CC BY
45
kaznmu.kz • КазНМУ • №1-2016*
T.I. GLEBOVA1, N.G. KLIVLEEVA1, M.G. SHAMENOVA1, N.T. SAKTAGANOV1, G.V. LUKMANOVA1, M.K. KALKOZHAEVA1, A.ZH. MURZAGALIEVA2, G. DOSANKYZY 3
1RSOE on the right of economic management"Institute of Microbiology and Virology", Committee of Science, Ministry of Education and Science,
Republic of Kazakhstan, Kazakhstan, Almaty, [email protected] 2State municipal enterprise "Regional Clinical Hospital of Infectious Diseases" on the right to run the state institution "Department of Health
Aktobe region"
3 Branch of RSOE on the right of economic management «National center of expertise Committee on Consumer Protection MHE PK Ministry of
National Security of Kazakhstan Kyzylorda region
CIRCULATION OF INFLUENZA VIRUSES IN ARAL SEA REGION OF THE REPUBLIC OF KAZAKHSTAN
IN THE 2015 EPIDEMIC SEASON
Resume: In January-March 2015, 293 nasopharyngeal swabs and 48 sera have been collected in medical institutions of Aktobe and Kyzylorda oblasts from the patients diagnosed with ARVI (acute respiratory viral infection), nasopharyngitis and adenoviral infection. The genetic material of influenza A virus was detected by polymerase chain reaction in 12.6% of cases, influenza virus B - in 1.0%. At subtyping, RNA of the influenza A/H3N2 virus was detected in 9.2% of the samples, A/H1N1 - in 2.7%; in 0.7% of samples RNA was simultaneously detected for both subtypes of influenza A virus (H1N1+H3N2). The results obtained in the PCR screening of nasopharyngeal swabs, as well as serological data obtained in haemagglutination assay and immunnoenzyme tests and presented in the paper indicate cocirculation of influenza A/H3N2, A/H1N1 and B viruses on the territory of the Aral Sea region.
The paper presents data on the isolation of influenza A/H1N1 virus from the patients in the MDCK cell culture and developing chicken embryos.
Keywords: influenza virus circulation, isolate, hemagglutinin, neuraminidase
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА ¡Ь1В:
СВЯЗЬ С ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ И ПРОГРЕССИРОВАНИЕМ В ЦИРРОЗ ПЕЧЕНИ В КАЗАХСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ
М.Р. МАСАБАЕВА
Государственный медицинский университет г. Семей, Казахстан
УДК 616.36 - 006 - 002 - 616 - 056.71
Исследование направлено на оценку влияния полиморфизма гена цитокина ^1В rs1143627 на предрасположенность к заболеванию хроническим вирусным гепатитом и дальнейшего развития цирроза печени. Всего в исследовании случай-контроль приняло участие 389 человек казахской национальности. Из них 54 пациента с диагнозом цирроз печени вирусной этиологии, 175 с хроническим вирусным гепатитом и 160 человек контрольной группы, которые не имели заболеваний печени и были НВУ- и НСУ-отрицательны. Ассоциативный анализ данных генотипирования rs1143627, не выявил значимой связи полиморфизма гена цитокина ^1В с предрасположенностью ни к хроническому вирусному гепатиту, ни к вероятности его прогрессии в цирроз печени. Частоты аллелей в группах пациентов и группе контроля оказались очень близки между собой, и, соответственно, вычисленные отношения шансов достоверно не отличались.
Ключевые слова: ^1В; rs1143627; однонуклеотидный полиморфизм; хронический вирусный гепатит; цирроз печени.
Введение. Более 170 млн. людей во всем мире, т. е. около 3% населения Земли [1,2], инфицированы вирусными гепатитами с парентеральным путем передачи, которые в большинстве развитых стран являются самой частой причиной развития хронического гепатита, цирроза печени (ЦП) и гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК) [3,4]. Исходы хронических вирусных гепатитов (ХВГ) зависят от иммунного ответа [5], обусловленного в частности генетическими особенностями организма-хозяина. Цитокины являются ключевыми медиаторами воспалительного процесса и формирования специфического иммунитета, ответственного за естественную элиминацию вируса гепатита [6,7]. Их образование и секреция происходит кратковременно, в ответ на присутствие в организме антигена [8].
Интерлейкин-1 (ИЛ-1) - один из первых открытых цитокинов, регулятор процессов воспаления и иммунитета [9,10]. Он синтезируется многими клетками организма, в первую очередь активированными макрофагами, в меньшей степени кератиноцитами, стимулированными В-лимфоцитами и фибробластами [11]. Клетками-мишенями действия ИЛ-1 являются миоциты, синовиоциты, гепатоциты, костные клетки, лимфоциты, нейроциты [12]
ИЛ-1 вызывает экзоцитоз лизосомальных ферментов и свободных радикалов фагоцитами; усиливает пролиферацию фибробластов, повышает синтез коллагена; в качестве флогогена стимулирует дегрануляцию тучных клеток с освобождением медиаторов воспаления, активирует продукцию простациклина; индуцирует синтез коллагеназ и активатора плазмина в тканях, стимулирует образование гепатоцитами белков острой фазы, оказывает провоспалительное и пирогенное дей- ствие [9,13]. Семейство ИЛ-1 включает в себя 3 гомологичных белка: интерлейкин-1-альфа и -1-бета (ИЛ-1А и ИЛ-IB), которые являются провоспалительными, и ИЛ-IRN, молекула которого обладает антивоспалительным действием [14]. Эти белки кодируются генами IL1A, IL1B и IL1RN соответственно. Равновесие между экспрессией и ингибированием синтеза IL-1 определяет развитие, регуляцию и исход воспалительного процесса [15]. В настоящее время показано, что нуклеотидные замены в генах IL1A и IL1B могут приводить к изменению характера их экспрессии. Выявлен ряд точечных маркеров высокопродуцирующего варианта гена IL1B [16,17]. У лиц, несущих два или один аллель Т (т. е. гомо- или гетерозиготных по высокопродуцирующему аллелю IL1B С(+3953)Т), синтезируется, соответственно, в 4 и 2 раза
ВЕСТНИК
• Nq1 -201 6 • КазНМУ • kaznmu.kz
большее количество этого цитокина, чем у лиц, гомозиготных по основному С-аллелю [18]. На сегодняшний день в литературе встречается противоречивые данные по изучаемой проблеме, подобные исследования не проводились в казахской популяции. Цель. Оценка влияния полиморфизма гена 1Ь1В ^1143627 на предрасположенность к заболеванию хроническим вирусным гепатитом и дальнейшего развития цирроза печени.
Материалы и методы. В исследовании случай-контроль всего приняло участие 389 человек, казахской национальности. Из них 54 с ЦП вирусной этиологии и 175 с ХВГ, состояли на учете в Гепатологическом центре г. Семей с установленным и подтвержденным диагнозом. В контрольной группе 160 донора, HBV- и НСУ-отрицательны. Обследование на наличие или отсутствие хронического вирусного гепатита проводили согласно Приказу и. о.
Министра здравоохранения Республики Казахстан от 17 февраля 2012 года № 92 «Об утверждении Правил обследования и лечения больных вирусными гепатитами». Принадлежность к казахской национальности устанавливали путем анкетирования и сверки с данными свидетельства о рождении, в котором указана национальность респондента и его родителей. В исследование не включали лиц, имеющих родителя или родителей не казахской национальности. Исследование отвечает требованиям Хельсинской декларации, Всемирной Медицинской Ассоциации и одобрено этическим комитетом Государственного Медицинского Университета г. Семей, протокол №2 от 13.11.2013г. Все участники исследования были информированы о целях исследования и предстоящих процедурах, у всех было получено информированное письменное согласие на участие в исследовании. Половозрастные характеристики приведены в таблице 1.
Таблица 1 - Распределение больных циррозом печени вирусной этиологии, хроническим вирусным гепатитом B и/или C и
Показатель Пациенты с циррозом печени вирусной этиологии (n=54) Пациенты с хроническим вирусным гепатитом B/C (n=175) Контрольная группа (здоровые лица) (n=160)
Пол (муж/жен) 28/26 79/96 51/109
Возраст: интервал средний 29 - 75 49±9,2 18 - 79 42,4±12,7 18 - 79 42,6±12,9
Хронический вирусный гепатит B/С 25/29* 55/120
* гепатит В и С выявлен одновременно у 3 пациентов с циррозом печени
Готовые наборы для проведения генотипирования IL1B rs1143627, были разработаны РК РГП «Национальный центр биотехнологий» лаборатория органического синтеза, г. Астана.
Для исследования использовалась периферическая кровь в пробирки с ЭДТА. Выделение геномной ДНК из крови проводилось при помощи наборов QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN,Germany) в соответствии с инструкцией изготовителя. Концентрация и частота ДНК были измерены при помощи NanoDrop 1000 (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA), измеряя оптическую плотность при длинах волн 260 и 280 нм. Выделенную ДНК замораживали и хранили при температуре -20°С.
Генотипирование ДНК при помощи CFX96™ Real-Time PCR (Bio-Rad). Условия для амплификации Real-time PCR подбирали, используя структуру праймеров и параметры температурных циклов. Программа амплификации включала предварительную денатурацию при 94°С в течение 3 минут, далее 50 циклов 94°С в течение 10 секунд и 58°С в течение 50 секунд.
Для ретроспективного ассоциированного исследования случай-контроль, сравнения частот генотипических распределений, между исследуемой и контрольной группами применялись критерий %2. Для описания соотношения частот генотипов и аллелей генов
использовали равновесие Харди-Вайнберга. Различия между выборками считались статистически достоверными при значении для p < 0,05. Статистический анализ проводили с использованием программы SPSS для Windows, версии 17.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA).
Результаты. Сравнение трех групп по возрасту выявило статистически значимую разницу. Возраст пациентов с циррозом печени был значимо старше (49±9,2 лет), чем пациентов с хроническим вирусным гепатитом (42,4±12,7 лет) и здоровых лиц (42,6±12,9 лет). Значимой разницы в возрасте между двумя последними группами не наблюдалось. Эти результаты, вероятно, указывают на то, что прогрессия вирусного гепатита к циррозу печени растянута во времени; в данном исследовании этот срок оказался равным около 6,5 годам.
Как показано в таблице 2, аллели rs1143627[C] в группах ЦП и ХВГ практически не отличались от таковых в контрольной выборке, и составила примерно 0,5 и 0,4. Генотип СС чаще встречается при ЦП (0,426), чем при ХВГ (0,286) и в контрольной группе (0,344). Генотип СТ при ЦП (0,222) встречается реже, чем при ХВГ (0,417) и в контрольной группе (0,400). Если говорить о генотипе ТТ, то так же как и в первом случае чаще встречается при ЦП (0,352) чем при ХВГ (0,297) и в контрольной группе (0,256).
Таблица 2 -Распределение генотипов, аллелей полиморфизма 1Ь1В. Сравнение цирроза печени, хронического вирусного гепатита и контрольной группы._
Хроническ
Цирроз печени (n=55) ий вирусный гепатит В/С (n=175) Контроль (здоровые лица) (n=160) Сравнение ЦП и контроль Сравнение ХВГ и контроль
ОШ ОШ (95% ДИ) (95% ДИ)
Аллель
С 0,537 0,494 0,544 0,9 0,97 (0,63 - 1,51) 0,2 0,82 (0,61 - 1,11)
Т 0,463 0,506 0,456 1,03 (0,66 - 1,59) 1,22 (0,90 - 1,65)
Генотип
СС 0,426 0,286 0,344 0,06 1,42 (0,75-2,66) 0,48 0,76 (0,48-1,21)
СТ 0,222 0,417 0,400 0,43 (0,21-0,88) 1,07 (0,69-1,66)
ТТ 0,352 0,297 0,256 1,58 (0,81-3,05) 1,23 (0,76-1,98)
Ассоциативный анализ данных генотипирования ^1143627, не выявил значимой связи полиморфизма с предрасположенностью ни к хроническому вирусному гепатиту, ни к вероятности его прогрессии в цирроз печени. Частоты аллелей в группах пациентов и группе контроля оказались близки между собой, и, соответственно, вычисленные отношения шансов достоверно не отличались. Обсуждение.
Настоящая работа направлена на оценку потенциального влияния полиморфизма гена цитокина 1Ь1В ^1143627 на предрасположенность к заболеванию хроническим вирусным гепатитом и дальнейшего развития цирроза печени в казахской популяции. 1Ь1В ^1143627 локализуется на длинном плече 2 хромосомы, цитогенетическая полоса 2q13.
Анализ данных для ^1143627показал, что аллель С встречается чаще у больных циррозом печени вирусной этиологии и у контрольной группы по сравнению с аллелем Т. Частота аллеля С а двух перечисленных группах составляет от 0,537 до 0,544. В то же время частота встречаемости аллеля Т выше у больных хроническими вирусными гепатитами и составляет 0,506. У больных циррозом печени вирусной этиологии генотип СС (0,426) встречался чаще, чем гетерозигота СТ (0,222). В группе пациентов с хроническим вирусных гепатитом
генотип СТ (0,417) встречается чаще, чем гомозигота ТТ (0,297) или СС (0,286). В контрольной группе гомозигота ТТ (0,256) встречается реже, чем СТ (0,400) и СС (0,344). Однако частоты рисковых аллелей в группах пациентов и в группе контроля оказались близкими между собой и, соответственно, вычисления отношения шансов не имели статистически значимых отличий.
При сравнении групп ЦП с ХВГ мы получили р=0,03, генотип СС: отношение шансов = 1,85 с 95% доверительным интервалом (0,99-3,49). Так же при объединении групп ХВГ и контроль и сравнении с ЦП мы получили подобные результаты: р=0,03 генотип СС отношение шансов = 1,63 с 95% доверительным интервалом (0,90-2,92). Полученный нами результат не может расцениваться, как положительный, так как не достиг порога статистической значимости.
Вывод. Взаимосвязь исследованного однонуклеотидного полиморфизма ^1143627 гена цитокина 1Ь1В с предрасположенностью к заболеванию хроническим вирусным гепатитом и его прогрессированием в цирроз печени в казахской популяции не выявлена. Работа выполнена с помощью финансовой поддержки Министерства Образования и Науки Республики Казахстан, грант №0115РК01852.
ВЕСТНИК
• Nq1 -201 6 • КазНМУ • kaznmu.kz
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1 Самоходская Л. М. и др. Прогностическое значение комбинации аллельных вариантов генов цитокинов и гемохроматоза у больных хроническим гепатитом С //Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2007. - Т. 17. -№. 2. - С. 50-56.
2 Шайзадина Ф. М. и др. Эпидемиологическая ситуация вирусных гепатитов в небольшом городе центрального Казахстана //международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2013. - №8(3). - С. 88-89.
3 Waly Raphael S., Yangde Z., YuXiang C. Hepatocellular carcinoma: focus on different aspects of management //ISRN oncology. - 2012. - Р. 421-427.
4 Масабаева М.Р.; Аукенов Н.Е. и др. Молекулярно-генетические механизмы развития осложнений хронических вирусных гепатитов B и C (Обзор литературы). Наука и здравоохранение. - 2014. - №1 - С. 11-14.
5 Яковенко Э. П., Григорьев П. Я. Хронические заболевания печени: диагностика и лечение //Рос. мед. журн. - 2003. - Т. 11. - №. 5. - С. 291-296.
6 Арсентьева Н. А., Семенов А. В., Тотолян А. А. Роль полиморфизма генов цитокинов при вирусном гепатите С. Инфекция и иммунитет. - 2012. - 2 - С. 687-698.
7 Маркелова Е. В., Костюшко А. В., Красников В. Е. Патогенетическая роль нарушений в системе цитокинов при инфекционно -воспалительных заболеваниях //Тихоокеанский медицинский журнал. - 2008. - Т. 3. - С. 24-9.
8 Громова А. Ю., Симбирцев А. С. Полиморфизм генов семейства IL-1 человека //Журнал'Цитокины и воспаление. -2005. - №. 2. -С. 4-5.
9 Громова А. Ю., и др. Влияние функционального полиморфизма генов семейства интерлейкина-1 на предрасположенности и характер течения хронического гнойного риносинусита и эффективность терапии рекомбинантным интерлейкином-1 бета (беталейкин). //Российская оториноларингология: Медицинский научно-практический журнал. - 2005. - №2. - С. 5-12.
10 Серебренникова С. Н., Семинский И. Ж. Роль цитокинов в воспалительном процессе (сообщение 1) //Сибирский медицинский журнал. - Иркутск: 2008. - Т. 81. - №. 6. - С. 14-18.
11 Романова Е. С., Кузнецов Н. И., Старцева Г. Ю. Беталейкин В терапии хронического гепатита С //Журнал инфектологии. - 2007. -С. 27.
12 Саламатов А. В., и др. Эффективность рекомбинантного IL-1 бета в лечении гнойно-деструктивных заболеваний легких и плевры //Цитокины и воспаление. - 2006. - №5 - С. 39- 45.
13 Shi C. S. et al. Activation of autophagy by inflammatory signals limits IL-1 [beta] production by targeting ubiquitinated inflammasomes for destruction //Nature immunology. - 2012. - Т. 13. - №3. - С. 255-263.
14 Симбирцев А. С. Цитокины: классификация и биологические функции //Журнал Цитокины и воспаление. - 2004. - №2. - С. 5-6.
15 Симбирцев А. С. Цитокины-новая система регуляции защитных реакций организма //Журнал Цитокины и воспаление. - 2002 -№1. - С. 3-5.
16 Ахматов А. Т. и др. Влияние рекомбинантного IL-1B на цитохром Р450-зависимые монооксигеназы печени и почек. взаимосвязь со специфическим и нейроэндокринным эффектами //Журнал Цитокины и воспаление. - 2016. - Т. 20. - №1. - С. 28-31.
17 Ризванова Ф. Ф. и др. Генетическая диагностика: полиморфизм генов цитокинов //Практическая медицина. - 2010. - №45. - С. 41-43.
18 Байке Е. В., Байке Е. Е. Полиморфизм генов IL-1B, IL-6, IL-10 и TNF-a у больных разными формами хронического гнойного среднего отита //Современные проблемы науки и образования. - 2015. - №4. - С. 45-49.
М.Р. МАСАБАЕВА
Семей мемлекетт!к медицина университет!, Цазацстан Республикасы
ГЕН ПОЛИМОРФИЗМ1 ¡Ь1В: СОЗЫЛМАЛЫ ВИРУСТЫ ГЕПАТИТПЕН ЖЭНЕ ЦИРРОЗ ПРОГРЕССИЯСЫНА ЦАРЫМ-ЦАТЫНАС
БАЙЛАНЫСЫН ЦАЗАЦ ХАЛЫЦТЫН, АРАСЫНДА ЦАРАУЫ
ТYЙiн: Осы зерттеу созылмалы вирусты гепатит жэне бауыр циррозы одан эрi дамыту бар ауруга бешмдштн туралы цитокиндердщ 1Ь1В ^1143627 полиморфизмi эсерш багалау ушш багытталган.Жумыста тек бакылау зерттеуде 389 казак ултты адам ;атысты. Олардыц 54 наукасы вирусты этиологиялы циррозы диагнозымен, 175 наукас созылмалы гепатитпен жэне 160 адам бакылау тобында болды, осы наукастардыц диагнозында баур аурулары болганжо; жэне НСТ- ИСУ-терк болды. Ассоциативт генотиптеу талдау деректерi ^1143627, полиморфизiмдi ген цитокин 1Ь1В созылмалы вирусты гепатит ушш ешкандай бешмдтг елеулi корреляция аньщталмады жэне цирроз прогрессиясыныц ьщтималдыгы жо; екендш белплендь Наукастар мен бакылау тобында аллель жшлМ бiр-бiрiне оте жакын болды. жэне, тшсшше, тужырым коэффициенттершщ есептеу айтарлыктай айырмашылыгы жо; болып шы;ты.
ТYЙiндi свздер: 1Ь1В; ^1143627; бiр нуклеотидтi полиморфизм; созылмалы вирусты гепатит; бауыр циррозы.
M.R. MASSABAYEVA
Semey State Medical University, The Republic of Kazakhstan
THE POLYMORPHISM OF IL1B GENE: BOND WITH CHRONIC ACUTE VIRAL HEPATITIS AND ITS PROGRESSION TO LIVER CIRRHOSIS
AMONG KAZAKH POPULATION
Resume: The research is aimed at assessing the influence of the polymorphism of IL1B cytokine gene for predisposition to the chronic viral hepatitis and further development of liver cirrhosis. The case - control study have involved 389 people of Kazakh nationality. 54 of examined patients diagnosed with cirrhosis of viral etiology, 175 with chronic hepatitis and 160 patients of control group who did not have a liver diseases and were HBV- and HCV-negative. Associative analysis of genotyping data rs1143627, showed no significant bond of the polymorphism of IL1B cytokine gene for predisposition neither to chronic viral hepatitis nor to the probability of its progression to cirrhosis. The frequencies of alleles among patients groups and control group proved to be very close to each other, and therefore, the computed odds ratios were not significantly different.
Keywords: IL1B; rs1143627;single nucleotide polymorphism; chronic viral hepatitis; liver cirrhosis.
