CC BY
9
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
183
ПОЛУЧЕНИЕ 3D МОДЕЛИ КОЖИ ПУТЕМ СОВМЕСТНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ФИБРОБЛАСТОВ И КЕРАТИНОЦИТОВ
А.Ю. Полянская1, EP. Павлова1, 2, М.В. Волкова1 В.В. Бояринцев1, А.В. Трофименко1, Г.И. Фильков1, Д.В. Багров2, 3, Д.В. Клинов1 2, М.О. Дурыманов1
1 НИУ Московский физико-технический институт (национальный исследовательский университет), Долгопрудный, Россия
2 НИИ физико-химической медицины ФМБА ул. Малая Пироговская, Москва, Россия
3 МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: polyanskaya.ayu@phystech.edu
Ключевые слова: 3D модель кожи, фибробласты, кератино-циты, дифференцировка клеток, эпидермис.
Разработка 3D моделей кожи и исследование их свойств является актуальной задачей, поскольку на данный момент во многих странах запрещено тестирование косметических средств на животных, а также импорт и продажа косметики, содержащей ингредиенты, протестированные на животных [1, 2]. Эквиваленты кожи, полученные путем совместного культивирования фибробластов и кератиноцитов могут быть использованы для этих целей, также для тестирования лекарственных препаратов, изучения механизмов биологических процессов в коже [3].
Целью данной работы является получение 3D модели кожи путем совместного культивирования фибробластов и кератиноцитов, а также изучение дифференцировки кератиноцитов методом иммуногистохимии криосрезов.
Для получения 3D модели использовали первичные фибробласты и кератиноциты, которые были выделены из кожи новорожденных мышей возрастом 1 день. Результаты по идентификации клеток путем иммуноги-стохимии и проточной цитометрии показали, что чистота популяций составила более 90%.
Результаты иммуногистохимии образцов 3D моделей, которые были получены на 5 и 10 день культивирования на границе среда/воздух свидетельствуют о наличии в эквивалентах кожи маркеров, характерных для фибробластов (виментин), базальных кератиноцитов (цитокератин 5),кератиноцитов на начальных стадиях дифференцировки (цитокератин 10), а также терминально дифференцированных клеток эпидермиса (лорикрин). Наличие рогового слоя установлено уже на 5й день культивирования, что говорит о том, что кератиноциты в составе полнослойного эквивалента кожи в течение этого срока уже достигают терминального уровня дифференцировки. Полученная 3D модель обладает анатомической организацией схожей с нативной кожей мыши. В образцах, которые культивировали 10 дней на границе среда/воздух, по сравнению с эквивалентами, полученными после 5 дней культивирования, наблюдали увеличение рогового слоя, а также увеличение числа кератиноцитов, экспрессирующих цитокератин 10.
Литература:
1. Roshangan L, Soleimani Rad J, Kheirjou R et al. Wounds 2019. V. 31. P. 308-315.
2. Vivchanenko V, Wojcik M, Pnzekona A. Cells. 2020. V. 9(5), P. 1185.
3. Niehues H, Bouwstna J.A, El Ghalbzouni A et al. Exp Dermatol. 2018. V. 27(5). P. 501-511.
ВЛИЯНИЕ LPA И Y-27632 НА СРЕДНЮЮ СКОРОСТЬ МИГРАЦИИ КЛЕТОК FETMSC, НАХОДЯЩИХСЯ НА РАЗЛИЧНЫХ СТАДИЯХ РЕПЛИКАТИВНОГО СТАРЕНИЯ
А.В. Полянская, А.С. Мусорина, Г.Г. Полянская, Д.Е. Бобков
Институт Цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: polyanskaya.nastya18@gmail.com
Ключевые слова: мезенхимные стволовые клетки, актино-вый цитоскелет, репликативное старение, малые ГТФазы Rho, клеточная подвижность.
Оценка подвижности мезенхимных стволовых клеток (МСК) в процессе долговременного культивирования, сопровождающегося репликативным старением (РС), является важным шагом для их эффективного применения в регенеративной медицине. Малая ГТФаза RhoA регулирует организацию актинового цитоскелета, а следовательно, определяет характер подвижности немышечных клеток. Нижестоящим эффектором RhoA является ROCKI-киназа, которая способствует формированию стресс-фибрилл.
Целью работы было исследование роли RhoA в регуляции подвижности МСК человека, находящихся на разных стадиях РС. Было изучено влияние активатора RhoA —лизофосфатидной кислоты (LPA) и ингибитора ROCK1-киназы (Y-27632) на подвижность клеток в культуре.
Использовали клеточную линию FetMSC, выделенную из костного мозга эмбриона человека. Линия была получена из ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных» ИНЦ РАН. Для измерения скорости клеток на пассажах 12, 16, 20 и 26 анализировали треки клеточных движений, записанные в течение 24 ч с помощью системы прижизненной конфокальной микроскопии. Результаты показали отсутствие достоверных отличий средней скорости контрольных клеток на изученных пассажах.
На 12 пассаже средние скорости клеток под действием модуляторов были ниже и достоверно отличались от контроля (23,1 ± 5,1 рм/ч), а также различались между собой — наименьшая скорость была у клеток, которые находились под действием Y-27632 (12,04 ± 2,6 рм/ч). На 1 6 пассаже средняя скорость клеток во всех трех группах статистически не отличалась. На 20 пассаже достоверно снизилась только средняя скорость клеток под действием LPA. На 26 пассаже средняя скорость клеток, относительно контроля (20,8 ± 6,8 рм/ч) достоверно снизилась: 17,1 ± 6,8 рм/ч — под действием LPA, 18,15 ± 5,2 рм/ч — под действием Y-27632.
Результаты демонстрируют, что репликативное старение FetMSC сопровождается изменением чувствительности клеток к действию LPA и Y-27632.
ОЦЕНКА ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ, ЦИТОКИНО-ВОГО ПРОФИЛЯ И ГЕНОВ ПЛЮРИПОТЕНТ-НОСТИ В КЛЕТКАХ КОЛОНОСФЕР ПОСЛЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С ОПУХОЛЕВЫМИ И СТВОЛОВЫМИ ВЕЗИКУЛАМИ
А.С. Пономарев, З.Е. Гилазиева, А.А. Ризванов, В.В. Соловьева
НИЛ «OpenLab Гэнные и клеточные технологии», Казань, Россия
e-mail: l.ponomarev2013@gmail.com
Ключевые слова: колоносферы, мембранные везикулы, опухолевые клетки, мезенхимные стромальные клетки.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
