CC BY
14
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
в стерильных культуральных 12-луночных планшетах с добавлением 100 мкл Дюльбекко фосфатно-солевого раствора (DPBS) — спонтанная секреция, или 100 мкл различных индукторов: адреналина ((-) —Epinephrine) в конечной концентрации 0,01, 0,1 и 1 мкМ; норадре-налина ((-) —Norepinephrine) в конечной концентрации 0,001, 0,1 и 1мкМ; изопротеренола ((plus-minus) — Isoproterenol Hydrochloride) — 0,1 мкМ; селективного антагониста Р-адренорецепторов пропранолола (DL-Propranolol) — 1 мкМ, формил пептида (fMLP) — 10 мкМ. Все вещества получены из SIGMA-ALDRICH (Германия). При использовании нескольких веществ их вносили через 30 мин инкубации в следующей последовательности: fMLP-антагонист-агонист. Через 20 ч инкубации клетки осаждали центрифугированием, супернатант отбирали и замораживали (-20 °С) до проведения исследования. Концентрацию IL-ф в супер-натанте определяли методом ИФА с использованием коммерческих тест-наборов, согласно инструкции производителя (ООО «Цитокин», Россия). Чувствительность метода составляла для IL-ф — 6,25 пг/мл. Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 7 (StatSoftlnc., США). Центральные тенденции и дисперсии количественных признаков описывали медианой и интерквартильным интервалом (Qj-Q3). Сравнение групп по количественным признакам проводили с использованием непараметрического W-критерия Вилкоксона для выборок парных измерений. Наблюдаемые различия считались не случайными при P < 0,05. Установлено, что адреналин в дозе 0,1 мкМ в 2 раза стимулирует секрецию IL-1 в нейтрофи-лами здоровых доноров (34,10; 19,75-61,60 пг/мл/106кл. в сравнении с 15,1; 6,3-24,65 пг/мл/106кл. при спонтанной секреции, P = 0,012). Норадреналин и изопротере-нол не оказывают статистически значимого влияния. Выявлены тенденции к усилению продукции IL-ф ней-трофилами при совместном действии адреналина в дозе 1 мкМ и хемотаксического пептида fMLP (Р = 0,0679). Этот эффект лишь частично отменяется селективным антагонистом в-адренорецепторов пропранололом, что, наряду с отсутствием влияния изопротеренола, может свидетельствовать о в-адренонезависимом стимулирующем действии адреналина на секрецию IL-1 в нейтрофилами.
Работа поддержана РФФИ и Министерством образования и науки Краснодарского края, проект № 16-44-230391р_а.
ПОЛИМОРФИЗМ МОЛЕКУЛЫ Н2-А КЛАССА II ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ ОПРЕДЕЛЯЕТ ПРОТЕКТИВНЫЙ ОТВЕТ ХОЗЯИНА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ
Шепелькова Г.С., Майоров К.Б., Логунова Н.Н., Апт А.С.
ФГБНУ «Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза», Москва, Россия
Туберкулез (ТБ) — одна из самых распространенных и опасных инфекционных болезней в мире. Показано, что чувствительность к ТБ контролируется многими полиморфными генами. Как профессиональные антиген презентирующие клетки макрофаги экспрессируют на своей мембране молекулы класса II МНС. Ассоци-
ация чувствительности к ТБ с полиморфизмом MHC показана как у мыши, так и у человека. Ранее в нашей лаборатории был идентифицирован один из генов, контролирующий восприимчивость к ТБ — ген H2-Ab1, кодирующий бета-цепь классической молекулы МНС Класса II. Рекомбинантные линии мышей, выведенные в нашей лаборатории и различающиеся только по аллелям этого гена, проявляют различную чувствительность к инфекции. У мышей, несущих аллель от чувствительной родительской линии I/St (H2-Aj), развивается тяжелая патология легких с выраженным воспалением и продукцией большого количества воспалительных цитокинов, в отличие от резистентных к ТБ мышей несущих аллель Н2-АЬ. Однако роль полиморфизма Н2-А молекулы в развитии чувствительности/резистентности к ТБ до сих пор неясна. Неизвестно, зависит ли взаимодействие эффекторных Т лимфоцитов CD4 с инфицированными макрофагами от вариантов аллеля Н2-А.
Цель. Определение роли полиморфизма Н2-А в формировании протективного ответа хозяина при экспериментальной ТБ инфекции.
Материалы и методы. Макрофаги перитонеального экссудата полученные от линий мышей отличающихся по аллелям гена Н2-А: C57BL/6 (В6), несущие аллель Н2-АЬ, B6.I-9.3.19.8, несущие аллель H2-Aj и гибридов первого поколения F1(B6xB6.I-9.3.19.8) (F1), экспрессирующие оба аллеля гена Н2-А. Т-лимфоциты CD4 выделяли из суспензии спленоцитов мышей F1, инфицированных вирулентным штаммом M. tuberculosis, методом селекции в магнитном поле. Жизнеспособность микобактерий в смешенных культурах оценивали по избирательному включению последними 5,6-[3Н]-урацила. Поверхностный фенотип лимфоцитов определяли методом проточной цитофлуорометрии. Предрасположенность клеток к апоптозу смотрели по активности каспазы-3 и каспа-зы-7.
Результаты. Ранее в нашей лаборатории было показано, что активация бактериостатической функции макрофагов T-лимфоцитами CD4 зависит от молекулы МНС класса II. Для выявления роли Н2-А полиморфизма была использована модель активации инфицированных макрофагов с разными аллельными вариантами молекулы Н2-А иммунными Т-лимфоцитами CD4. Макрофаги перитонеального экссудата мышей линий В6, B6.I-9.3.19.8 и F1 культивировали в присутствии вирулентного штамма микобактерий с Т-лимфоцитами CD4 мышей F1. Через 72 часа культивирования клеток оценивали активацию макрофагов под действием Т-лимфоцитов по степени подавления роста микобак-терий в культурах, содержащих Т-лимфоциты, по сравнению с культурами не содержащими Т-лимфоциты. Т-лимфоциты CD4 усиливали способность В6 (H2-Ab) и F1(H2-AbAj) макрофагов ингибировать рост мико-бактерий и не влияли на бактериостатическую функцию макрофагов B6.I-9.3.19.8 (H2-Aj), то есть существует доминирование H2-Ab молекулы над молекулой H2-Aj при активации инфицированных макрофагов Т-клетками CD4.
Известно, что молекулы МНС класса II определяют не только презентацию антигенов при развитии адаптивного иммунного ответа, но и важны в селекции T-клеток CD4+. Определение количества Т-лимфоцитов в лимфо-идной ткани показало, что молекула H2-Aj плохо селектирует Т-клетки CD4+. Наличие единственной селектирующей молекулы класса II H2-Aj (линия 9.3.19.8) при-
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
водит к резкому дефициту клеток CD4+ в лимфоидной ткани, хотя экспрессия единственной молекулы другого аллеля, (H2-Ab у мышей В6) достаточна для поддержания стандартного соотношения CD4:CD8. Также установлено, что CD4 клетки мышей несущих аллель H2-Aj сильнее подвержены апоптозу.
Заключение. Показано преимущество аллеля Н2-АЬ при активации бактериостатической функции макрофагов иммунными Т-лимфоцитами CD4, а также влияние данного аллеля на селекцию Т-лимфоцитов CD4 и предрасположенность последних к апоптозу.
Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант № 15-04-02002).
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИЦИДНОГО ЭФФЕКТА СЕКРЕТОРНЫХ ПРОДУКТОВ НЕЙТРОФИЛОВ, ПРЕДВАРИТЕЛЬНО ПОДВЕРГШИХСЯ МОДЕЛИРОВАННОМУ НИЗКОИНТЕНСИВНОМУ ЭЛЕКТРОМАГНИТНОМУ ИЗЛУЧЕНИЮ, В ОТНОШЕНИИ LACTOBACILLUS PLANTARUM, BIFIDOBACTERIUM BIFIDUM, STAPHYLOCOCCUS AUREUS, ESCHERICHIA COLI
Шишкова Ю.С., Даровских С.Н., Вильданова О.Р.
ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет», Челябинск, Россия ФГАОУ ВО «Южно-Уральский государственный университет (Национальный исследовательский университет)», Челябинск, Россия
Введение. Нейтрофильные гранулоциты являются бы-строреагирующими клетками на изменение условий внешней среды. В последнее время все чаще обсуждается проблема электромагнитного загрязнения окружающей среды, его негативное влияние на организм человека, и прежде всего на иммунную систему, а также рассматривается позитивная роль космического ЭМИ в сохранении здоровья человечества. До настоящего момента окончательно не ясно, каким образом влияет техногенное ЭМИ (излучение от линий электропередачи, сотовых телефонов, компьютерной техники и т. д.) и космическое (природное) электромагнитное излучение (ЭМИ) на микробицидный потенциал секреторных продуктов.
Цель. Оценить микробицидный эффект секреторных продуктов нейтрофилов, предварительно подвергшихся
моделированному низкоинтенсивному ЭМИ, аналогичному природному и техногенному, в отношении представителей резидентной и факультативной микрофлоры слизистых оболочек тела человека.
Задачи. 1. Оценить микробицидный эффект секреторных продуктов нейтрофилов, предварительно подвергшихся моделированному низкоинтенсивному электромагнитному излучению, аналогичному техногенному, в отношении L. plantarum, B. bifidum, S. aureus, E. coli. 2. Определить микробицидный эффект секреторных продуктов нейтро-филов, предварительно подвергшихся моделированному низкоинтенсивному ЭМИ, аналогичному природному, в отношении L. plantarum, B. bifidum, S. aureus, E. coli.
Материалы и методы. Для получения секреторных продуктов использовали чистую фракцию нейтрофилов, выделенных на двойном градиенте фиколла-урографина из периферической венозной крови условно здоровых доноров (n = 28), предварительно облученных моделированным низкоинтенсивным электромагнитным излучением, генерируемым аппаратом АИМТ-1. Микробицидный эффект секреторных продуктов изучали фотометрическим методом, учет результатов проводили с помощью фотометра Anthos 2020. Результаты были статистически обработаны с помощью компьютерной программы Past_2.17a
Результаты. В результате проведенных исследований определили, что секреторные продукты интактных нейтро-филов обладали микробицидным эффектом по отношению ко всем тестируемым культурам. Микробицидный эффект секреторных продуктов нейтрофилов, предварительно подвергшихся моделированному ЭМИ, аналогичному природному и техногенному, оставался стабильным по отношению к грампозитивным микроорганизмам L. plantarum, B. bifidum, S. aureus. По отношению к E. coli микробоцидный эффект секреторных продуктов нейтрофилов, предварительно подвергшихся моделированному низкоинтенсивному ЭМИ, аналогичному природному и техногенному, значительно возрастал (табл.).
Заключение. Таким образом, низкоинтенсивное ЭМИ, аналогичное природному и техногенному, повышает бак-терицидность секреторных продуктов нейтрофилов по отношению к грамотрицательной микрофлоре и не влияет на антибактериальную способность по отношению к грампо-зитивной флоре.
ТАБЛИЦА. ПОКАЗАТЕЛИ ОПТИЧЕСКОЙ ПЛОТНОСТИ ТЕСТИРУЕМОГО ОБРАЗЦА (К ТЕЗИСАМ ШИШКОВОЙ Ю.С. И ДР.)
Супернатант неактивированных нейтрофилов Супернатант нейтрофилов, предварительно подвергшихся моделированному низкоинтенсивному ЭМИ, аналогичному техногенному Супернатант нейтрофилов, предварительно подвергшихся моделированному низкоинтенсивному ЭМИ, аналогичному природному
1 2 3 4
Lactobacillus plantarum 0,295 (0,259-0,332) 0,282 (0,243-0,322) 0,299 (0,262-0,328)
Bifidobacterium bifidum 0,237 (0,198-0,266) 0,316 (0,253-0,345) 0,259 (0,235-0,285)
Staphylococcus aureus 0,532 (0,408-0,630) 0,591 (0,467-0,653) 0,476 (0,263-0,700)
Escherichia coli 0,334 (0,308-0,373) 0,235 (0,200-0,264) р23 = 0,00001 0,269 (0,235-0,334) р2_4 = 0,0007
