CC BY
139
УДК 616.366-003.7+616.37-002]-056.7
И.Н. Григорьева, Т.М. Никитенко, Т.И. Романова, М.Ф. Осипенко, М.А. Егошина, Е.В. Сединина, Ю.Ю. Венжина, Е.В. Шахтшнейдер, И.В. Куликов, В.Н. Максимов, С.А. Усов, Т.В. Мироненко,
Т.В. Данильчева, М.В. Иванова, Т.А. Потапова, А.Г. Ромащенко, С.К. Малютина, М.И. Воевода
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА АПОЛИПОПРОТЕИНА Е, ЖЕЛЧНОКАМЕННАЯ БОЛЕЗНЬ И ПАНКРЕАТИТ
ГУ НИИ терапии СО РАМН, Новосибирск
ГОУ ВПО Новосибирский государственный медицинский университет Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск НУЗ ДКБ № 1, Новосибирск МКБ № 7, Новосибирск
ГОУ ВПО Кемеровская государственная медицинская академия
Впервые проанализированы показатели липидного обмена, литогенности пузырной желчи и уровни полиморфизма генов APOE у женщин с желчнокаменной болезнью (ЖКБ) и у пациентов с панкреатитом. Доказано, что уровень полиморфизма гена APOE практически не различался у женщин с ЖКБ, с ХЖКБ и у женщин в популяции г. Новосибирска. Частота генотипов и аллелей у обследованных лиц с и без панкреатита достоверно не различалась, однако частота генотипа APOE E3/E4 у больных с панкреатитом в 2,2 раза превышает таковую у лиц в группе сравнения. Генотип APOE E3/E4 встречался достоверно чаще в группе пациентов с острым панкреатитом, чем в группе пациентов с хроническим панкреатитом. Аллель Е4 гена APOE в группе больных острым панкреатитом встречался значительно чаще, чем у больных с хроническим панкреатитом. У женщин с ЖКБ и с ХЖКБ не выявлено ассоциации между уровнем полиморфизма гена АРОЕ и концентрацией липидов сыворотки крови. Наибольший уровень холестерина в желчи отмечен у женщин с ХЖКБ с генотипами Е2/Е4 или Е3/ Е4 гена APOE.
Ключевые слова: аполипопротеин Е, полиморфизм гена, холестерин, желчнокаменная болезнь, литогенность желчи, острый панкреатит, хронический панкреатит
В настоящее время известен целый ряд генов, мечают повышенные уровни ОХС, ХС ЛНП [4]
изменение структуры которых либо непосредс- и увеличение риска сердечно-сосудистых заболе-
твенно связано с развитием заболеваний, либо ваний [5].
способствует повышенной восприимчивости Идентифицированы 3 основных аллеля АРОЕ
к неблагоприятным факторам внешней среды. (Е2, Е3 и Е4), разница между аллелями заклю-Одними из наиболее изученных в настоящее вре- чается в замене цистеина и аргинина в позици-
мя являются фенотипические эффекты генов апо- ях 112 и 158 в молекуле, содержащей всего 299
липопротеинов. В последние годы все большее аминокислот [6]. Фенотип АРОЕ3/Е3 является
внимание исследователей привлекает изучение наиболее общим, поскольку Апо Е3 считается
возможной роли аполипопротеинов в патогенезе «родительской» формой белка в различных попу-
ЖКБ [1]. Аполипопротеин Е (Апо Е) имеет мо- ляциях [7]. В западной и восточной европейской
лекулярную массу 34 000, входит в состав липоп- белой популяции уровень полиморфизма этого
ротеинов очень низкой, промежуточной и высо- гена составляет 0,77-0,81 для Е3, 0,12-0,16 для
кой плотности, а также ремнантов хиломикронов, Е4 и 0,06-0,08 для Е2, для Франции и Испании —
Апо Е является высокоаффинным лигандом для 0,8-0,85, 0,08-0,12 и 0,07-0,08 соответственно [8]. семейства рецепторов ЛНП, воздействуя, таким Различия в метаболизме холестерина при раз-
образом, на процессы доставки холестерина к тка- личных фенотипах АРОЕ потенциально влияют
ням [2]. Липидные показатели сыворотки крови на желчную секрецию холестерина и его стабиль-
во многом обусловлены уровнем полиморфизма ность в желчи. Лица с аллелем АРОЕ4 имеют по-
гена АРОЕ [3]. При наличии аллеля АРОЕ4 от- вышенную кишечную абсорбцию ХС [7], обратно
ассоциированную с содержанием дезоксихолевой кислоты в желчи [9]. Большинство авторов признает тот факт, что в присутствии аллеля АРОЕ4 повышается захват холестерина гепатоцитами [3,
10, 11]. У лиц с аллелем АРОЕ4 отмечено уменьшение синтеза желчных солей и, соответственно, их фекального выхода [7, 11]. Поскольку желчные соли играют центральную роль в растворимости холестерина в смешанных мицеллах в желчи, можно сделать вывод о том, что высокое соотношение холестерин/желчные соли в желчи у лиц с аллелем АРОЕ4 может быть проявлением определенной связи аллеля АРОЕ4 с наличием холестериновых желчных камней [12].
Итак, заключение о возможной связи уровня полиморфизма гена АРОЕ с ЖКБ основывается на нескольких фактах: 1) у лиц с аллелем АРОЕ4 отмечено повышение абсорбции холестерина в кишечнике, увеличено содержание холестерина в гепатоцитах и, вследствие этого, происходит билиарная гиперсекреция холестерина; 2) аллель АРОЕ4 чаще встречается у больных ЖКБ, проживающих в Испании, Германии, Голландии; 3) у больных ЖКБ с аллелем АРОЕ4 повышено содержание холестерина в желчных камнях, ускорено появление кристаллов холестерина в желчи, время их нуклеации, а также появление конкрементов после нехирургического лечения ЖКБ [13]; 4) при наличии генотипов, содержащих аллель АРОЕ4, у людей повышается риск развития заболеваний, которые сами являются факторами риска ЖКБ, т.е. сахарного диабета, ИБС, дисли-попротеинемии, артериальной гипертензии [14, 15]; 5) у лиц с аллелем АРОЕ4 отмечается несколько более высокая частота семейной предрасположенности к ЖКБ [16].
Панкреатит — заболевание, которым страдает наиболее трудоспособная часть населения. Частота его неуклонно растет, а диагностика и лечение представляют значительные трудности
[17]. Панкреатит является результатом аутоди-гестии: конверсия панкреатических зимогенов в активные энзимы внутри паренхимы поджелудочной железы предполагает инициирование воспалительного процесса. Ключевая роль принадлежит активации трипсиногена в трипсин [18].
Распространенность панкреатита значительно варьирует в разных странах мира: от 13 до 25 случаев на 100000 населения в европейских странах, заболеваемость панкреатитом составляет от
49,5 случаев в год на 100000 в США до 73,4 — в Финляндии [19]. В эпидемиологическом исследовании, проводимом в течение 7 лет в Лунеберге (Германия), заболеваемость острым панкреатитом составила 19,7, хроническим панкреатитом
— 6,4 [19]. На Украине в 1999 г. распространен-
ность патологии поджелудочной железы составляла 1115 на 100000 [18]. В России насчитывается более 60000 больных хроническим панкреатитом
[17]. За последние 30 лет в мире отмечен более чем двукратный рост числа больных панкреатитом, первичная инвалидизация среди этих больных составляет 15% [18]. В 1993 г. в США было госпитализировано 302000 больных острым и хроническим панкреатитом [19], причем соотношение мужчин и женщин среди больных острым панкреатитом составляет 1,9:1 [20]. Летальность среди больных панкреатитом составляет 11,9%
[18]. Двадцатилетний анамнез хронического панкреатита в 5 раз повышает риск развития рака поджелудочной железы.
По данным Whitcomb D.C. (2001) и других авторов, в качестве одного из основных факторов риска панкреатита, стоящего на первом месте даже с учетом алкогольной этиологии, признают генетические мутации [21, 22, 23].
Эти находки позволяют сфокусировать внимание на следующей цели: исследовать ассоциацию между уровнем полиморфизма гена АРОЕ, показателями липидного обмена сыворотки крови и индексами литогенности желчи у больных ЖКБ, а также определить уровень полиморфизма гена АРОЕ у пациентов с острым и хроническим панкреатитом.
Материалы и методы
В Новосибирске при эпидемиологическом обследовании городского населения в возрасте 25-64 лет в рамках проекта ВОЗ «МОНИКА» («Мониторинг заболеваемости и смертности от сердечно-сосудистых заболеваний и факторов риска, их определяющих»; директор программы в НИИ терапии СО РАМН — академик РАМН Ю.П. Никитин, ответственный исполнитель — д.м.н., проф. С.К. Малютина) была изучена распространенность ЖКБ по данным УЗИ желчного пузыря. В нашем исследовании участвовало 870 женщин в возрасте 25-64 лет.
Кроме того, в рамках клинического исследования было обследовано 113 женщин с хирургической стадией ЖКБ в возрасте от 46 до 78 лет. Всем женщинам визуально определяли тип желчных камней, извлеченных из желчного пузыря при холецистэктомии. Всем больным проводили плановую холецистэктомию: 109 больным проведена лапароскопическая холецистэктомия, 4 больным
— традиционная холецистэктомия открытым методом. Забор крови для исследования липидного профиля, биохимических анализов и для геноти-пирования проводили за 1 день до операции.
Набор пациентов, больных панкреатитом, проходил в клиническом и поликлиническом отделениях ГУ НИИ терапии СО РАМН, в ста-
ционаре МКБ № 7, в отделении абдоминальной хирургии Кузбасского филиала НЦРВХ ВСНЦ СО РАМН. Наличие или отсутствие панкреатита подтверждали с учетом клинической картины, лабораторных анализов крови, кала, у части больных — определения уровня эластазы-1 в кале [24, 25], с помощью сонографического исследования поджелудочной железы [26]. Нескольким пациентам была проведена эндоскопическая ретроградная панкреатохолангиография (ЭРХПГ), компьютерная томография (КТ) поджелудочной железы [26]. Каждому пациенту были заполнены клиническая анкета, проведены биохимические анализы крови.
Концентрацию общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ) определяли в мг/дл по стандартной методике. Концентрацию холестерина желчи, холевой кислоты и общих желчных кислот определяли по стандартным методикам. Уровень полиморфизма гена АРОЕ изучали с помощью ПЦР в лаборатории молекулярно-генетических исследований терапевтических заболеваний ГУ НИИ терапии СО РАМН (зав. лаб. — д.м.н., проф. М.И. Воевода). Забор крови проводили в утреннее время натощак из локтевой вены толстой иглой в интактные пробирки. Сразу же после забора пробирки центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 мин. Сгусток крови сразу же замораживали в камере до -60 °С.
На проведение исследований получено положительное решение этического комитета ГУ НИИ терапии СО РАМН. От каждого пациента было получено письменное информированное согласие на участие в исследовании.
Статистическую обработку данных проводили с применением пакета прикладных программ SPSS (версия 11.0). Достоверность различий между признаками оценивали методами параметрической (по критериям Стьюдента и Фишера) и непараметрической статистики (по критериям Mann-Whitney). Анализ простых связей между переменными — корреляционный анализ (Пирсона, ранговой корреляции Спирмена). Отношение шансов (OR) с 95% доверительными интервалами (С1) рассчитывали по таблице сопряженности. Достоверность различий частот аллелей между обследованными группами и тест на соблюдение равновесия Харди-Вайнберга проводили с использованием критерия х2, программы CHIHW и Генеральной линейной модели (GLM) в рамках программ SPSS.
Результаты и обсуждение
Распределение аллелей и генотипов АРОЕ в неорганизованной женской популяции г. Новосибирска в возрасте 25-64 лет, по данным Е.В. Шахтшнейдер (2004) [27], и у женщин с ЖКБ
Таблица 1
Частота аллелей и генотипов АРОЕ у женщин с ЖКБ и в женской популяции, P(Sp)
Аллели и генотипы ароЕ Частота
Женская популяция Р№) Женщины без ЖКБ Р№) Женщины с ЖКБ Р^р)
АРОЕ2 0,060 (0,013) 0,054 (0,003) 0,127 (0,003)
АРОЕ3 0,818 (0,023) 0,797 (0,005) 0,771 (0,004)
АРОЕ4 0,122 (0,017) 0,135 (0,004) 0,102 (0,002)
АРОЕ2/АРОЕ2 0 0 0
АРОЕ2/АРОЕ3 0,119 (0,024) 0,108 (0,008) 0,254 (0,007)
АРОЕ3/АРОЕ3 0,642 (0,036) 0,622 (0,013) 0,542 (0,008)
АРОЕ3/АРОЕ4 0,233 (0,032) 0,243 (0,011) 0,203 (0,007)
АРОЕ4/АРОЕ4 0,006 (0,006) 0,027 (0,004) 0
АРОЕ2/АРОЕ4 0,060 (0,013) 0 0
(Григорьева И.Н., 2005) [28] показано в таблице
1. Средний возраст в выборке из женской популяции (51,3±0,9 лет) не различался с таковым у женщин с ЖКБ (49,7±1,4 лет, р>0,05). Различия в частоте аллелей и генотипов АРОЕ в женской популяции 25-64 лет и у женщин с ЖКБ во всех случаях были незначимыми.
Отмечено некоторое повышение частоты генотипов АРОЕ2/АРОЕ3 у женщин с ЖКБ по сравнению с таковой у женщин без ЖКБ. В нашем исследовании повышения частоты аллеля АРОЕ4 у женщин с ЖКБ по сравнению с соответствующими показателями у женщин без ЖКБ не выявлено.
Распределение аллелей и генотипов гена АРОЕ в клиническом исследовании у женщин с верифицированной холестериновой ЖКБ и в женской популяции г. Новосибирска представлено в таблице 2. Распределение частот генотипов АРОЕ соответствует равновесию Харди-Вайнберга (х2=2,04, р>0,05). Достоверных различий между частотой аллелей и генотипов АРОЕ у женщин с
Таблица 2
Распределение аллелей и генотипов гена APOE у женщин с холестериновой ЖКБ и без ЖКБ
Аллели и генотипы АРОЕ Частота
В популяции женщин Р(8р) У женщин с ХЖКБ Р^р)
АРОЕ2 0,060 (0,013) 0,093 (0,021)
АРОЕ3 0,818 (0,023) 0,808 (0,029)
АРОЕ4 0,122 (0,017) 0,099 (0,021)
АРОЕ2/АРОЕ2 0 0
АРОЕ2/АРОЕ3 0,119 (0,024) п=21 0,165 (0,027) п=15
АРОЕ3/АРОЕ3 0,642 (0,036) п=113 0,637 (0,035) п=58
АРОЕ3/АРОЕ4 0,233 (0,032) п=41 0,176 (0,027) п=16
АРОЕ4/АРОЕ4 0,006 (0,006) п=1 0
АРОЕ2/АРОЕ4 0 0,022 (0,010) п=2
ХЖКБ и в женской популяции не выявлено, хотя отмечено некоторое повышение частоты генотипов АРОЕ2/АРОЕ3, АРОЕ2/АРОЕ4 у женщин с ХЖКБ по сравнению с таковой у женщин без ЖКБ.
Группа испанских исследователей — Bertomeu А. et al. (1996) — доказала, что среди больных с холестериновыми желчными камнями выявляется повышенная частота генотипов, содержащих аллель АРОЕ4: относительная частота аллеля АРОЕ4 у больных ЖКБ составляла 0,1, в контрольной группе — 0,04 (p<0,01) [29]. В дополнительном исследовании те же авторы в группе из 61 пациента после холецистэктомии с верифицированными холестериновыми конкрементами также подтвердили повышенную частоту аллеля АРОЕ4: 0,131 против 0,04 в контроле (p<0,01). Кроме того, и в Германии у людей с генотипами, содержащими аллель АРОЕ4, отмечена ассоциация с повышенной частотой холестеринового холецистолитиаза, а аллель АРОЕ2 в генотипе, наоборот, «защищает» от образования холестериновых желчных камней, возможно, путем повышения синтеза желчных солей [30]. Также и для финских пациентов наличие в генотипе аллеля АРОЕ2 выполняло некую протективную роль по отношению к холецистолитиазу [31].
В Западном Китае было проведено исследование, согласно которому наличие в генотипе аллеля АРОЕ2 является опасным фактором литогенеза в желчном пузыре [32], а в другой работе китайских авторов Jiang Z. Y. (2004) [33], как и в работе Socha P. с соавт. (2000) [34] приводятся данные об отсутствии какого-либо вклада наличия генотипа с аллелем АРОЕ2 в процесс камнеобразования в желчном пузыре. В этой связи становится очевидной необходимость обследования каждой конкретной популяции на
предмет изучения возможной ассоциации между полиморфизмом, в частности гена АРОЕ, и холе-цистолитиазом.
В рамках клинического исследования уровня полиморфизма гена АРОЕ при панкреатите всего было обследовано 103 пациента, из них 42 человека без панкреатита составили группу сравнения и 57 больных панкреатитом (с острым панкреатитом — 22 человека; с хроническим панкреатитом
— 35 человек).
Распределение частот генотипов гена АРОЕ в группе пациентов без панкреатита и в группе пациентов с панкреатитами находилось в равновесии Харди-Вайнберга (х2=0,358, х2=1,32 соответственно, р>0,05).
В группе пациентов без панкреатита частота генотипа Е3/Е3 гена АРОЕ составила 0,857±0,09, что в 1,3 раза превышает частоту этого генотипа в группе больных с панкреатитами (0,667±0,08) и в популяционном исследовании (0,665±0,019) (р>0,05) [28]. Частота генотипа Е3/Е2 составила 0,071±0,07. Частота аллелей гена АРОЕ у пациентов без панкреатита составила Е2 — 0,036±0,03, Е3 — 0,928±0,05, Е4 — 0,036±0,03 (Таблица 3).
Нужно отметить, что частота аллелей АРОЕ2 и Е4 в группе пациентов без панкреатита была меньше таковых частот в популяционном исследовании [28] в 1,8 раза и 3,3 раза соответственно (р>0,05). Частота генотипа АРОЕ3/Е4 в группе обследованных больных с панкреатитом составила 0,152±0,06, что в 2 раза превышало частоту этого генотипа в группе пациентов без панкреатита (0,071±0,07). Частота генотипа Е3/Е2 у больных панкреатитом составила 0,182±0,07, что в 2,5 раза превышало частоту этого генотипа в группе пациентов без панкреатита (0,071±0,07) (р>0,05) и в
1,5 раза — частоту этого генотипа в популяционном исследовании (0,116±0,013) (р>0,05).
Таблица 3
Частота генотипов и аллелей гена APOEу обследованных в группе лиц с и без панкреатита, P(Sp)
Генотипы и аллели гена APOE Частота генотипов и аллелей гена APOE
В популяционном исследовании P(Sp) В группе лиц без панкреатита P(Sp) В группе лиц с панкреатитом P(Sp)
E3/E4 0,181(0,016) 0,071(0,07) 0,152(0,06)
E3/E3 0,665(0,019) 0,857(0,09) 0,667(0,08)
E3/E2 0,116(0,013) 0,071(0,07) 0,182(0,07)
E2/E2 0 0 0
E2/E4 0,020(0,006) 0 0
E4/E4 0,018(0,005) 0 0
E2 0,068(0,007) 0,036(0,03) 0,091(0,03)
E3 0,813(0,011) 0,928(0,05) 0,833(0,04)
E4 0,119(0,090) 0,036(0,03) 0,076(0,03)
Показатели соответствия равновесию Харди-Вайнберга
X2 4,793 0,358 1,32
Примечание: HWE — равновесие Харди-Вайнберга. E2, E3, E4 — аллели гена APOE; E2/E2, E2/E3, E3/E3, E3/E4, E4/E4, E2/E4 — генотипы гена APOE. P(Sp): P — частота, Sp — ошибка частоты.
Распределение частот генотипов гена АРОЕ в группах с хроническим и острым панкреатитами соответствует равновесию Харди-Вайнберга (х2=0,668, х2=0,662 соответственно, р>0,05). В группе обследованных пациентов с хроническим панкреатитом частота генотипов АРОЕ составила: Е3/Е4 — 0,053±0,05, Е3/Е3 — 0,684±0,1, Е3/Е2 — 0,263±0,1, в группе пациентов с острым панкреатитом — Е3/Е4 — 0,286±0,1, Е3/Е3 — 0,643±0,1, Е3/Е2 — 0,071±0,07. Частота генотипа Е3/Е4 в группе лиц с острым панкреатитом в 5,3 раза превышала частоту этого генотипа в группе пациентов с хроническим панкреатитом (р<0,05), частота генотипа Е3/Е2. наоборот, была в 3,7 раза меньше в группе лиц с острым панкреатитом по сравнению с группой лиц с хроническим панкреатитом. Частота генотипа Е3/Е3 в обеих группах фактически не различалась (р>0,05).
Частота аллелей гена АРОЕ в группе обследованных больных с хроническим и с острым панкреатитом составила: Е2 — 0,132±0,05 и 0,036±0,03 соответственно (р>0,05), Е3 — 0,842±0,06 и
0,821±0,07 (р>0,05), Е4 — 0,026±0,02 и 0,143±0,05 (р<0,05) (Таблица 4).
В группах обследованных лиц с и без панкреатита частота генотипов и аллелей гена АРОЕ не отличалась от популяционных данных [28] (Таблица 3). Между группами лиц с и без панкреатита частота генотипов и аллелей АРОЕ достоверно не различалась, хотя обращает на себя внимание тот факт, что частота генотипа АРОЕ Е3/Е4 у больных с панкреатитом в 2 раза превышает таковую у лиц в группе сравнения (0,071±0,07 и
0,152±0,06 соответственно, р>0,05). При этом ге-
Таблица 4
Частота генотипов и аллелей гена APOE у пациентов с хроническим панкреатитом и с острым панкреатитом, P(Sp)
Примечание: HWE — равновесие Харди-Вайнберга. Е2, Е3, Е4
— аллели гена АРОЕ; Е2/Е2, Е2/Е3, Е3/Е3, Е3/Е4, Е4/Е4, Е2/Е4
— генотипы гена АРОЕ. P(Sp): Р — частота, Sp — ошибка частоты. * — р<0,05.
нотип АРОЕ Е3/Е4 встречался достоверно чаще в группе пациентов с острым панкреатитом, чем в группе пациентов с хроническим панкреатитом, (0,286±0,10 и 0,053±0,05 соответственно, р<0,05). Аллель Е4 гена АРОЕ в группе больных острым панкреатитом встречался значительно чаще, чем у больных с хроническим панкреатитом (0,143±0,05 и 0,026±0,02 соответственно, р<0,05), что является косвенным доказательством важной роли нарушений липидного обмена у этой категории больных. Христич Т.Н. и соавт. (2004) среди дисметаболических форм хронического панкреатита выделяют липогенный панкреатит [35].
Полиморфизм гена АРОЕ оказывает значительное влияние на уровень липидов крови: в большинстве работ, посвященных изучению этого вопроса, доказано, что дислипидемии чаще выявляют при наличии в генотипе индивидов аллеля АРОЕ4 [3, 4, 8]. В эпидемиологическом исследовании при анализе средних показателей липидов сыворотки крови не выявлено достоверных различий при сравнении уровней ОХС, ХС ЛВП, ХС ЛНП и ТГ между женщинами с ЖКБ при наличии генотипов АРОЕ2/АРОЕ3, АРОЕ3/АРОЕ3 и АРОЕ3/АРОЕ4 [27].
При анализе средних показателей липидов сыворотки крови в клиническом фрагменте нашей работы не было выявлено достоверных различий при сравнении уровней ОХС, ХС ЛВП, ХС ЛНП и ТГ между больными с ХЖКБ с генотипами, содержащими аллели АРОЕ2, АРОЕ3 и АРОЕ4 (GLM р>0,05 во всех случаях), хотя была отмечена общая тенденция к увеличению уровня ОХС у больных ЖКБ от аллеля АРОЕ2 в генотипе (5,3 ммоль/л) к аллелю АРОЕ4 (5,7 ммоль/л).
Косвенным подтверждением предположения
о связи между генотипом, содержащим аллель АРОЕ4, и нарушениями липидного обмена среди женщин с ХЖКБ может служить тот факт, что у лиц с аллелями АРОЕ2 и АРОЕ3 в генотипе средняя величина ИМТ значительно ниже, чем у лиц с генотипом, содержащим аллель АРОЕ4 (30,6±1,3, 30,5±0,7 и 34,2±1,4 кг/м2 соответственно): OR=0,84 (95%С1 0,74-0,9, р=0,016).
При анализе средних показателей липидов желчи у больных ХЖКБ выявлено, что наличие генотипов АРОЕ3/АРОЕ4 и АРОЕ2/АРОЕ4 сопровождается значительно более высоким уровнем холестерина желчи, чем при генотипе АРОЕ2/АРОЕ3 (Таблица 5).
Эти данные согласуются с результатами Веііотеи А. с соавт. (1996), которые обнаружили существенные различия в значениях общей концентрации липидов в желчи у больных ЖКБ (5,7, 8,2, и 11,0 г/дл соответственно, для аллелей Е2, Е3 и Е4) [29]. Среди больных с ХЖКБ, имеющих
Генотипы и аллели гена АРОЕ Частота генотипов и аллелей гена АРОЕ
У пациентов с хроническим панкреатитом Р№) У пациентов с острым панкреатитом Р№)
Е3/Е4 0,053(0,05) 0,286(0,10)*
Е3/Е3 0,684(0,10) 0,643(0,10)
Е3/Е2 0,263(0,10) 0,071(0,07)
Е2/Е2 0 0
Е2/Е4 0 0
Е4/Е4 0 0
Е2 0,132(0,05) 0,036(0,03)
Е3 0,842(0,06) 0,821(0,07)
Е4 0,026(0,02) 0,143(0,05)*
Показатели соответствия равновесию Харди-Вайнберга
х2 0,668 0,662
Таблица 5
Показатели литогенности желчи у больных
с ХЖКБ с различными генотипами гена APOE, г/л
Генотипы APOE XЖ ОЖК XXК
АРОЕ2/АРОЕ3 6,9±0,6 21,8±2,4 3,2±0,1
АРОЕ3/АРОЕ3 7,1±0,3 22,0±0,9 3,1±0,05
АРОЕ3/АРОЕ4, АРОЕ2/АРОЕ4 8,0±0,5* 25,0±1,6 3,2±0,1
Примечание. * — р<0,05между соответствующими показателями состава желчи у больных ХЖКБ с генотипами АРОЕ2/ АРОЕ4 или АРОЕ3/АрОЕ4 и генотипом АРОЕ2/АРОЕ3.
генотип АРОЕ3/АРОЕ4 или АРОЕ2/АРОЕ4, уровни холестерина желчи, превышающие 4,5 г/ л, встречаются в 5,1 раза чаще, чем у лиц с генотипом АРОЕ2/АРОЕ3: OR=5,1 (95%CI 1,1-24,0, p=0,025).
Этот факт может свидетельствовать о возможной ассоциации наличия в генотипе аллеля АРОЕ4 с показателями липидного обмена, и в частности, липидов желчи. При анализе уровня полиморфизма APOE и показателей общих желчных кислот и ХХК у больных ХЖКБ достоверных различий не обнаружено: GLM p=0,5 для общих желчных кислот, и GLM p=0,77 для ХХК соответственно.
Поскольку АРОЕ был обнаружен в человеческой пузырной желчи [36], он может подобным образом действовать в желчи как локальный промотор образования камней в желчном пузыре, хотя, возможно, он действует совместно с другими промотирующими и ингибирующими протеинами, которые частично контролируют как нуклеа-цию кристаллов холестерина из перенасыщенной желчи, так и их рост и агрегацию в микролиты [37]. Возможно, эффект АРОЕ также может быть опосредован через различия в скорости образовании холестериновых кристаллов: в работе Juvonen Т. с соавт. (1993) у 68% пациентов с аллелем Е4 кристаллы холестерина в желчи появились сразу же после холецистэктомии (у 29% лиц с аллелем АРОЕ2 и у 41% лиц с аллелем АРОЕ3, р<0,001) [36]. Однако Mella J.C. с соавт. (1997) [38] при исследовании чилийской популяции больных ЖКБ и Hasegawa K. (2003) [39] при обследовании японских пациентов с ЖКБ не обнаружили связи между полиморфизмом АРОЕ и ЖКБ.
В немногочисленных исследованиях, проведенных в разных странах, авторы приводят противоречивые данные о частоте аллеля Е4 гена аполи-попротеина Е (АРОЕ) у больных панкреатитом: для билиарнозависимых панкреатитов аллель гена АРОЕ4 по сравнению с популяцией обнаруживается чаще, для алкогольной этиологии — реже [40]. Rollan A. et al. (1994) исследовали уровень полиморфизма АРОЕ у 52 больных с острым панкреатитом, 109 больных с желчнокаменной болезнью и 110 больных составили контрольную группу [41].
Частота аллелей АРОЕ2, Е3, Е4 практически не различалась в данных группах и составила 0,212, 0,701, 0,090 при остром панкреатите, ЖКБ и в контроле соответственно [41]. Frenzer A. et al. (2002) исследовали уровень полиморфизма АРОЕ при хроническом панкреатите, в результате частота генотипов АРОЕ не отличалась от таковых у больных без панкреатита или популяционных данных [42]. Поскольку в нашем исследовании выявлено, что аллель АРОЕ4 встречается у больных острым панкреатитом достоверно чаще, вероятно, значительный интерес представляет изучение показателей липидного обмена у этой категории больных и возможной ассоциации дислипидемии с генетическими факторами.
Выводы
1. Уровень полиморфизма гена APOE у женщин с ЖКБ в эпидемиологическом исследовании (частота аллелей Е2, Е3, Е4 составила 0,127, 0,771, 0,102 соответственно) и в клиническом исследовании у женщин с верифицированной холестериновой ЖКБ (частота аллелей Е2, Е3 и Е4 — 0,093, 0,808 и 0,099 соответственно) близок к регистрируемому в женской популяции в возрасте 25-64 лет г. Новосибирска.
2. Уровни полиморфизма гена АРОЕ у лиц без панкреатита (частота аллелей Е2, Е3, Е4 составила 0,036, 0,928, 0,036 соответственно) и у больных панкреатитом (частота аллелей Е2, Е3, Е4 составила 0,091, 0,833, 0,076 соответственно) практически не различались.
3. В группе пациентов с острым панкреатитом генотип E3/E4 (0,286) и аллель Е4 (0,143) гена APOE встречались достоверно чаще, чем в группе пациентов с хроническим панкреатитом. (0,053 и
0.026 соответственно).
4. Среди женщин с ЖКБ в возрасте 25-64 лет отмечена незначительная тенденция к увеличению среднего уровня ТГ крови у лиц, имеющих в генотипе аллель Е2, и к увеличению средних показателей ОXС крови — при наличии аллеля Е4.
5. При генотипах АРОЕ2/Е4 или Е3/Е4 у женщин с XЖКБ отмечено достоверное повышение среднего уровня холестерина желчи.
APOLIPOPROTEIN E POLYMORPHISM, GALLSTONE DISEASE AND PANCREATITIS.
Grigorieva I.N., Nikitenko T.M., Romanova T. I., Osipenko M.F., Egoschina M.A., Sedinina E.V., Venzhina Yu., Schakhtschneider E.V., Kulikov
1.V., Maksimov V. N., Usov S.A., Mironenko T.V., Potapova T.A., Danilcheva T.V., Ivanova M.V., Ro-mashchenko A.G., Malyutina S.K., Voevoda M.I.
In this article was established our experience in the researching of APOE polymorphism, lipid metabolism disorders and litogenicity bile indices in
Gallstone disease (GSD) and pancreatitis patients. We proved, that APOE polymorphism in general women population, in women with GSD, and in women with verified cholesterol GSD did not differ. The frequency of АРОЕ genotypes and alleles at the persons with acute and chronic pancreatitis significantly did not differ from the population data. However frequency of a genotype APOE E3/E4 at the patients with pancreatitis in 2,2 times exceeds those at the persons in control group (p>0,05). The genotype APOE E3/E4 met significantly more often in group of the patients with acute pancreatitis, than in group of the patients with chronic pancreatitis. APOЕ4 allele in the group of the patients with acute pancreatitis met much more often, than at the patients with chronic pancreatitis (p<0,05). Associations between APOE polymorphism and blood lipid levels in women with GSD did not revealed. Was shown, that the greatest cholesterol concentration in bile is marked in women with cholesterol GSD with APO E2/E4 or APO E3/E4 genotypes.
Литература
1. Paigen B. Gallstones // The genetic basis of common diseases / B. Paigen, M.C. Carey. — 2nd Edition. — Oxford: University Press, 2002. — 298-335 p.
2. Творогова М.Г. Аполипопротеины крови, диагностическое значение и методы определения / М.Г. Творогова, В.Н. Титов // Клин. лаб. диагн. — 1993. — № 2. — С. 4-10.
3. Mahley R.W. Apolipoprotein E: Cholesterol Transport Protein with expanding Role in Cell Biology / R.W. Mahley // Science. — 1988. — Vol. 240. — P. 622-630.
4. Gylling H. Cholesterol absorbtion and metabolism and LDL kinetics in healthy men with different apoprotein E phenotypes / H. Gylling, K. Kontula, T.A. Miettinen // Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. — 1995. — Vol. 15. — P. 208-213.
5. Apo E polymorphism and predisposition to coronary heart disease in youths of different European populations. The EARS Study / L. Tiret, P. de Kniff, H-J. Menzel et al. // Arterioscler. Tromb. — 1994. — Vol. 14. — P. 16171624.
6. Walden С.С. Apolipoprotein E and hyperlipidemia / С.С. Walden, R.A. Hegele // Ann. Intern. Med. — 1994.
— Vol. 120. — P. 1026-1036.
7. Kesaniemi Y.A. Intestinal cholesterol absorbtion efficiency is related to apolipoprotein E phenotype / Y.A. Kesaniemi, C. Ehnholm, T.A. Miettinen // J. Clin. Invest.
— 1987. — Vol. 80. — P. 578-581.
8. Полиморфизм и связь с факторами риска некоторых генов предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям в этнических группах Сибири: эволюционно-генетические и молекулярно-эпидемиологические аспекты: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук / М.И. Воевода. — Новосибирск, 2001. — 52 с.
9. Sama C. Effect of deoxycholic, chenodeoxycholic and cholic acids on intestinal absorbtion of cholesterol in humans / C. Sama, N.F. LaRusso // Mayo Clin. Proc.
— 1982. — Vol. 57. — P. 44-50.
10. Davignon J. Apolipoprotein E polymorphism and atherosclerosis / J. Davignon, R.E. Gregg, C.F. Sing // Atherosclerosis. — 1988. — Vol. 8. — P. 1-21.
11. Miettinen T.A. Impact of Apo E phenotype on the regulation of cholesterol metabolism / T.A. Miettinen // Ann. Med. — 1991. — Vol. 23. — P. 181-186.
12. Mittal B. Genetics of gallstone disease / B. Mittal , R.D. Mittal // J. Postgrad. Med. — 2002. — Vol. 48. — №2.
— P. 149-152.
13. Apolipoprotein E genotype and gallbladder motility influence speed of gallstone clearance and risk of recurrence after extracorporeal shock-wave lithotripsy / P. Portincasa, K.J. van Erpecum, P.C. van de Meeberg et al. // Hepatology. — 1996. — Vol. 24. — P. 580-587.
14. Apolipoprotein E polymorphism and insulin levels in a biethnic population / R. Valdez, B.V. Howard, M.P. Stern, S.M. Haffner // Diabetes Care. — 1995. — Vol. 18.
— P. 992-1000.
15. Katsuya T. Epsilon 4 allele of apolipoprotein E gene associates with lower blood pressure in young Japanese subjects: The Suita Study / T. Katsuya, S. Baba, K. Ishi-kawa // J. Hypertens. — 2002. — Vol. 20. — №10. — P. 2017-2021.
16. High familial prevalence of gallstones in the first-degree relatives of gallstone patients / S.K. Sarin, V.S. Negi, R. Dewan et al. // Hepatology. — 1995. — Vol. 22.
— № 1. — P. 138-141.
17. Жуков Н.А. Хронический панкреатит и факторы, определяющие его развитие / Н.А. Жуков // Терапевтический архив. — 2003. — №2. — С. 12-16.
18. Губергриц Н.Б. Клиническая панкреатология / Н.Б. Губергриц, Т.Н. Христич Донецк, 2000. — 413 с.
19. Lankisch P.G. Epidemiology of pancretic Disease in Luneberg Caunty / P.G. Lankisch, C. Assmus, P. Maison-neuve, A.B. Zowenfels // Pancreatology. — 2002. — № 2.
— P. 469-477.
20. Imamura M. Epidemiology of acute pancreatitis--incidence by etiology, relapse rate, cause of death and longterm prognosis / M. Imamura // Nippon Rinsho. — 2004.
— Vol. 62. — №11. — P. 1993-1997.
21. Маев И.В. Теории и гипотезы патогенеза хронического панкреатита / И.В. Маев, Ю.А. Кучерявый // Клинические перспективы, гастроэнтерологии гепато-логии. — 2005. — №2. — С.18-26.
22. Keim V. Identification of patients with Genetic Risk Factors of Pancreatitis / V. Keim // Dig. Dis. — 2003.
— № 21. — P. 346-350.
23. Whitcomb D.C. Hereditary pancreatitis: a model for understanding the genetic basis of acute and chronic pancreatitis. / D.C. Whitcomb // Pancreatology. — 2001.
— Vol.1. — № 6. — P. 565-570
24. Ивашкин В.Т. Использование метода определения панкреатической эластазы в кале в диагностике хронического панкреатита / В.Т. Ивашкин, А.В. Ох-лобыстин, Н. Баярмаа // Клин. персп. гастроэнтерол., гепатол. — 2002. — №2. — С. 8-14.
25. GlasbrennerB. Modern diagnosis of chronic pancreatitis / B. Glasbrenner, S. Kahl, P. Malfertheiner // Eur. J Gastroenterol Hepatol. — 2002. — № 14. — P. 935-941.
26. Merkle E.M. Imaging of acute pancretitis. /E.M. Merkle, J. Gorich // Eur. Radiol. — 2002. — № 12. — P. 1979-1992.
27. Григорьева И.Н. Липидный обмен и желчнокаменная болезнь / И.Н. Григорьева, Ю.П. Никитин.
— Новосибирск, 2005. — 178 с.
28. Шахтшнейдер Е.В. Связь полиморфизма гена аполипопротеина Е с факторами риска хронических неинфекционных заболеваний в популяциях г. Новосибирска и коренных жителей Горной Шории: Авто-реф. дис. ... канд. мед. наук / Шахтшнейдер Е.В. — Новосибирск, 2004. — 24 с.
29. Apolipoprotein E polymorphism and gallstones / A. Bertomeu, E. Ros, D. Zambon, et al. // Gastroenterology.
— 1996. — Vol. 111. — P. 1603-1610.
30. Apolipoprotein E4 genotype is associated with increased lithogenic factors in gallbladder bile of patients with gallstones / M.H. Dolu, E.R.M. Eckhardt, G.M. Dal-linga-Thie et al. // Gastroenterology. — 1998. — Vol. 114.
— № 4. — P. A520.
31. The role of apolipoprotein E and glucose intolerance in gallstone disease in middle aged subjects / M. Ni-emi, K. Kervinen, A. Rantala et al. // Gut. — 1999. — Vol. 44. — №4. — P. 557-562.
32. Effect of apolipoprotein E gene Hha I restricting fragment length polymorphism on serum lipids in cholecystolithiasis / Q.Y. Lin, J.P. Du, M.Y. Zhang et al. // World J. Gastroenterol. — 1999. — Vol. 5. — № 3. — P. 228-230.
33. Polymorphisms at cholesterol 7alpha-hydroxylase, apolipoproteins B and E and low density lipoprotein receptor genes in patients with gallbladder stone disease / Z.Y. Jiang, T.Q. Han, G.J. Suo et al. // World J. Gastroenterol.
— 2004. — Vol. 15. — № 10. — P. 1508-1512.
34. Apolipoprotein E polymorphism in alagille syndrome and progressive familial intrahepatic cholestasis / P. Socha, G. Nowicka, I. Jankowska et al. // Dig. Dis. Sci.
— 2000. -Vol. 45. — № 4. — P. 675-679.
35. Христич Т.Н. Дисметаболические формы хронического панкреатита / Т.Н. Xристич, Т.Б. Кендзер-ская, И.В. Трефаненко // Сучасна гастроэнтерология.
— 2004. — № 6. — С. 79-84.
36. Gallstone cholesterol content is related to apolipo-protein E polymorphism / T. Juvonen, K. Kervinen, M.I. Kairaluoma, et al. // Gastroenterology. — 1993. — Vol. 104. — P. 1806-1813.
37. Biliary pronucleating proteins and apolipoprotein E in cholesterol and pigment stone patients / K.J. van Er-pecum, P. Portincasa, M.H. Dohlu, G.P. van Berge-Hene-gouwen et al. // J. Hepatol. — 2003. — Vol. 39. — № 1.
— P. 7-11.
38. Apolipoprotein E polymorphism in patients with cholesterol gallstones in a high risk population / J.C. Mella, J.F. Miquei, A. Rollan et al. // Gastroenterology. — 1997.
— Vol. 112. — № 4. — P. A1332.
39. Effect of apolipoprotein E polymorphism on bile lipid composition and the formation of cholester-
ol gallstone / K. Hasegawa, S. Terada , K. Kubota et al. // Am. J. Gastroenterol. — 2003. — Vol. 98. — № 7. — P. 1605-1609.
40. Keim V. The Course of Genetically Determined Chronic Pancreatitis. / V. Keim, H. Witt, N. Bauer et al. // J. Pancreas (Online) 2003. — Vol. 4. — №4. — P. 146-154.
41. Rollan A. Apolipoprotein E polymorphism in patients with acute pancreatitis. / A. Rollan, G. Loyola, C. Covarrubias et al. // J. Pancreas. — 1994. — Vol. 9. — №
3. — P. 349-353.
42. Frenzer A. Polymorphism in alcohol-metabolizing enzymes, glutathione S-transferases and apolipoprotein E and susceptibility to alcohol-induced cirrhosis and chronic pancreatitis / A. Frenzer, W.J. Butler, I.D. Norton et al. // J Gastroenterol Hepatol. — 2002. — Vol. 17.- № 2. — P. 177-182.
