CC BY
74
ГЕНЕТИКА РАСТЕНИЙ
УДК 575.113:582.542.1
А. В. Ловцюс, Т. В. Долматович, Е. И. Михайлова,
С. В. Малышев, А. В. Войлоков, С. П. Соснихина
ПОЛУЧЕНИЕ ДВОЙНЫХ МУТАНТОВ
ПО СИНАПТИЧЕСКИМ ГЕНАМ SY1 И SY9 У РЖИ
И ИХ ИЗУЧЕНИЕ МЕТОДАМИ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ЦИТОГЕНЕТИКИ*
Введение
Мейоз является ключевым событием жизненного цикла всех эукариотических организмов, размножающихся половым путем и инициирует переход от диплоидной к гаплоидной фазе развития. Редупликация числа хромосом в мейозе определяется особым типом сегрегации хромосом, которая выражается в том, что в первом делении к полюсам расходятся гомологичные хромосомы, а во втором — хроматиды. Такое расхождение в первом делении мейоза зависит от взаимодействия гомологичных хромосом, что проявляется в их попарном объединении и осуществлении гомологичной рекомбинации. Объединение гомологов в биваленты в профазе I происходит поэтапно: поиск гомологов, грубое их выравнивание, спаривание, которое достигает кульминации при синапсисе (образовании синаптонемного комплекса — белковой структуры, объединяющей гомологичные хромосомы). После деградации синаптонемного комплекса (СК), синапсис завершается и в диплотене выявляются хиазмы (результат кроссинговера), которые, наряду с когезией сестринских хроматид, удерживают гомологов в биваленте до наступления анафазы I (AI) [9, 13, 16, 21-23]. Образование СК начинается в лептотене при формировании осевых элементов (ОЭ) и установления хромосомной структуры. В зиготене гомологичные ОЭ, которые называются уже латеральными элементами (ЛЭ), объединяются благодаря белкам центрального пространства СК и в пахитене образуется зрелый СК, который связывает гомологичные хромосомы вдоль всей их длины.
У большинства организмов, включая растения, рекомбинация инициируется в лептотене с образования двойных разрывов ДНК (ДРД) благодаря действию белка Spoil. Разрывы процессируются нуклеазами с образованием однонитевых 37 концов. Эти 37 нитевые «хвосты» взаимодействуют с белками Rad51 и Dmcl (гомологами бактериального белка RecA), образуя спиральный нуклеопротеиновый филамент. Этот филамент проникает в интактный дуплекс и ищет гомологичные последовательности.
* Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проекты №04—04—81006, №06-04-48419, 0904-00636), Фонда Leverhulm Trust Великобритании, БРФФИ (проект Б04Р-106), программы «Научные школы» и программы Президиума РАН «Биоразнообразие и динамика генофондов» (проект №06-11П-II-3.1).
© А. В. Ловцюс, Т. В. Долматович, Е. И. Михайлова, С. В. Малышев, А. В. Войлоков, С. П. Со-снихина, 2009
В случае успеха такого поиска образуется гетеродуплекс и осуществляется нитевой обмен. Образование ДРД происходит до образования зрелого СК, а некоторые события созревания кроссоверов осуществляются во время синапсиса, в контексте СК [6, 9, 14,
20, 21]. Инициация образования СК совпадает с нитевой инвазией и началом нитевых обменов [9, 23]. Таким образом, синапсис и рекомбинация являются взаимосвязанными событиями, что отмечается и при изучении фенотипов мей-мутантов с нарушением обоих процессов. Нарушение взаимодействия гомологов на любом этапе ведет к аномальной сегрегации хромосом и в конечном итоге к стерильности. У большинства организмов синапсис хромосом происходит при сборке СК, функция которого до сих пор не ясна. Недавнее развитие методов протеомики создало новые возможности в анализе си-напсиса и рекомбинации, особенно у видов с большими несеквенированными геномами. Эксперименты по иммуноцитолокализации известных белков позволяют тестировать функциональные ортологи.
Изучение регуляции и механизмов мейоза у ржи основывается на оригинальной коллекции спонтанных мейотических мутантов лаборатории генетики растений БиНИИ СПбГУ (Петергофская коллекция) [4, 5, 18, 19]. На базе этой коллекции создана и совершенствуется модель для исследования гомологичного синапсиса мейотических хромосом. Генетический анализ направлен на выяснение закономерностей наследования, межгенных и межаллельных взаимодействий мейотических генов и их хромосомной локализации. Проявление мутантных генов изучают на различных стадиях мейотическо-го цикла методами молекулярной цитогенетики для выявления дефектов, вызываемых мутантными аллелями.
Проведение генетического и молекулярно-биологического анализа асинаптических мутаций 8/1 и 8/9 осложняется тем, что в гомозиготном состоянии они приводят к полной стерильности. Картирование этих мутаций позволило повысить эффективность генанализа, так как полное сцепление и той, и другой мутации с молекулярными маркерами SSR или микросателлитами, позволяет определять гетерозиготы по синаптической мутации в расщепляющемся потомстве как в Fl, так и в F2 до начала мейоза. Таким образом, без проведения трудоемкого анализа по определению цитологического фенотипа можно подобрать гетерозиготы по обеим мутациям, провести скрещивания, получить гибридное потомство, в котором можно выбрать растения гомозиготные по каждой из мутаций, а также двойные мутанты, и провести на свежезафиксированном материале эксперименты по молекулярной цитогенетике.
В этой работе приведены данные по анализу двух асинаптических мутаций у ржи — 8/1 и 8/9, а также двойных мутантов 8у18у9, полученных с целью изучения проявления мутантных аллелей на разных стадиях мейотического цикла, для выявления самых первых дефектов как в поведении хромосом, так и в ядерной локализации мейозоспеци-фичных белков, выяснения последовательности включения мутантных генов в события мейоза.
Материалы и методы исследования
Растительный материал и анализ мейоза. Линии, несущие асинаптические мутации 8/1 и 8/9, первоначально были выделены из сорнополевой ржи Закавказья и сортовой популяции Вятка соответственно, [4, 18] и поддерживаются в виде инбред-ных популяций — потомств от самоопыления гетерозигот по мей-мутациям. Гибридные популяции F2, состоящие из 129 и 122 растений соответственно, были получены от скрещивания индивидуальных растений 8/ 1/+ и 8/9/+ с автофертильной инбредной линией Л6 (изолирована из сорта Steel) [2, 3].
Анализ мейоза. Тестирование фенотипов по характеристикам мейоза вели только по цитологическим показателям, для чего колосья с каждого растения фиксировали в смеси Ньюкомера и исследовали метафазу I мейоза на давленых препаратах, окрашенных 2%-ным ацетокармином. С этих же растений были взяты листья для изозимного и микросателлитного анализа.
Микросателлитный анализ. Для выявления мутантных генотипов была использована выборка микросателлитных маркеров, содержащая геномные SSR маркеры ржи (Xscm), EST-SSR маркеры ржи (Xscm, Xrems) и геномные SSR маркеры пшеницы (Xgwm) [2, 3]. Полимеразную цепную реакцию выполняли по методике, описанной Röder и соавторами (Xscm и Xgwm маркеры) или Khlestkina (Xrems маркеры) (см. [2, 3 и ссылки]. Электрофорез проводили в 6%-ном денатурирующем полиакриламидном геле на автоматическом лазерном флуоресцентном секвенаторе ALFex-press II (Amersham-Pharmacia-Biotech). Размеры фрагментов вычисляли с использованием программы Fragment Analyser 1.02 (Amersham-Pharmacia-Biotech) путем сравнения с внутренними стандартами известного размера.
Иммуноцитохимическую детекцию белка Asyl проводили в соответствии с ранее описанными процедурами [12].
Результаты исследования и их обсуждение
Мутанты 8у1 и 8у9 относятся к классу асинаптических. На рис. 1 представлены метафаза I (МІ) у растений с нормальным мейозом (рис. 1, а), а также у мутантов 8у1 (рис. 1, б) и эу9 (рис. 1, в). У мутанта 8у1 образуются только осевые элементы, а зрелые СК не выявляются ни в зиготене, ни в пахитене [18]. В диакинезе и метафазе I (МІ) почти все хромосомы находятся в унивалентном состоянии, до 97% мейоцитов в МІ содержат только униваленты (табл. 1). Среди 2882 мейоцитов только в отдельных клетках встречаются редкие биваленты. Среднее число хиазм на клетку составляет 0,001 (табл. 2). У мутанта эу9 нарушено образование СК, а именно обнаружены лишь
Рис. 1. Микроспороциты ржи дикого типа (а) и мутантных растений Бу1 (б) и Бу9 (в);
а — клетка с нормальной М1 — дикий тип. Видны два кольцевых, закрытых, бивалента с двумя хиазмами и пять палочковидных (открытых) бивалентов с одной хиазмой на пару гомологичных хромосом; б —14 унивалентов, неориентированных в веретене первого деления; в — 5 бивалентов и 4 унивалента.
Таблица 1. Распределение мейоцитов в зависимости от числа пар гомологов у асинаптических мутантов бу1 и бу9 и у растений с нормальным мейозом
Название формы Число растений Число мейоцитов Среднее число бивалентов на мейоцит Доля мейоцитов (%) с бивалентами Вероятность (Р) образования бивалентов
7 6 5 4 3 2 1 0
Нормальные растения 30 888 6,86 774 (87,2) 101 (11,4) 13 (1,4) — — — — 0,98
Мутанты вуї 61 2882 0,04 — — — — — 20 72 2789 0,05
Мутанты ву9 16 1026 0,78 30 (2,9) 14 (1,4) 12 (1,2) 16 (1,6) 24 (2,3) 62 (6,0) 189 (18,4) 679 (66,2) 0,11
Таблица 2. Распределение пар гомологов в зависимости от числа хиазм в метафазе I в норме и у асинаптических мутантов бу1 и бу9
Название формы Число растений Число мейоцитов Среднее число унивалентов на мейоцит Доля гомологов с числом хиазм Среднее число хиазм на на бивалент и клетку
0 1 2
Нормальные растения 52 1377 0,29 199 (2Д) 1989 (20,6) 7451 (77,3) 1,75
вуї 56 1943 13,89 13583 (99,9) 18 (ОД) 0 0,001
яу9 22 720 10,90 4086 (81,1) 834 (16,5) 120 (2,4) 0,21
осевые элементы [4], а в MI наблюдается варьирующее число бивалентов (см. табл. 1). Последнее позволяет отнести этот мутант к частичным асинаптикам. В 66% клеток у 8у9 выявлены только униваленты, среднее число хиазм в MI соответствует 0,21, а среднее число бивалентов 0,78. Таким образом, у обоих мутантов по сравнению с нормой резко нарушено образование бивалентов (см. табл. 1), а вероятность их образования очень низка, и отсутствует СК. Последующие нарушения в мейозе определяются от-
сутствием синапсиса, мутанты полностью стерильны. Мутации ву1 и ву9 неаллельны и наследуются независимо [4, 5, 19].
Получение двойных мутантов
Оба гена ву1 и ву9 были картированы в прицентромерных районах длинных плечей хромосом 7И, и 2И, соответственно, с использованием изозимных и микросателлитных маркеров. Ген ву9 косегрегировал с двумя SSR маркерами Хзет43 и Хди>т132. Другой асинаптический ген ву1 был картирован в интервале между изозимным локусом ЛаЬ2 и двумя косегрегирующими локусами Хтетз1188 и Хтетз1135 [2, 3]. Установление абсолютного в случае ву1 и ву9 сцепления с молекулярными маркерами дает возможность однозначно выявлять в расщеплении F2 все генотипы, в том числе и двойные мутанты.
Расщепление в семье 118/3, полученной от самоопыления двойной гетерозиготы, по SSR маркерам Хтетз1135 (7R) и Хди>т132 (2R), абсолютно сцепленым с генами Бу1 и Бу9 соответственно, позволило определить генотипы по синаптическим мутациям ву1 и ву9 в Р2. Для выявления двойных мутантов было проанализировано 50 растений из потомства 118/3 (табл. 3). «Н» в таблице — гетерозигота по одному из генов. Выявлено два двойных мутанта. Цитологический анализ временных ацетокарминовых препаратов подтвердил цитологические фенотипы одиночных мутантов Бу1 и 8у9. Двойные мутанты так же, как и одиночные, имели до 14 унивалентов в М1.
Таблица 3. Расщепление по мутациям sy1 и sy9 в семье 118/3 (F2)
Генотип Упрощенная запись генотипа SylSyl Sy9Sy9 syl+ sy9+ SylSyl Sy9sy9 syl+ H SylSyl sy9sy9 syl+ sy9 Sylsyl Sy9Sy9 H sy9+ Sylsyl Sy9sy9 H H Sylsyl sy9sy9 H sy9 sylsyl Sy9Sy9 syl sy9+ sylsyl Sy9sy9 syl H sylsyl sy9sy9 syl sy9
Выявленное расщепление 5 5 3 8 19 4 0 4 2
Теоретически ожидаемое расщепление 1 2 1 2 4 2 1 2 1
Примечание. Н — гетерозиготное состояние по генам SY1 или SY9.
Ранее проведенные нами исследования проявления мутантных аллелей обоих генов на ранних стадиях методом FISH (fluorescence in situ hybridisation) с использованием субтеломерных и перицентромерных последовательностей ДНК выявило нарушения расположения в ядре микроспороцитов указанных районов хромосом у мутанта syl, в отличие от мутанта sy9 и нормальных по мейозу растений. Таким образом, по-видимому, мутант syl дефектен уже на ранних стадиях формирования «букета» [11].
Помимо нарушения кластеризации теломеров, асинапсис может быть следствием нарушения узнавания гомологов, нарушения пресинаптического спаривания, рекомбинации и дефекта в белках, входящих в СК или ассоциированных с ними [9, 13, 17]. Для иммуноцитохимической локализации мы использовали белок Asy1, ассоциированный с ОЭ/ЛЭ [7, 8].
Иммуноцитохимическая локализация белка Asy1 арабидопсиса
Белок Asyl арабидопсиса является ортологом белка Hopl S.cerevisiae (28% идентичности, 52% сходства), входящего в состав ОЭ и, следовательно, СК. Мутанты hopl и asyl характеризуются нарушениями синапсиса и снижением гомологичной рекомбинации [7-9, 17], как и мутант sy9 у ржи. В отличие от белка Hopl, Asyl взаимодействует с хроматином, ассоциированным с ОЭ, а не входит в состав ОЭ [7]. Предполагают, что белок Hopl дрожжей вместе с другими белками (Redl, Mekl) участвует в рекомбинации на стадиях образования и процессинга ДРД и совместно с Dmcl способствует переключению репарации ДРД с межсестринской на межгомологичную [9, 23].
В данной работе были использованы антитела, выработанные к белку Asyl араби-допсиса, для детального анализа распределения белка Asyl на мейотических хромосомах в ядрах на стадии профаза I у растений ржи с нормальным мейозом и растений, мутантных по генам Sy1 и Sy9. Белок Asyl в лептотене выявляется как непрерывный сигнал в виде тонких нитей, или осей, вдоль хромосом (рис. 2, а) у растений дикого типа. Использование антител позволяет выявить присутствие его в неспаренных гомологах, увидеть вилки спаривания (рис. 2, г) и утолщения осей в зиготене (рис. 2, б). В пахитене оси Asyl полностью спарены (рис. 2, в). На стадии разборки СК—дипло-тене— сигнал выявляется в виде спиральных осей [l2, l5].
У асинаптического мутанта syl белок Asyl также выявляется в виде непрерывных осей в лептотене, которые, однако, остаются неспаренными на последующих стадиях (рис. 2, д, ж). У мутанта sy9 в 90% клеток белок Asyl на хромосомах отсутствует. В остальной части клеток в лептотене сигнал выявляется в виде дискретных фокусов. В зиготене (рис. 2, з) наблюдаются отдельные фокусы, а в пахитене (рис. 2, е) —короткие отрезки, при этом в ядрышке наблюдается диффузное свечение. Показанные различия выявляемых сигналов Asyl у мутантов syl и sy9 позволили изучить характер взаимодействия двух генов на основании иммунцитохимического фенотипа двойных мутантов. Если sy1 эпистатирует над sy9 (sy1 >sy9), т. е. действует в мейозе раньше, то двойной мутант должен иметь фенотип syl. Если же sy9 экспрессируется в мейозе раньше sy1, то двойной мутант будет иметь фенотип sy9 по характеру иммуноокрашивания белка Asyl. У мутантов sy9 и двойных мутантов были выявлены очень короткие фрагменты осей (рис. 2, з, и) в сочетании с отдельными точечными пятнами свечения (фокусами), что делало их фенотипы по этому признаку неразличимыми.
Таким образом, нам удалось выявить белок, гомологичный белку Asyl арабидопсиса, который у последнего ассоциирован с СК.Об этом свидетельствует тот факт, что антитела к Asyl арабидопсиса узнают соответствующий белок ржи. Кроме того, нами обнаружен мутант ржи, у которого асинапсис сопряжен с дефектами в рекрутировании этого белка на осях мейотических хромосом. Обнаружение ортолога соответствующего белка у ржи с помощью антител к белку Asyl арабидопсиса говорит о том, что, по всей видимости, выявленный нами белок ржи должен иметь coiled-coil домен (район суперконденсации), т. е. обладать определенной структурой, которая, как известно, характеризует белки СК, и отличаться от своих ортологов по общим характеристикам аминокислотных последовательностей, которые у этих белков проявляются в очень низких показателях сходства и идентичности [l, 7-9, l3, l7]. Показано, что ген ASY1 ара-бидопсиса имеет ограниченное сходство нуклеотидной последовательности с таковой гена HOP1 S. cerevisiae, который, в свою очередь, имеет частичное сходство с гомологичным ему геном HIM3 нематоды. Более высокая степень сходства обнаружена между генами HOP1 S. cerevisiae и HOP1 Kluyveromyces lactis, а также между генами ASY1
Рис. 2. Иммуноцитохимическая локализация белка Asy1 в ядрах микроспороцитов у растений дикого типа (а-г, ж), у асинаптических мутантов, sy1 (д, ж), sy9 (е, з), и у двойного мутанта sy1sy9 (и).
Компьютерные изображения (а-д ) получены с помощью конфокального сканирующего микроскопа, (є-u) —флуоресцентного микроскопа (см. также пояснения в тексте).
арабидопсиса и Brassica oleraceae (Bo ASY1 ) [7]. Интересно, что белки Hopl и Him3 считают компонентами ОЭ/ЛЭ. Белок Asyl, как показано в результате ультраструктурного (ТЭМ) исследования с использованием мечения иммунозолотом у капусты, локализуется в хроматине, ассоциированном с ОЭ/ЛЭ. Иными словами, белок Asyl является скорее ось-ассоциированным белком, чем компонентом осей хромосом [7, 17]. У
мутанта asy1 не наблюдается видимых дефектов осевых элементов и морфогенез осей не зависит от белка Asy1, хотя на ультраструктурном уровне в осях выявлена некоторая прерывистость [17]. Таким образом, в отсутствие Asy1 оси могут не созревать в непрерывную структуру, как у дикого типа. Предполагаем, что снижение выявляемо-сти белка Asy1 у мутанта sy9 связано с его асинаптическим фенотипом. Как и у asy1, у sy9 наблюдается резкое снижение рекомбинации. Сравнение двух мутантов показывает, что у asy1 выявляется в среднем 1,57 бивалента на клетку, а у sy9 — 0,78. Основываясь на данных литературы [9, 23], можно также предположить, что дефект у мутанта sy9 связан с другим белком типа Red1, от присутствия которого на хромосомах дрожжей зависит загрузка Hop1 и который входит в состав ОЭ. Однако последовательностей, соответствующих гену RED1, в геноме арабидопсиса пока не найдено [7]. Полагают, что белок Asy1 арабидопсиса может выполнять функции белков Hop1 и Red1 дрожжей, которые у последнего образуют функциональный комплекс. Здесь интересно заметить, что в геноме арабидопсиса обнаружен гомологичный ASY1 ген ASY2, функция которого неизвестна [8]. Фенотип двойного мутанта sy1sy9 по виду осей, образованных Asy1, идентичен таковому у одиночного мутанта sy9, что позволяет подтвердить ранее предсказанный эпистаз гена SY9 над SY1 [4], т. е. более раннее включение в события мейоза гена SY9 по сравнению с геном SY1. Рекомбиногенные белки Rad51/Dmc1 образуют поляризованные фокусы в профазе I, колокализуясь с кластеризованными теломерами, у растений дикого типа и у мутанта sy9, однако отсутствуют у sy1 [10]. Сопоставление фенотипических портретов мутантов sy1 и sy9 позволяет предполагать, что события синапсиса у ржи являются определяющими для завершения событий рекомбинации.
Заключение
Изучение проявления мутантных аллелей мей-генов на ранних стадиях мейотиче-ского цикла методом FISH и изучение особенностей иммуноцитолокализации мейоти-ческих белков с целью составления «протеомных портретов» мейотических мутантов позволяет выявить нарушения в поведении хромосом и спектр дефектных белков. Мы руководствуемся идеей, что выявление дефектных мейотических белков у мей-мутан-тов позволяет сделать предположение об аномалиях в функции этих белков и об ассоциированности изучаемых мутаций с генами, кодирующими эти белки. Следующим этапом является клонирование генов с использованием праймеров гомологичных генов у других организмов. Конечно на этом пути успех достигается не всегда быстро, так как аномалии иммунолокализации какого-либо белка не всегда связаны с дефектами именно этого белка (гена), а, возможно, с другими мейотическими белками, с которыми он работает совместно или от которых зависит его загрузка в хромосоме. Это говорит о том, что необходимо исследовать иммунолокализацию нескольких белков, используя информацию об их взаимодействии у других объектов. Такая тактика проведения исследований особенно оправдана при изучении практически значимых видов с большими геномами, низкой плотностью генетических карт, низким процентом кодирующих последовательностей по отношению ко всему геному и отсутствием данных по полным геномным последовательностям. Локализация мей-генов на хромосомах, которая осуществляется нами в настоящее время, и установление сцепления этих генов с молекулярными маркерами позволит непосредственно выделить и секвенировать последовательности именно этих генов и выявить их молекулярную основу.
Авторы выражают благодарность Е. Р. Гагинской и сотрудникам центра коллективного пользования «Хромас» СПбГУ за квалифицированную помощь при работе на конфокальном микроскопе Leica TCS SP5.
Литература
1. Богданов Ю. Ф. Изменчивость и эволюция мейоза // Генетика. 2003. Т. 39, №4. С. 453473.
2. Войлоков А. В., Цветкова Н .В., Ловцюс А. В., Долматович Т. В., Малышев С. В., Соснихина С. П. Использование генетических маркеров в изучении мейоза у ржи // Вестн. С.-Петерб. ун-та. Сер. 3. 2005. Т. 4, №1. C. 26-33.
3. Малышев С. В., Долматович Т. В., Войлоков А. В., Соснихина С. П., Цветкова Н.В., Ловцюс А. В., Картель Н. А. Молекулярно-генетическое картирование асинаптических генов syl и sy9 ржи (Secale cereale L.) с использованием SSR и изозимных маркеров // Генетика. 2009. Т. 45, №12. С. 1634-1640.
4. Соснихина С. П., Кириллова Г. А., Михайлова Е.И., Смирнов В. Г., Федотова Ю. С., Богданов Ю. Ф. Генетический контроль синапсиса у ржи Secale cereale L.: асинаптический ген sy9 // Генетика. 1998. Т. 34, №11. С. 1504-1512.
5. Соснихина С. П., Михайлова Е.И., Тихолиз О. А., Прияткина С.Н., Смирнов В. Г., Войлоков А. В., Федотова Ю. С., Коломиец О. Л., Богданов Ю. Ф. Генетическая коллекция мейотических мутантов ржи Secale cereale L. // Генетика. 2005. Т. 41, №10. C. 1310-1321.
6. Anderson L. K., Offenberg H. H., Verkuijlen W. M. H. C., Heyting C. RecA-like proteins are components of early meiotic nodules in lily// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. Vol. 94. P. 68686873.
7. Armstrong S. J., Caryl A. P., Jones G.H., Franklin F. Ch. H. Asy1, a protein required for meiotic chromosome synapsis localizes to axis-associated chromatin in Arabidopsis and Brassica // J. H. Cell Sci. 2002. Vol. 115, N 18. P. 3645-3655.
8. Caryl A. P., Armstrong S. J., Jones G. H., Franclin F. Ch. A homologue of yeast HOP1 gene is inactivated in the Arabidopsis meiotic mutant asy1 // Chromosoma. 2000. Vol. 109. P. 62-72.
9. Gerton J. L., Hawley R. S. Homologous chromosome interaction in meiosis: diversity amidst conservation // Nature. 2005. Vol. 6. P. 477-487.
10. Jenkins G. M., Mikhailova E. I., Langdon T., Tikholiz O. A., Sosnikhina S. P., Jones R. N. Strategies for the study of meiosis in rye // Plant Cytogenetics — A special volume of Cytogenetic and Genome Research (Guest Editors M. J. Puertas, T. Naranjo). 2005. Vol. 109. P. 221-227.
11. Mikhailova E.I., Sosnikhina S. P., Kirillova G.A., Tikholiz O.A., Smirnov V.G., Jones R.N., Jenkins G. Nuclear dispositions of subtelomeric and pericentromeric chromosomal domains during meiosis in asynaptic mutants of rye (Secale cereale L.) // J. Cell Sci. 2001. Vol. 114, N 10. P. 1875-1882.
12. Mikhailova E. I., Phillips D., Sosnikhina S. P., Lovtsyus A. V., Jones R. N., Jenkins G. Molecular assembly of meiotic proteins Asy1 and Zyp1 and pairing promiscuity in rye (Secale cereale L.) and its synaptic mutant sy10 // Genetics. 2006. Vol. 174. P. 1247-1258.
13. Page S. L. and Hawley R. S. The genetics and molecular biology of the synaptonemal complex // Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. 2004. Vol. 20. P. 525-558.
14. Pawlowsky W. P., Golubovskaya I. N., Cande W. Z. Altered nuclear distribution of recombination protein RAD51 in maize mutants suggests the involvement of RAD51 in meiotic homology recognition // Plant Cell. 2003. Vol. 15. P. 1807-1816.
15. Phillips D., Mikhailova E.I., Timofejeva L., Mitchell J.L., Osina O., Sosnikhina S. P., Jones R. N., Jenkins G. Dissecting meiosis of rye using translational proteomics // Annals of Botany. 2008. Vol. 101. P. 873-880.
16. Roeder G. S. Meiotic chromosomes: it takes two to tango // Genes and Dev. 1997. Vol. 11. P. 2600-2621.
17. Sanchez-Moran E., Santos L., Jones G.H., Franklin F. C.H. Asy1 mediates At DMC1-dependent interhomolog recombination during meiosis in Arabidopsis // Genes and Dev. 2007. Vol. 21. P. 2220-2233.
18. Sosnikhina S. P., Fedotova Yu. S., Smirnov V. G., Mikhailova E.I., Kolomiets O.L., Bogdanov Yu. F. Meiotic mutants of rye Secale cereale L. I. Synaptic mutant syl // Theor. Appl. Genet.1992. Vol. 84. P. 979-985.
19. Sosnikhina S. P., Mikhailova E.I., Tikholiz O.A., Priyatkina S.N., Smirnov V. G., Dada-shev S. Y., Kolomiets O. L., Bogdanov Y. F. Meiotic mutations in rye Secale cereale L. // Plant Cytogenetics — A special volume of Cytogenetic and Genome Research (Guest Editors M. J. Puertas, T. Naranjo). 2005. Vol. 109. P. 215-220.
20. Terasawa M., Shinohara A., Hotta J., Ogawa H., Ogawa T. Localization of RecA-like recombination proteins on chromosomes of the lily at various meiotic stages // Genes and Dev. 1995. Vol. 9. P. 925-934.
21. Zickler D. From early homologue recognition to synaptonemal complex formation // Chromosoma. 2006. Vol. 115. P. 158-174.
22. Zickler D., Kleckner N. The leptotene-zygotene transition of meiosis // Annu. Rev. Genet. 1998. Vol. 32. P. 619-697.
23. Zickler D., Kleckner N. Meiotic chromosomes: integrating structure and function // Annu. Rev. Genet. 1999. Vol. 33. P. 603-754.
Статья поступила в редакцию 31 июля 2009 г.
