CC BY
23
ТРАНСПЛАНТОЛОГИЯ И ИСКУССТВЕННЫЕ ОРГАНЫ
DOI: https://doi.org/10.22263/2312-4156.2020.6.122
ПОКАЗАТЕЛИ CD3-CD16+CD56+ И CD3+CD16+CD56+ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ УДОВЛЕТВОРИТЕЛЬНОЙ ПЕРВИЧНОЙ ФУНКЦИИ ПОЧЕЧНОГО ТРАНСПЛАНТАТА
ЗЫБЛЕВА С.В., ЗЫБЛЕВ С.Л.
Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека, г. Гомель, Республика Беларусь
Вестник ВГМУ. - 2020. - Том 19, №6. - С. 122-131.
INDICATORS OF CD3"CD16+CD56+ AND CD3+CD16+CD56+ LYMPHOCYTES WITH SATISFACTORY PRIMARY KIDNEY GRAFT FUNCTION
ZYBLEVA S.V., ZYBLEV S.L.
Republican Research Center for Radiation Medicine and Human Ecology, Gomel, Republic of Belarus Vestnik VGMU. 2020;19(6):122-131.
Резюме.
Цель - изучить динамику CD3"CD16+CD56+ и CD3+CD16+CD56+ лимфоцитов у пациентов после трансплантации почки с удовлетворительной первичной функцией почечного трансплантата.
Материал и методы. 197 реципиентам выполнена трансплантация почки. Все пациенты разделены на 3 группы. Первая группа (ПФТ, n=101) - пациенты с удовлетворительной первичной функцией трансплантата без эпизодов отторжения, вторая группа (ДФТ, n=82) - пациенты с первичной дисфункцией трансплантата без эпизодов отторжения, третья группа (ОПТ, n=14) - пациенты с первичной дисфункцией трансплантата и отторжением, верифицированным на основании биопсии почечного трансплантата. Группа сравнения (ГС) - 90 здоровых добровольцев. Функция трансплантата оценивалась по следующим критериям: первичная функция трансплантата характеризовалась при уровне креатинина на 7 сутки после операции ниже 300 мкмоль/л; при концентрации креатинина равной или превышающей 300 мкмоль/л и(или), при необходимости в проведении диализа на первой неделе после трансплантации состояние классифицировалось как дисфункция почечного трансплантата. Иммунологическое обследование проводилось на 1-е, 3-и, 7-е, 30-е и 90-е сутки после операции. Определяли уровень CD3-CD16+CD56+ и CD3+CD16+CD56+ лимфоцитов.
Результаты. В группе ПФТ выявлено значимое преобладание с 3-х до 30-х суток абсолютного уровня NK только по сравнению с группой ОПТ. Относительный уровень NK был значимо выше в группе ПФТ по сравнению с группой ОПТ начиная с 30-х суток. Не выявлена связь относительного и абсолютного количества NK с уровнем креатинина на протяжении всего исследования.
Выявлен значимый рост абсолютного и относительного показателя NKT с 30-х суток в группе ПФТ по сравнению с группами ДФТ и ОПТ. Обнаружена отрицательная связь абсолютного количества NKT с уровнем креатинина на 30-е и 90-е сутки и относительного количества данных лимфоцитов с уровнем креатинина на 90-е сутки. Заключение. Результаты исследования могут быть использованы для иммунологического мониторинга в раннем посттрансплантационном периоде.
Ключевые слова: CD3'CD16+CD56+ и CD3+CD16+CD56+, трансплантация почки. Abstract.
Objectives. To study the dynamics of CD3-CD16+CD56+ and CD3+CD16+CD56+ lymphocytes in patients after kidney transplantation with satisfactory primary graft function.
Material and methods. 197 recipients underwent kidney transplantation. All patients were divided into 3 groups. The first group (PGF, n=101) consisted of patients with satisfactory primary graft function without rejection episodes, the second group (PGD, n=82) included patients with primary graft dysfunction without rejection episodes, the third group
(GR, n=14) was composed of patients with primary graft dysfunction and graft rejection verified on the basis of renal transplant biopsy. A comparison group (CG) consisted of 90 healthy volunteers. Graft function was assessed according to the following criteria: primary graft function was characterized by creatinine level below 300 ^mol/l on the 7th day after surgery; when creatinine concentration was equal to or higher than 300 ^mol/l and (or) in case of need for dialysis during the first week after transplantation, the state was classified as kidney graft dysfunction. Immunological examination was carried out on the 1st, the 3rd, the 7th, the 30th and the 90th days after the transplantation. The level of CD3-CD16+CD56+ and CD3+CD16+CD56+ lymphocytes was determined.
Results. In the PGF group, a significant predominance of the absolute NK level from the 3rd day to the 30th day was revealed only in comparison with the GR group. The relative NK level was significantly higher in the PGF group compared to the GR group beginning with the 30th day. No correlation was found between the relative and absolute NK levels and creatinine levels throughout the study. There was a significant increase in the absolute and relative NKT level beginning with the 30th day in the PGF group compared to the PGD and GR groups. A negative correlation was found between the absolute NKT level and creatinine level on the 30th and the 90th days and the relative level of these lymphocytes with the creatinine level on the 90th day.
Conclusions. The results of the study can be used for the immunological monitoring in the early post-transplantation period.
Key words: CD3-CD16+CD56+ and CD3+CD16+CD56+, kidney transplantation.
Естественные киллерные (NK) лимфоид-ные клетки являются основными компонентами врожденного иммунитета и служат первым барьером против микробной инфекции и развития опухоли. На основании интенсивности экспрессии молекулы CD56 все периферические NK-клетки человека можно разделить на два основных подмножества (CD56dim и CD56bright), причем каждая группа проявляет различные фенотипические и функциональные свойства. К основным маркерам относятся Fcy рецептор IIIa (CD16), CD6, и KIR (killer cell immunoglobulin-like receptors) которые экспрессированы на CD56dim клетках [1]. В отличие от CD56dim, субпопуляция CD56bright NK-клеток экспрессирует очень низкий уровень, менее 3%, молекул CD16 и CD6, но при этом демонстрирует более высокую плотность ингиби-торного гетеродимера CD94/NKG2A [2]. Другие поверхностные рецепторы, такие как активацион-но-зависимые маркеры CD25, CD69, HLA-DR и типичные рецепторы NK-клеток, такие как естественные рецепторы цитотоксичности (NCR), NKG2D и CD161, одинаково экспрессируются на клетках обеих субпопуляций. Помимо отчетливых различий по фенотипическим признакам, обе субпопуляции NK-клеток также отличаются разными эффекторными функциями. Общепринято, что CD56dim NK-клетки в первую очередь ответственны за цитотоксическую активность из-за их высокого содержания гранул, наполненных цитотоксинами, такими как перфорин, гранзим А и В. В то время как CD56bright постулируются регуляторами иммунных реакций, главным образом
через продукцию цитокинов, например секрецию интерферона (ИФН)-у после стимуляции интер-лейкином (Ил)-2, Ил-12 или Ил-15 [3].
Таким образом, КК-клетки являются ци-толитическими эффекторными клетками с двумя основными режимами действия. Первый - это прямой лизис человеческих клеток-мишеней, относящийся к естественной цитотоксичности. Вторым способом действия КК-клеток является лизис, индуцируемый взаимодействием между Бе-рецептором СБ16 и Бе-фрагментом антитела, которое распознает чужеродные антигены на клетках-мишенях, действие которого также называется антителозависимой клеточной цито-токсичностью. В отличие от того, что считалось несколько десятилетий назад, в настоящее время четко установлено, что 1ЧК играют определенную роль в отторжении аллотрансплантата [4]. Отсутствие на аллотрансплантате самоподдерживающихся молекул комплекса гистосовместимости I класса или активация Бе-рецептора донорспе-цифическими АТ индуцируют активность КК-клеток, приводя к прямому лизису клеток алло-трансплантата и секреции провоспалительных молекул, способствующих адаптивному иммунитету [5]. Однако функция КК-клеток, как указывалось выше, является двунаправленной. Помимо того, что они играют определенную роль в отторжении аллотрансплантата, КК-клетки также участвуют в формировании иммунологической толерантности согласно исследованиям на животных моделях. Таким образом, в последнее десятилетие статус 1ЧК-клеток перешел от «вредной роли»
к «нулевой роли», а затем и к «полезной роли» в области трансплантации. Было показано, что в экспериментальных моделях, как и в организме человека, КК-клетки оказывают благоприятное воздействие и могут быть мощными регуляторами иммунитета. Данные клетки здерживают отторжение аллотрансплантата путем снижения гомеостатической пролиферации СБ8+ Т-клеток, конкурируя за Ил15 и так же способны ингиби-ровать клональную экспансию антиген-стиму-лированных Т-клеток в дополнение к снижению уровня дендритных клеток [6].
ККТ-лимфоциты представляют уникальную популяцию клеток, экспрессирующих антигены КК-лимфоцитов (например, СБ16) и Т-клеточный рецептор (ТСЯ), и могут относиться к СБ4+ или СБ4-СБ8- фенотипу [7]. 1ЧКТ-лимфоциты распознают гликолипид агалакто-зилцерамиды (а^а1Сег) в комплексе с белками главного комплекса гистосовместимости (СБИ) на поверхности опухолевых клеток и затем уничтожают их. Кроме того, ККТ-лимфоциты угнетают активированные (аутореактивные) Т-лимфоциты, что связано с продукцией ими Ил-4. В настоящее время установлена «дефектность» ККТ лимфоцитов у пациентов с некоторыми аутоиммунными расстройствами [8].
Несмотря на активное участие КК-клеток в иммунологическом ответе после трансплантации почки, репертуар периферических КК-клеток реципиентов почки изучен недостаточно подробно. Таким образом, 1ЧК-клетки явно влияют на результат трансплантации, и одна из задач заключается в том, чтобы согласовать их роль в формировании толерантности при трансплантации почки [9].
Недавние открытия расширили понимание биологии КК-клеток и подняли важные вопросы о том, как КК-клетки влияют на результаты трансплантации. Эти данные подчеркивают необходимость разработки и тестирования новых стратегий, направленных на модуляцию КК-клеток в качестве адъювантной терапии для предотвращения повреждения трансплантата и облегчения индукции толерантности [10].
Материал и методы
Обследовано 197 пациентов, которым выполнена трансплантация почки в хирургическом отделении (трансплантации, реконструктивной и эндокринной хирургии) ГУ «РНПЦ РМиЭЧ». Исследование соответствовало критериям Хель-
синкской декларации 1975 года, одобрено комитетом по этике ГУ «РНПЦ РМиЭЧ» (протокол №5 от 02.12.2013). Пациенты сравниваемых групп не имели статистически значимых отличий по полу, возрасту, виду проводимого диализа до трансплантации и времени ишемии, что представлено в таблице 1.
Из 197 реципиентов с первично удовлетворительной функцией почечного трансплантата (ПФТ) был 101 пациент (51,27%), в группе с первичной дисфункцией (ДФТ) было 82 пациента (42,62%). В третью группу (n=14) вошли пациенты с первичной дисфункцией донорского органа и гистологически подтвержденным отторжением почечного трансплантата (ОПТ) (7,10%). В качестве группы сравнения участвовало 90 практически здоровых пациентов.
Для определения иммунологических особенностей реципиентов почечного трансплантата использовали методику проточной цитометрии с применением многократного поступательного гейтирования. Иммунологическое обследование пациентов проводилось на 1-е, 3-и, 7-е, 30-е и 90-е сутки после операции.
Методика определения относительного и абсолютного количества субпопуляций Т-лимфоцитов
Кровь брали из локтевой вены, в качестве антикоагулянта использовали ЭДТА. Определение относительного и абсолютного количества натуральных киллеров (NK) и Т-натуральных киллеров (XNK) в периферической крови проводилось в рамках исследования показателей стандартной иммунограммы. Применяли комбинацию моноклональных антител, меченных флуорохромами к поверхностным антигенам: CD3 Fitc, CD45 PerCP, CD19 APC, CD56, CD16 PE (BD, США), согласно инструкции фирмы-производителя. Инкубировали 15 минут в темноте. Для лизиса эритроцитов использовали OptiLyseB. Пробы анализировали на проточном цитофлуориметре FACS Canto II (BD, США). Накапливали не менее 30 000 событий. Гейтирова-ние проводили по клеткам с NK определяли как CD3-CD56CD16+ клетки. Клетки с иммунофено-типом CD3+CD56+CD16+ определялись как XNK периферической крови. Абсолютное значение NK и XNK получали путем математического вычисления.
Статистическая обработка результатов проводилась с помощью пакета программ Statistica
Таблица 1 - Пол и возраст пациентов, вид диализа, время ишемии в сравниваемых группах
Группа Возраст, лет, M ДИ[-95%;+95%] Пол, n (%) Вид диализа, n (%) Время ишемии, час, M ДИ [-95%;+95%]
Всего (п=197) 45,85 [44,12; 47,58] жен - 75 (38,07%), муж -122 (61,93%) ГД - 157 (79,70%) ПД - 37 (18,78%) ДД - 3 (1,52%) 12,38 [11,77; 13,00]
Группа ПФТ (п=101) 45,46 [42,92; 47,99] жен - 38 (37,62%) муж - 63 (62,38%) ГД - 76 (75,25%) ПД - 23 (22,77%) ДД - 2 (1,98%) 11,93 [11,11; 12,75]
Группа ДФТ (п=82) 46,32 [43,67; 48,97] жен - 28 (34,15%) муж - 54 (65,85%) ГД - 69 (84,15%) ПД - 12 (14,63%) ДД - 1 (1,22%) 12,58 [11,62; 13,55]
Группа ОПТ (п=14) 45,93 [39,92; 51,94] жен - 9 (64,29%) муж - 5 (35,71%) ГД - 12 (85,71%) ПД - 2 (14,29%) 13,85 [10,89; 16,81]
Сравнение показателей p=0,919 Kruskal-Wallis test p=0,100 Pearson Chi-square p=0,613 Pearson Chi-square p=0,245 Kruskal-Wallis test
10,0. Описательная статистика качественных признаков представлена абсолютными и относительными частотами, а количественных признаков — в формате: среднее (доверительный интервал) - M [Confidence -95%; +95%] и медиана (интерквартильный размах) - Me [Q25; Q75]. Для сравнения значений использовался метод числовых характеристик (Mann-Whitney U Test) с оценкой распределения переменных. Результаты считали статистически значимыми при достигнутом уровне значимости менее 0,05.
Результаты
В результате исследования получены следующие данные, представленные в таблице 2 и 3.
В 1-е сутки после операции существенной динамики зафиксировано не было (Wilcoxon Matched Pairs ТЫ р^отТ0,170, роДДФТ=0,°71, р01ОПТотн=0,214). Относительное содержание NKT лимфоцитов на 3-и сутки наблюдения в группе ПФТ значимо снизилось на 42,86%, а группах ДФТ и ОПТ стало выше на 20,00% и 80,00% соответственно (Mann-Whitney U Test р3ПФТ/
ДФТотн=0,464, р
(рис. 1).
Схожая картина отношения уровней субпопуляции CD3CD16CD56+ клеток сохранялась и на 7-е сутки, причем в группе ДФТ отмечено некоторое снижение уровня данных клеток (Mann-
3ПФТ/ОПТотн
=0,037, рзДФТ/ОПТотГ0,111)
н=0,357, р
7ПФТ/ОПТотн
=0,044,
тйпеу иТей р^т/ДФ^
р7ДФТ/ОПТотн 0,023).
К 30-м суткам относительное содержание NKT клеток во всех группах реципиентов ста-
билизовалось и значимо между собой и с группой сравнения не различалось (Mann-Whitney U
Test р30ПФТ/ДФТотн 0,356 р30ПФТ/ОПТотн 0,679 р30ДФТ/ ОПТотГ0,772, рэ^Т/гео^0,151, р30ДФТ/ГСОТН=0,697, р30ОПТ/ГСотн 0,503).
Сравнив уровень CD3+CD16+CD56+ лимфоцитов на 90-е сутки, был зафиксирован достоверный их рост в группе ПФТ, превышающий содержание данных клеток у пациентов групп ДФТ и ОПТ (Mann-Whitney U Test р9Шфт/дфт<лн<0,0001,
р90ПФТ/ОПТотн=0,041, р90ДФТ/ОПТотн=0,346).
Мониторинг абсолютного содержания NKT клеток выявил, что в 1-е и 3-и сутки после трансплантации их количество во всех группах реципиентов был ниже, чем в ГС (Mann-Whitney
U Test р1ПФТ/гсабс<0,0001, р1ДФТ/гсабс<0,0001, рЮПТ/ ГСабс<0,0001, р 3ПФТ/ГСабс 0,003, р3ДФТ/Гсабс=0,005,
р3ОПТ/ГСабс=0,012). К 90-м суткам абсолютное количество CD3CD16CD56+ лимфоцитов было выше в группе ПФТ, чем в группах ДФТ и ОПТ
(Mann-Whitney U Test P9°ПФТ/ДФТO^=0,001, р90ПФТ/ОП-Тотн=0,047, р90ДФТ/ОПТо^=0,754) (табл. 2, рис. 2).
В ранний период после ТП динамика количества CD3-CD16+CD56+ натуральных киллеров (NK) характеризовалась снижением количества клеток на 3 сутки после операции, и весь период мониторинга, кроме 1 суток, общее число NK не превышало верхней границы референтных значений (табл. 3).
В первые сутки наблюдения значимой разницы между группами и группой сравнения по уровню CD3-CD16+CD56+ лимфоцитов выявлено не было (Mann-Whitney U Test р1ПфТ/Гс=0,297,
р
1ДФТ/ГС
=0,142, р1ОПТ/Гс=0,935, р
1ПФТ/ДФТотн
=0,609,
Таблица 2 - Показатели CD3+CD16+CD56+ лимфоцитов у реципиентов почечного трансплантата и группы сравнения (Ме [025; 075])
ГС 4,20 [2,70;7,30] %
0,08 [0,05;0,18] 109/л
Сут. Ед. Группы
изм. ПФТ ДФТ ОПТ
% 7,00* 6,70* 6,60*
0 5,40;9,40 3,90;12,60 5,40;16,50
109/л 0,11 0,10 0,10
0,07;0,21 0,06;0,25 0,09;0,17
% 7,30* 5,50 5,10
1 3,40;9,70 2,70;8,70 3,30;7,30
109/л 0,01* 0,01*§ 0,00*#
0,00;0,02 0,00;0;01 0,00,0,01
% 4,60§ 6,20 9,55*
3 3,20;8,40 3,00;9,20 5,30;12,50
109/л 0,06* 0,06* 0,03*
0,03;0,09 0,02;0,10 0,01;0,17
% 5,90 5,90§ 9,60*Л
7 4,00;8,40 3,20;8,70 4,80;20,50
109/л 0,10 0,07 0,09
0,06;0,14 0,04;0,17 0,04;0,15
% 5,70 5,00 5,70
30 3,50;10,50 2,90;6,40 3,70;8,90
109/л 0,12Л 0,08# 0,04*#
0,04;0,17 0,05;0,13 0,02;0,11
% 8,60*Л 4,50# 4,90#
90 5,25;12,10 3,10;5,60 3,50;7,05
109/л 0,20*Л 0,10# 0,10#
0,08;0,24 0,08;0,14 0,09;0,12
Примечания: * - р<0,05 относительно показателей ГС; # - р<0,05 относительно показателей группы ПФТ; - р<0,05 относительно показателей группы ДФТ; § - р<0,05 относительно показателей группы ОПТ.
12
10 9,55 8,6
16 - „
4'9
4 4,5
2 0 1 3 7 30 4,2 90
сутки
ПФТ ДФТ ОПТ -ГС
Рисунок 1 - Динамика относительного количества CD3+CD16+CD56+ лимфоцитов.
РшФ1Уашътн=0>623, р1ДфТ/ОПТотн=0,544). после операции было выявлено существенное
У пациентов из группы ПФТ на 3-и сутки снижение КК на 68,75%, в группе ДФТ снижение
Таблица 3 - Показатели СВ3~СВ16СВ56+ лимфоцитов у реципиентов почечного трансплантата и группы сравнения (Ме [025; 075])
ГС 14,40 [11,00; 17,80]%
0,33 [0,21; 0,40] 109/л
Сут. Ед. Группы
изм. ПФТ ДФТ ОПТ
% 15,60§ 11,90 9,70*#
0 10,6;24,40 8,20;18,90 5,90;11,20
109/л 0,30§ 0,25 0,13*#
0,16;0,42 0,10;0,39 0,09;0,24
% 16,10 17,60 14,55
1 9,00;26,00 11,10;22,70 6,60;22,70
109/л 0,12* 0,13* 0,12*
0,06;0,21 0,09;0,20 0,03;0,20
% 5,40*§Л 13,15# 14,45#
3 3,80;12,70 11,20;17,80 10,00;18,90
109/л 0,06*Л 0,13*#§ 0,05*Л
0,03;0,14 0,06;0,20 0,02;0,13
% 8,10*§ 9,00* 10,55*#
7 6,00;10,40 5,20;11,50 9,30;12,90
109/л 0,13* 0,12* 0,10*
0,09;0,22 0,07;0,19 0,08;0,14
% 9,90* 10,70 7,55*
30 5,30;13,70 5,10;21,60 3,20;19,15
109/л 0,15* 0,14* 0,08*
0,09;0,17 0,07;0,24 0,04;0,18
% 9,20*§ 8,20*§ 5,25*#
90 5,00;13,50 5,90;15,60 2,60;6,70
109/л 0,17*§ 0,19*§ 0,09*#Л
0,12;0,28 0,10;0,35 0,02;0,10
Примечания: * - р<0,05 относительно показателей ГС; # - р<0,05 относительно показателей группы ПФТ; Л - р<0,05 относительно показателей группы ДФТ; § - р<0,05 относительно показателей группы ОПТ.
0,25
0,2 0,2
_ 0,1 0,08
90
ПФТ ДФТ ОПТ -ГС
Рисунок 2 - Динамика абсолютного количества CD3+CD16+CD56+ лимфоцитов.
было менее выраженным - на 23,53%, а в груп- (Wilcoxon Matched Pairs Test р13ПфТотн=0,0001, пе ОПТ значимой динамики выявлено не было р13ДфТ=0,065, р13ОПТотн=0,144, Mann-Whitney U
с 0,15
0,1
0,05
7
сутки
0
Test рзПфТ/ДфТотн<0,0001, рзпфт/оптотн 0,047, рздфТЛЭп-тотн=0'954) (рис. 3).
На 7-е пострансплантационные сутки снижение CD3"CD16+CD56+ лимфоцитов относительно ГС было зафиксировано во всех группах реципиентов, причем в группе ПФТ уровень данной субпопуляции был достоверно ниже, чем в группе ДФТ (Mann-Whitney U Test р7ПфТ/ГС<0,0001,
р7ДФТ/ГС<0,0001, Р 7ОПТ/ГС 0,°48, р7ПФТ/ДФТотГ0,894, р7ПФТ/ОПТотн_0,040, р7ДФТ/ОПТотн_0,115).
При проведении сравнительного анализа на 90-е сутки выявлены достоверные различия между группой сравнения и группами реципиентов почечного трансплантата (Mann-Whitney U Test
р^ПФТ/гс^001, р90ДФТ/гс=0,008, р^ОПТ/г^0,0001).
Также выявлены значимые различия между группами ПФТ и ДФТ с группой ОПТ (Mann-Whitney
U Test р90ПФТ/ДФТотн 0,870 р90ПФТ/0ПТотн 0,023, р90ДФТ/ 0ПТотн=0,046).
Уровень абсолютного содержания CD3-CD16+CD56+ лимфоцитов в группах ПФТ, ДФТ и ОПТ был ниже, чем в группе сравнения весь ранний пострансплантационный период (MannWhitney U Test р1ПФТ/гсабс<0,0001, р1ДФТ/ГСабс<0,0001,
р10ПТ/гсабс<0,0001, рзПФТ/гсабс<0,0001, рз
зДФТ/
гсабс<0'0001, РзОПТ/ГСабс<0,0001, р7ПфТ/ГСа6с<0,0001, Р7ДФТ/ГСа6с<0,0001, Р7опт/гСабс<0,0001, Рз0ПФТ/ ГСабс<0,0001, Рз0ДФТ/ГСабс<0,0001, Рз0ОПТ/ГСаб<0,0001)-
На 90-е сутки наблюдения в группе ПФТ и ДФТ уровень NK был значимо ниже чем в группе ПФТ
90ПФТ/ДФТабс
и ГС (Mann-Whitney U Test р,
р90ПФТ/0ПТабс 0,003 P9°ДФТ/ОПТaбс=0,012, р Гсабс<0,0001, р9ОДФТ/ГСабс=0,008, В
(рис. 4).
=0,334,
900ПТ/ГСабс
90ПФТ/ <0,0001)
20 18 16 14 12 ' 10 8 6 4 2 0
7
сутки
30
90
ПФТ • ДФТ
ОПТ -ГС
Рисунок 3 - Динамика относительного количества CD3-CD16+CD56+ лимфоцитов.
- 0,33
0,35 0,3 0,25 0,2 ' 0,15 0,1 0,05 0
7
сутки
30
90
ПФТ -О— ДФТ ОПТ -ГС
Рисунок 4 - Динамика абсолютного количества CD3-CD16+CD56+ лимфоцитов.
3
3
Обсуждение
В исследовании Sagoo P. с соавт. сообщается, что у толерантных реципиентов почечного трансплантата наблюдается увеличение уровня В- и NK-лимфоцитов, снижение активированных CD4+ Т-клеток, отсутствие донорспецифических антител, донорспецифическая гипореактивность CD4+ Т-клеток и высокое соотношение FoxP3 к экспрессии гена Альфа-1,2-маннозидазы [11]. Некоторые исследователи описали связь иммунологической толерантности после трансплантации печени преимущественно с NK-клетками и у5-Т-клетками в крови и генами, ассоциированными с гомеостазом железа в трансплантате. Так, толерантные реципиенты демонстрировали повышенное содержание NK-клеток на фоне снижения уровня v52 у5 Т-клеток [12].
Другие экспериментальные сообщения указывали на то, что NK-клетки здерживают отторжение аллотрансплантата за счет снижения регуляции гомеостатической пролиферации CD8+ Т-клеток [13]. Представления о роли NK-клеток в трансплантологии были дополнены открытием Yu G. И соавт., что NK-клетки необходимы для индукции толерантности, а их истощение (но не NKT-клеток) препятствовало развитию иммунологической толерантности к островковым и кожным аллотрансплантатам [14]. В исследованиях Deniz G. и соавт., показывают, что NK-клетки могут ингибировать или модулировать местные иммунные реакции посредствам синтеза Ил-10 [15]. Однако точные механизмы, контролирующие повреждение трансплантата, опосредованное NK-клетками, в сравнении с индукцией иммунологической толерантности, расшифрованы в полной мере не были. Более глубокое понимание этих вопросов может иметь существенное значение при разработке методов лечения, направленных на продление выживаемости трансплантата. Тот факт, что NK-клетки могут одновременно выполнять как про-, так и противовоспалительные действия, представляет собой серьезную проблему в определении точной роли NK-клеток в индукции отторжения трансплантата и иммунологической толерантности [10]. Так, по нашим данным в группе ПФТ наблюдалось значимое преобладание с 3-х суток до 3-х месяцев абсолютного уровня NK по сравнению с показателями только группы ОПТ. Относительный уровень NK был значимо выше в группе ПФТ по сравнению с группой ОПТ начиная с 30-х суток. Кроме
того, корреляционный анализ не выявил связь относительного и абсолютного количества CD3-CD16+CD56+ лимфоцитов с уровнем креатинина на протяжении всего исследования.
Что касается натуральных супрессоров (NKT), которые являются неспецифическими блокаторами Т-лимфоцитов и дендритных клеток, нами выявлен значимый рост абсолютного и относительного уровня данных клеток, четко ассоциированный с удовлетворительной функцией почечного трансплантата. Отмечен значимый рост абсолютного и относительного показателя NKT клеток с 30-х суток посттрансплантационного периода в группе реципиентов с ПФТ по сравнению с уровнем групп ДФТ и ОПТ. Следует отметить, что корреляционный анализ выявил отрицательные связи абсолютного количества CD3+CD16+CD56+ лимфоцитов с уровнем креатинина на 30-е и 90-е сутки и относительного количества данных лимфоцитов с уровнем креатини-на на 90-е сутки (Spearman Rank Order Correlations
r30CD3+CD16+CD56+абс/30креатинин 0,347 р=0,000264, r90CD3
+CD16+CD56+ б /90 =-0,295, р=0,001095, r9(
+CD16+CD56+абс/90креатинин ' ' ^ •> ' 9(
CD56+отн/90креатинин 0,398 р 0,000003).
90CD3+CD16+
Заключение
1. В группе реципиентов с первично функционирующим почечным трансплантатом выявлен рост абсолютного и относительного уровня СВ3+СВ16+СБ56+ лимфоцитов (1ЧКТ) с 30-х суток посттрансплантационного периода.
2. Определена отрицательная связь абсолютного количества СВ3СВ16СВ56+ лимфоцитов с уровнем креатинина на 30-е и 90-е сутки и относительного количества данных лимфоцитов с уровнем креатинина на 90-е сутки.
3. Не обнаружена связь относительного и абсолютного количества СВ3-СВ16+СБ56+ лимфоцитов (КК) с уровнем креатинина на протяжении всего исследования.
4. Результаты исследования могут быть использованы для иммунологического мониторинга в раннем посттрансплантационном периоде.
Литература
1. The CD6 scavenger receptor is differentially expressed on a CD56 natural killer cell subpopulation and contributes to natural killer-derived cytokine and chemokine secretion / M. Braun [et al.] // J. Innate Immun. - 2011. - Vol. 3, N 4. - P. 420-434.
2. CD94 surface density identifies a functional intermediary
between the CD56bright and CD56dim human NK-cell subsets / J. Yu [et al.] // Blood. - 2010 Jan. - Vol. 115, N 2. - P. 274-281.
3. The Peripheral NK Cell Repertoire after Kidney Transplantation is Modulated by Different Immunosuppressive Drugs / C. Neudoerfl [et al.] // Front Immunol. - 2013 Feb. - Vol. 4. - P. 46.
4. Rajalingam, R. The impact of HLA class I-specific killer cell immunoglobulinlike receptors on antibody-dependent natural killer cell-mediated cytotoxicity and organ allograft rejection / R. Rajalingam // Front Immunol. - 2016 Dec. -Vol. 7. - P. 585.
5. Hadad, U. NK cells after transplantation: friend or foe / U. Hadad, O. Martinez, S. M. Krams // Immunol. Res. - 2014 May. - Vol. 58, N 2/3. - P. 259-267.
6. Natural killer cells recruited into lymph nodes inhibit alloreactive T-cell activation through perforin-mediated killing of donor allogeneic dendritic cells / S. Laffont [et al.] // Blood. - 2008 Aug. - Vol. 112, N 3. - P. 661-671.
7. Godfrey, D. I. Going both ways: Immune regulation via CD Id-dependent NKT cells / D. I. Godfrey, M. Kronenberg // J. Clin. Invest. - 2004 Nov. - Vol. 114, N 10. - P. 1379-1388.
8. Testing the NKT cell hypothesis of human IDDM pathogenesis / P. T. Lee [et al.] // J. Clin. Invest. - 2002 Sep.
- Vol. 110, N 6. - P. 793-800.
9. Broad impairment of natural killer cells from operationally tolerant kidney transplanted patients / E. Dugast [et al.] // Front Immunol. - 2017 Dec. - Vol. 8. - P. 1721.
10. Bromberg, J. S. Evolving paradigms that determine the fate of an allograft / J. S. Bromberg, P. S. Heeger, X. C. Li // Am. J. Transplant. - 2010 May. - Vol. 10, N 5. - P. 1143-1148.
11. Development of a crossplatform biomarker signature to detect renal transplant tolerance in humans / P. Sagoo [et al.] // J. Clin. Invest. - 2010 Jun. - Vol. 120, N 6. - P. 1848-1861.
12. Newell, K. A. Tolerance signatures in transplant recipients / K. A. Newell, L. A. Turka // Curr. Opin Organ. Transplant. -2015 Aug. - Vol. 20, N 4. - P. 400-405.
13. Association of peripheral NK cell counts with Helios+ IFN-y- Tregs in patients with good long-term renal allograft function / K. Trojan [et al.] // Clin. Exp. Immunol. - 2017 Jun. - Vol. 188, N 3. - P. 467-479.
14. NK cells promote transplant tolerance by killing donor antigen-presenting cells / G. Yu [et al.] // J. Exp. Med. - 2006 Aug. - Vol. 203, N 8. - P. 1851-1858.
15. Regulatory NK cells suppress antigen-specific T cell responses / G. Deniz [et al.] // J. Immunol. - 2008 Jan. - Vol. 180, N 2. - P. 850-857.
Поступила 28.09.2020 г.
Принята в печать 11.12.2020 г.
References
1. Braun M, Müller B, ter Meer D, Raffegerst S, Simm B, Wilde S, et al. The CD6 scavenger receptor is differentially expressed on a CD56 natural killer cell subpopulation and contributes to natural killer-derived cytokine and chemokine secretion. J Innate Immun. 2011;3(4):420-34. doi: 10.1159/000322720
2. Yu J, Mao HC, Wei M, Hughes T, Zhang J, Park I, et al. CD94 surface density identifies a functional intermediary between the CD56bright and CD56dim human NK-cell subsets. Blood. 2010 Jan;115(2):274-81. doi: 10.1182/ blood-2009-04-215491
3. Neudoerfl C, Mueller BJ, Blume C, Daemen K, Stevanovic-Meyer M, Keil J, et al. The Peripheral NK Cell Repertoire after Kidney Transplantation is Modulated by Different Immunosuppressive Drugs. Front Immunol. 2013 Feb;4:46. doi: 10.3389/fimmu.2013.00046
4. Rajalingam R. The impact of HLA class I-specific killer cell immunoglobulinlike receptors on antibody-dependent natural killer cell-mediated cytotoxicity and organ allograft rejection. Front Immunol. 2016 Dec;7:585. doi: 10.3389/ fimmu.2016.00585
5. Hadad U, Martinez O, Krams SM. NK cells after transplantation: friend or foe. Immunol Res. 2014 May;58(2-3):259-67. doi: 10.1007/s12026-014-8493-4
6. Laffont S, Cyril S, Ortaldo J, Coudert JD, Guery J-C. Natural killer cells recruited into lymph nodes inhibit alloreactive T-cell activation through perforin-mediated killing of donor allogeneic dendritic cells. Blood. 2008 Aug;112(3):661-71. doi: 10.1182/blood-2007-10-120089
7. Godfrey DI, Kronenberg M. Going both ways: Immune regulation via CD Id-dependent NKT cells. J Clin Invest. 2004 Nov;114(10):1379-88. doi: 10.1172/JCI23594
8. Lee PT, Putnam A, Benlagha K, Teyton L, Gottlieb PA,
Bendelac A. Testing the NKT cell hypothesis of human IDDM pathogenesis. J Clin Invest. 2002 Sep;110(6):793-800. doi: 10.1172/JCI15832
9. Dugast E, David G, Oger R, Danger R, Judor J-P, Gagne K, et al. Broad impairment of natural killer cells from operationally tolerant kidney transplanted patients. Front Immunol. 2017 Dec;8:1721. doi: 10.3389/fimmu.2017.01721
10. Bromberg JS, Heeger PS, Li XC. Evolving paradigms that determine the fate of an allograft. Am J Transplant. 2010 May;10(5):1143-8. doi: /10.1111/j.1600-6143.2010.03033.x
11. Sagoo P, Perucha E, Sawitzki B, Tomiuk S, Stephens DA, Miqueu P, et al. Development of a crossplatform biomarker signature to detect renal transplant tolerance in humans. J Clin Invest. 2010 Jun; 120(6):1848-61. doi: 10.1172/JCI39922
12. Newell KA, Turka LA. Tolerance signatures in transplant recipients. Curr Opin Organ Transplant. 2015 Aug;20(4):400-5. doi: 10.1097/M0T.0000000000000207
13. Trojan K, Zhu L, Aly M, Weimer R, Bulut N, Morath C, et al. Association of peripheral NK cell counts with Helios+ IFN-y- Tregs in patients with good long-term renal allograft function. Clin Exp Immunol. 2017 Jun;188(3):467-479. doi: 10.1111/cei.12945
14. Yu G, Xu X, Vu MD, Kilpatrick ED, Li XC. NK cells promote transplant tolerance by killing donor antigen-presenting cells. J Exp Med. 2006 Aug;203(8):1851-8. doi: 10.1084/jem.20060603
15. Deniz G, Erten G, Can Kücüksezer U, Kocacik D, Karagiannidis C, Aktas E, et al. Regulatory NK cells suppress antigen-specific T cell responses. J Immunol. 2008 Jan;180(2):850-7. doi: 10.4049/jimmunol.180.2.850
Submitted 28.09.2020 Accepted 11.12.2020
Сведения об авторах:
Зыблева С.В. - к.м.н., ученый секретарь, врач-иммунолог, Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека, ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3061-5324;
Зыблев С.Л. - к.м.н., доцент, врач-хирург хирургического отделения (трансплантации, реконструктивной и эндокринной хирургии), Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека, ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0968-6630.
Information about authors:
Zybleva S.V. - Candidate of Medical Sciences, academic secretary, immunologist, Republican Research Center for Radiation Medicine and Human Ecology; ORCID: https://orcid.org/0000-0003-3061-5324;
Zyblev S.L. - Candidate of Medical Sciences, associate professor, surgeon of the surgical department (transplantation, reconstructive and endocrine surgery), Republican Research Center for Radiation Medicine and Human Ecology, ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0968-6630.
Адрес для корреспонденции: Республика Беларусь, 246000, г. Гомель, ул. Ильича, 290, Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека, научный отдел. E-mail: zyb-svetlana@yandex.by - Зыблева Светлана Валерьевна.
Correspondence address: Republic of Belarus, 246000, Gomel, 5 Ilicha str., Republican Research Center for Radiation Medicine and Human Ecology, Scientific Department. E-mail: zyb-svetlana@yandex.by - Svetlana V. Zybleva.
