CC BY
54
© Пocoxoвa K. А., Зoзyляк H. Б., Чepняшoвa В. В.
УДK 615. 356-Q6:616. 379-QQ8. 64]-Q92. 9
Ïocoxoâa К. А., Зoзyляк H. Б., Чepняшoвa В. В.
ПOPIBHЯЛЬHA AKTИBHICTЬ BOДOPO3ЧИHHOÏ I ЛIПOCOMAЛЬHOÏ ÔOPM
KBEPÖE^HY ПPИ EKCПEPИMEHTAЛЬHOMУ ÖYKPOBOMY ДIAБETI 2 TИПУ
ДBHЗ «Tepнoпiльcький дepжaвний мeдичний yнiвepcитeт
iмeнi I. Я. Гoбaчeвcькoгo MO3 Y^arn^ (м. Tepнoпiль)
Дaнa poбoтa е фpaгмeнтoм НДР «Bcтaнoвлeння eфeктивнocтi пpeпapaтiв мeтaбoлiчнoгo типу дм тa eнтepocopбцiÏ пpи пaтoлoгiчниx пpoцecax piзнoÏ e^-oлoгiÏ», № дepж. peecтpaцiÏ Q113UQQ1246.
Bcтyп. Дaнi лiтepaтypи cвiдчaть, щo чacтoтa ypa-жeнь пeчiнки пpи цyкpoвoмy дiaбeтi (ЦД) е cyттeвo бiльшoю, пopiвнянo з вiдпoвiдними пoкaзникaми y людeй, як нe xвopiють нa ЦД [1Q,15]. Бiльшe тoгo, ypaжeння пeчiнки ввaжaeтьcя нeзaлeжним пpeдик-тopoм кapдio-вacкyляpниx ycклaднeнь y xвopиx нa ЦД 2 типу, пpичoмy тяжкicть пeчiнкoвиx гicтoлoгiчниx змiн пpямo кopeлюe з paннiми oзнaкaми aтepocклe-poтичнoгo ypaжeння apтepiй [14]. Зaгaльнoвiдoмo тaкoж, щo пpи цyкpoвoмy дiaбeтi 2 типу тa йoгo cy-динниx ycклaднeнняx aктивaцiя вiльнopaдикaльниx пpoцeciв е нeвiд'eмнoю чacтинoю мeтaбoлiчниx пo-pyшeнь [7].
Meтoю дaнoÏ poбoти бyлo вcтaнoвлeння мoжли-вocтi змeншeння ypaжeння пeчiнки пpи eкcпepимeн-тaльнoмy цyкpoвoмy дiaбeтi 2 ТИПУ зa дoпoмoгoю вoдopoзчиннoÏ тa лiпocoмaльнoÏ фopм квepцeтинy.
Oб'eкт i мeтoди дocлiджeння. В eкcпepимeн-тax викopиcтoвyвaли бiлиx щypiв-caмцiв. Утpимaння твapин тa eкcпepимeнти пpoвoдилиcя вiдпoвiднo дo пoлoжeнь «GвpoпeйcькoÏ кoнвeнцiÏ пpo зaxиcт xpe-бeтниx твapин, якi викopиcтoвyютьcя для eкcпepи-мeнтiв тa Ыии нayкoвиx цiлeй» (Cтpacбypг, 1985), «Зaгaльниx eтичниx пpинципiв eкcпepимeнтiв нa твapинax», yxвaлeниx Пepшим нaцioнaльним ган-гpecoм з бioeтики (KиÏв, 2QQ1).
Пiдцocлiдниx твapин пoдiлили нa чoтиpи фупи: 1 - кoнтpoль (iнтaктнi твapини); 2, 3 i 4 - твapини з ЦД; твapинaм 3 i 4 фуп ввoдили вiдпoвiднo кopвiтин i лiпoфлaвoн (Бopщaгiвcький xiм. -фapм. зaвoд, м. KиÏв; пo 1Q мг/кг мacи тiлa, внyтpiшньooчepeвиннo, щoдeннo, пoчинaючи чepeз 1Q тижыв пicля ввeдeння STZ, пpoтягoм 2 тижыв) [3]. Moдeлювaння ЦД 2 типу здiйcнювaли шляxoм oднopaзoвoгo внyтpiшньoчe-peвиннoгo ввeдeння cтpeптoзoтoцинy (STZ, Sigma, C0A, 3Q мг/кг мacи ™a) [12], пicля пoпepeдньoгo 4-тижнeвoгo yтpимaння твapин нa виcoкo жиpo-вм дieтi [13]. STZ бeзпocepeдньo пepeд ввeдeнням
poзчиняли у Q,1 мoляpнoмy цитpaтнoмy бyфepi (pH 4,5); кoнтpoльнiй гpyпi ввoдили вiдпoвiднy кiлькicть цитpaтнoгo бyфepy. Дocлiджyвaли cиpoвaткy кpoвi тa ткaнинy пeчiнки. Bизнaчaли: aктивнicть АлАХ AcAT, piвeнь зaгaльнoгo бiлipyбiнy, викopиcтoвyючи CTa^ дapтнi нaбopи ООО НПП «Фили^т Дiaгнocтикa», УкpaÏнa; пoкaзники пepeкиcнoгo oкиcнeння лiпiдiв (ПОЛ) - гiдpoпepeкиci лiпiдiв (ГПЛ) [2], TБK-aктивнi пpoдyкти (АП) [1], дieнoвi кoн'югaти (Д^ [4]; aнтиoк-cидaнтний cтaтyc: aктивнicть cyпepoкcицциcмyтaзи (CОД) [8], кaтaлaзи [5], вмют вiднoвлeнoгo тугатЬ-ну (ВГ) [11], piвeнь мoлeкyл cepeдньoÏ мacи (MCM1, MCM2) [6]. Отpимaнi peзyльтaти пiдцaвaли CTa™c-тичнiй oбpoбцi у пpoгpaмi Excel з викopиcтaнням t-кpитepiю Cт'юдeнтa пpи p<Q,Q5.
Peзyльтaти дocлiджeнь тa ïx oбгoвopeння. Peзyльтaти бioxiмiчниx дocлiджeнь виявили пopy-шeння пpoцeciв лiпoпepoкcидaцiÏ тa cтaнy aнтиoкcи-дaнтнoгo зaxиcтy пpи eкcпepимeнтaльнoмy ЦД. Ta^ cпocтepiгaлocь збiльшeння вмicтy TБП у cиpoвaтцi кpoвi нa 8Q,2 О; у гoмoгeнaтax пeчiнки вмicт ГПЛ, TБK тa ДK зpocтaв нa 7Q,Q, 129,2 тa 4Q,8 в^-вiднo. Однoчacнo збiльшyвaлacь aктивнicть CОД тa кaтaлaзи - нa 6Q,9 тa 19,Q О вiдпoвiднo, пopiвнянo з кoнтpoлeм, щo мoжнa poзцiнити як кoмпeнcaтop-ну peaкцiю з бoкy aнтиoкcидaнтнoÏ cиcтeми у вiдпo-вiдь нa нaдмipнe yтвopeння пpoдyктiв ПОЛ. Piвeнь вiднoвлeнoгo глyтaтioнy, нaвпaки, знижyвaвcя нa 39,8 О. Cпocтepiгaлocь пiдвищeння piвня мoлe-кул cepeдньoÏ мacи: MCM, - нa 45,4 О, MCM2 - нa 131,4 (тaбл.).
Piвeнь зaгaльнoгo бiлipyбiнy у cиpoвaтцi кpoвi зpocтaв нa 45,3 % (pиc.), ймoвipнo, у зв'язку з пopy-шeнням пpoцeciв йoгo кoн'югaцiÏ у пeчiнцi тa вид^н-ня з жoвчю. Пiдвищyвaлиcь piвнi aмiнoтpaнcфepaз: AлAT - нa 33,3 %, ^и^), щo cвiдчить пpo нaявнicть цитoлiтичнoгo кoмпoнeнтy ypaжeння пeчiнки; AcAT - дocтoвipнo нe вiдpiзнявcя вiд фупи твapин з ЦД. Пpи зacтocyвaннi вoдopoзчиннoÏ фopми квepцeтинy piвeнь TБK у cиpoвaтцi кpoвi змeншyвaвcя нa 33,5 %. У гoмoгeнaтax пeчiнки piвeнь ГПЛ, TБK тa ДK знизив-cя нa 31,5, 41,Q тa 14,3 % вiдпoвiднo. Активнють CОД
Bicник пpoблeм бioлoгiï i мeдицини -2014 - Bип. 2, Ъэм 3 (109)
179
Таблиця
Б\ох\м\чн\ показники у сироватц\ кров\ \ печ\нц\ тварин при цукровому д\абет\ 2 типу та корекцГГ корв\тином \ л\пофлавоном (М±т)
Показники Контроль 8Т7-д!абет 8Т7-д!абет +корв!тин 8Т7-д!абет +л!пофлавон
ТБК-АП (кров), ммоль/л 0,91±0,02 1,64±0,01* 1,09±0,02*# 1,04±0,03*#
ТБК-АП (печ!нка), ммоль/кг 1,30±0,14 2,98±0,21* 1,76±0,08*# 1,42±0,14#»
ГПЛ (печ!нка) 103 ум. од. /кг 2,88±0,18 4,89±0,22* 3,35±0,15# 3,98±0,19*#»
ДК ум. од/мл (печ!нка) 2,23±0,10 3,14±0,14* 2,69±0,11*# 2,46±0,08#
СОД (печ!нка), ум. од. /кг 2,07±0,23 3,33±0,23* 2,31±0,13# 2,16±0,09#
Каталаза (печ!нка), кат/кг 8,41±0,30 10,01±0,20* 8,92±0,15# 8,61±0,18#
ВГ (печ!нка), ммоль/кг 4,30±0,13 2,59±0,16* 3,30±0,15*# 3,78±0,11*#»
МСМ1, ум. од. /л 0,465±0,02 0,676±0,01* 0,538±0,02*# 0,515±0,02#
МСМ2, ум. од. /л 0,255±0,01 0,590±0,02* 0,384±0,01*# 0,357±0,01*#"
Прим\тка: У таблиц! та на рисунку р!зниця достов!рна в!дносно: * - контролю, # - 8Т7 д!абету, " - групи 8Т7-д!абет+корв!тин.
% 160
120
100
80
60
40
АлАТ
Загальний 61Л1руб1н
Рис. Активн\сть алан\нам\нотрансферази та вм\ст загального б\л\руб\-ну при ЦД 2 типу та на тл\ корекцп корв\тином \ л\пофлавоном.
та каталази в орган! зменшилась на 30,6 та 11,0 %, к!льк!сть ВГ зросла на 27,4 %. (табл.). Зменшува-лись показники ендогенноТ !нтоксикац!Т: МСМ1 та МСМ2 - на 20,4 та 35,0 % в!дпов!дно. Знижувались активн!сть АлАТ - на 15,4 % та р!вень загального б!-л!руб!ну - на 27,5 % (рис.). Вм!ст АсАТ достов!рно не в!др!знявся в!д групи тварин з ЦД, в яких не проводили корекц!ю.
Введення л!посомальноТ форми кверцетину сприяло зниженню р!вня ТБК у сироватц! кров! на 36,6 %, пор!вняно з групою нел!кованих щур!в. У
гомогенатах печ!нки р!вень ГПЛ та ТБК зменшився на 18,6 та 52,3 % в!дпов!дно, р!вень ДК на 21,7 %, пороняно з патолог!ею. Активн!сть СОД та каталази знизилась на 35,1 та 14,0 %, к!льк!сть ВГ зросла - на 46,0 % (табл.). Зменшувались показники ендогенноТ !нтоксикац!Т: МСМ1 та МСМ2 - на 23,8 та 39,4 % вщповщно. Знижувались активн!сть АлАТ - на 9,2 %, вм!ст АсАТ достов!рно не в!д-р!знявся, р!вень загального б!л!руб!ну на 29,7 % (рис.).
У процес! пор!вняльного анал!зу активност! водорозчинноТ та л!по-сомальноТ форм кверцетину при ЦД 2 типу встановлено, що л!пофлавон перевершуе корв!тин за впливом на так! показники, як ТБК, ГПЛ, ВГ у печ!нц!, МСМ2 у кров!, на 19,3, 18,8, 14,5, 7,0 %, в!дпов!дно. Даний факт можна пояснити наявн!стю в молекул! препарату фосфатидилхол!ну - структурного компоненту б!олог!ч-них мембран, який не лише волод!е антиоксидантною активн!стю, але й мае здатн!сть вбудовуватись у по-шкоджеш дтянки бюмембрани при м пошкоджены, тим самим сприяючи репаративним процесам та вщнов-ленню функци пошкоджених оргашв
[9].
Висновки.
1. При експериментальному цукровому д1абет1 2 типу з ожирЫням спостер1гаеться ураження печЫки, що проявляеться активащею про-цесив переокислення мембранних л1пщ1в, дисбалансом у компонентах антиоксидантноТ системи, наростан-ням активное^ амшотрансфераз, вмюту загального бш1руб1ну, р1вня середньомолекулярних пептид1в у сироватщ кровг
2. Препарати кверцетину, кор-в!тин та л!пофлавон, б!льшою м!рою його л!посомальна форма, сприя-ють в!дновленню порушеного при
цукровому д!абет! 2 типу балансу у систем! про-оксиданти/антиоксиданти, зменшенню активност! ам!нотрансфераз, вм!сту загального б!л!руб!ну у сироватц! кров!, р!вня ендогенноТ !нтоксикац!Т.
Перспективи подальших досл\джень. Отри-ман! дан! про гепатозахисну активн!сть препарат!в кверцетину при експериментальному цукровому д!абет! 2 типу з ожир!нням е пщГрунтям для подаль-шого поглибленого вивчення ефективност! корв!ти-ну ! л!пофлавону та можливост! Тх подальшого засто-сування у кл!н!ц! при даному патолог!чному процес!
Ъ Контроль * БТ1-д1абет || БТ1+корвггин БТ1+л1пофлавон
140
180
В\сник проблем б\олог\'Г \ медицини - 2014 - Вип. 2, Том 3 (109)
Л1тература
1. Андреева Л. И. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой / Л. И. Андреева, Л. А. Кожемякин, А. А. Кишкун // Лаб. дело. - 1988. - № 11. - С. 41-43.
2. Гаврилов В. Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови /
B. Б. Гаврилов, М. И. Мишкорудная // Лаб. дело. - 1983. - № 3. - С. 33-35.
3. Зупанець I. А. Доошдження гостроУ токсичност та середньо ефективних доз кверцетину при парантеральному уведенш в умовах розвитку нирковоУ недостатност у щур1в / I. А. Зупанець, С. К. Шебеко, Д. С. Харченко // Фармакол. та лкар. токсикол. - 2009. - № 1 (8). - С. 28-32.
4. Колесова О. Е. Перекисное окисление липидов и методы определения продуктов липопероксидации в биологических средах / О. Е. Колесова, А. А. Маркин, Т. Н Федорова // Лаб. дело. - 1984. - № 9. - С. 540-546.
5. Королюк М. А. Метод определения активности каталазы / М. А. Королюк, Л. И. Иванова, И. Г. Майорова [и др.] // Лаб. дело. - 1988. - № 1. - С. 16-19.
6. Оськина В. В. Среднемолекулярные пептиды спинномозговой жидкости при гнойных менингитах / В. В. Оськина, К. И. Чекалина, Н. И. Габриэлян // Лаб. дело. - 1987. - № 2. - С. 23-25.
7. Петринич А. О. Пероксидне окиснення лтщ1в й антиоксидантний захист у хворих на ппертошчну хворобу та в поеднанш з цукровим д1абетом 2 типу / А. О. Петринич // Клш1чна та експериментальна патолопя - 2009. - Т. VIII, № 3 (29). -
C.74-78.
8. Чевари С. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения её в биологических материалах / С. Чевари, И. Чаба, И. Секей // Лаб. дело. - 1985. - № 11. - С. 678-681.
9. Archakov A. I. Action of phospholipids on hydrophobic microsomal proteins / A. I. Archakov, V.Yu. Uvarov // Phosphatidylcholine (Polyenephosphatidylcholine / PPC): Effects on cell membranes and transport of cholesterol / Eds. A. I. Archakov, K. J. Gundermann. - wbn - Verlag, Bingen / Rhein. - 1989. - P. 127-136.
10. Booth G. Liver at 50 % Greater Risk in Diabetes / G. Booth // Diabetes In Control. - 2010. - № 527(27). - Pежим доступу: http://www. diabetesincontrol. com/index. php?option=com_content&view=article&id=9504&catid=1&Itemid=17.
11. Ellman G. L. Tissue sulfhydryl groups / G. L. Ellman // Arch. Biochem. Biophys. - 1959. - № 82. - Р. 70-77.
12. HuiJie Wang. Low dose streptozotocin (STZ) combined with highenergy intake can effectively induce type 2 diabetesthrough altering the related gene expression / HuiJie Wang,Yuan Xiang Jin PhD, Wan Shen, [et al] // Asia Pac J ClinNutr - 2007. - № 16 (Suppl 1). - P. 412-417.
13. Xiu-HuaShen. Vitamin E regulates adipocytokine expression in a rat modelof dietary-induced obesity / Xiu-HuaShen, Qing-Ya Tang, Juan Huang // Experimental Biology and Medicine. - 2010. - № 235. - P. 47-51.
14. Targher G. Nonalcoholic fatty liver disease is independently associated with an increased incidence of cardiovascular events in type 2 diabetic patients / G. Targher, L. Bertolini, S. Rodella [et al.] // Diabetes Care. - 2007. - № 8, Vol. 30. - P. 2119-2121.
15. Porepa L. Newly diagnosed diabetes mellitus as a risk factor for serious liver disease / L. Porepa // Diabetes In Control. -2010. - № 526. - Pежим доступу: http://www. diabetesincontrol. com/index. php?option=com_content&view=article&id=9 504&catid=1&Itemid=17
УДК 615. 356-06:616. 379-008. 64]-092. 9
ПОР1ВНЯЛЬНА АКТИВНЮТЬ ВОДОРОЗЧИННОТ I Л1ПОСОМАЛЬНОТ ФОРМ КВЕРЦЕТИНУ ПРИ ЕКС-ПЕРИМЕНТАЛЬНОМУ ЦУКРОВОМУ Д1АБЕТ1 2 ТИПУ
Посохова К. А., Зозуляк Н. Б., Черняшова В. В.
Резюме. В експеримент на бтих щурах-самцях встановлено, що препарати кверцетину - водорозчин-ний корвггин та, його лтосомальна форма - лтофлавон (щоденне внутршньоочеревинне введення по 10 мг/кг протягом 14 дыв) при експериментальному цукровому д1абет 2 типу з ожиршням (одноразове введення стрептозотоцину, 30 мг/кг маси тта, на тгм висококалормно! д1ети) зменшують прояви ураження печшки, що проявляеться вщновленням балансу у систем! прооксиданти/антиоксиданти, зменшенням р1вня амЫо-трансфераз, загального б1трубшу у сироватц кров1, показниюв ендогенно! ¡нтоксикаци.
Ключов1 слова: цукровий д1абет 2 типу, печшка, кверцетин, корв1тин, лтофлавон.
УДК 615. 356-06:616. 379-008. 64]-092. 9
СРАВНИТЕЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ВОДОРАСТВОРИМОЙ И ЛИПОСОМАЛЬНОЙ ФОРМ КВЕРЦЕТИНА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ САХАРНОМ ДИАБЕТОМ 2 ТИПА
Посохова К. А., Зозуляк Н. Б., Черняшова В. В.
Резюме. В эксперименте на белых крысах - самцах установлено, что препараты кверцетина -водорастворимый корвитин и его липосомальная форма - липофлавон (ежедневное внутрибрюшинное введение по 10 мг / кг в течение 14 дней) при экспериментальном сахарном диабете 2 типа с ожирением (однократное введение стрептозотоцин, 30 мг / кг массы тела, на фоне высококалорийной диеты) уменьшают проявления поражения печени, проявляется восстановлением баланса в системе прооксиданты / антиоксиданты, уменьшением уровня аминотрансфераз, общего билирубина в сыворотке крови, показателей эндогенной интоксикации.
Ключевые слова: сахарный диабет 2 типа, печень, кверцетин, корвитин, липофлавон.
В1сник проблем бюлош i медицини -2014 - Вип. 2, Том 3 (109)
181
UDC 615. 356-06:616. 379-008. 64]-092. 9
Comparative Activity of Water Soluble and Liposomal Form of Quercetin in Experimental Diabetes Type II
Posokhova K. A., Zozulyak N. B., Chernyashova V. V.
Abstract. Introduction. The literature data indicate that the incidence of liver disease in diabetes mellitus (DM) is significantly higher compared with those of people who do not suffer from diabetes. When diabetes occurs metabolism, leading to multiple organ damage, including chili to liver damage, which is the central body that provides the normal course of metabolic processes in the body. One of the causes of death associated with type 2 diabetes, is a disease of the liver. In the USA diabetes as the 1st and 2nd type is the most common cause of liver disease. Moreover, liver damage is considered an independent predictor of cardio-vascular complications in patients with type 2 diabetes, and severity of liver histological changes directly correlated with early signs of atherosclerotic arteries. It is well known also that in type 2 diabetes and its cardiovascular complications activation of free radical processes are an integral part of metabolic disorders.
To date, there are a number of researches that demonstrate the positive effects of bioflavonoids. Quercetin is one of the most studied bioflavonoids, besides its proven recovery effect the condition of diabetes mellitus. That is why we decided to use phosphatidylcholine liposomes that contain quercetin and water soluble form of quercetin in the conditions of oxidative stress on the background of experimental diabetes.
The aim of this study was to establish the possibility to decrease liver injury in experimental diabetes mellitus type 2 using water-soluble and liposomal forms of quercetin.
Materials and methods. In experiments using rats males. Experimental animals were divided into four groups: 1 - control (intact animals), 2, 3 and 4 - animals with diabetes, the animals of groups 3 and 4 were administered according Corvitin and Lipoflavon (Borshchahivskiy him. - farm. Plant, Kyiv, 10 mg / kg, ip daily, starting 10 weeks after STZ, for 2 weeks). Modeling of type 2 diabetes was done by a single intraperitoneal administration of streptozotocin (STZ, Sigma, USA, 30 mg / kg body weight) after the previous 4 weeks Pets accepted on high fat diet. STZ was dissolved immediately prior to the introduction of a 0. 1 molar citrate buffer (pH 4,5); control group injected with the appropriate amount of citrate buffer. We investigated the serum and liver tissue.
We determined: activity of ALT, AST, total bilirubin level, using standard sets OOO NPP «Fylysyt Diagnostics», Ukraine, indicators of lipid peroxidation (LPO) - lipid hydroperoxides (HPL), TBA-active products (AP), diene conjugates (DC), antioxidant status: superoxide dismutase (SOD), catalase, glutathione content (SH), the level of average molecular weight (MSM1, MSM2). The results obtained were subjected to statistical analysis in Excel using Student's t-test at p < 0,05.
Conclusions. In experimental type 2 diabetes with obesity observed liver injury, manifested by activation of membrane lipid peroxidation, antioxidant imbalance in the components of the system, increase the activity of aminotransferases, total bilirubin content, the level of the average molecular weight in the serum.
Preparations, Quercetin, and Corvitin Lipoflavon, it is more liposomal form, promote restoration of impaired in diabetes type 2 balance in the system prooxidant / antioxidant, reducing the activity of aminotransferases, total bilirubin content in the blood serum level of endogenous intoxication.
The data on hepatoprotective activity of Quercetin drugs in experimental type 2 diabetes with obesity is the basis for further in-depth study of the efficacy and Corvitin, Lipoflavon and their possible future use in the clinic during this pathological process.
Key words: type 2 diabetes, liver, quercetin, corvitin, lipoflavon.
Рецензент - проф. Бобирьова Л. £.
Стаття надшшла 14. 03. 2014 р.
182
BicHMK проблем бюлош i медицини - 2014 - Вип. 2, Том 3 (109)
