CC BY
193
https://doi.ora/10.33647/2074-5982-16-1-82-88
C«D
ПОВЕДЕНЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У КРЫС-ГЕТЕРОЗИГОТ ПО НОКАУТУ ГЕНА ДОФАМИНОВОГО ТРАНСПОРТЁРА DAT
А.Р. Гайнетдинов1*, З.С. Фесенко2, З.Р. Хисматуллина1
1 ФГБОУ ВО «Башкирский государственный университет» 450076, Российская Федерация, Республика Башкортостан, Уфа, ул. Заки Валиди, д. 32
2 ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет» 199034, Российская Федерация, Санкт-Петербург, Университетская наб., д. 7/9
|В настоящей работе приведены результаты сравнительного анализа поведенческих показателей крыс модели генетического дефицита транспортёра дофамина (dopamine transporter, DAT) — гетерозиготных DAT нокаутных крыс (DAT-HET) — и крыс популяции линий Wistar в тестовых установках «Открытое поле», «Приподнятый крестообразный лабиринт» и «Экстраполяционное избавление». Установлено, что крысы DAT-HET характеризуются повышенной двигательной и исследовательской активностью наряду с пониженной тревожностью, а также нарушением когнитивных функций по сравнению с крысами Wistar, использованными в качестве контроля.
■ Ключевые слова: крысы линии DAT-HET, тестирование поведения, дофаминергическая система Конфликт интересов: авторы заявили об отсутствии конфликта интересов.
Для цитирования: Гайнетдинов А.Р., Фесенко З.С., Хисматуллина З.Р. Поведенческие изменения у крыс-гетерозигот по нокауту гена дофаминового транспортёра DAT. Биомедицина. 2020;16(1):82-88. https://doi.org/10.33647/2074-5982-16-1-82-88
Поступила 22.06.2019
Принята после доработки 16.10.2019
Опубликована 10.03.2020
IThis paper presents the results of a comparative analysis of behavioural indicators in rats with modelled genetic dopamine transporter (DAT) deficiency. Two groups of laboratory animals — heterozygous DAT knockout rats (DAT-HET) and Wistar rats — underwent the "Open field", "Elevated plus maze" and "Extrapolation deliverance" tests. It is established that DAT-HET rats are characterized by an increased locomotor and research activity along with reduced anxiety and cognitive impairment compared to Wistar rats used as control.
BEHAVIOURAL CHANGES IN HETEROZYGOUS RATS BY GENE KNOCKOUT OF THE DOPAMINE TRANSPORTER (DAT)
Albert R. Gainetdinov1*, Zoya S. Fesenko2, Zuhra R. Khismatullina1
1 Bashkir State University 450076, Russian Federation, Republic of Bashkortostan, Ufa, Zaki Validi str., 32
2 Saint Petersburg State University 199034, Russian Federation, Saint Petersburg, Universitetskaya embankment, 7/9
Keywords: DAT-HET rats, behavioural testing, dopaminergic system Conflict of interest: the authors declare no conflict of interest.
А.Р Гайнетдинов, З.С. Фесенко, З.Р Хисматуллина «Поведенческие изменения у крыс-гетерозигот по нокауту гена дофаминового транспортёра DAT»
For citation: Gainetdinov A.R., Fesenko Z.S., Khismatullina Z.R. Behavioural Changes in Heterozygous Rats by Gene Knockout of the Dopamine Transporter (DAT). JournalBiomed. 2020;16(1):82-88. https:// doi.org/10.33647/2074-5982-16-1-82-88
Submitted 22.06.2019 Revised 16.10.2019 Published 10.03.2020
Введение
Дофамин контролирует многие жизненно важные физиологические функции и играет важную роль в некоторых психоневрологических расстройствах, таких как шизофрения и синдром дефицита внимания и гиперактивности [17]. Дефицит дофамина является основной причиной двигательных расстройств при болезни Паркинсона [19].
Основные дофаминергические системы берут свое начало от дофаминергических нейронов ствола головного мозга, расположенных в «черной субстанции», а именно в области четверохолмия среднего мозга, являющейся составной частью экстрапирамидной системы. Нейроны темной компактной части связываются в основном с областями хвостатого ядра и скорлупы, образуя нигростриатную систему, тогда как нейроны вентральной области покрышки посылают свои аксоны в вентральную часть стриатума, включающую прилежащее ядро, а также в некоторые др. лимбические и корковые зоны, образуя мезолимбическую и мезокортикальную системы. Небольшие дофаминсодержащие клеточные группы также расположены в гипоталамусе и составляют тубероин-фундибулярную дофаминергическую систему [19].
Внутринейрональный дофамин накапливается в синаптических пузырьках при помощи везикулярного моноаминового транспортера-2 [19]. Дофамин, высвобождаемый во внеклеточное пространство, выполняет свои физиологические функции посредством активации связанных с в-белком Б1- и Б2-подобных рецепто-
ров дофамина [16]. Частично дофамин во внеклеточном пространстве подвержен разбавлению путем диффузии и метаболической деградации. Однако основным путем выведения дофамина из внеклеточного пространства в стриатуме и прилежащем ядре является быстрая рециркуляция этого нейротрансмиттера обратно в дофаминергические терминалы с помощью №7С1--зависимого транспортера дофамина (dopamine transporter, DAT) [6, 10]. После рециркуляции в дофаминергические терминали дофамин хранится до последующего повторного высвобождения [9, 14].
Известно, что нейротрансмиссия дофамина в дорсальном и вентральном стри-атуме необходима для нормальной двигательной функции, а прогрессирующая дегенерация нейронов дофамина в этих областях является известной причиной болезни Паркинсона [25].
Для понимания основных патологических процессов, приводящих к нейропси-хическим заболеваниям, и поиска новых принципов терапии с помощью различных антипсихотиков в 1996 г. группой ученых во главе с М. Г. Кароеном была разработана модель трансгенных мышей. В основу этой модели легли методики генетического таргетинга и гомологичной рекомбинации, которые приводили к полной инактивации гена, кодирующего функциональный белок-переносчик дофамина. Разработанная модель мышей получила название «DAT-KO мыши» [18]. Отсутствие данного белка блокирует захват дофамина из синаптичес-кой щели в терминальный аксон клетки, что снижает внутриклеточный дофамин на 95 % и увеличивает внеклеточный в 5 раз
83
по сравнению с животными дикого типа, приводя к поразительным поведенческим реакциям — гиперактивности, нарушениям когнитивных способностей и регуляции сна [19].
Группа ученых во главе с Р. Р. Гай-нетдиновым в 2018 г. с помощью более современной методики редактирования генома под названием «нуклеаза-цинко-вые пальцы» разработала модель транс-генных крыс БЛТ-КО [8]. Эти крысы, как и БЛТ-КО мыши, лишены функционального переносчика дофамина. Помимо очевидных преимуществ, модель БЛТ-КО крыс имеет больший размер мозга для хирургических манипуляций и электрофизиологических записей, а также близкое физиологическое сходство с человеком. Крысы БЛТ-КО имеют гораздо более широкий набор хорошо зарекомендовавших себя поведенческих подходов для исследования когнитивных функций, чем БЛТ-КО мыши, что играет главную роль в моделировании психоневрологических состояний [15].
В той же публикации Р. Р. Гайнетдинова и др. была описана модель крыс с частично сниженным уровнем переносчика дофамина, названная «БЛТ-ИБТ», или «БЛТ-гетерозиготы» [15]. Если у крыс БЛТ-КО нарушены сайты рестрикции, отвечающие за процесс трансляции на обеих аллелях гена (гомозиготное носительство мутации), то у БЛТ-ИБТ модели нарушение сайта рестрикции происходило на одной аллели гена (гетерозиготное носительст-во мутации). Это приводило к уменьшению сайтов рестрикции функционального белка-переносчика дофамина примерно на 50 % по сравнению с животными дикого типа. Добиться данного фенотипа позволяло скрещивание модели БЛТ-КО с аутбредными животными, не подвергавшимися генетическому редактированию. Концентрация внеклеточного дофамина у этих животных возрастала почти в два
раза по сравнению с обычными крысами. Существенного снижения в концентрации внутриклеточного дофамина обнаружено не было, что некоторые ученые связывают с гомеостатической функцией нейронов. По немногочисленным данным, несмотря на повышенный уровень дофамина, у БЛТ-ИБТ крыс не наблюдалось существенных изменений в локомо-ции. БЛТ-ИБТ модель крыс гораздо менее изучена по сравнению с БЛТ-КО, но они также могут быть полезны в изучении роли и функции дофаминергической системы [15, 10, 14, 19].
Исходя из вышесказанного, целью исследования стало изучение поведенческих особенностей крыс модели БЛТ-ИБТ, которая широко используется при изучении синдрома дефицита внимания и гиперактивности (СДВГ) [7].
Материалы и методы
Экспериментальное исследование было проведено на базе научной лаборатории кафедры физиологии и общей биологии биологического факультета Башкирского государственного университета и Санкт-Петербургского государственного университета в соответствии с Женевской конвенцией от 1985 г. и Хельсинкской декларацией о гуманном отношении к животным от 2000 г. Все животные находились в одинаковых условиях и на обычном рационе питания.
Исследование проводили на двух группах крыс. Первую группу (контрольную) составляли половозрелые крысы популяции линий вторую (опытную) — половозрелые крысы БЛТ-ИБТ. В каждой группе было по 12 животных массой тела 200-250 г. Крысы Wistar были выведены в питомнике лабораторных животных «Пущино» (Московская обл.). Модель БЛТ-ИБТ была выведена в виварии Санкт-Петербургского государственного университета.
А.Р. Гайнетдинов, З.С. Фесенко, З.Р Хисматуллина «Поведенческие изменения у крыс-гетерозигот по нокауту гена дофаминового транспортёра DAT»
DAT-HET крысы были верифицированы с помощью методики генотипирования. При выделении ДНК использовался модифицированный метод «Алкалайн» (Hot shot method), основанный на лизирующем щелочном реагенте и специальном нейтрализующем буфере [20]. Генотипирование проводилось с помощью классического метода ПЦР. Амплификация необходимого участка проводилась с помощью специфической последовательности праймеров (Slc6a3 Cel-1 F 5'-tcctggtcaaggagcagaac-3' и Slc6a3 Cel-1 R 5'-cacaggtagggaaacctcca-3') и при использовании Taq-полимеразы. Для идентификации непосредственно генотипов затем проводилась реакция рестрикции с помощью фермента рестриктазы BtsI MutI. Детекцию продуктов ПЦР проводили с помощью метода гель-электрофореза ДНК с использованием 2 %-го агарозного геля.
Исследование поведения животных проводилось в утренний период (9:00-12:00). Длительность карантина составляла 5 сут. Передвижение животных в тест-системах регистрировали с помощью системы видеорегистрации Logitech HD Webcam C310 (Китай).
Для оценки ориентировочно-исследовательской активности нами был выбран тест «Открытое поле» (ОП), созданный американским исследователем Холлом в 1934 г. [12]. Данный тест является универсальным в оценке исследовательского поведения и вегетативных реакций животного [2, 3, 11]. ОП представляет собой арену в форме круга площадью 100 см2 и высотой 0,4 м. Поверхность разделена на 25 квадратов, из которых 16 находятся на периферии, 9 — внутри. Крыс помещали в центр арены и в течение последующих 5-ти мин регистрировали поведенческие показатели: количество пересеченных квадратов, коли -чество стоек, почесывания шерсти и умывания (груминг), время отсутствия активности, количество фекальных болюсов,
оставленных животным после тестирования [2, 4, 5].
Также для наблюдения за поведением экспериментальных животных в состоянии стресса был использован тест «Приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ), созданный в 1984 г. исследователями Хэндли и Митани [13]. ПКЛ используется для изучения поведения животных в условиях переменной стрессогенности. Лабиринт делится на два закрытых по бокам и спереди перегородками участка (аналоги нор) и два открытых участка, которые в естественных условиях грызуны избегают. Помещали крыс в центральную зону установки, так чтобы нос животного был направлен в сторону открытого «рукава». Стресс от новой обстановки усиливался боязнью высоты, на которую поднят ПКЛ. В течение 5-ти мин фиксировались следующие показатели: число выходов в открытые «рукава», количество актов дефекации, выглядываний вниз, время пребывания в закрытых и открытых «рукавах» и центре.
Тест-система «Экстраполяционное избавление» (ТЭИ), созданная Н. А. Бондаренко в 1985 г., была выбрана как чувствительный метод для выявления нарушений когнитивных способностей у крыс [1]. ТЭИ представлял собой цилиндр, помещенный внутрь емкости. Емкость с цилиндром заполнялась водой на 2,5 см. Температура воды 22 °C. Животное помещалось в цилиндр хвостом вниз. Оценивали показатели: латентный период двигательной активности, латентный период подныривания под край цилиндра, число и длительность аверсивных реакций в форме карабканий и прыжков внутри цилиндра. Время тестирования — 2 мин.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ IBM SPSS Statistics. Различия признавались достоверными при p<0,05.
Результаты и их обсуждение
При анализе поведения животных в ОП нами было установлено, что крысы БЛТ-ИБТ характеризуются большим количеством пересеченных квадратов (77,00±7,13) и стоек (16,83±5,27), что может свидетельствовать о повышенной двигательной и исследовательской активности по сравнению с крысами Wistar, у которых количество пересеченных квадратов и стоек составило 42,50±6,95 и 8,17±3,43 соответственно.
Проведением теста ТЭИ у крыс БЛТ-ИБТ обнаружено нарушение когнитивных функций, проявившееся в увеличении латентного периода подныривания (17,67±6,98 с) и числа безуспешных попыток избегания (11,50±2,17) по сравнению с контрольной группой крыс Wistar — 5,83±1,47 и 3,67±2,16 с соответственно, а также
в снижении длительности латентного периода двигательной активности у крыс БЛТ-ИБТ (0,50±0,84 с) по сравнению с крысами Wistar (4,67±1,37 с).
При анализе поведения животных в ПКЛ нами было установлено, что крысы БЛТ-ИБТ характеризуются большим количеством выглядываний вниз (11,50±2,43), более длительным пребыванием в открытых «рукавах» (34,67±9,42 с) и меньшим временем нахождения в закрытых «рукавах» (177,66±22,40 с), чем крысы Wistar, у которых количество выглядываний вниз составило 3,83±2,23, время нахождения в открытых «рукавах» — 20,17±7,11 с, в закрытых «рукавах» — 230,33±21,16 с. Результаты исследования свидетельствуют о повышенной исследовательской активности, а также о меньшей тревожности крыс БЛТ-ИБТ.
Таблица 1. Сравнение поведенческих показателей крыс Wistar и DAT-HET в тесте «Открытое поле» (M±m) Table 1. Comparison of the behavioural indicators of Wistar and DAT-HET rats in the "Open Field" test (M±m)
Группа Кол-во пересеченных квадратов Кол-во стоек Кол-во фекальных болюсов Длительность неподвижности, с Грумминг, с
Wistar 42,50±6,95 8,17±3,43 2,33±1,21 27,00±9,21 26,50±5,89
DAT-HET 77,00±7,13* 16,83±5,27* 0,83±1,32 20,50±9,65 23,83±5,46
Примечание: * — результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05). Note: * — the results are statistically significant compared to the control (p<0.05).
Таблица 2. Сравнение поведенческих показателей крыс Wistar и DAT-HET в тесте «Приподнятый крестообразный лабиринт» (M±m)
Table 2. Comparison of the behavioural indicators of Wistar and DAT-HET rats in the "Elevated plus maze" test (M±m)
Группа Кол-во выглядываний вниз Время пребывания в закрытых «рукавах», с Время пребывания в открытых «рукавах», с Время пребывания в центре, с Кол-во актов дефекации Число выходов в открытые «рукава»
Wistar 3,83±2,23 230,33±21,16 20,17±7,11 49,00±20,45 1,00±1,10 2,00±0,89
DAT-HET 11,50±2,43* 177,66±22,40* 34,67±9,42* 86,67±20,13* 1,00±1,26 2,17±0,98
Примечание: * — результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05). Note: * — results are statistically significant compared to the control (p<0.05).
Таблица 3. Сравнение поведенческих показателей крыс Wistar и DAT-HET в тесте «Экстраполяционное избавление» (M±m)
Table 3. Comparison of the behavioural indicators of Wistar and DAT-HET rats in the "Extrapolation deliverance" test (M±m)
Группа Латентный период двигательной активности, с Число безуспешных попыток избегания Латентный период подныривания, с
Wistar 4,67±1,37 3,67±2,16 5,83±1,47
DAT-HET 0,50±0,84* 11,50±2,17* 17,67±6,98*
Примечание: * — результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р<0,05). Note: * — the results are statistically significant compared with the control (p<0.05).
А.Р. Гайнетдинов, З.С. Фесенко, З.Р. Хисматуллина «Поведенческие изменения у крыс-гетерозигот по нокауту гена дофаминового транспортёра DAT»
Выводы
Таким образом, установленные в ходе исследования различия в двигательной, исследовательской активности и когнитивной деятельности, а также уровня тревожности между моделью крыс с измененной нейротрансмиссией дофамина (DAT-HET) и аутбредной линией крыс с нормальной нейротрансмиссией дофамина (Wistar) позволяют утверждать, что повышение концентрации дофамина в синапсе и нейроне головного мозга крыс DAT-HET приводит к изменениям в поведенческих реакциях животных. Крысы DAT-HET были более подвижны, у них наблюдалось большее количество пересеченных квадратов в тесте «Открытое поле» и «Приподнятый крестообразный лабиринт». В тесте «Экстраполяционное избавление» крысы DAT-HET показали снижение когнитивных функций, проявившееся в увеличении латентного пе-
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ | REFERENCES
1. Якимова Н.Л., Соседова Л.М. Дофамин-зависимое нарушение поведения белых крыс с интоксикацией сулемой в тесте экстраполяционного избавления. ВСНЦ СО РАМН. 2013;(1): 130-133. [Yakimova N.L., Sosedova L.M. Dofamin-zavisimoe narushenie povedenija belyh krys s intoksikaciej sulemoj v teste ekstrapolyacionnogo izbavleniya [Dopamine-dependent behavioral disorder of white rats with intoxication of the sublimate in the extrapolation disposal test]. VSNTs SO RAMN [East Siberian Scientific Center of the Siberian Branch of the RAMS]. 2013;1:130-133. (In Russian)].
2. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Пер. с англ. Е.Н. Живописцевой. М.: Высшая школа, 1991. 399 с. [Buresh Ya., Bureshova O., H'yuston D.P. Metodiki i osnovnye eksperymenty po izucheniyu mozga i povedeniya [Methods and main experiments on the study of the brain and behavior]. Transl. from English by E.N. Zhivopistseva. Moscow: Vysshaya shkola Publ., 1991. 399 p. (In Russian)].
3. Коплик Е.В., Салиева P.M., Горбунова А.В. Тест открытого поля как прогностический критерий устойчивости крыс линии Вистар к эмоциональному стрессу. Журнал высшей нервной де-
риода подныривания и увеличении числа безуспешных попыток избегания. Повышенная двигательная активность животных и нарушение когнитивных функций, проявившиеся в вышеуказанных тестах, может доказывать, что генетически обусловленная гипофункция транспортера дофамина у этих животных изменяет траекторию функционирования нервной системы, приводя к поведенческому фенотипу сходному с симптомами таких нейро-дегенеративных заболеваний, как синдром дефицита внимания и гиперактивности, шизофрения и биполярное расстройство.
На основании полученных результатов можно утверждать, что крысы БАТ-ИЕТ — модель умеренного повышения активности дофаминовой системы — представляют не меньший интерес для исследований механизмов патогенеза различных психоневрологических расстройств, чем крысы трансгенной модели БАТ-КО.
ятельности. 1995;45(4):775-781. [Koplik E.V., Salieva R.M., Gorbunova A.V. Test otkrytogo polya kak prognosticheskij kryterij ustojchivosti krys linii Vistar k emocional'nomu stressu [Open field test as a prognostic criterion for the stability of Wistar rats to emotional stress]. Zhurnal vysshej nerv-noj deyatel'nosti [J. of Higher Nervous Activity]. 1995;45(4):775-781. (In Russian)].
4. Маркель А.Л. К оценке основных характеристик поведения крыс в тесте открытого поля. Журнал высшей нервной деятельности. 1981;31(2):301— 307. [Markel' A.L. K ocenke osnovnyh harakteristik povedeniya krys v teste otkrytogo polya [To the assessment of the main characteristics of the behavior of rats in the open field test]. Zhurnal vysshej nerv-noj deyatel'nosti [J. of Higher Nervous Activity]. 1981;31(2):301-307. (In Russian)].
5. Семиохина А.Ф., Плескачева М.Г. Неспецифический груминг у крыс при решении экстра-поляционной задачи. Журнал высшей нервной деятельности. 1989;39(2):284-291. [Semiohina A.F., Pleskacheva M.G. Nespecificheskij gruming u krys pri reshenii ekstrapolyacionnoj zadachi [Nonspecific grooming rats in solving the extrapolation problem]. Zhurnal vysshej nervnoj deyatel 'nosti [J. of Higher Nervous Activity]. 1989;39(2):284-291. (In Russian)].
6. Amara S., Sonders M. Neurotransmitter transporters as molecular targets for addictive drugs. Drug and alcohol dependence. 1998:51:87-96.
7. Cinque S., Zoratto F., Poleggi A., et al. Behavioral Phenotyping of Dopamine Transporter Knockout Rats: Compulsive Traits, Motor Stereotypies, and Anhedonia. Frontiers in Psychiatry. 2018;9:43.
8. Efimova E., Gainetdinov R., Budygin E., et al. Dopamine transporter knockout rats: new experimental model in behavioral psychopharmacology research. Neurogenetics. 2016;30:5-15.
9. Gainetdinov R., Caron M. Monoamine transporters: From genes to Behavior. Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 2003;43:261-284.
10. Giros B., Jaber M., Jones S., Wightman R., Caron M. Hyperlocomotion and indifference to cocaine and amphetamine in mice lacking the dopamine transporter. Nature. 1996;379:606-612.
11. Gould T. Mood and anxiety related phenotypes in mice. New York: Humana Press Publ., 2009. 373 p.
12. Hall C. Emotional behavior in the rat. Comparative Psychology. 1934;22:345-352.
13. Handley S., Mithani S. Effects of alpha-adrenoceptor agonists and antagonists in a maze-exploration model of 'fear'-motivated behavior. Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 1984;327:1-5.
14. Jones S., Gainetdinov R., Jaber M., et al. Profound neuronal plasticity in response to inactivation of the dopamine transporter. J. Proceedings of the National Academy of Sciences. 1998;95:4029-4034.
15. Gainetdinov R., Leo D., Sukhanov I., Zoratto F., et al. Cognitive dysfunctions, and BDNF dysregulation in dopamine transporter knock-out rats. Neuroscience. 2018;38:2081-2093.
16. Missale C., Nash S.R., Robinson S., Jaber M., Caron M. Dopamine receptors: From structure to function. Physiological Reviews. 1998;78:189-225.
17. MolinoffP.,Axelrod J. Biochemistry ofcatecholamines. Annual Review of Biochemistry. 1971;412:1-48.
18. Sora I., Wichems C., Takahashi N., Li X., Zeng Z., Revay R., et al. Cocaine reward models: conditioned place preference can be established in dopamine- and in serotonin-transporter knockout mice. Proceedings of the National Academy of Sciences. 1998;95:7699-7704.
19. Sotnikova T.D., Caron M.G., Gainetdinov R.R., et. al. Dopamine-independent locomotor actions of amphetamines in a novel acute mouse model of Parkinson disease. Plos Biology. 2005;8:3.
20. Truett G., Heeger P., et. al. Preparation of PCR-quality mouse genomic DNA with hot sodium hydroxide and tris (HotSHOT). BioTechniques. 2000;1:52-54.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ | INFORMATION ABOUT THE AUTHORS
Гайнетдинов Альберт Рамилевич*, ФГБОУ ВО «Башкирский государственный университет»;
e-mail: alfreddd96@mail.ru
Фесенко Зоя Сергеевна, ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет»; e-mail: zozoya07@mail.ru
Хисматуллина Зухра Рашидовна, д.б.н., проф., ФГБОУ ВО «Башкирский государственный университет»; e-mail: hismatullinazr@mail.ru
Albert R. Gainetdinov*, Bashkir State University; e-mail: alfreddd96@mail.ru
Zoya S. Fesenko, Saint Petersburg State University; e-mail: zozoya07@mail.ru
Zuhra R. Khismatullina, Dr. Sci. (Biol.), Prof., Bashkir State University; e-mail: hismatullinazr@mail.ru
* Автор, ответственный за переписку / Corresponding author
