CC BY
17
Серия «Биология. Экология»
И З В Е С Т И Я
2021. Т. 37. С. 43-53
Иркутского государственного университета
Онлайн-доступ к журналу: http://izvestiabio.isu.ru/ru
УДК 579.869.1+616-078 https://doi.org/10.26516/2073-3372.2021.37.43
Получение и оценка эффективности диагностической агглютинирующей сыворотки для идентификации возбудителя листериоза
Н. М. Хаптанова1, Н. М. Андреевская1, Ж. А. Коновалова1, Н. Г. Гефан1, С. В. Лукьянова1, А. С. Остяк1, Н. Н. Карцев2, В. Н. Борзенков2, С. В. Балахонов1
1 Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора, г. Иркутск, Россия
2 Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора, пос. Оболенск, Московская область, Россия
E-mail: khaptnat@mail.ru
Аннотация. Описаны методы получения диагностической агглютинирующей сыворотки для реакции агглютинации (РА), применяемой при качественной идентификации возбудителя листериоза. Разработана схема иммунизации животных-продуцентов для получения сыворотки. Представлены результаты оценки клинической информативности сыворотки по показателям диагностической чувствительности в отношении гомологичных штаммов L. monocytogenes и диагностической специфичности с близкородственными и гетерологичными штаммами в пробирочной РА и на стекле. Показан 14%-ный уровень допустимого расхождения внутрипостановочной внутрисерийной воспроизводимости исследований для всех положительных проб.
Ключевые слова: Listeria monocytogenes, листериозная агглютинирующая сыворотка, диагностическая чувствительность, диагностическая специфичность, диагностика.
Для цитирования: Получение и оценка эффективности диагностической агглютинирующей сыворотки для идентификации возбудителя листериоза / Н. М. Хаптанова, Н. М. Андреевская, Ж. А. Коновалова, Н. Г. Гефан, Лукьянова С. В., А. С. Остяк, Н. Н. Карцев, В. Н. Борзенков, С. В. Балахонов // Известия Иркутского государственного университета. Серия Биология. Экология. 2021. Т. 37. С. 43-53. https://doi.org/10.26516/2073-3372.2021.37.43
Введение
В настоящее время листериоз представляет собой актуальную проблему как пищевая инфекция человека [Ефимочкина, 2013]. Согласно данным медицинской статистики, с употреблением продуктов питания в последние годы связаны крупные вспышки листериоза с высоким процентом летальных исходов [Matle, Mbatha, Madoroba, 2020; Listeria monocytogenes contamination ... , 2018; The public health ... , 2020]. Ввиду полиморфизма симптомов клиническая диагностика заболевания бывает затруднительна. При идентификации возбудителя листериоза (Listeria monocytogenes) наряду с определением морфологических, культуральных и биохимических свойств широко
используются серологические исследования [Частная медицинская микробиология ... , 2020].
Одним из специфичных, простых и доступных методов является реакция агглютинации (РА), для постановки которой необходимы диагностические агглютинирующие сыворотки [Перетрухина, Блинова, 2010]. Использование РА предпочтительно для быстрого выявления наличия или отсутствия в биологическом материале возбудителя листериоза [Тартаковский, 2000]. К факторам, определяющим диагностическую ценность, аналитическую надежность и клиническую информативность результатов РА, относятся чувствительность и специфичность сыворотки. В связи с этим актуальны разработка и оценка эффективности листериозной сыворотки.
Цель работы - получить гипериммунную агглютинирующую сыворотку для идентификации возбудителя листериоза и оценить её эффективность.
Материалы и методы
Для проведения исследований в качестве животных-продуцентов ли-стериозной сыворотки выбрали 54 экземпляра кролика породы шиншилла массой 2,5-3,0 кг, полученных из лаборатории подопытных животных ФКУЗ «Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Ро-спотребнадзора» (Иркутский НИПЧИ). Все стадии исследования с использованием животных проведены в соответствии с нормативами1. Специфическую стерильность иммуногена проверяли согласно методическим указани-ям2. Для этого иммуноген высевали по 0,3 мл в пробирки с мясо-пептонным бульоном (МПБ) с 1%-ной глюкозой и по 0,1 мл на чашки Петри с мясо-пептонным агаром (МПА) с 1%-ной глюкозой (ГОСТ-10444.1, п. 5.123). Посевы инкубировали при (37±1) °C в течение 6 сут. с ежедневным просмотром. Затем из накопительной среды, после трёх суток инкубации, делали посевы на две чашки с МПА с 1%-ной глюкозой с последующей инкубацией до трёх суток. Содержание белка в иммуногене определяли с применением бычьего сывороточного альбумина (Sigma-Aldrich, США) в качестве стандарта [Protein measurement ... , 1951].
Для определения чувствительности и специфичности листериозной сыворотки ампулы с лиофилизированными культурами L. monocytogenes и Listeria spp. (L. grayi, L. innocua, L. ivanovii, L. seeligeryi, L. welschimerii, L. murrayi), полученными из Иркутского НИПЧИ (отдел «Коллекция патогенных бактерий»), вскрывали и вносили по 0,3 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида. После растворения микробную взвесь культур высевали на МПБ с 1%-ной глюкозой и инкубировали при 37±1 °C в течение 24 ч. Далее
1 ГОСТ 33216-2014. Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами. М., 2019, 10 с.
2 Методические указания МУК 4.1/4.2.588-96. Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям // Противоэпидемические мероприятия. Т. 2 / ред.: Г. Г. Онищенко, Б. Л. Черкасский. М., 2006. С. 858-934.
3 ГОСТ 10444.1-84. Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе. М., 2010. 228 с.
пересевали на две чашки Петри со средой для культивирования листерий (СКЛ) и инкубировали при 37±1 °C в течение 24 ч.
Лиофилизированные культуры гетерологичных микроорганизмов Escherichia coli, Salmonella enterica enteritidis, S. e. typhimurium, Shigella flexneri, Staphylococcus aureus, Yersinia enterocolitica, предварительно разведённые в 0,3 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида, высевали на бульон Хоттингера (рН 7,2) (ГОСТ-10444.1, п. 5.20) и инкубировали при 37±1 °C в течение 24 ч. Далее пересевали на две чашки Петри с агаром Хоттингера (pH 7,2) (ГОСТ-10444.1, п. 5.20.3) с последующей инкубацией при 37±1 °C в течение 24 ч.
Чувствительность полученной листериозной сыворотки определяли в пробирочной РА и на стекле с 25 штаммами L. monocytogenes; на специфичность - с 22 штаммами Listeria spp. и гетерологичными микроорганизмами. Антигены готовили в 2 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида по отраслевому стандартному образцу (ОСО) мутности 10 МЕ, что соответствовало 0,93-109 м. к./мл. Учёт результатов в пробирочной РА проводили через 21 ч по 4-крестовой схеме: 4 креста - крупно- или мелкозернистая агглютинация при полном просветлении жидкости; 3 креста - крупно- или мелкозернистая агглютинация при легкой опалесценции жидкости; 2 креста - слабая мелкозернистая агглютинация на фоне мутной жидкости; 1 крест - следы агглютинации на фоне мутной жидкости. «-» - отрицательная, отсутствие просветления и зонтика. Реакция считалась положительной на 3-4 креста в разведении 1:400. Учёт результатов РА на стекле считали положительной при появлении мелко- или крупнозернистого агглютината, ясно видимого невооружённым глазом в течение 3 мин.
При оценке результатов рассчитывали процентную частоту попаданий в выборке, определяли нижнюю границу доверительного интервала, в котором находится истинная доля признака (вероятность) в зависимости от числа независимых опытов, и сходимость внутрипостановочных, воспроизводимость межпостановочных и межсерийных испытаний определяли путём сравнения двух вероятностей биномиальных распределений при статистической надежности 95 % [Методические рекомендации ... , 2018].
Исследования листериозной сыворотки проведены на базе Иркутского НИПЧИ и ФГБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» (пос. Оболенск) с использованием в работе штаммов, полученных из коллекций патогенных микроорганизмов этих учреждений.
Результаты и обсуждение
При проведении исследований использовали две серии экспериментальной листериозной сыворотки, полученной по разработанной схеме иммунизации кроликов-продуцентов с применением корпускулярного антигена (иммуногена).
Для получения иммуногена штамм L. monocytogenes 766 выращивали во флаконах на экспериментальной среде СКЛ (Иркутский НИПЧИ) при температуре 37±1 °С в течение 48 ч. Бактериальную массу смывали забуфе-
ренным физиологическим раствором, определяли концентрацию микробных клеток по отраслевому стандартному образцу мутности 10 ME (ОСО 42-28-85 соответствующего года выпуска), далее инактивировали кипячением в течение 1 ч. На среде СКЛ получена микробная масса L. monocytogenes 766, обладающая типичными культурально-морфологическими и антигенными свойствами без признаков диссоциации культуры [Конструирование питательной среды ... , 2020].
Проверка специфической стерильности листериозного иммуногена в течение 6 сут. показала отсутствие роста листерий. Содержание белка в им-муногене составило 5,2±0,13 мг/мл.
Схема иммунизации кроликов-продуцентов включала трёхкратное введение иммуногена с интервалом в три дня в возрастающей концентрации внутривенно 6; 16 и 25 млрд м. к./мл и внутримышечно 500 млн м. к./мл. На седьмой день после третьей иммунизации в пробах крови от каждого кролика определяли титр антител в сыворотках, который соответствовал значениям не ниже 1:400.
Для получения сыворотки кровь помещали в термостат при температуре 37±1 °C на 1 ч для свертывания, образовавшийся сгусток отделяли от стенок пробирки, после чего сыворотку выдерживали в течение 18-20 ч в холодильнике при температуре 7±1 °C. На следующий день все сыворотки объединяли и вновь ставили РА. Затем полученную сыворотку консервировали борной кислотой (массовая доля основного вещества не менее 99,8 %) из расчёта 1,5 %, далее добавляли стабилизатор, смешивая сахарозу (массовая доля кислот в пересчёте на уксусную кислоту не более 0,005 %) и натрий тиосульфат 5-водный (массовая доля основного вещества не менее 99,5-100,5 %). Сыворотку фильтровали через фильтр Sartobran (Sartoris, Германия) и разливали по 1 мл в ампулы (ШП-5-НС-1 по ОСТ 64-2-485-854), лиофилизировали и запаивали. Получено 47 серий листериозной агглютинирующей сыворотки, для проведения исследований в работу взяты две серии (43, 44).
Для оценки диагностической чувствительности листериозной сыворотки готовили пробы бактериальных суспензий штаммов L. monocytogenes в концентрации 0,93 х 109 м. к./мл и проводили постановку пробирочной РА и на стекле (табл. 1).
При исследовании 25 штаммов L. monocytogenes I и II серогрупп (серо-типы 1/2а, 1/2b, 1/2с, 3а, 3b, 3с, 4а, 4b, 4с, 7), выделенных на территории Российской Федерации из различных источников (клинический материал, пищевые продукты, сточные воды) в пробирочной РА титр сыворотки не отличался и составлял 1:800, на стекле получен положительный результат в 100 % случаев. Таким образом, исследуемая листериозная сыворотка обладала высокой диагностической чувствительностью, истинная доля серопо-ложительных случаев составляла 89 %, что определяли расчётом нижней границы доверительного интервала со статистической надёжностью 95 %.
4 ОСТ 64 2-485-85. Ампулы стеклянные для лекарственных средств. Технические условия. М., 1985. 36 с.
Таблица 1
Результаты определения диагностической чувствительности листериозных сывороток в РА со штаммами L. monocytogenes
№ п/п Штаммы L. monocytogenes Серотип Место выделения Источник выделения Результаты реакции
РА на стекле серии 43/44 Пробирочная РА (1:800) серии 43/44
1 ВВ-1 l/2a, 3а г. Ярославль Клинический материал 4+/4+ 4+/4+
2 TVe11985 l/2a, 3а г. Тверь Мясной полуфабрикат 3+/4+ 4+/4+
3 TVe12269 l/2a, 3а г. Тверь Рыбный полуфабрикат 4+/4+ 4+/4+
4 Bel-1 l/2a, 3а г. Белгород Клинический материал 4+/4+ 4+/4+
5 V23w l/2a, 3а г. Вологда Мясной полуфабрикат 4+/4+ 4+/4+
6 V30w l/2a, 3а г. Вологда Полуфабрикат 4+/4+ 4+/4+
7 V40w l/2a, 3а г. Вологда Полуфабрикат 4+/4+ 4+/4+
8 V44w l/2a, 3а г. Вологда Полуфабрикат 4+/4+ 4+/4+
9 V59w l/2a, 3а г. Вологда Мясной полуфабрикат 4+/4+ 4+/4+
10 V299w l/2a, 3а г. Вологда Клинический материал 4+/4+ 4+/4+
11 Water 3 l/2a, 3а г. Вологда Сточные воды 4+/4+ 4+/4+
12 Water 4 l/2a, 3a г. Вологда Сточные воды 4+/4+ 4+/4+
13 766 l/2a, 3a Нет данных Клинический материал 4+/4+ 4+/4+
14 И-76 l/2a, 3a Иркутская обл. Клинический материал 4+/4+ 4+/4+
15 MIB-871 1/2с, 3с г. Москва Клинический материал 4+/3+ 4+/4+
16 МО-ОЬ 1/2с, 3с г. Москва Клинический материал 4+/4+ 4+/4+
17 OR-513 4b г. Орел Клинический материал 4+/4+ 4+/4+
18 OR-517 4b г. Орел Клинический материал 4+/4+ 4+/4+
19 MO-um 4b г. Москва Клинический материал 4+/4+ 4+/4+
20 ROS150-1 1/2b, 3b, 7 г. Ростов-на- Дону Мясной полуфабрикат 4+/4+ 4+/4+
21 V41w 1/2b, 3b, 7 г. Вологда Рыбный полуфабрикат 4+/4+ 4+/4+
22 И-71 1/2b, 3b, 7 г. Иркутск Мясной полуфабрикат 4+/4+ 4+/4+
23 И-72 1/2b, 3b, 7 г. Иркутск Мясной полуфабрикат 4+/4+ 4+/4+
24 V276-2w 4а, 4с г. Вологда Клинический материал 4+/4+ 4+/4+
25 Water 5 4а, 4с г. Вологда Сточные воды 4+/4+ 4+/4+
Для определения диагностической специфичности листериозной сыворотки готовили бактериальные суспензии 22 штаммов, включающие близкородственные и гетерологичные микроорганизмы (L. grayi, L. innocua, L. ivanovii, L. seeligeryi, L. welschimerii, L. murrayi, E. coli, S. e. enteritidis, S. e. typhimurium, Sh. flexneri, S. aureus, Y. enterocolitica) в концентрации 0,93-109 м. к./мл. В результате проведённых исследований в пробирочной РА и на стекле с листериозными сыворотками (с. 43, 44) получены отрицательные результаты со всеми штаммами (табл. 2).
Таблица 2
Результаты определения диагностической специфичности листериозных сывороток с. 43/44 в РА с Listeria spp. и гетерологичными штаммами
№ п/п Вид микроорганизмов Название штамма Результаты реакции
РА на стекле с. 43/44 Пробирочная РА (1:800) с. 43/44
1 L. grayi АТСС25400 - / - - / -
2 L. grayi МКМ2 - / - - / -
3 L. grayi ИП - / - - / -
4 L. innocua АТСС33090 - / - - / -
5 L. innocua В-64 - / - - / -
6 L. innocua М4 - / - - / -
7 L. ivanovii АТСС19119 - / - - / -
8 L. ivanovii 7842 - / - - / -
9 L. ivanovii 11840 - / - - / -
10 L. seeligeryi АТСС35967 - / - - / -
11 L. seeligeryi SLSC5981 - / - - / -
12 L. seeligeryi LSC3954 - / - - / -
13 L. welschimerii B-107 - / - - / -
14 L. welschimerii 4911 - / - - / -
15 L. welschimerii ЯрославльЗ - / - - / -
16 L. murrayi G-44 - / - - / -
17 E. coli АТСС25952 - / - - / -
18 S. enteritidis Gartneri - / - - / -
19 S. typhimurium 21 - / - - / -
20 Sh. flexneri 170 - / - - / -
21 S. aureus 6538 - / - - / -
22 Y. enterocolitica O3 628/1 - / - - / -
Примечание: «-» - РА отрицательна.
Истинная доля отрицательных результатов определения диагностической специфичности листериозной сыворотки в РА с близкородственными и гетерологичными штаммами составила 87 % (нижняя граница доверительного интервала) со статистической надежностью 95 %.
Разработанная схема иммунизации кроликов-продуцентов позволяет в короткие сроки получить высокоактивную гипериммунную листериозную агглютинирующую сыворотку и исключает этап адсорбции гетерологичных антител.
Заключение
В результате проведённых исследований получена листериозная агглютинирующая сыворотка и выполнена оценка её диагностической чувствительности и специфичности в пробирочной РА и на стекле с культурами Listeria spp. и гетерологичными штаммами. Диагностическая чувствительность с 25 штаммами L. monocytogenes определена в титре 1:800 в пробирочной РА и на стекле, получен положительный результат в 100 % случаев. При
исследовании диагностической специфичности 22 образцов близкородственных и гетерологичных штаммов получены отрицательные результаты.
При проведении испытаний наблюдалась полная внутрипостановочная сходимость, а также межпостановочная и межсерийная воспроизводимось. Полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности листе-риозной агглютинирующей сыворотки и возможности её применения в клинической лабораторной диагностике для выявления возбудителя листериоза. Исследования показали высокую эффективность полученной листериозной сыворотки, которая обладает высокой диагностической чувствительностью к L. monocytogenes и специфичностью в отношении близкородственных и гетерологичных микроорганизмов.
Список литературы
Ефимочкина Н. Р. Микробиология пищевых продуктов и современные методы детекции патогенов. М. : Изд-во РАМН, 2013. 518 с.
Методические рекомендации по порядку проведения экспертизы качества, эффективности и безопасности медицинских изделий для государственной регистрации. М. : ВНИИИМТ Росздравнадзора, 2018. 158 с.
Перетрухина А. Т., Блинова Е. И. Бактерийные и вирусные препараты. М. : Акад. естествознания, 2010. 311 с.
Тартаковский И. С. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика // Клиническая микробиология антимикробная химиотерапия. 2000. Т. 2, № 2. С. 20-30.
Конструирование питательной среды для культивирования листерий / Н. М. Хап-танова, С. В. Лукьянова, В. И. Кузнецов, Н. Г. Гефан, Н. М. Андреевская, Ж. А. Коновалова, А. С. Остяк, В. С. Косилко // Acta biomedica scientifica. 2020. Т. 5, № 4. С. 60-66. https://doi.Org/10.29413/ABS.2020-5.4.8
Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований. / ред.: А. С. Лабинская, Л. П. Блинкова, А. С. Ещина, А. С. Анкирская. СПб. : Лань, 2020. 608 с.
Listeria monocytogenes contamination of ready-to-eat foods and the risk for human health in the EU / A. Ricci, A. Allende, D. Bolton, M. Chemaly, R. Davies, P. S. Fernández Escámez, R. Girones, L. Herman, K. Koutsoumanis, B. N0rrung, L. Robertson, G. Ru, M. Sanaa, M. Simmons, P. Skandamis, E. Snary, N. Speybroeck, B. Ter Kuile, J. Threlfall, H. Wahlstrom, J. Takkinen, M. Wagner, D. Arcella, M. T. Da Silva Felicio, M. Georgiadis, W. Messens, R. Lindqvist // EFSA Journal. 2018. Vol. 16, N 1. 170 p. https://doi.org/10.2903/j.efsa.2018.5134
Matle I., Mbatha К. R., Madoroba Е. A review of Listeria monocytogenes from meat and meat products: Epidemiology, virulence factors, antimicrobial resistance and diagnosis // Onderstepoort J. Vet Res. 2020. Vol. 87, N 1. P. 1-20. https://doi.org/10.4102/ojvr.v87i1.1869
Protein measurement with the Folin phenol reagent / O. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr, R. J. Randall // J. Biol. Chem. 1951. Vol. 193, N 1. P. 265-275. https://doi.org/10.1016/S0021-9258(19)52451-6
The public health risk posed by Listeria monocytogenes in frozen fruit and vegetables including herbs, blanched during processing / K. Koutsoumanis, A. Alvarez-Ordonez, D. Bolton, S. Bover-Cid, M. Chemaly, R. Davies, A. De Cesare, L. Herman, F. Hilbert, R. Lindqvist, M. Nauta, L. Peixe, G. Ru, M. Simmons, P. Skandamis, E. Suffredini, K. Jordan, I. Sampers, M. Wagner, M. T. Da Silva Felicio, M. Georgiadis, W. Messens, O. Mosbach-Schulz, A. Allende // EFSA Journal. 2020. Vol. 18, N 4. 101 p. https://doi.org/10.2903/j.efsa.2020.6092
Obtaining and Efficiency Assessment of Diagnostic Agglutinating Serum for Identifying the Causative Agent of Listeriosis
N. M. Khaptanova1, N. M. Andreevskaya1, Zh. A. Konovalova1, N. G. Gefan1, S. V. Luk'yanova1, A.S. Ostyak1, N. N. Kartsev2, V. N. Borzenkov2, S. V. Balakhonov1
'Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East, Irkutsk, Russian Federation 2State Scientific Center of Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russian Federation
Abstract. Listeriosis is a saprozoonotic natural anthropurgic infectious disease caused by Listeria monocytogenes, with multiple pathways and factors of its transmission, characterized by pronounced clinical polymorphism from carriage and subclinical to severe generalized forms, meningitis and meningoencephalitis, and high mortality among newborn children and individuals with immunodeficiency. Express diagnostics of listeriosis is based on the use of immunochemical (immunodiffusion reaction, enzyme immunoassay) and molecular genetic (polymerase chain reaction) methods. In the practice of laboratory diagnostics, serological methods for the study of listeriosis remain in high demand for verifying the clinical diagnosis. One of the specific, reliable and available serological methods for laboratory diagnostics of causative agents of infectious diseases remains the agglutination test (AT), to conduct which, listeria agglutinating serum is required. Obtaining diagnostic agglutinating listeria serum with a high level of diagnostic sensitivity and specificity will allow timely identification of the pathogen in the test tube AT and on glass, based on the specific interaction of the antigen with the antibody, with the formation of agglutinate visible to the naked eye. In this study a scheme has been developed for immunization of animal producers to obtain diagnostic listeria agglutinating serum. Evaluation of the clinical efficiency of two series of the serum was carried out based on the indices of diagnostic sensitivity with different serovariants of L. monocytogenes and diagnostic specificity with closely related and heterologous strains in the test tube AT and on glass. During the study of 25 strains of L. monocytogenes serogroups I and II (serotypes 1/2a, 1/2b, 1/2c, 3a, 3b, 3c, 4a, 4b, 4c, 7) isolated on the territory of the Russian Federation from various sources (clinical material, food products, wastewater), the serum titer did not differ and amounted to 1:800 in the course of in vitro agglutination reaction; a positive result was obtained on glass in 100% of cases. The assessment of the statistical reliability of the obtained test results was at least 89 % with a statistical significance of 95 %, which indicates a high diagnostic efficiency of the serum. In order to establish intra-stage convergence and inter-series reproducibility of studies, two probabilities of binomial distributions were compared. The convergence of staged studies for all positive samples has been proven. Based on the results obtained, listeriosis serum can be used as a medical preparation for in vitro diagnostics of the causative agent of listeriosis.
Keywords: Listeria monocytogenes, listeria agglutinating serum, diagnostic sensitivity, diagnostic specificity, diagnosis.
For citation: Khaptanova N.M., Andreevskaya N.M., Konovalova Zh.A., Gefan N.G., Luk'yanova S.V., Ostyak A.S., Kartsev N.N., Borzenkov V.N., Balakhonov S.V. Obtaining and Efficiency Evaluation of Diagnostic Agglutinating Serum for Identifying the Causative Agent of Listeriosis. The Bulletin of Irkutsk State University. Series Biology. Ecology, 2021, vol. 37, pp. 43-53. https://doi.org/10.26516/2073-3372.2021.37.43 (in Russian) '
References
Efimochkina N.R. Mikrobiologiya pishchevykh produktov i sovremennye metody de-tektsii patogenov [Microbiology of food products and modem methods of detection of pathogens]. Moscow, RAMS Publ., 2013, 518 p. (in Russian)
Metodicheskie rekomendatsii po poryadku provedeniya ekspertizy kachestva, effektivnos-ti i bezopasnosti meditsinskikh izdelii dlya gosudarstvennoi registratsii [Methodological recommendations on the procedure for conducting an examination ofthe quality, effectiveness and safety of medical devices for state registration]. Moscow, VNIIIMT Publ., 2018. 158 p. (in Russian)
Peretrukhina A.T., Blinova E.I. Bakteriinye i virusnye preparaty [Bacterial and viral drugs]. Moscow, Akademiya Estestvoznaniya Publ., 2011, 311 p.
Tartakovskij I.S. Listerii: rol v infektsionnoi patologii cheloveka i laboratornaya diag-nostika [Listeria: role in human infectious pathology and laboratory diagnostics]. Klinich-eskaya mikrobiologiya i antimikrobnaya khimioterapiya [Clinical Microbiology and Antimicrobial Chemotherapy], 2000, vol. 2, no. 2, pp. 20-30. (in Russian)
Khaptanova N.M., Lukyanova S.V., Kuznetsov V.I., Gefan N.G., Andreevskaya N.M., Konovalova Zh.A., Ostyak A.S., Kosilko V.S. Designing a nutrient medium for the accumulation of microbial mass of Listeria. Acta Biomedica Scientifica, 2020, vol. 5, no. 4, pp. 60-66. (in Russian) https://doi.org/10.29413/ABS.2020-5A8
Chastnaya meditsinskaya mikrobiologiya s tekhnikoi mikrobiologicheskikh issledovanii [Partial medical microbiology with the technique of microbiological research]. Labinskaya A.S., Blinkova L.P., Eshchina A.S., Ankirskaya A.S. (Eds.). St.-Petersb., Lan' Publ., 2020, 608 p. (in Russian)
Ricci A., Allende A., Bolton D., Chemaly M., Davies R., Fernández Escámez P. S., Girones R., Herman L., Koutsoumanis K., N0rrung B., Robertson L., Ru G., Sanaa M., Simmons M., Skandamis P., Snary E., Speybroeck N., Ter Kuile B., Threlfall J., Wahlstrom H., Tak-kinen J., Wagner M., Arcella D., Da Silva Felicio M. T., Georgiadis M., Messens W., Lind-qvist R. Listeria monocytogenes contamination of ready-to-eat foods and the risk for human health in the EU. EFSA journal, 2018, vol. 16, no. 1, 170 p. https://doi.org/10.2903/j.efsa.2018.5134
Matle I., Mbatha K. R., Madoroba E. A review of Listeria monocytogenes from meat and meat products: Epidemiology, virulence factors, antimicrobial resistance and diagnosis. Onder-stepoort J. Vet Res, 2020, vol. 87, no. 1, pp. 1-20. https://doi.org/10.4102/ojvr.v87il.1869
Lowry O. H., Rosebrough N. J., Farr A. L., Randall R. J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem., 1951, vol. 193, no. 1, pp. 265-275. https://doi.org/10.1016/S0021-9258(19)52451-6
Koutsoumanis K., Alvarez-Ordonez A., Bolton D., Bover-Cid S., Chemaly M., Davies R., De Cesare A., Herman L., Hilbert F., Lindqvist R., Nauta M., Peixe L., Ru G., Simmons M., Skandamis P., Suffredini E., Jordan K., Sampers I., Wagner M., Da Silva Felicio M. T., Georgiadis M., Messens W., Mosbach-Schulz O., Allende A. The public health risk posed by Listeria monocytogenes in frozen fruit and vegetables including herbs, blanched during processing. EFSA Journal, 2020, vol. 18, no. 4, 101 p. https://doi.org/10.2903/j.efsa.2020.6092
Хаптанова Наталья Маркеловна младший научный сотрудник Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора Россия, 664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78 e-mail: khaptanchik@mail.ru
Khaptanova Natalya Markelovna
Junior Research Scientist
Irkutsk Antiplague Research Institute
of Siberia and Far East
78, Trilisser St., Irkutsk, 664047,
Russian Federation
e-mail: khaptanchik@mail.ru
Андреевская Нина Михайловна кандидат биологических наук старший научный сотрудник Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора Россия, 664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78 e-mail: andreevskayа45@mail.ru
Andreevskaya Nina Mikhailovna Candidate of Sciences (Biology) Senior Research Scientist Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East 78, Trilisser St., Irkutsk, 664047, Russian Federation e-mail: andreevskayа45@mail.ru
Коновалова Жанна Анатольевна кандидат биологических наук старший научный сотрудник Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора Россия, 664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78 e-mail: adm@chumin.irkutsk.ru
Konovalova Zhanna Anatol'evna Candidate of Sciences (Biology) Senior Research Scientist Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East 78, Trilisser St., Irkutsk, 664047, Russian Federation e-mail: adm@chumin.irkutsk.ru
Гефан Наталья Геннадьевна
кандидат медицинских наук
заведующая отделом
Иркутский научно-исследовательский
противочумный институт
Роспотребнадзора
Россия, 664047, г. Иркутск,
ул. Трилиссера, 78
e-mail: adm@chumin.irkutsk.ru
Gefan Natalya Gennadyevna
Candidate of Sciences (Medicine)
Head of Department
Irkutsk Antiplague Research Institute
of Siberia and Far East
78, Trilisser St., Irkutsk, 664047,
Russian Federation
e-mail: adm@chumin.irkutsk.ru
Лукьянова Светлана Владимировна
кандидат биологических наук
научный сотрудник
Иркутский научно-исследовательский
противочумный институт
Роспотребнадзора
Россия, 664047, г. Иркутск,
ул. Трилиссера, 78
e-mail: svetalukyan@mail.ru
Luk'yanova Svetlana Vladimirovna
Candidate of Sciences (Biology)
Research Scientist
Irkutsk Antiplague Research Institute
of Siberia and Far East
78, Trilisser St., Irkutsk, 664047,
Russian Federation
e-mail: svetalukyan@mail.ru
Остяк Александр Сергеевич
научный сотрудник
Иркутский научно-исследовательский
противочумный институт
Роспотребнадзора
Россия, 664047, г. Иркутск,
ул. Трилиссера, 78
e-mail: ostyakalex@mail.ru
Карцев Николай Николаевич кандидат медицинских наук старший научный сотрудник
Ostyak Aleksandr Sergeevich
Research Scientist
Irkutsk Antiplague Research Institute
of Siberia and Far East
78, Trilisser St., Irkutsk, 664047,
Russian Federation
e-mail: ostyakalex@mail.ru
Kartsev Nikolay Nikolaevich Candidate of Sciences (Medicine) Senior Research Scientist
Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора Россия, 142279, Московская область, р.п. Оболенск, г. о. Серпухов, территория «Квартал А», 24 e-mail: kartsev@obolensk.org
Борзенков Валерий Николаевич кандидат биологических наук старший научный сотрудник Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора Россия, 142279, Московская область, р.п. Оболенск, г. о. Серпухов, территория «Квартал А», 24 e-mail: vbn5314@mail.ru
Балахонов Сергей Владимирович доктор медицинских наук, профессор директор
Иркутский научно-исследовательский
противочумный институт
Роспотребнадзора
Россия, 664047, г. Иркутск,
ул. Трилиссера, 78
e-mail: balakhonov.irk@mail.ru
State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology 24, "KvartalA" Territory, Obolensksetl., Moscow region, 142279, Russian Federation e-mail: kartsev@obolensk.org
Borzenkov Valerii Nikolaevich Candidate of Sciences (Biology) Senior Research Scientist State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology 24, "Kvartal A" Territory, Obolensk setl., Moscow region, 142279, Russian Federation e-mail: vbn5314@mail.ru
Balakhonov Sergei Vladimirovich
Doctor of Sciences (Medicine),
Professor, Director
Irkutsk Antiplague Research Institute
of Siberia and Far East
78, Trilisser St., Irkutsk, 664047,
Russian Federation
e-mail: balakhonov.irk@mail.ru
Дата поступления: 20.01.2021 Received: January, 20, 2021
