CC BY
35VETERINARY MICROBIOLOGY, VIROLOGY AND EPIZOOTOLOGY
8. GOST 28573 - 90. Svinyi. Metody laboratornoy diagnostiki afrikanskoy chumy sviney [Pigs. Methods of laboratory diagnostics of ASF]. - M.: Standartinform, 2005. - 10 p.
9. Laboratory methods to study African swine fever virus / P. de Leyn [et al.] // Virus Research. - 2013. - № 4 (April).
- P. 168-179.
10. Biologicheskie svoystva virusa afrikanskoy chumy sviney, vydelennogo v Rossiyskoy Federacii [Biological properties of ASF virus, detected in Russian Federation] / V.M.Balyshev, V.V.Kurinnov, S.Zh.Cybanov [et al.] // Veterinariya.
- 2010. - № 7. - P. 25-27.
11. African swine fever virus replication and genomics / L.K.Dixon [et al.] // Virus Research. - 2013. - Vol. 173, № 1. - P. 3-14.
УДК: 619:616.98:579.852.11
ПОЛУЧЕНИЕ ЭРИТРОЦИТАРНОГО СИБИРЕЯЗВЕННОГО АНТИГЕНА
С.В.Иванова - кандидат биологических наук, зав.лаб.; Л.А.Мельникова - кандидат ветеринарных наук, вед.н.с.; Х.Н.Макаев - доктор ветеринарных наук, профессор; А.П.Родионов - аспирант.
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», г.Казань (420075, г.Казань, Научный городок-2, е-таИ: [email protected]).
Сибирская язва особо опасное инфекционное заболевание, относится к группе зооантропонозов, проявляется массово или спорадически в различных регионах Российской Федерации. Одной из причин возникновения случаев заболевания сибирской язвой людей и животных является деятельность человека при проведении земельных работ, строительстве жилых объектов, дорог, прокладке трубопроводов и других работ, пастьба животных и сельскохозяйственная деятельность вблизи сибиреязвенных захоронений без учета эпизоотической обстановки и несогласованности с ветеринарными-санитарными службами регионов. В настоящее время для обеспечения благополучия по данному заболеванию животных поголовно вакцинируют, что снижает риск возникновения заболевания, но и не устраняет угрозу появления новых вспышек сибирской язвы. Дополнительным источником заболевания могут служить пропущенные при вакцинации животные, недостаточная напряженность индуцируемого противосибиреязвенного иммунитета при нарушении хранения и транспортирования вакцины. Поэтому важным звеном в недопущении заболевания и распространения сибирской язвы среди животных является контроль напряженности поствакцинального иммунитета. Получение эритроцитарного сибиреязвенного антигена включает три этапа: 1 - получение крови, формалинизация эритроцитов, определение сухого вещества и приготовление 3%-ной взвеси; 2 - танизация 3%-ной взвеси формалинизированных эритроцитов; 3 - сенсибилизация 3%-ной взвеси формалинизированных эритроцитов полисахаридным комплексом штамма 55 возбудителя сибирской язвы. Полученный эритроцитарный сибиреязвенный антиген активен, специфичен, не дает самоагглютинацию.
КЛюЧЕВЫЕ СЛОВА: сибирская язва, антиген, формалинизация, танизация, сенсибилизация, эритроциты.
DOI: 10.33632/1998-698X^019-2-22-25
В последние годы в связи с развитием промышленного животноводства и созданием крупных агропромышленных комплексов возросла потребность в иммунологических, лечебных и диагностических препаратах, позволяющих систематически контролировать благополучие страны по инфекционным заболеваниям [2], одним из которых является сибирская язва - особо опасное остропротекающее инфекционное заболевание, представляющее серьезную угрозу для здоровья человека и животных.
Возбудитель сибирской язвы существует в двух формах: вегетативной - в организме больного животного и споровой - в местах захоронения павших животных.
Возникновение очагов и спорадических случаев сибирской язвы обусловлено народно-хозяйственной деятельностью при проведении широкомасштабных
строительных и мелиоративных работ. Все это должно строго осуществляться и согласовываться с ветеринарной службой муниципальных образований, которые владеют информацией о наличии на той или иной территории отдельных захоронений больного скота и скотомогильников, являющихся потенциальными рассадниками возбудителя сибирской язвы. С целью профилактики заражения животных данным заболеванием на территории России проводится вакцинация животных с охватом всего восприимчивого поголовья [4, 5, 7].
Несмотря на то, что сибирская язва тщательно изучена и подробно описана в специальной литературе, она продолжает оставаться наиболее опасной болезнью и малейшее пренебрежение профилактическими мероприятиями против данного заболевания может нанести огромный экономический ущерб и принести большую
угрозу здоровью населения и животных в целом. Массовая вакцинация снижает риск возникновения заболевания, но не устраняет угрозу новых вспышек. Дополнительными причинами заболевания животных считаются пропуски при вакцинации, толерантность и недостаточная напряженность противосибиреязвенного иммунитета. Эти недостатки контролируются иммунологическими реакциями с сывороткой крови животных, вакцинированных против данного заболевания, на наличие сибиреязвенных антител [1,3]. Одной из надежных, быстрых и простых в исполнении является реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) [1]. На сегодняшний день актуальным является вопрос получения эритроцитарного сибиреязвенного антигенного диагностикума [6].
Материалы и методы. На первом этапе для получения эритроцитарного сибиреязвенного антигена брали крови у барана-донора из яремной вены в мерную посуду со стеклянными бусами. Кровь дефибри-нировали, фильтровали через четырехслойную марлевую салфетку. Полученную суспензию эритроцитов разбавляли 1:1 буферным раствором с рН 6,4. На 100 мл разбавленной суспензии добавляли смесь из 40 мл буферного раствора с рН 6,4 и 40 мл нейтрального формалина. Помещали в термостат на магнитную мешалку при температуре 370С, выдерживали 2 часа. Затем эритроциты осаждали центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин, трижды отмывали раствором с рН 7,2. Эритроциты разбавляли буферным раствором с рН 6,4 в расчете на 100 мл разбавленной суспензии 500 мл буфера с рН 6,4. Оставляли на 48 часов при температуре +40С, затем верхнюю часть декантировали со сгустка, осадок трижды отмывали буферным раствором с рН 7,2, после чего определяли остаточную массу. Для получения 3%-ной концентрации эритроцитов остаток разбавляли буферным раствором с рН 6,4. Для консервации добавляли нейтральный формалин до 1% в конечной концентрации. Через 24 ч формалинизированные эритроциты проверяли на самоагглютинацию (формалинизированные эритроциты + 0,85% раствором хлористого натрия).
Второй этап - танизация 3%-ной взвеси форма-линизированных эритроцитов. Для этого подготовленную взвесь эритроцитов трижды отмывали буфером с рН 7,2, добавляли рабочий раствор танина (1:20000), помещали в термостат на магнитную мешалку при 370С на 20 мин, затем трижды отмывали центрифугированием (1500 об/мин 10 мин) буфером с рН 7,2. Консервировали нейтральным формалином
до 1%-ной в конечной концентрации. Через 24 ч тани-зированные эритроциты проверяли на самоагглютинацию (танизированные эритроциты + 0,85% раствором хлористого натрия).
Третий этап - сенсибилизация 3%-ной взвеси танизированных эритроцитов. В качестве сенситина использовали полисахарид из вакцинного штамма 55 возбудителя сибирской язвы, полученный путем культивирования его на мясо-пептонном агаре в матровых колбах. Выросшую культуру с агара смывали 0,85% раствором хлористого натрия. Культуру инактиви-ровали автоклавированием, фильтровали в горячем виде через бумажный фильтр. Фильтрат помещали в стерильный диализный мешочек и оставляли в холодильнике (в висячем положении), концентрировали до й части первоначального объема.
Полученный антиген добавляли к 3% взвеси тани-зированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе с рН 6,4 и сенсибилизировали с добавлением глютарового альдегида до 0,2% к конечной концентрации в течение двух часов на магнитной мешалке в термостате при температуре 370С. По истечении указанной экспозиции взвесь эритроцитов с антигеном центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 минут. Осадок трижды отмывали фосфатно-буферным раствором рН 7,2, готовили 3% взвесь эритроцитов. Полученный эри-троцитарный сибиреязвенный антиген консервировали формалином до 1% к конечной концентрации.
Изучение специфической активности эритроци-тарного сибиреязвенного антигена проводили в реакции непрямой гемагглютинации с позитивной сибиреязвенной, негативной сыворотками крови кроликов; на самоагглютинацию ставили контроль антигена с 0,85% раствором хлористого натрия.
Результаты исследований. Проведена работа по изготовлению эритроцитарного сибиреязвенного антигена с применением трехэтапного технологического процесса. В результате первых двух получены эритроциты, проверенные на самоагглютинацию, которая дала отрицательный результат. Следовательно, формалини-зированные и танизированные эритроциты были стабильны, что позволило использовать их для сенсибилизации сибиреязвенным антигеном (третий этап).
Результаты исследований эритроцитарного сибиреязвенного антигена на специфическую активность в РНГА с негативной, позитивной кроличьими сыворотками, а также в реакции на самоагглютинацию, приведены в таблице.
Таблица
Контроль специфической активности и самоагглютинации эритроцитарного сибиреязвенного антигена
Антиген Сыворотки крови Титр антител
Эритроцитарный сибиреязвенный антиген Позитивная сибиреязвенная 1:4096
Негативная отр.
Контроль на самоагглютинацию отр.
VETERINARY MICROBIOLOGY, VIROLOGY AND EPIZOOTOLOGY
Анализ таблицы показал, что специфическая язвенный антиген со специфической активностью в
активность эритроцитарного сибиреязвенного ан- РНГА 1:4096, который испытан на сыворотках кро-
тигена с позитивной сывороткой в РНГА составила ви животных, вакцинированных против сибирской
1:4096 при отрицательном результате с негативной язвы, позволяющий контролировать иммунный фон
и контроля на самоагглютинацию. и своевременно организовывать профилактические
Заключение. Получен эритроцитарный сибире- мероприятия.
Литература
1. Бургасов, П.Н. Метод оценки противосибиреязвенного иммунитета по привентивным свойствам сыворотки / П.Н.Бургасов, Г.И.Рожков // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1972. - № 6. - С. 10-15.
2. Борисович, Ю.Ф. Ветеринарные препараты / Ю.Ф.Борисович, Л.В.Кириллов; под ред. Д.Ф.Осидзе. -М.: Колос, 1981. - С. 49.
3. Галиуллин, А.К. Оценка сибиреязвенного иммунитета у животных через разные сроки после вакцинации / А.К.Галиуллин, А.А.Файзуллин, Д.А.Адиятуллина // Ветеринария. - 1994. - № 8. - С. 27-28.
4. Сибирская язва / Н.Г.Ипатенко [и др.]; под ред. Н.Г.Ипатенко. - М.: Колос, 1996. - 336 с.
5. Сибирская язва сельскохозяйственных животных / Н.Г.Ипатенко, В.А.Седов, В.С.Зелепукин, В.Н.Гущин. -М.: Агропромиздат, 1987. - 256 с.
6. Каральник, Б.В. Эритроцитарные диагностикумы / Б.В.Каральник. - М.: Медицина, 1976. - 164 с.
7. Колесов, С.Г. Сибирская язва / С.Г.Колесов. - М.: Колос, 1976. - 288 с.
OBTAINING ERYTHROCYTE ANTHRAX ANTIGEN
Ivanova S.V. - Candidate of Biological Sciences; Melnikova L.A. - Candidate of Veterinary Sciences;
Makaev Kh.N. - Doctor of Veterinary Sciences, professor; RodionovA.P. - postgraduate student.
Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety, Kazan (e-mail: [email protected]).
Anthrax is a particularly dangerous infectious disease which refers to a group of zooanthroponosis, manifested massively or sporadically in various regions of the Russian Federation. One of the reasons for the occurrence of human and animals anthrax cases is human activity connected with ground works, construction of residential objects and roads, laying of pipelines and other works, herding animals and agricultural activities near anthrax graves ignoring the epizootic situation and lack of coordination with veterinary and sanitary services of regions. At present, to ensure the welfare for this disease, all animals without exception are vaccinated that reduces risk of disease occurrence but does not eliminate the ongoing threat of new outbreaks of anthrax. Additional sources of the disease in animals are omitted at vaccination animals, lack of tension of induced antianthrax immunity when violating keeping and transportation of the vaccine. Therefore, an important element to prevent from the disease and its spread among animals is the control of tension of postvaccinal immunity. Obtaining erythrocyte anthrax antigen includes 3 stages:1) getting blood, formalinization of red blood cells, determination of the residual mass and preparation of 3% suspension; 2) tanization of 3% suspension of formalinized erythrocytes; 3) sensibilization of 3% suspension of formalinized erythrocytes by polysaccharide complex of strain 55 of anthrax pathogen. The obtained erythrocyte anthrax antigen is active, specific, gives no self-agglutination.
KEY WORDS: anthrax, antigen, formalinization, tanization, sensibilization, erythrocytes.
References
1. Burgasov, P.N. Metod ocenki protivosibireyazvennogo immuniteta po preventivnym svoystvam syvorotki [Method for evaluation of anthrax immunity according to the preventive serum properties] / P.N.Burgasov, G.I.Rozhkov // Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii, immunologii. - 1972. - № 6. - P. 10-15.
2. Borisovich, Yu.F. Veterinarnye preparaty [Veterinary preparations] / Yu.F.Borisovich, L.V.Kirillov; pod red. D.F.Osidze. - M.:Kolos, 1981. - P.49.
3. Galiullin, A.K. Ocenka sibireyazvennogo immuniteta u zhivotnykh cherez raznye sroki vakcinacii [Evaluation of anthrax immunity in animals in various terms after vaccination] / A.K.Galiullin, A.A.Fayzullin, D.A.Adiyatullina // Veterinariya. - 1994. - № 8. - P. 27-28.
4. Sibirscaya yazva [Anthrax] / N.G.Ipatenko [et al.]; pod red. N.G.Ipatenko. - M.: Kolos, 1996. - 336 p.
5. Sybirskaya yazva selskokhozyaystvennykh zhivotnykh [Anthrax of farm animals] / N.G.Ipatenko, V.A.Sedov, V.S.Zelepukin, V.N.Guschin. - M.: Agropromizdat, 1987. - 256 p.
6. Karalnik, B.V.Eritrocitarnye diagnostikumy [Erythrocyte diagnosticums] / B.V.Karalnik. - M.: Medicina, 1976. - 164 p.
7. Kolesov, S.G. Sybirskaya yazva [Anthrax] / S.G.Kolesov. - M.: Kolos, 1976. - 288 p.
УДК: 619:616.98:578.828.11
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В РЕСПУБЛИКЕ ДАГЕСТАН
А.Р.Мустафаев - кандидат ветеринарных наук, ст. н.с.
ФГБНУ«Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт», г.Махачкала (367000, г.Махачкала, Дахадаева, 88, тел. +7(8722) 67-94-65, e-mail: [email protected]).
Изучена степень распространения вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) в сравнительном аспекте по годам (с 2009 по 1-полугодие 2018 гг.) в республике Дагестан. По данным республиканской ветеринарной лаборатории уровень инфицированности скота лейкозом варьирует от 2,9% в 2012 г. до 23% в 2010 г., а на первое полугодие 2018 года этот показатель составил 3,7%. Такие колебания показателей инфицированности КРС по годам зависели от количества исследованных животных, уровня охвата поголовья, зональной поясности республики, возраста животных и от статуса хозяйства. Проведенные нами исследования показали, что высокий уровень энзоотического лейкоза крупного рогатого скота получил распространение в общественном скоте, находящемся на равнинной плоскости. В первом полугодии 2018 года серологическим методом было исследовано 60216 голов крупного рогатого скота, из которых 2212 (3,7%) проб сыворотки крови оказались положительными. По гематологии было подвергнуто исследованию 345 животных, из которых 72 (20,9%) были с высоким перси-стентным лейкоцитозом. Высокий уровень инфицированности выявлен в следующих районах и городах: Лакском - 35,8%, Гунибском - 29,6%, Карабудахкентском - 15,3%, Кумторкалинском - 14,42%, Кизилюртовском - 10,4%, Каякентском - 9,5%, Левашинском - 8,1%, Бабаюртовском - 39,1% и Шамильском - 9,4%, а также в Махачкале - 13,6% и Каспийске - 8%. В других районах и городах республики этот показатель колеблется от 0,07% до 7,2%. Свободными от ВЛКРС остаются следующие районы: Агульский, Акушинский, Курахский, Цунтинский, Хунзахский, Чародинский, а также г. Ю. Сухокумск от числа исследованных животных.
КЛюЧЕВЫЕ СЛОВА: энзоотический лейкоз крупного рогатого скота, инфицированность, серология, гематология, эпизоотология.
DOI: 10.33632/1998-698X.2019-2-25-30
Общеизвестно то, что заболевание лейкозом крупного рогатого скота вызывает вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) или Bovine leukemia virus (BLV) [1-10]. Распространение ВЛКРС происходит путем передачи от одного животного к другому В-лимфоцитов, содержащихся в жидкости (крови, слюне, сперме и т.д.). Зараженное ВЛКРС животное до конца жизни остается вирусоносителем и является резервуаром и разносчиком данного вируса в разных стадиях заболевания. ВЛКРС или энзоотический лейкоз крупного рогатого скота (ЭЛКРС) имеет определенную приуроченность к месту обитания животных. Это связанно с природными условиями, что создает определенную «энзоотию» инфекции. Однако, ВЛКРС имеет широкое распространение как в Республике Дагестан, так и во всех субъектах Российской Федерации, создавая эпизоотию заболевания лейкоза крупного рогатого скота. Высоким процентом ин-фицированности ВЛКРС отмечены такие субъекты как Рязанская область (30,4%), Хабаровский край (26,0%), Приморский край (19,9%) и т.д. [2]. Напряженная обстановка по лейкозу крупного рогатого скота также сохраняется и в Республике Дагестан [3-4]. В свете вы-
шеизложенного была поставлена цель исследования: провести сравнительный анализ распространения ВЛКРС по годам на территории Республики Дагестан.
Материалы и методы. Материалом для серологического и гематологического исследования ВЛКРС служили взятые пробы сыворотки (нативной) крови крупного рогатого скота, в различных хозяйствах, от разных форм собственности, а также были обработаны отчетные данные Республиканской ветеринарной лаборатории (РВЛ) за 2009 - 1-полугодие 2018 гг.
В лаборатории все диагностические исследования животных на ВЛКРС, а также эпизоотические исследования проводились соответственно «Методическим указаниям по диагностике лейкоза крупного рогатого скота» (2000), и «Методическим рекомендациям по эпизоотологическому исследованию при лейкозе крупного рогатого скота» (2001). Гематологические исследования проводились путем подсчета лейкоцитов в камере Горяева [5, 6, 7].
Результаты исследований. С целью сравнительного анализа распространения ВЛКРС на территории республики, а также изучения эпизоотической обстановки были сопоставлены серологические и
