOD AND VISITING SOLARIUM
20
I. N. Kalashnikov, Ph. D. (Biology), Associate Professor of the Biology Department
at the Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education
"Privolzhsky Research Medical University " of the Ministry of Health of the Russian Federation,
ilia17ne@mail.ru.
I. A. Chernigina, assistant of the Biology Department at the Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Privolzhsky Research Medical University" of the Ministry of Health of the Russian Federation, chernigina.i@mail.ru. T. G. Shcherbatyuk, Ph. D. (Biology), Dr. Habil, Professor, Senior Researcher at the Bacteriology Group of the Laboratory Research Department at the Research Institute of Preventive Medicine at the University Clinic Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Privolzhsky Research Medical University" of the Ministry of Health of the Russian Federation, ozone_stg@mail.ru.
N. I. Zaznobina, Ph. D. (Biology), Associate Professor of the Ecology Department Lobachevsky State University of Nizhni Novgorod, dis212.166.12@gmail.com.
References
1. Shvetsov A. G., Shvetsov D. A. Novyj konceptual'nyj podhod k ocenke fizicheskogo zdorov'ya vzroslogo naseleniya [A new conceptual approach to assessing the physical health of adults] Gigiena i sanitariya [Hygiene and sanitation]. 2012. No. 4. P. 90—94 [in Russian].
2. Velichkovskii B. T. Social'nyj stress, trudovaya motivaciya i zdorov'e [Social stress, work motivation and health] Rossiiskii meditsinskii zhurnal [Russian medical journal]. 2006. No 6. P. 8—14 [in Russian].
3. Walther J., Aldrian U., Stüger H. P., Kiefer I., Ekmekcioglu C. Nutrition, lifestyle factors, and mental health in adolescents and young adults living in Austria. Int. J. Adolesc. Med. Health. 2014. No. 26 (3). P. 377—86.
4. Aranceta-Bartrina J., Pérez-Rodrigo C. Determinants of childhood obesity: ANIBES study. Nutr. Hosp. 2016. No. 12. 33 (4). P. 17—20.
5. Mikhaleva M. A., Voblaya I. N. Materialy mezhvuzovskoi nauchno-prakticheskoi internet konferentsii "Zdorovyi obraz zhizni kak uslovie ustoichivogo razvitiya gosudarstva i faktor formirovaniya konkurent-osposobnoi lichnosti" [Proc. of the inter-university scientific-practical Internet conference "Healthy way of life as a condition for sustainable development of the state and the factor of formation of a competitive personality"] Novorossiisk. 2015. P. 76—82 [in Russian].
6. Azeredo C. M., de Rezende L. F., Canella D. S. Dietary intake of Brazilian adolescents. Public Health Nutr. 2015. No. 18(7). P. 1215—1224.
7. Olisova O. Yu., Vladimirova E. V., Babushkin A. M. Kozha i solnce [Skin and sun] Rossiiskii zhurnal kozhnykh i venericheskikh boleznei [Russian journal of skin and venereal diseases]. 2012. No. 6. P. 57—62 [in Russian].
8. Kondakova N. A. Zdorovyj obraz zhizni molodogo pokoleniya [Healthy lifestyle of the younger generation]. Voprosy territorialnogo razvitiya [Territorial development issues]. 2013. No. 88. P. 3. [in Russian].
9. Zimina L. A., Boeva A. V. Mezhdunarodnyi zhurnalprikladnykh i fundamentalnykh issledovanii [International journal of applied and fundamental research]. 2016. No. 1 P. 347—351 [in Russian].
10. Araldi R., de Melo T., Mendes T., de Sá Júnior P., Nozima B., Ito E., de Carvalho R., de Souza E., de Cassia Stocco R. Using the comet and micronucleus assays for genotoxicity studies: A review. Biomed Pharmacother. 2015. No. 72. P. 74—82.
11. Plotnikov E., Zhuravkov S., Gapeyev A., Plotnikov V., Martemianova I., Martemianov D. Comparative study of genotoxicity of silver and gold nanoparticles prepared by the electric spark dispersion method. Jour. Appl. Pharm. Sci. 2017. No. 7(7). P. 35—39.
12. Gapeyev A. B., Lukyanova N. A., Gudkov S. V. Hydrogen peroxide induced by modulated electromagnetic radiation protects the cells from DNA damage. Cent. Eur. J. Biol. 2014. No. 9 (10). P. 915—921.
13. Hobbs C., Swartz C., Maronpot R., Davis J., Recio L., Hayashi S. Evaluation of the genotoxicity of the food additive, gum ghatti. Food Chem. Toxicol. 2012. No. 50. P. 854—860.
14. Durnev A. D., Zhanataev A. K., Anisina E. A. et al. Primenenie metoda shchelochnogo gel'-elektroforeza izolirovannykh kletok dlya otsenki genotoksicheskikh svoistv prirodnykh i sinteticheskikh soedinenii [The use of the method of alkaline gel-electrophoresis of isolated cells to assess the genotoxic properties of natural and synthetic compounds]. Moscow, Poligrafservis Publ. 2006. 27 p. [in Russian].
15. Speit G., Hartmann A. The comet assay: a sensitive genotoxicity test for the detection of DNA damage and repair. Methods Mol. Biol. 2006. No. 314. P. 275—286.
16. Stepanov V. N. Metody i programmnye sredstva avtomatizatsii analiza izobrazhenii mediko-biolog-icheskikh mikroob'ektov. Diss. kand. techn. nauk, 05.13.11 [Methods and software for automation of image analysis of biomedical microobjects. Thesis synopsis for Dr. Sci (Engineering)]. Moscow, 2005. 124 p. [in Russian].
17. Sirota N. P., Kuznetsova E. A. Radiatsionnaya biologiya. Radioekologiya [Radiation biology. Radioecol-ogy]. 2010. No. 3. Vol. 50. P. 329—339 [in Russian].
18. Ishii Y., Matsushita K., Kuroda K., Yokoo Y. Acrylamide induces specific DNA adduct formation and gene mutations in a carcinogenic target site, the mouse lung. Mutagenesis. 2015 . No. 12. 30 (2). P. 227—235.
19. Tronov V. A., Nikol'skaya T. A., Konoplyannikov M. A. DNA comet as a marker of cell death. Biofizika. 1999. No. 2. Vol. 44. P. 288—295.
20. Collins A. R. Measuring oxidative damage to DNA and its repair with the comet assay. Biochimica et Bio-physica Acta. 2014. No. 1840. P. 794—800.
21. Omoruyi I. M., Pohjanvirta R. Genotoxicity of processed food items and ready-to-eat snacks in Finland. Food chemistry. 2014. No. 162. P. 206—214.
22. Smetanina N. M., Pustovalova M. V., Osipov A. N. Vliyanie inkubacii v gipertonicheskih rastvorah hlo-rida natriya na povrezhdaemost' DNK limfocitov krovi cheloveka dlinnovolnovym UF-izlucheniem [Effect of incubation in hypertonic solutions of sodium chloride on the DNA damage of human blood lymphocytes by long-wave UV radiation] Radiatsionnaya biologiya. Radioekologiya [Radiation biology. Radio-ecology]. 2008. No. 6. Vol. 53. P. 620—624 [in Russian].
23. Snarskaya E. S. Fotokancerogenez, i profilaktika raka kozhi [Photo-carcinogenesis and prevention of skin cancer] Rossiiskii zhurnal kozhnykh i venericheskikh boleznei [Russian journal of skin and venereal diseases]. 2012. No. 5. P. 10—13 [in Russian].
cn
o
O -i
21
