CC BY
5доксорубицином. Дозы соответствовали рекомендованным максимальным терапевтическим дозам. Проточную цитометрию (CytoFlex, BC) использовали для оценки витальности клеток (Calcein-am), трансформации мембран (Annexin V-FITC; Eosin5-maleimide), генерации АФК (DCF-DA). Конфокальная и атом-но-силовая микроскопия использована для оценки морфологии и жесткости мембран (модуль Юнга); лазерная дифракция — для оценки осмотической хрупкости. Скорость движения эритроцитов в микроканалах (3^2x200 мкм) определяли по видео, полученному на микроскопе Leica DM4000B с помощью камеры XIMEA MC023MG-SY; обработка видеофайлов — MATLAB; статистика GraphPad Prism8.
Результаты
Выявлены значимые цитологические нарушения эритроцитов при действии всех исследованных препаратов — снижение активности внутриклеточных эстераз (витальность), нарушение липидной асимме-
трии. Наибольшей травматичностью для эритроцитов обладали препараты таксанов, поскольку механизм их действия затрагивает многие белки цитоскелета. По данным конфокальной микроскопии установлены грубые нарушения формы при обработке TAX и TAX-PLAT — стоматоцитоз, множественные каверны мембраны, для остальных препаратов — единичные нарушения. Микрофлюидный анализ показал, что действие препаратов ХТ вызывает появление субпопуляции эритроцитов с нарушенными параметрами микрореологии — снижение скорости движения в микроканалах, окклюзии, повышение адгезии к стенкам каналов.
Выводы
Нарушения поведения эритроцитов в микропотоке могут рассматриваться как значимая часть механизма развития анемии при онкологии — цитологическая травма эритроцитов препаратами ХТ приводит к нарушению микрореологии. Работа выполнена при поддержке РНФ 22-24-00998.
Список литературы
1. Frontiers in Physiology 2018 . 9 . DOI . org/10 . 3389/fphys . 2018 . 00656 .
2 . Cells 2021. 10 (12) . Р 3552 . doi . org/10 . 3390/cells10123552 .
3 . Membranes 2022 . 12 (2) . Р 217 . DOI . org/10 ,3390/membranes12020217 .
Мутационная сигнатура алкилирования ДНК, ассоциированная с SDHB-мутацией, при вагальной параганглиоме
Авторы
Снежкина Анастасия Владимировна, leftger@rambler.ru, ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва
Кобеляцкая Анастасия Андреевна, kaa.chel@mail.ru, ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва
Калинин Дмитрий Валерьевич, dmitry.v.kalinin@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ хирургии им. А.В. Вишневского» Минздрава России, Москва
Федорова Мария Сергеевна, fedorowams@yandex.ru, ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва
Павлов Владислав Сергеевич, vladislav1pavlov@gmail.com, ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва
Пудова Елена Анатольевна, pudova_elena@inbox.ru, ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва
Головюк Александр Леонидович, algolovyuk@inbox.ru, ФГБУ «НМИЦ хирургии им. А.В. Вишневского» Минздрава России, Москва
Краснов Георгий Сергеевич, gskrasnov@mail.ru, ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Эн-гельгардта РАН, Москва
Кудрявцева Анна Викторовна, rhizamoeba@mail.ru, ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Эн-гельгардта РАН, Москва
Ключевые слова:
параганглиомы головы и шеи, SDHx, мутации, мутационные сигнатуры, повреждение ДНК
Актуальность SDHx. Однако соматические изменения и молекуляр-
Параганглиомы головы и шеи являются редкими ные механизмы, приводящие к развитию как спора-
нейроэндокринными опухолями, которые часто ас- дических, так и наследственных форм, не до конца
социированы с герминальными мутациями в генах ясны.
Цель
Исследование этиологии формирования мутационных соматических паттернов, связанных с SDHx-мутациями.
Материалы и методы
В исследовании использовались данные высокопроизводительного секвенирования 42 экзомов опухолей и парных нормальных тканей пациентов с известным мутационным статусом SDHx (наличие/отсутствие терминальных мутаций). Анализ мутационных сигнатур проведен с помощью инструмента SigProfiler на основе профиля идентифицированных соматических мутаций. SigProfilerExtractor применялся для определения de novo сигнатур в режиме замены одного основания (SBS) для 6 вариантов мутированных оснований (C>A, C>G, C>T, T>A, T>C и T>G) с учетом контекста 5' или 3' последовательности (96SBS). Выявленные de novo сигнатуры декомпозированы и аннотированы согласно 96SBS COSMIC.
Результаты
Идентифицировано 3 мутационные сигнатуры (SBS1, SBS5 и SBS29), наблюдаемые у всех пациентов. Выявленные сигнатуры обогащены наибольшим числом соматических мутаций и, вероятно, не связаны с наличием генетической предрасположенности. Сигнатура SBS1 связана с дезаминирова-
Список литературы
нием 5-метилцитозина до тимина; SBS5 и SBS29 могут быть ассоциированы с воздействием табака. В SDHx-мутантных опухолях выявлены 2 специфические сигнатуры, SBS11 и SBS19, в образцах без мутаций — только SBS33. Особый интерес представляет SBS11, похожая на мутационный паттерн после лечения алкилирующими агентами. SBS11-сигнатура выявлена у 1 пациента с SDHB-мутантной вагальной параганглиомой, получавшего только хирургическое лечение. Известно много факторов, приводящих к повреждению ДНК в результате ал-килирования, которое репарируется при участии 06-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы (MGMT) и Fe(П)/a-кетоглутарат диоксигеназы семейства ALKBH. При этом активность Fe(II)/a-кетоглутарат диоксигеназы связана с уровнем промежуточных метаболитов цикла Кребса и может быть нарушена в результате мутаций в генах SDHx. Гиперметилирование и снижение экспрессии MGMT ранее уже было показано в SDHB-мутантных опухолях.
Выводы
Таким образом, нарушение системы репарации алкилирования ДНК может быть одним из механизмов развития параганглиом и является потенциальным терапевтическим таргетом. Исследование выполнено при финансовой поддержке гранта РНФ № 19-15-00419.
Получение и характеристика моноклональных антител против стресс-индуцированных молекул MICA и MICB
Авторы
Столбовая Анастасия Юрьевна, anastasia.stolbovaya@gmail.com, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Смирнов Илья Валерьевич, smirnov.iv.iem@gmail.com, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург
Грязева Ирина Владимировна, girvl@yandex.ru, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», Санкт-Петербург Крутецкая Ирина Юрьевна, 3136086@mail.ru, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», Санкт-Петербург Терехина Лидия Александровна, terehina.l@list.ru, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», Санкт-Петербург
Малахов Ипат Сергеевич, ipatyi.malakhov@yahoo.com, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», Санкт-Петербург
Шашкова Ольга Александровна, ujinolga@yandex.ru, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург
Пиневич Агния Александровна, agniapinevich@gmail.com, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гранова», ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет», Санкт-Петербург
Самойлович Марина Платоновна, mpsamoylovich@gmail.com, ФГБУ «РНЦРХТ им. академика А.М. Гра-нова», ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет», Санкт-Петербург
Ключевые слова:
белки MICA/B, антитела против MICA/B, NKG2D, NK-клетки, противоопухолевый иммунитет
