CC BY
15
гноз ее развития на 2020-2025 гг. // Проблемы особо опасных инфекций. 2020. № 1. С. 43-50.
5. Путинцева Е.В., Удовиченко С.К., Боро-дай Н.В. [и др.]. Особенности эпидемиологической ситуации по лихорадке Западного Нила в Российской Федерации в 2020 г. и прогноз ее развития в 2021 г. // Проблемы особо опасных инфекций. 2021. № 1. С. 63-72.
razvitiya na 2020-2025 gg. // Problemy osobo opasnyh infekcij. 2020. № 1. S. 43-50.
5. Putinceva E.V., Udovichenko S.K., Borodaj N.V. [i dr.]. Osobennosti epidemiologicheskoj situacii po lihoradke Zapadnogo Nila v Rossijskoj Federacii v 2020 g. i prognoz ee razvitiya v 2 021 g. // Problemy osobo opasnyh infekcij. 2021. № 1. S. 63-72.
Смелянский Владимир Петрович - кандидат медицинских наук, доцент, ведущий научный сотрудник лаборатории эпидемиологического анализа и противоэпидемического обеспечения; Жуков Кирилл Вадимович - кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник лаборатории эпидемиологического анализа и противоэпидемического обеспечения; Фомина Валерия Константиновна, научный сотрудник сектора эпизоотологического мониторинга; Несговорова Анна Владимировна - научный сотрудник сектора эпизоотологического мониторинга; Никитин Дмитрий Николаевич - научный сотрудник лаборатории эпидемиологического анализа и противоэпидемического обеспечения; ФКУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора.
УДК 577.29
Содоваров И.С., Хаснатинов М.А., Данчинова Г.А.
ФГБНУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека», Иркутск, Россия
ПОИСК И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПРОТИВОВИРУСНЫХ МОЛЕКУЛ ИЗ TERMINALIA CHEBULA К ВИРУСУ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА
Проведена работа по очистке целевых компонентов, обладающих вирус ингибирующей активностью в отношении вируса клещевого энцефалита (ВКЭ). Полученные данные позволяют предположить наличие нескольких ингибирующих компонентов в составе водного экстракта Terminalia chebula. Наличие вещества в 635 а.е.м. с ингибирующими свойствами было показано для двух отдельных видов хроматографирования. В дальнейшем планируется подтверждение биологической активности для двух потенциальных веществ.
Ключевые слова: клещевой энцефалит, противовирусная активность, хроматография, масс-спектрометрия.
Solovarov I.S., Khasnatinov M.A., Danchinova G.A.
FGBNU Scientific Center for family Health and Human Reproduction, Irkutsk, Russia
SEARCH AND IDENTIFICATION OF ANTIVIRAL MOLECULES FROM TERMINALIA CHEBULA TO THE TICK-BORNE ENCEPHALITIS VIRUS
In this study we tried to purify target components having virus inhibition activity against tick-borne encephalitis virus (TBE). The obtained data suggest the presence of not one, but several inhibitory compounds in the water extract of the Terminalia chebula. In two separate types of liquid chromatography we have shown the presence of substance in a
ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫЕ ИНФЕКЦИИ И ИНВАЗИИ
635 a.m.u., possessing inhibitory properties. In the prospect work we plan to confirm the biological activity for two potential substances.
Keywords: tick-borne encephalitis, antiviral activity, chromatography, mass spectrometry.
Вирус клещевого энцефалита (ВКЭ) -один из РНК-содержащих вирусов семейства Флавивирус, передающийся человеку через укусы клещей [7]. Вызываемое вирусом заболевание - клещевой энцефалит - характеризуется широким полиморфизмом клинических проявлений от стертых и бессимптомных форм до тяжелых случаев, сопровождающихся поражением центральной нервной системы, параличами и высоким уровнем смертности [3,9]. Единственным эффективным постэкспозиционным средством для профилактики и лечения на территории Российской федерации является иммуноглобулин от иммунизированных доноров, который в свою очередь обладают рядом критических недостатков. В научной литературе описано много веществ, выделенных из растений, которые применяются как лекарственные препараты или находятся на стадии тестирования. В качестве альтернативной замены существующим средствам борьбы против ВКЭ, также рассматриваются новые противовирусные препараты на основе растительных экстрактов [12, 10, 4, 11, 6, 1, 8].
Ранее нами было показано наличие ви-рус-ингибирующей активности в отношении ВКЭ цельного водного экстракта Terminalia chebula (Retz.) [2]. В этой работе мы попытались провести фракционирование и идентификацию активных компонентов экстракта. Использованный в работе изолят вирус клещевого энцефалита 92М относится к сибирскому субтипу. Оценка вирусингибирующих свойств полученных от разделения фракций проводилась согласно протоколу E. Gould [5]. Пассирование и определение концентрации инфекционного вируса проводили на клеточной линии почек эмбриона свиньи (СПЭВ) на среде RPMI1640, с добавлением антибиотиков и 5% фетальной телячьей сыворотки. Концентрацию инфекционного вируса в экспериментах определяли титрованием, с подсчетом бляшкообразующих единиц (БОЕ) и выражали в виде десятичного логарифма БОЕ на миллилитр суспензии. Все эксперименты по определению ингибирования проводились в трех повторах с использованием иммуноглобулина человека и бидистиллиро-ванной воды в качестве положительного и отрицательного контроля.
Хроматографическое разделение водного экстракта Terminalia chebula проводили с помощью гель-фильтрации на Сефадексе G-50 и на силикагеле Silica gel 60, 0.032-0.063 mm (230-450 mesh) в различных органических растворителях (ацетон, ацетонитрил и вода). На сефадексе не удалось разделить компоненты экстракта по их антивирусной активности. При разделении на силикагеле с использованием 85 % ацетона в качестве подвижной фазы удалось разделить и выделить фракции, обладающие выраженной противовирусной активностью. Масс-спектрометрический анализ фракций показал сильную положительную корреляцию между противовирусной активностью и концентрацией иона 635 а.е.м. (г = 0,92, p < 0,05). Картина фрагментации иона 635 указывает на два вещества, которые могут давать родительский ион с такой массой - корилагин и тригаллоилглюкоза.
Для увеличения качества разделения экстракта и подтверждения найденной корреляции, было решено провести разделение с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Высокоэффективное разделение проводилось на приборе Agilent 1200, на обращено-фазовой колонке Thermo Acclain 120 C18. Разделение проводили в течение 80 минут, подача элюента проводилась в изократическом режиме, с добавлением 0,1 % муравьиной кислоты и скоростью подвижной фазы 0,5 мл/мин Объем загрузки 1 % экстракта препаративного образца был 50 мкл. Сбор фракций от разделения проводился каждые 30 сек, по 250 мкл. Полученные фракции выпаривали и растворяли в дистиллированной воде. После чего проводили оценку активности фракций с вирусом. Фракции с наиболее высокими значениями ингибирования анализировались с помощью масс спектрометрии. Получение спектр масс проводили на приборе Agilent 6210 TOF MS, ионизация осуществлялась электрораспылением. Соотношение массы и заряда оценивалось в диапазоне 70-3200 m/z, в отрицательном режиме.
В результате были получены значения ингибирования ВКЭ от 125 фракций среди которых выделено четыре области с максимальным вирус ингибирующим значением -
35 фракция, 39 фракция, фракции 46, 47 и фракции 86-89. Во фракциях 86-89 был обнаружен ион с массой 635 а.е.м., идентичный иону, наблюдавшемуся при разделении на си-
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Макаренкова И.Д., Крылова Н.В., Леонова Г.Н., Беседнова Н.Н. [и др.]. Протективное действие фукоидана из морской бурой водоросли Laminaria japónica при экспериментальном клещевом энцефалите. Тихоокеанский медицинский журнал. 2009; (3). С. 89-92.
2. Соловаров И.С., Хаснатинов М.А., Данчинова Г.А., Ляпунов А.В. [и др.]. Оценка вируснейтрализую-щих свойств днк-аптамеров и экстрактов лекарственных растений в отношении вируса клещевого энцефалита. Acta Biomedica Scientifica. 2017; 2(1) С. 84-88. URL: https://doi.org/10.12737/article_5955e6b5aad2e3.30269730
3.Burke D.S., Monath T.P. Flaviviruses. In: Knipe DM, Howley PM, editors. Fields Virology. Lippincott-Williams & Wilkins, Philadelphia, PA; 2001: P. 1043-1125
4.Cesar G.Z., Alfonso M.G., Marius M.M., Elizabeth E.M., Angel C.B., Maira H.R. [et al.]. Inhibition of HIV-1 reverse transcriptase, toxicological and chemical profile of Calophyllum brasiliense extracts from Chiapas, Mexico. Fitoterapia. 2011; 82 (7). P. 1027-34. D0I:10.1016/j.fitote.2011.06.006.
5.Gould E.A., Clegg JCS. Growth, titration and purification of togaviruses. In: Mahy BWJ, editor. Virology: A Practical Approach. IRL Press Ltd., Oxford; 1985. P. 43-48.
6.Intisar A., Zhang L., Luo H., Kiazolu J.B., Zhang R., Zhang W. Anticancer constituents and cytotox-ic activity of methanol-water extract of Polygonum bis-torta L. Afr J Tradit Complement Altern Med. 2012;1. P. 53-9.
7.Kaiser R. Tick-Borne Encephalitis // Infect. Dis. Clin. N. Am. 2008. Vol. 22. No. 3. P. 561-575.
8. Krylova N.V., Leonova G.N., Popov A.M., Ar-tiukov A.A., Kozlovskaia É.P. [Investigation of luromar-in efficacy on mice with experimental tick-borne encephalitis]. Antibiot Khimioter. 2011; 56 (7-8):13-5. Russian.Gould EA, Clegg JCS. Growth, titration and purification of togaviruses. In: Mahy BWJ, editor. Virology: A Practical Approach. IRL Press Ltd., Oxford; 1985. P. 43-48.
9.Lindenbah B.D., Rice C.M. Molecular biology of flaviviruses. Adv Virus Res. 2003; 59. P. 23-61.
10. Lubbe A., Seibert I., Klimkait T., van der Kooy F. Ethnopharmacology in overdrive: the remarkable anti-HIV activity of Artemisia annua. J Ethnophar-macol. 2012; 141 ( 3). P. 854-9. D0I:10.1016/j.jep.2012.03.024.
11. Yu J.S., Kim J.H., Lee S., Jung K., Kim K.H., Cho J.Y. Src/Syk-Targeted Anti-Inflammatory Actions of Triterpenoidal Saponins from Gac (Momordi-ca cochinchinensis) Seeds. Am J Chin Med. 2017:45 (3). P. 459-473. DOI: 10.1142/S0192415X17500288.
ликагеле. В дальнейшем планируется идентификация остальных компонентов, входящих в активные фракции, и проверка биологической активности идентифицированных веществ.
REFERENCES
1. Makarenkova I.D., Krylova N.V., Leonova G.N., Besednova N.N. [i dr.]. Protektivnoe dejstvie fu-koidana iz morskoj buroj vodorosli Laminaria japonica pri eksperimental'nom kleshchevom encefalite. Ti-hookeanskij medicinskij zhurnal. 2009; (3). S. 89-92.
2. Solovarov I.S., Hasnatinov M.A., Danchinova G.A., Lyapunov A.V. [i dr.]. Ocenka virusnejtralizuyush-chih svojstv dnk-aptamerov i ekstraktov lekarstvennyh ras-tenij v otnoshenii virusa kleshchevogo encefalita. Acta Biomedica Scientifica. 2017; 2(1) S. 84-88. URL : https://doi.org/10.12737/article_5955e6b5aad2e3.30269730.
3. Burke D.S., Monath T.P. Flaviviruses. In: Knipe DM, Howley PM, editors. Fields Virology. Lippincott-Williams & Wilkins, Philadelphia, PA; 2001: P. 1043-1125
4. Cesar G.Z., Alfonso M.G., Marius M.M., Elizabeth E.M., Angel C.B., Maira H.R. [et al.]. Inhibition of HIV-1 reverse transcriptase, toxicological and chemical profile of Calophyllum brasiliense extracts from Chiapas, Mexico. Fitoterapia. 2011; 82 (7). P. 1027-34. D0I:10.1016/j.fitote.2011.06.006.
5. Gould E.A., Clegg JCS. Growth, titration and purification of togaviruses. In: Mahy BWJ, editor. Virology: A Practical Approach. IRL Press Ltd., Oxford; 1985. P. 43-48.
6.Intisar A., Zhang L., Luo H., Kiazolu J.B., Zhang R., Zhang W. Anticancer constituents and cytotoxic activity of methanol-water extract of Polygonum bistorta L. Afr J Tradit Complement Altern Med. 2012;1. P. 53-9.
7. Kaiser R. Tick-Borne Encephalitis // In-fect. Dis. Clin. N. Am. 2008. Vol. 22. No. 3. P. 561-575.
8. Krylova N.V., Leonova G.N., Popov A.M., Ar-tiukov A.A., Kozlovskaia E.P. [Investigation of luromar-in efficacy on mice with experimental tick-borne encephalitis]. Antibiot Khimioter. 2011; 56 (7-8):13-5. Russian.Gould EA, Clegg JCS. Growth, titration and purification of togaviruses. In: Mahy BWJ, editor. Virology: A Practical Approach. IRL Press Ltd., Oxford; 1985. P. 43-48.
9. Lindenbah B.D., Rice C.M. Molecular biology of flaviviruses. Adv Virus Res. 2003; 59. P. 23-61.
10. Lubbe A., Seibert I., Klimkait T., van der Kooy F. Ethnopharmacology in overdrive: the remarkable anti-HIV activity of Artemisia annua. J Ethnophar-macol. 2012; 141 (3). P. 854-9. D0I:10.1016/j.jep.2012.03.024.
11. Yu J.S., Kim J.H., Lee S., Jung K., Kim K.H., Cho J.Y. Src/Syk-Targeted Anti-Inflammatory Actions of Triterpenoidal Saponins from Gac (Momordica cochinchinensis) Seeds. Am J Chin Med. 2017:45 (3). P. 459-473. DOI: 10.1142/S0192415X17500288.
ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫЕ ИНФЕКЦИИ И ИНВАЗИИ
12. Weiss H.J., Aledort LM. Impaired platelet/connective-tissue reaction in man after aspirin ingestion. Lancet. 1967; 2 (7514):495-7.
12. Weiss H.J., Aledort LM. Impaired platelet/connective-tissue reaction in man after aspirin ingestion. Lancet. 1967; 2 (7514):495-7.
Соловаров Иннокентий Сергеевич - младший научный сотрудник лаборатории трансмиссивных инфекций; Хаснатинов Максим Анатольевич - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории трансмиссивных инфекций; Данчинова Галина Анатольевна - доктор биологических наук, руководитель лаборатории трансмиссивных инфекций; ФГБНУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека»
УДК 616.9-036.21:576.895.42
Сорокина Ю.В., Коренберг Э.И., Нефедова В.В., Ковалевский Ю.В.
ФГБУ «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н. Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Россия
КЛЕЩ IXODES TRIANG ULICEPS BIR. КАК ВОЗМОЖНОЕ ЗВЕНО ЦИРКУЛЯЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ОБЛИГАТНО-ТРАНСМИССИВНЫХ ИНФЕКЦИЙ В ЛЕСНЫХ СОЧЕТАННЫХ ПРИРОДНЫХ ОЧАГАХ ВОСТОЧНОЙ ЕВРОПЫ
В результате многолетних исследований нимфы клеща Ixodes trianguliceps Bir., собранные с мелких грызунов, были проверены на наличие ДНК возбудителей ряда облигатно-трансмиссивных инфекций. Среди положительных на Babesia microti образцов встречались как генотип US, так и Munich. В образцах, положительных на Anaplasma phagocytophilum, была выявлена ДНК Anaplasma sp. Japan. Также в нимфах обнаружена ДНК B. garinii и B. afzelii, но не Ehrlichia muris. Эти данные косвенно свидетельствуют о важной роли мелких млекопитающих - хозяев I. trianguliceps в паразитарных системах возбудителей в лесных экосистемах
Ключевые слова Ixodes trianguliceps Bir., Anaplasma phagocytophilum, Babesia microti, Ehrlichia muris, Borrelia afzelii, Borrelia garinii.
Sorokina Yu.V., Korenberg E.I., Nefedova V.V., Kovalevskii Yu.V.
FSBI "National Research Center for Epidemiology and Microbiology named after the honorary academician N.F. Gamaleya" of the Ministry of Health of the Russian Federation, Moscow, Russia
IXODES TRIANGULICEPS AS A POSSIBLE PART OF CIRCULATION OF TICK-BORNE OBLIGATE INFECTION IN EASTERN EUROPEAN MIXED FOREST FOCI
