CC BY
9Цель
Исследование этиологии формирования мутационных соматических паттернов, связанных с SDHx-мутациями.
Материалы и методы
В исследовании использовались данные высокопроизводительного секвенирования 42 экзомов опухолей и парных нормальных тканей пациентов с известным мутационным статусом SDHx (наличие/отсутствие терминальных мутаций). Анализ мутационных сигнатур проведен с помощью инструмента SigProfiler на основе профиля идентифицированных соматических мутаций. SigProfilerExtractor применялся для определения de novo сигнатур в режиме замены одного основания (SBS) для 6 вариантов мутированных оснований (C>A, C>G, C>T, T>A, T>C и T>G) с учетом контекста 5' или 3' последовательности (96SBS). Выявленные de novo сигнатуры декомпозированы и аннотированы согласно 96SBS COSMIC.
Результаты
Идентифицировано 3 мутационные сигнатуры (SBS1, SBS5 и SBS29), наблюдаемые у всех пациентов. Выявленные сигнатуры обогащены наибольшим числом соматических мутаций и, вероятно, не связаны с наличием генетической предрасположенности. Сигнатура SBS1 связана с дезаминирова-
Список литературы
нием 5-метилцитозина до тимина; SBS5 и SBS29 могут быть ассоциированы с воздействием табака. В SDHx-мутантных опухолях выявлены 2 специфические сигнатуры, SBS11 и SBS19, в образцах без мутаций — только SBS33. Особый интерес представляет SBS11, похожая на мутационный паттерн после лечения алкилирующими агентами. SBS11-сигнатура выявлена у 1 пациента с SDHB-мутантной вагальной параганглиомой, получавшего только хирургическое лечение. Известно много факторов, приводящих к повреждению ДНК в результате ал-килирования, которое репарируется при участии 06-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы (MGMT) и Fe(П)/a-кетоглутарат диоксигеназы семейства ALKBH. При этом активность Fe(II)/a-кетоглутарат диоксигеназы связана с уровнем промежуточных метаболитов цикла Кребса и может быть нарушена в результате мутаций в генах SDHx. Гиперметилирование и снижение экспрессии MGMT ранее уже было показано в SDHB-мутантных опухолях.
Выводы
Таким образом, нарушение системы репарации алкилирования ДНК может быть одним из механизмов развития параганглиом и является потенциальным терапевтическим таргетом. Исследование выполнено при финансовой поддержке гранта РНФ № 19-15-00419.
Получение и характеристика моноклональных антител против стресс-индуцированных молекул MICA и MICB
Авторы
Столбовая Анастасия Юрьевна, anastasia.stolbovaya@gmail.com, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Смирнов Илья Валерьевич, smirnov.iv.iem@gmail.com, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург
Грязева Ирина Владимировна, girvl@yandex.ru, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», Санкт-Петербург Крутецкая Ирина Юрьевна, 3136086@mail.ru, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», Санкт-Петербург Терехина Лидия Александровна, terehina.l@list.ru, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», Санкт-Петербург
Малахов Ипат Сергеевич, ipatyi.malakhov@yahoo.com, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», Санкт-Петербург
Шашкова Ольга Александровна, ujinolga@yandex.ru, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург
Пиневич Агния Александровна, agniapinevich@gmail.com, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет», Санкт-Петербург
Самойлович Марина Платоновна, mpsamoylovich@gmail.com, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гра-нова», ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет», Санкт-Петербург
Ключевые слова:
белки MICA/B, антитела против MICA/B, NKG2D, NK-клетки, противоопухолевый иммунитет
Актуальность
Белки MICA и MICB относят к неклассическим молекулам главного комплекса гистосовместимости I класса. Эти белки относятся к маркерам клеточного стресса и появляются на мембране инфицированных, поврежденных или трансформированных клеток. Оба белка связываются с рецепторами NKG2D NK-клеток, что приводит к запуску их цитотоксиче-ской реакции. Злокачественная трансформация клеток приводит к усилению экспрессии белков MICA и MICB. Под действием металлопротеиназ образуются растворимые формы белков MICA и MICB, которые связываются с рецептором NKG2D и вызывают де-сенситизацию NK-клеток. Ряд злокачественных онкологических заболеваний органов пищеварительной, кровеносной систем, кожи сопровождается ростом концентрации растворимых форм MICA и MICB в крови пациентов. Повышенная концентрация растворимого MICA отрицательно коррелирует с общей и безрецедивной выживаемостью пациентов. Повышение уровня растворимых белков MICA и MICB можно рассматривать как индикатор избегания иммунного надзора опухолью.
Цель
Получение моноклональных антител, связывающих растворимые и мембранные формы белков MICA и/или MICB.
Материалы и методы
Для индукции иммунного ответа мышам F1 (DBAxBalb/c) вводили экстраклеточные участки белков MICA*008 или MICB*005. Слияние спленоцитов мыши проводили с миеломной линией клеток Sp2/0. Тестирование иммунного ответа и скрининг надоса-
дочных жидкостей гибридом проводили с помощью 2 вариантов непрямого иммуноферментного анализа. В 1-м варианте в качестве антигена использовали адсорбированный на твердой фазе белок MICA или MICB, в 2-м варианте — молекулы MICA и MICB экспрессировали на мембране клеток линии С6.
Результаты
Получено 11 новых моноклональных антител, которые распознавали мембранную и растворимую формы белков MICA (5 антител) или MICB (6 антител). Среди них 3 антитела распознавали эпитопы, уникальные для белка MICA, и 2 антитела связывали эпитопы, уникальные для MICB. Остальные антитела обладали перекрестной реактивностью. С помощью иммуноферментного анализа установлена роль фолдинга и дисульфидных связей в формировании эпитопов белка MICA, распознаваемых антителами. Тепловая денатурация антигена не приводила к изменению их структуры, тогда как восстановление дисульфидных связей снижало аффинитет взаимодействия 3 антител; 1 антитело одинаково эффективно связывало как нативный, так и денатурированный антиген. Проведен подбор комплиментарных пар антител для выявления растворимой формы MICA с помощью двухцентрового иммуноферментного анализа. Установлено несколько сочетаний реагентов, позволяющих специфично выявлять MICA в растворе.
Выводы
Создана панель моноклональных антител, которая будет использована для изучения роли белков MICA и MICB в онкологическом процессе. Работа выполнена при финансовой поддержке РНФ (№ 21-15-00021).
Список литературы
1. de Andrade F. L . et al . Inhibition of MICA and MICB Shedding Elicits NK cell-mediated Immunity against Tumors Resistant
to Cytotoxic T cells Lucas // Cancer Immunity. 2020 . Vol . 8 . No . 6 . P769-780 . 2 . Zhao Y et al . Prognostic value of MICA/B in cancers: a systematic review // Oncotarget, 2017 . Vol . 8 . No . 56 . P 9638496395.
Сигнальные пути клеток рака молочной железы с приобретенной резистентностью к фулвестранту
Авторы
Филиппова Маргарита Николаевна, mn_filippova@student.mpgu.edu, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Бло-хина» Минздрава России, Москва
Андреева Ольга Евгеньевна, tilberta@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Сорокин Данила Владимирович, dsorokin2018@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Щербаков Александр Михайлович, Alex.Scherbakov@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Бло-хина» Минздрава России, Москва
Ключевые слова:
рак молочной железы, S6K, метформин, фулвестрант
