CC BY
20
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 67
2 нед ЛТ. Больному в ходе ЛТ ректально вводили «Коле- Г-6-ФДГ достоверно увеличена: 3,3 ± 0,6 при РЖ; 2,0 ± 0,4 гель-диск» с наночастицами серебра с экспозицией до 6—8 ч при РК; 3,1 ± 0,8 при РЛ (1,4 ± 0,3 нмоль/мин х 106; р < 0,001). 2 раза в сутки (утром и за 1 ч до сна). Параллельно исследована активность этих ферментов Результаты. В результате лечения в 1-й группе полный в лимфоцитах крови, отходящей непосредственно от опу-регресс (ПР) достигнут у 1 пациента, частичный регресс холи. Полученные величины активности достоверно выше (ЧР) — у 15, стабилизация (Ст) — у 3, прогрессирование таковых в венозной крови. Найдена линейная корреляци-(Пр) — у 1. Во 2-й группе ПР опухоли диагностирован у 3 па- онная связь между активностью АДА и Г-6-ФДГ (г = 0,533; циентов, ЧР — у 17. В 3-й группе ПР опухоли диагностиро- р = 0,019) и АДА и ЛДГ (г = 0,711; р < 0,001) в лимфоцитах ван у 7 пациентов, ЧР — у 13. Кровомазание проходило крови, отходящей непосредственно от опухоли при РК. к 4-6-му дню использования дисков с наночастицами се- Заключение. Таким образом, ферментативный статус ребра. Боли в области рецидива снижались или исчезали клеток иммунной системы здоровых людей значительно к 6-9-му дню лечения. Среди лучевых реакций в 1-й груп- отличается от статуса онкологических больных. Повыше-пе тошнота I степени отмечена у 3 пациентов, лучевой рек- ние активности ЛДГ лимфоцитов крови больных РЖ, РК тит 1—11 степени — у 15, лучевой эпителиит 1—11 степени — и РЛ отражает интенсификацию процессов анаэробного у 4 пациентов; во 2-й группе тошнота I степени — у 7, лучевой окисления глюкозы в лимфоцитах. Снижение активности ректит 1—11 степени — у 7, лучевой эпителиит 1—11 сте- АДА приводит к накоплению аденозина и способствует его пени — у 6 и у 6 больных лучевых реакций не отмечено; проапоптозному эффекту и нарушению иммунного ответа. в 3-й группе тошнота I степени наблюдалась у 7 пациентов, Возрастание активности Г-6-ФДГ у больных — повышение лучевой ректит 1—11 степени — у 9, лучевой эпителиит 1—11 сте- активности реакций антиоксидантной системы защиты — пени — у 8 и у 3 пациентов лучевых реакций не отмечено. по-видимому, указывает на функциональное напряжение Заключение. ЛТ в режиме динамического фракциони- адаптивных и защитных систем в лимфоцитах в условиях рования стабилизирует патологический процесс и приво- иммунодефицита. дит к регрессу опухоли. Использование «Колегель-диска» на основе альгината натрия с частицами серебра снижает В. О. Мирончик, Н.К. Юркштович, общую токсичность лечения и позволяет завершить лече- В.А. Алиновская, Т.Л. Юркштович ние в запланированный срок. ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ФОСФАТОВ К.А. Миронова, Б.Г. Борзенко, Р.В. Ищенко ЦЕЛЛЮЛОЗЫ В КАЧЕСТВЕ НОСИТЕЛЕЙ НАРУШЕНИЯ МЕТАБОЛИЗМА В ЛИМФОЦИТАХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ВЕЩЕСТВ ПРИ РАЗЛИЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ ОПУХОЛЕВОГО НИИФХПБГУ, Минск, Республика Беларусь ПРОЦЕССА Введение. Интенсивное развитие химии биополимеров ДонНМУ им. М. Горького, Донецк, Украина обусловлено непрерывно растущим уровнем медицинских Введение. Аденозиндезаминаза (АДА) и лактатдегидро- технологий и возникающей в связи с этим необходимостью геназа (ЛДГ) — ферменты энергообмена клеток, влияющие создания изделий и средств на основе синтетических на их функциональное состояние. Резкое снижение актив- и природных полимеров для восстановления и обеспече-ности АДА может приводить к нарушению функции Т- ния нормальной жизнедеятельности организма. Одним и В-клеток. Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г-6-ФДГ) из основных требований, предъявляемых к биополимерам, принадлежит к системе антиоксидантной защиты, ключе- является биосовместимость — способность полимера вой фермент цикла которого поставляет НАДФН2 и фос- встраиваться в организм, не вызывая побочных клиниче-фопентозы, необходимые для пластических и репаратив- ских проявлений. В настоящее время предпочтение отда-ных процессов в клетках. ется биоактивным материалам, которые вступают в специ-Цель исследования — провести сравнительное изучение фические взаимодействия с организмом и стимулируют активности ЛДГ, АДА и Г-6-ФДГ в лимфоцитах крови конкретные процессы. Наибольший интерес для создания больных раком желудочно-кишечного тракта и раком лег- таких биополимеров представляют полисахариды и прежде кого (РЛ). всего целлюлоза, макромолекулы которой состоят из ан-Материалы и методы. Спектрофотометрически иссле- гидроглюкопиранозных звеньев, соединенных Р-гликозидной дована активность ЛДГ, АДА и Г-6-ФДГ в лимфоцитах связью, и не содержат структурных единиц, которые мо-у 84 пациентов с раком желудка (РЖ, п = 23), кишечника гли бы оказывать токсическое воздействие на организм. (РК, п = 27) и РЛ (п = 34), стадии Т3—4М0—ХМ0—1, в воз- Цель исследования — определение оптимальных усло-расте от 50 до 70 лет. вий получения высокозамещенных фосфатов целлюлозы Результаты. Установлено однонаправленное изменение путем этерификации фосфорилирующей смесью «трибу-активности исследуемых ферментов в лимфоцитах боль- тилфосфат — ортофосфорная кислота — оксид фосфора ных с различной локализацией опухоли. Активность ЛДГ (V)», изучение физико-химических и медико-биологиче-достоверно увеличена у всех больных по сравнению ских свойств полученных образцов и определение возмож-с контролем и составила 3,8 ± 0,1 нмоль/мин х 106 при РЖ; ности использования их в качестве биодеструктируемого 3,3 ± 0,2 нмоль/мин х 106 при РК; 3,6 ± 0,2 при РЛ (2,5 носителя противоопухолевых веществ. ± 0,1 нмоль/мин х 106, р < 0,001). Активность АДА досто- Материалы и методы. В качестве исходного целлюлоз-верно снижена: 18,5 ± 1,6 при РЖ; 8,9 ± 1,5 при РК; 23,5 ± 3,9 ного материала использовали трикотажное полотно. Реак-при РЛ (52,1 ± 6,7 нмоль/мин х 106; р < 0,001). Активность цию этерификации целлюлозы осуществляли свежеприго-
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
68
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
товленной фосфорилирующей смесью при атмосферном давлении, температуре 20—60 °С, в течение 1—14 сут. Структуру, состав и размеры полученных образцов исследовали методами потенциометрического титрования, инфракрасной спектроскопии и 31Р-спектроскопии ядерного магнитного резонанса, элементного анализа, рентгенофазового анализа, сканирующей электронной микроскопии и атом-но-силовой микроскопии.
Результаты. При фосфорилирования в вышеописанных системах были получены фосфаты целлюлозы с содержанием фосфорнокислых групп в интервале 0,2—4,9 ммоль/г, степенью набухания 2,4—119 г/г, относящиеся к классу малотоксичных веществ, способные к гелеобразованию. Результаты исследований показали, что содержание фосфора и степень набухания в значительной степени зависят от продолжительности реакции и температуры процесса. При этом следует отметить, что увеличение температуры и времени реакции способствует накоплению фосфора, в то время как степень набухания проходит через максимум. Так, максимум набухания (112 г/г) фосфатов целлюлозы, полученных при 30 °С, достигается при фосфорили-ровании в течение 6 сут, а при 40 °С (119 г/г) — за 4 сут.
Заключение. На основании проведенных исследований предложен способ получения биодеструктируемых полимеров на основе высокозамещенных фосфатов целлюлозы, которые могут быть использованы в качестве носителей противоопухолевых веществ в силу их физико-химических свойств.
С.М. Мирошниченко. А.Н. Дударев, Т.А. Ткаченко,
А.Ю. Городецкая, С.И. Давыденко, И.Ф. Усынин
ВЛИЯНИЕ КОМПЛЕКСА СТАУРОСПОРИНА
С АПОЛИПОПРОТЕИНОМ А-1 НА КЛЕТОЧНУЮ
ПРОЛИФЕРАЦИЮ
ФГБНУ «НИИбиохимии», Новосибирск
Введение. Стауроспорин (СТ) является противоопухолевым препаратом, способным вызывать апоптоз опухолевых клеток с фенотипом лекарственной устойчивости. Однако его использование затруднено в связи с цитоток-сичностью по отношению к здоровым клеткам и плохой фармакокинетикой. Создание липосом с более низкими концентрациями СТ позволило снизить его токсичность. Аполипопротеин А-1 (АпоА-1), основной белок липопро-теинов высокой плотности (природные переносчики), имеет амфипатические а-спирали, способные связывать плохо растворимые в воде молекулы. Показана его роль в транспорте холестерина, гормонов, жирорастворимых витаминов, ксенобиотиков.
Цель исследования — изучить влияние комплекса СТ с АпоА-1 на удвоение ДНК высокопролиферирующих клеток.
Материалы и методы. Липопротеины выделяли из плазмы крови человека методом изоплотностного ультрацентрифугирования в растворе КВг. АпоА-1 экстрагировали смесью бутанола с диизопропиловым эфиром с последующим высаливанием сульфатом аммония. Чистоту АпоА-1 оценивали с помощью электрофореза в полиакриламид-ном геле. Пролиферацию клеток оценивали по включению [3Н] -тимидина («Изотоп», Россия) в ДНК. Для этого за 2 ч до окончания эксперимента в культуральную среду вноси-
ли 2,0 мкКю/мл. Радиоактивность проб измеряли на жидкостном сцинтилляционном счетчике Mark-III (США). Скорость биосинтеза ДНК рассчитывали в импульсах в 1 мин на 106 клеток. Клетки линии THP-1 и мышиной меланомы B16-F10 культивировали в среде RPMI-1640 («ПанЭко», Россия) в присутствии СТ или комплекса СТ с АпоА-1 в течение 4 ч, концентрация СТ (Sigma) изменялась от 0,5 до 0,005 мкМ.
Результаты. Анализ тушения флуоресценции триптофана в АпоА-1 под влиянием СТ указывает на связывание данного индуктора апоптоза с белком. Полученный комплекс был стабилен в течение исследуемого периода (1 мес) и сохранял способность ингибировать включение [3Н] -ти-мидина в ДНК клеток линии THP-1 при меньшей концентрации антибиотика в комплексе с АпоА-1. Комплекс усиливал СТ-индуцированный апоптоз клеток линии THP-1. Для исследования включения [3Н] -тимидина в ДНК (S-фаза) клеток меланомы B16-F10 использовали СТ в концентрации от не влияющей на данный показатель (0,05 мкМ) до ин-гибирующей на 70 % (0,5 мкМ). В комплексе с АпоА-1 в первом случае ингибирование составило 41 % от контрольного уровня. Повышение концентрации СТ до 0,1 мкМ в среде культивирования снижало включение [3Н]-тими-дина на 38 %, комплекс усиливал ингибирующий эффект до 56 %. В дальнейшем СТ в комплексе с АпоА-1 снижал включение [3Н]-тимидина в ДНК клеток в большей степени, чем СТ сам по себе.
Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности использования АпоА-1 для доставки СТ в высокопролиферирующие клетки.
В.А. Мисюрин1, А.В. Мисюрин1, Н.А. Лыжко1, Т.В. Ахлынина1, Ю.П. Финашутина1, Л.А. Кесаева1, А. В. Пономарёв1, А.Е. Мисюрина2, А.А. Крутов2, Е.Н. Пушкова1, О. С. Бурова1, А. С. Уварова1, М.А. Барышникова1 БЕЛОК PRAME СПОСОБЕН ВЛИЯТЬ НА ЭКСПРЕССИЮ СОБСТВЕННОГО ГЕНА 1ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва;
2ФГБУ ГНЦМинздрава России, Москва
Введение. Экспрессия гена PRAME при онкологических заболеваниях наблюдается очень часто. Активность белка PRAME оказывает негативное влияние на прогноз. Известно, что PRAME способен связываться с бактериальными липополисахаридами и пептидогликанами (PAMPs). Данный белок состоит из лейцин-богатых повторов и имеет структуру, сходную с TLR2 (толл-подобный рецептор 2) и белком RI (ингибитор рибонуклеаз). Известно, что TLR2 через NF-kB активирует экспрессию гена TLR2. Согласно современным представлениям, экспрессия гена PRAME запускается при связывании неизвестного поверхностного рецептора с PAMPs. Мы располагаем данными, доказывающими наличие белка PRAME на поверхности клетки. Мы предполагаем, что мембраносвязанный белок PRAME связывается с PAMPs и передает сигнал внутрь клетки, что приводит к активации экспрессии многих генов, в том числе и гена PRAME. Кроме того, PRAME, подобно белку RI, может обладать способностью защищать РНК от тепловой деградации.
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
