CC BY
76© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2019
Н.Б.Егорова, Е.А.Курбатова, Н.К.Ахматова, И.М.Грубер
ПОЛИКОМПОНЕНТНАЯ ВАКЦИНА ИММУНОВАК-ВП-4 И ИММУНО-ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ КОНЦЕПЦИЯ ЕЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ УСЛОВНО ПАТОГЕННЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ
НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, Москва
Цель. Анализ экспериментальных данных и результатов многолетних клинических исследований иммунотерапевтической и иммунопрофилактической эффективности поликомпонентной вакцины Иммуновак-ВП-4. Материалы и методы. Для получения вакцины селекционированы иммуногенные штаммы Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli, антигены которых обладали широкой внутри- и межвидовой перекрестной протективной активностью. Иммунологические показатели определяли с помощью проточной цитометрии при использовании диагностических моноклональных антител к цитокинам, ТоИ-подобным рецепторам, поверхностным молекулам дендритных клеток и лимфоцитов. Клинический эффект Иммуновак-ВП-4 оценивали при хронических воспалительных и аллергических заболеваниях, а также при профилактике острых респираторных заболеваний (ОРЗ) в детских организованных коллективах. Результаты. Иммуновак-ВП-4 защищала мышей от заражения этиологически значимыми штаммами бактерий и вирусов, способствовала увеличению TLR-2, 4, 9 экспресси-рующих клеток; созреванию дендритных клеток; синтезу цитокинов — IL1p, IL-6, IL-10, IL-12, IFNy; пролиферации и усилению цитотоксичности NK-клеток. Отмечен клинический эффект (69,2 — 100)% Иммуновак-ВП-4 при включении в базисную терапию пациентов с хроническими воспалительными и аллергическими заболеваниями. Терапевтический эффект сопровождался положительной динамикой иммунологических показателей, в частности повышением IFNy и снижением IL-4. Иммунотерапия и иммунопрофилактика при использовании Иммуновак-ВП-4 приводила к снижению числа эпизодов ОРЗ и их бактериальных осложнений, в том числе в детских организованных коллективах. Заключение. Иммунологически обоснована целесообразность использования Иммуновак-ВП-4 в комплексном лечении и профилактике бактериальных и вирусных инфекций, вызываемых условно патогенными микроорганизмами, а также при аллергических заболеваниях.
Журн. микробиол., 2019, № 1, С. 43—49
Ключевые слова: Иммуновак-ВП-4, условно патогенные микроорганизмы, иммунотерапия, иммунопрофилактика, врожденный иммунитет
N.B.Egorova, E.A.Kurbatova, N.KAkhmatova, I.M.Gruber
POLYCOMPONENT VACCINE IMMUNOVAC-VP-4 AND IMMUNOTHERA-PEUTIC CONCEPT OF ITS USE FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF DISEASES CAUSED BY OPPORTUNISTIC MICROORGANISMS
Mechnikov Reseach Institute of Vaccines and Sera, Moscow, Russia
Aim. Analysis of experimental data and results of long-term clinical studies of immunotherapeutic and prophylactic effectiveness of a polycomponent vaccine, Immunovac-VP-4. Materials and methods. Immunogenic strains of Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli, which antigens possessed broad intra — and interspecific cross-protective activity were selected to obtain the vaccine. Immunological parameters were determined using flow cytometry with the use of diagnostic monoclonal antibodies to cytokines, Toll-like receptors, surface molecules of dendritic cells and lymphocytes. The clinical effect of Immunovac-VP-4 was evaluated in chronic inflammatory and allergic diseases, as well as in the prevention of acute respiratory diseases (ARI) in children's organized groups. Results. Immunovac-VP-4, protected the mice from infection caused by etiologically significant strains of bacteria and viruses, increased TLR-2, 4, 9-expressing cells; maturing the dendritic cells; the synthesis of cytokines IL1p, IL-6, IL-10, IL-12, IFNy,; proliferation and increased cytotoxicity of NK cells. Significant clinical effect (69.2 — 100)% of Immunovac-VP-4 on the background of the basic therapy was obtained in patients with chronic inflammatory and allergic diseases. The therapeutic effect was accompanied by a positive dynamics
of immunological parameters, in particular, an increase in IFNy and a decrease in IL-4. Immunotherapy and immunoprophylaxis using Immunovac-VP-4 led to a decrease in the number of episodes of acute respiratory infections and their bacterial complications, including children in organized groups. Conclusion. Immunological feasibility of using Immunovac-VP-4 in complex treatment and prevention of bacterial and viral infections, caused by opportunistic microorganisms, as well as in allergic diseases was proved.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2019, No. 1, P. 43—49
Key words: Immunovac-VP-4, opportunistic microorganisms, immunotherapy, immunization, innate immunity
ВВЕДЕНИЕ
Роль условно патогенной микрофлоры в патологии человека возрастает, что связано с трудностями терапии и профилактики этих заболеваний, обусловленных полиэтиологичностью возбудителей и их резистентностью к применяемым хими-опрепаратам. Эти факторы практически исключают возможность использования средств специфической профилактики, направленных против отдельных возбудителей, и обосновывают необходимость разработки новых подходов к управлению эпидемическими процессами, вызываемыми условно патогенными микроорганизмами.
За последние десятилетия достигнут значительный прорыв в исследованиях клеточных и молекулярных механизмов иммунитета. Пересмотрены основные представления о роли врожденного иммунитета в реализации резистентности к широкому кругу патогенов, активации адаптивного иммунитета. Установлено, что некоторые бактериальные антигены (липополисахарид, пептид огликан, белковые антигены клеточной стенки и др.) могут быть одним из инструментов программирования и коррекции врожденного иммунитета [1, 13]. Не менее важное значение имеют и современные представления о роли бактериальных антигенов в лечении аллергических заболеваний, основанные на признании ведущей роли иммунных механизмов в патогенезе атопии [10, 15]. Установлена важная роль нарушений в системе врожденного иммунитета, приводящих к формированию IgE-опосредован-ных аллергических реакций. Особенностью такого генотипа является поляризация иммунного ответа по ^2-типу, что сопровождается снижением содержания Th1 лимфоцитов, снижением синтеза интерферона и его ингибирующего действия на образование IgE.
Достижения иммунологической науки открывают значительные возможности для исследования клеточных и молекулярных механизмов иммунитета. Это, в первую очередь, относится к получению новых знаний о роли врожденного иммунитета в реализации резистентности к широкому кругу патогенов и программированию пути формирования адаптивного иммунитета. Важнейшую роль в осуществлении этих функций врожденного иммунитета играет структура первичного распознавания каждого патогена, что происходит под действием образраспознающих рецепторов (PRRs). Среди PRRs наибольшее внимание исследователей привлекают Toll-подоб-ные рецепторы (TLRs), экспрессируемые эффекторами врожденного иммунитета. После связывания с лигандами TLRs взаимодействуют с клеточными адаптерными молекулами и запускают каскад передачи сигнала Т-лимфоцитам. Важными элементами механизма действия бактериальных лигандов является усиление пролиферации и функциональной активности клеток эффекторов иммунитета. Эффекторные механизмы многофакторны, но ключевыми элементами являются дендритные клетки (DC) и естественные киллеры (NK). DC обеспечивают распознавание, процессинг патогенов и антигенное представление их в контексте молекул главного комплекса гистосовместимости (MHC) Т-лимфоцитам. Для осуществления этих функций DC продуцируют цитокины, костимулирующие адгезивные молекулы и молекулы антиген представления. При выполнении этих функций DC обеспечивают взаимосвязь врожденного и приобретенного иммунитета и программируют поляризацию Т-лим-фоцитов по Th1 или ^2-типу [14, 15].
Разработанная в НИИВС им. И.И.Мечникова поликомпонентная вакцина Иммуновак-ВП-4 содержит большой набор PAMP, являющихся лигандами для TLRs. Антигены этиологически значимых условно патогенных микроорганизмов, входящие в состав Иммуновак-ВП-4, обладают способностью активировать ключевые эффекторы врожденного иммунитета и внутри- и межвидовую перекрестную протективную активность. Эти качества обеспечивают возможность формирования защиты от полиэтиологичного комплекса респираторных заболеваний (ОРЗ), воспалительных заболеваний различной локализации и оказывать положительное влияние на течение аллергических заболеваний.
Цель исследования: анализ экспериментальных данных и результатов многолетних клинических исследований иммунотерапевтической и иммунопрофилактичес-кой эффективности поликомпонентной вакцины Иммуновак-ВП-4.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Поликомпонентная вакцина Иммуновак-ВП-4 содержит в своем составе антигены Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli, Staphylococcus aureus в виде липополисахарида, ассоциированного с белком наружной мембраны указанных трех грамотрицательных микроорганизмов, а также тейхоевых кислот, пепти-догликана и белковых антигенов Staphylococcus aureus. Для получения вакцины селекционированы наиболее иммуногенные штаммы указанных видов условно патогенных бактерий, антигены которых обладали широкой внутри- и межвидовой перекрестной протективной активностью. Для выделения антигенов использованы щадящие методы выделения антигенов, позволяющие в максимальной степени сохранить их нативную структуру. Вакцина разрешена к применению в практике здравоохранения Министерством здравоохранения и социального развития РФ для назально-подкожного и назально-перорального применения (регистрационное удостоверение от 24.02.2010).
Протективную активность Иммуновак-ВП-4 оценивали в опытах активной защиты мышей от вирулентных штаммов бактерий и вирусов. Иммунологические показатели определяли по морфофункциональным критериям, присущим имму-нокомпетентным клеткам, а также с помощью метода проточной цитометрии при использовании диагностических моноклональных антител к цитокинам, Толл-по-добным рецепторам, поверхностным молекулам дендритных клеток и лимфоцитов. Клинический эффект Иммуновак-ВП-4 оценивали при хронических воспалительных и аллергических заболеваниях, а также при профилактике острых респираторых заболеваний в детских организованных коллективах.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В проведенных экспериментах на мышах выявлено, что под действием Иммуновак-ВП-4 значительно увеличивалось количество экспрессирующих TLR2, TLR4 и TLR9 при разных методах введения вакцины [1, 3]. Прибавление Иммуновак-ВП-4 в среду культивирования DC приводило к их созреванию, что сопровождалось синтезом цитокинов (IL-1P , IL-6, IFNy, IL-12); повышением количества клеток, экспрессирующих молекулы CD40, CD80,CD86, CD83 и MHCI и MHCII. При вакцинации мышей Иммуновак-ВП-4 в крови мышей увеличивалось содержание IL1 в, IL-6, IL-10, IL-12, IFNy. Также показано, что Иммуновак-ВП-4 усиливала пролиферацию и цитотоксическое действие NK-клеток [1].
Наряду с исследованиями механизма иммунитета, осуществленного на молеку-лярно-клеточном уровне, были поставлены опыты по определению протективной активности Иммуновак-ВП-4 при заражении мышей различными условно патогенными возбудителями. В табл. 1 обобщены результаты исследований по защите от восьми бактериальных и двух вирусных возбудителей. Во всех опытах количество выживших после заражения летальными дозами мышей значительно отличалось от непривитого контроля. Приведенные данные подтверждают, что однократная вакцинация Иммуновак-ВП-4 создает протективный эффект от широкого круга патогенов.
Таблица 1. Протективная активность Иммуновак-ВП-4 при заражении штаммами бактерий и вирусов
Срок заражения после одно-Вид возбудителя кратной подкожной иммунизации, сутки Иммунизирующая доза, мкг на мышь Выжило/ Всего после заражения % выживших
K.pneumoniae 1 200 9/10*** 90
7 -«- 8/10*** 80
Контроль нв 0/10 0
S. aureus 1 200 16/20*** 80
7 -«- 15/20*** 75
Контроль нв 0/20 0
P. vulgaris 1 200 14/20*** 70
7 -«- 20/20*** 100
Контроль нв 0/20 0
E. coli 1 200 17/20*** 85
7 -«- 6/20** 30
Контроль нв 0/20 0
P. aeruginosa 1 100 13/20** 65
7 -«- 10/20** 50
Контроль нв 3/20 15
H. influenzae типа b 1 200 16/20*** 80
8 -«- 9/20*** 45
Контроль нв 0/20 0
S. pneumoniae серотип 3 5 50 27/38*** 71
Контроль нв 0/38 0
Salmonella серовар Typhimurium 1 200 7/10f** 70
Контроль нв 0/10 0
H. simplex 5 50 9/10П'* 90
Контроль нв 5/10 50
Вирус гриппа H5N2 1 400 8/10* 80
Контроль нв 1/10 10
Примечание. ^ — на 5 сутки наблюдения; ^ — на 8 сутки наблюдения. Достоверность различий с контролем: * < 0,05; ** <0,01; *** <0,001; нв — не вводили. Контроль — интактные (неиммунизиро-ванные) мыши, зараженные той же дозой одновременно с опытными мышами.
Таким образом, экспериментальные исследования показали, что Иммуновак-ВП-4 является мощным индуктором эффекторов врожденного иммунитета: вызывает значительную экспрессию TLRs—2, 4, 9; стимулирует DC к созреванию и экспрессии костимулирующих молекул и антигенпрезентирующих молекул CD40, CD80, CD86,CD83, МНС1, МНСП и цитокинов ЮТа, Шр , Ш-6, Ш-10, 1Ы2, №N7; способствует повышению цитокинов в крови иммунизированных мышей (^1р , ^-6, IL-10, IL-12, №N7); программирует дифференцировку Т-лимфоцитов по ТЫ-пути; повышает цитоксичность NK-клеток; обладает широкой перекрестной протективной активностью в отношении условно патогенных возбудителей.
В ходе ограниченных и государственных испытаний установлена способность Иммуновак-ВП-4 обеспечивать клинический эффект у детей и взрослых при острых и хронических полиэтиологичных респираторных заболеваниях, повышать эффективность базисного лечения гнойно-воспалительных заболеваний органов дыхания, кожи и аллергических заболеваний. У больных, получавших Иммуновак-ВП-4, отмечен стереотипный клинически положительный эффект в пределах 69,2 — 100%, проявляющийся в значительном снижении числа и тяжести рецидивов, улучшении клинических признаков заболеваний, снижении объема принимаемых лекарственных средств, в том числе антибиотиков и глюкокортикостероидов. Важным показателем является также снижение числа ОРЗ и их бактериальных осложнений, в том числе в детских организованных коллективах (табл. 2).
Таблица 2. Клинический эффект Иммуновак-ВП-4
Нозология Группа Метод введения Число привитых Эффект, %
Заболевания органов дыхания
ОРЗ,часто болеющие [12] дети нп 70 74,0
Хронический бронхит [9] взрослые пк 20 95,0
Абсцесс легкого [3] взрослые пк 20 75,0
Атопические заболевания
Бронхиальная астма [7] взрослые нпк 26 69,2
Бронхиальная астма [11] взрослые нпк 28 82,1
Бронхиальная астма [7] взрослые нп 35 88,6
Бронхиальная астма [8] дети нп 45 71,1
Атопический дерматит [5] дети нп 27 100,0
Латексная аллергия* [6] взрослые нп 12 100,0
Другие заболевания
Герпесвирусная инфекция [2] взрослые нп 165 90,0
Пиодермия [4] взрослые нпк 59 98,3
Эритемы фигурные [4] взрослые нпк 69,56**
Профилактика ОРЗ в детских организованных коллективах [3] Привитые дети нп 89 13,5***
Непривитые дети нв 60 41,6***
Примечание. * без базисной терапии. Наблюдение в течение 1 года и более. ** стойкая клиническая ремиссия, *** наблюдение в течение 14 месяцев. Представлен процент часто болеющих детей дошкольного возраста в привитых и непривитых группах; нп — назально-перорально, пк — подкожно, нпк — назально-подкожно, нв — не вводили.
Один курс профилактического введения Иммуновак-ВП-4 в детских организованных коллективах оказывал длительный профилактический эффект (14-месячный срок наблюдения) на заболеваемость ОРЗ, что проявлялось в снижении числа эпизодов ОРЗ, снижении числа часто болеющих детей, уменьшении бактериальных осложнений (отит, бронхит, гайморит, ангина) [3]
Было проведено также два исследования, в которых наблюдение за детьми проводили в течение семи месяцев. В этот срок из 138 привитых повторные эпизоды ОРЗ были только у одного ребенка, а бактериальные осложнения у двух детей, тогда как в группах непривитых (168 детей) было10 и 13 детей с повторными эпизодами и 20 детей с бактериальными осложнениями (отит, бронхит). Представленные данные свидетельствуют о значительном профилактическом эффекте действия Иммуновак-ВП-4 на заболеваемость ОРЗ в детских коллективах [3]. В трех последовательно проведенных контролируемых исследованиях получены практически однозначные результаты: снижение числа и длительности течения эпизодов ОРЗ; предупреждение развития повторных эпизодов ОРЗ, в том числе в младших возрастных группах; снижение числа бактериальных осложнений; длительный профилактический эффект в течение 14 месяцев (срок наблюдения) после одного курса введения препарата.
Исследование иммунологических показателей проведены в тех же группах больных, в которых был изучен клинический эффект иммунотерапии при вакцинации Иммуновак-ВП-4. Обобщены результаты по нескольким группам больных. Применение Иммуновак-ВП4 способствовало увеличению экспрессии TLR3, TLR4 и TLR9 у больных фигурными эритемами [7]. Увеличение синтеза №N7 и IFNa выявлено при всех исследованных на этот показатель нозологиях. При этом наибольшие количества продукции 1К№у были отмечены при пиодермиях и фигурных эритемах [7]. Изучение спектра цитокинов показало, что введение вакцин у пациентов с фигурными эритемами вызывало повышение №N7 при снижении ^-4. Важным показателем явилось снижение уровня ^Е, что отмечено при бронхиальной астме, атопическом дерматите и фигурных эритемах [4,6,7]. Эти данные подтверждают
приведенные результаты экспериментальных исследований о действии Иммуновак-ВП-4 на активацию Т-лимфоцитов по типу Th-1, что приводит к индукции IFNy, ингибирующего синтез IL-4 и способствующего переключению В-лимфоцитов с синтеза IgE на синтез IgG и IgA.
Введение Иммуновак-ВП-4 способствовало также формированию адаптивного иммунитета. Исследование уровня антител у больных пиодермией выявило их повышение у лиц с исходно низкими титрами к антигенам, входящим в состав Иммуновак-ВП-4, также было показано значительное увеличение аффинности антител [7].
Экспериментальные исследования показали, что Иммуновак-ВП-4 является мощным активатором эффекторов системы врожденного иммунитета, содержит большое число лигандов, связывающихся с TLRs, что способствует быстрому распознаванию патогена, в ответ на который активируются другие эффекторы врожденного иммунитета и происходит передача сигнала Т-лимфоцитам. Наиболее активно Иммуновак-ВП-4 действует на созревание дендритных клеток, что сопровождается появлением на их поверхности костимуляторных и антигенпрезентирующих молекул. Такие созревшие DC синтезируют ряд цитокинов, из которых наибольшее значение имеет IL-12, играющий важную роль в программировании направленности активации Т-лимфо-цитов по Thl-типу. Такие активированные Т-лимфоциты продуцируют IFNy, способствующий переключению В-лимфоцитов с синтеза IgE на синтез IgG и IgA. Этот процесс имеет важнейшее значение и объясняет эффект терапии при аллергических заболеваниях, для которых характерно наличие дисбаланса в системе Th1 и Th2 лимфоцитов. Протективная активность Иммуновак-ВП-4 при защите от бактериальных и вирусных условно патогенных возбудителей также связана со значительной активацией врожденного иммунитета, поскольку эти возбудители чаще вызывают заболевания при сниженной иммунологической резистентности организма, на таком фоне чаще возникают различные осложнения. Длительный эффект, отмечаемый при терапии и профилактике этих заболеваний, также можно объяснить тем, что мощная активация врожденного иммунитета длительно сохраняется и такая ее направленность по Th1-типу способствует формированию адаптивного иммунитета.
Установленный в экспериментальных исследованиях механизм действия Иммуновак-ВП-4 и его подтверждение при клинических исследованиях определяют целесообразность использования Иммуновак-ВП-4 при воспалительных заболеваниях различной локализации, вызываемых условно патогенными микроорганизмами бактериальной и вирусной природы, аллергических заболеваниях, профилактике по-лиэтиологичного комплекса ОРЗ, различных иммунодефицитных состояниях, экстренной профилактике и терапии заболеваний, вызванных неизвестным патогеном.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ахматова Н.К. Молекулярные и клеточные механизмы действия иммуномодуляторов микробного происхождения на функциональную активность эффекторов врожденного иммунитета. Автореф. дисс. докт. мед. наук. М., 2006.
2. Гусейнова З.К. Комплексный метод лечения простого рецидивирующего генитального герпеса с применением поликомпонентной вакцины ВП-4. Автореф. дисс. канд. мед наук. М., 2000.
3. Егорова Н.Б., Ахматова Н.К., Курбатова Е.А., Уткина Н.П., Семенов Б.Ф., Зверев В.В. Клеточные и молекулярные основы антимикробного мукозального иммунитета М., ООО «ИПП КУНА», 2013.
4. Немыкина О.Е., Егорова Н.Б., Курбатова Е.А. и др. Иммунологические показатели при терапии атопического дерматита у детей поликомпонентной вакциной Иммуновак-ВП-4. Журн. микробиол. 2005, 5:45-49.
5. Немыкина О.Е., Егорова Н.Б., Щербакова Б.В. и др. Оптимизация терапии атопического дерматита с помощью иммунотерапии. Журн.микробиол. 2005, 4:53-57.
6. Осипова Г.Л. Оптимизация патогенетической терапии бронхиальной астмы и других аллергических заболеваний. Автореф. дисс. док. мед. наук. М., 2003.
7. Сорокина Е.В., Егорова Н.Б., Масюкова С.А., Ахматова Н.К. Микробные антигены в терапии дерматозов. Медицинское информационное агенство. М., 2018.
8. Степушина М.А. Эффективность поликомпонентной бактериальной вакцины (ВП-4) при бронхиальной астме у детей. Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1996.
9. Суховская О.А., Александрова Н.И., Егорова Н.Б., Ефремова В.Н. Иммунореактивность больных хроническим бронхитом при вакцинотерапии. Журн. микробиол. 1996, 2:68-71.
10. Хаитов М.Р. Острые респираторные вирусные инфекции и бронхиальная астма. Клеточные и молекулярные аспекты проблемы. Журн.микробиол. 2002, 4:84-93.
11. Чучалин А.Г., Осипова Г.Л., Егорова Н.Б. и др. Контролируемые исследования по эффективности поликомпонентной вакцины при иммунотерапии у больных хроническими обструктив-ными заболеваниями органов дыхания. Пульмонология. 1995, 2:55-61.
12. Щербакова Б.В. Эффективность поликомпонентной бактериальной вакцины (ВП-4) при бронхиальной астме у детей. Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1999.
13. Medzhitov R., Janeway Jr. C.A. Innate immunity: impact in the adaptive immune response. Curr. Opin. Immunol. 1997, 9: 4-9.
14. Medzhitov R., Janeway Jr. C.A. Decoding the patterns of self and nonself by the innate immune system. Science. 2002, 296:298-300.
15. Romagnani S., Parronchi O., Delios M.M. et al. An update on human Th1 and Th2 cells. Int. Arch. Allergy Immunol. 1997, 113:153-156.
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2019
Е.М.Зайцев, М.В.Брицина, М.Н.Озерецковская, Н.У.Мерцалова, И.Г.Бажанова
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ БИОПЛЕНОК BORDETELLA PERTUSSIS НА АБИОТИЧЕСКОМ СУБСТРАТЕ
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Москва
Цель. Выбор оптимальных условий культивирования биопленок Bordetella pertussis и сравнительная оценка способности разных штаммов формировать биопленки. Материалы и методы. Использовали вакцинный штамм B. pertussis № 475 и селекционированный из этого штамма штамм № 475а, отличающийся повышенной вирулентностью. В качестве инокулята для получения биопленок использовали культуры штаммов, выращенных на плотной питательной среде (ППС) и жидкой питательной среде (ЖПС). Интенсивность образования биопленок в круглодонных полистироловых 96-луночные планшетах оценивали окрашиванием 0,1% раствором генциан-фи-олетового. Результаты. Суточные культуры штамма № 475 с ЖПС формировали умеренные биопленки в диапазоне доз 5 — 1,25 МОЕ (международных оптических единиц)/мл, при отсутствии роста на более низких дозах. Суточные культуры этого штамма с ППС формировали плотные биопленки при посевной дозе в диапазоне от 10 до 1,25 МОЕ/мл, умеренные от 0,625 до 0,157 МОЕ/мл и слабые биопленки в дозе 0,079 МОЕ/мл. Штамм № 475а с ППС формировал плотные биопленки в диапазоне доз от 10 до 0,04 МОЕ/мл и только при дозе 0,02 МОЕ/мл формировались умеренные биопленки. Заключение. Разработан простой и информативный метод, позволяющий оценивать способность штаммов B. pertussis формировать биопленки в полистироловых планшетах. Культуры, полученные с ППС, формировали более выраженные биопленки, чем культуры с ЖПС. Выявлена повышенная способность к образованию биопленок селекционированным штаммом № 475а, по сравнению с исходным штаммом № 475.
Журн. микробиол., 2019, № 1, С. 49—53
Ключевые слова: штаммы B. pertussis, жидкая питательная среда, плотная питательная среда, биопленки
E.M.Zaytsev, M.V.Britsina, M.N.Ozeretskovskaya, N.U.Mertsalova, I.G.Bazhanova
CULTIVATION OF BORDETELLA PERTUSSIS BIOFILMS ON ABIOTIC SUBSTRATE
Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Moscow, Russia
Aim. Selection of optimal conditions for the cultivation of Bordetella pertussis biofilms and comparative assessment of the ability of different strains to form biofilms. Materials and methods. Used a vaccine strain of B. pertussis № 475 and selected from this strain strain № 475а, characterized by high virulence. Cultures of strains grown on dense nutrient medium (DNM) and liquid nutrient medium (LNM) were used as inoculates for biofilms production. The intensity of biofilms formation in round-bottom 96-well
