CC BY
21
DOI: 10.29413/ABS.2021-6.1.8
Противовирусные свойства водных экстрактов мицелия Inonotus rheades (Pers.) P. Karst. (1882) в отношении вируса клещевого энцефалита in vitro определяются субстратом выращивания
Хаснатинов М.А. 1, Горностай Т.Г. 2, Соловаров И.С. 1, Полякова М.С. 2, Данчинова Г.А. 1, Боровский Г.Б. 2
1 ФГБНУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека» (664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева 16, Россия); 2 ФГБУН Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН (664033, г. Иркутск, ул. Лермонтова, 132, Россия)
Автор, ответственный за переписку: Хаснатинов Максим Анатольевич, e-mail: [email protected]
резюме
Обоснование. Вирус клещевого энцефалита, передающийся человеку при укусах иксодовых клещей, является одним из наиболее опасных и эпидемически значимых возбудителей инфекционных заболеваний в Российской Федерации. При этом существует потребность в эффективных противовирусных средствах для лечения и профилактики этой инфекции. Ксилотрофные базидиомицеты широко используются в качестве исходного сырья при поиске новых биологически активных субстанций, в том числе противовирусных средств. Ранее нами было показано, что водные экстракты мицелия Inonotus rheades обладают противовирусной активностью в отношении вируса клещевого энцефалита, однако природа этого действия остаётся неясной.
Цель исследования. Проанализировать взаимосвязь между вирулицидными свойствами экстракта I. rheades и субстратом, на котором велось культивирование.
Методы. Мицелий получали в стерильныхусловиях двумя разными способами - на стандартной жидкой среде с суслом и на древесных дисках берёзы. Из образцов мицелия приготавливали экстракты водорастворимых полисахаридов. Концентрацию инфекционного вируса клещевого энцефалита оценивали методом титрования бляшкообразующих единиц (БОЕ). Вирус клещевого энцефалита в количестве ЗО ООО БОЕ смешивали с равным объёмом соответствующего экстракта I. rheades в концентрации 8 мг/мл и инкубировали ЗО мин при 37 °С. После этого определяли остаточную инфекционность вируса клещевого энцефалита в сравнении с идентичным образцом вируса, инкубированным с равным объёмом воды. Результаты. Обработка вируса клещевого энцефалита экстрактом мицелия I. rheades, выращенного на дисках берёзы, приводит к полной инактивации вируса. Однако экстракт I. rheades, выращенный на среде с суслом, не обладает противовирусными свойствами.
Заключение. Можно предположить, что вирулицидные вещества не являются основными метаболитами мицелия исследуемого гриба, а, вероятно, являются побочными продуктами разложения древесины.
Ключевые слова: противовирусная активность, Inonotus rheades, вирус клещевого энцефалита, древесина берёзы
Для цитирования: Хаснатинов М.А., Горностай Т.Г., Соловаров И.С., Полякова М.С., Данчинова Г.А., Боровский Г.Б. Противовирусные свойства водных экстрактов мицелия Inonotus rheades (Pers.) P. Karst. (1882) в отношении вируса клещевого энцефалита in vitro определяются субстратом выращивания. Acta biomedica scientifica. 2021; 6(1): 55-59. doi: 10.29413/ ABS.2021-6.1.8.
Antiviral Properties of Water Extracts of Mycelium Inonotus rheades (Pers.) P. Karst. (1882) against the Virus of Tick-Borne Encephalitis Virus in vitro
Khasnatinov M.A. 1, Gornostai T.G. 2, Solovarov I.S. 1, Polyakova M.S. 2, Danchinova G.A. 1, Borovskii G.B. 2
1 Scientific Centre for Family Health and Human Reproduction Problems (Timiryaseva str. 16, Irkutsk 664003, Russian Federation); 2 Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry SB RAS (Lermontova str. 132, Irkutsk 664033, Russian Federation)
Corresponding author: Khasnatinov Maxim Anatolievich, e-mail: [email protected]
Abstract
Background. Tick-borne encephalitis virus is dangerous and widespread pathogen that is transmitted to humans through the bites of hard ticks. Wildfungi, such asxylotrophic basidiomycetes, are widely used in traditional medicine to treat the infectious diseases and are promising natural sources of new antiviral agents. It was previously shown that aqueous extracts from the mycelium of the Inonotus rheades (Pers.) P. Karst. (1882) fungus exhibit significant antiviral activity against tick-borne encephalitis virus, however, the mechanisms of this activity remain unclear. Aim. To analyze the relationship between the virucidal properties of I. rheades extract and the substrate on which the cultivation was carried out.
Materials and methods. The mycelium was grown either in a standard liquid medium with wort or on wooden disks from birch. Extracts of water-soluble polysaccharides were prepared from both mycelium samples. The concentration of infectious tick-borne encephalitis virus was determined using the method of titration of plaque-forming components (PFU). Approximately 30 000 PFU of tick-borne encephalitis virus was mixed with an equal volume of corresponding I. rheades extract at concentration of 8 mg/mL and incubated for 30 min at 37 °C. Afterwards, the residual infectivity of tick-borne encephalitis virus was determined using the identical virus sample incubated with sterile water as a reference.
Results. It was found that treatment of tick-borne encephalitis virus with extracts from I. rheades mycelium resulted in inhibition of the infectivity of the virus in the cell culture. However, the same strain of I. rheades, grown on medium with wort, did not exhibit antiviral properties.
Conclusions. Virucidal substances are likely to be not the main metabolites of the mycelium of I. rheades, but are rather metabolized wood polysaccharides. Further research is needed to more accurately identify the active ingredients and assess their antiviral activity.
Key words: antiviral activity, Inonotus rheades, tick-borne encephalitis virus, birch wood
For citation: Khasnatinov M.A., Gornostai T.G., Solovarov I.S., Polyakova M.S., Danchinova G.A., Borovskii G.B. Antiviral Properties of Water Extracts of Mycelium Inonotus rheades (Pers.) P. Karst. (1882) against the Virus of Tick-Borne Encephalitis Virus in vitro. Acta biomedica scientifica. 2021; 6(1): 55-59. doi: 10.29413/ABS.2021-6.1.8.
ОБОСНОВАНИЕ
Флавивирусы - опасные патогены человека. Возбудители лихорадки Денге, жёлтой лихорадки, японского и клещевого энцефалита являются флавивирусами. Специфических лекарственных средств против них не существует. Наиболее эпидемически значимым флави-вирусом в Российской Федерации является вирус клещевого энцефалита (ВКЭ), передающийся людям при укусах иксодовых клещей [1, 2]. Широкое распространение природных очагов клещевого энцефалита (КЭ) на территории РФ, низкий уровень вакцинации населения и недостаток специфических противовирусных препаратов делают актуальной разработку новых лекарственных средств против КЭ. Одним из активно развивающихся направлений в разработке новых противовирусных препаратов является поиск активных химических соединений в продуктах естественного происхождения.
К числу потенциальных источников природных метаболитов с противовирусной активностью относят ксилотрофные базидиомицеты, из которых наиболее изученным и широко распространённым объектом является склероций трутовика скошенного Inonotus obliquus (чага) [3]. Для различных экстрактов из склероция I. obliquus показан широкий диапазон противовирусной активности in vitro в отношении: вирусов гриппа птиц (субтип A/H5N1) [4], ВИЧ-1 [5, 6], простого герпеса (HSV) [7], натуральной оспы и осповакцины [8]. Также показано действие извлечений на активность вируса герпеса: при внутрибрюшинном введении водных экстрактов I. obliquus 0,4-2,0 мг сухого вещества на мышь за сутки до заражения животных вирусом простого герпеса II типа была выявлена 90%-ная выживаемость животных [9].
Ранее нами было показано, что один из представителей рода Inonotus - трутовик лисий Inonotus rheades (Pers.) P. Karst. (1882) - содержит в мицелии водорастворимые вещества, обладающие сильными вирулицид-ными свойствами в отношении ВКЭ [10]. В связи с этим стоит задача получения необходимого объёма сырья для извлечения и последующего изучения искомых соединений. Синтез определённых метаболитов у грибов в значительной степени определяется субстратным фактором [11]. В литературе отмечено, что модификация субстратов приводила к увеличению биоактивности экстрактов из широко используемых в традиционной медицине грибов, таких как Ganodermalucidum (рейши) [12] и I. obliquus [13]. Для экстрактов из I. obliquus выявлена антивирусная активность из сырья, полученного при жидкофазном культивировании и на древесине, для экстрактов Lentinula edodes (шиитаке) и Pleurotus ostreatus (вешенка устричная) - при получении плодовых тел на пшеничном зерне [5, 9], такие данные демонстрируют, что субстрат оказывает влияние на биологическую активность получаемого сырья. При этом древесина разных пород и мест произрастания в качестве субстрата может давать на выходе различную противовирусную
активность извлечений [14]. О специфичности наработки противовирусных веществ в зависимости от субстрата у I. rheades опубликованных данных нет.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Проанализировать взаимосвязь между вирули-цидными свойствами экстракта I. rheades и субстратом, на котором велось культивирование.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Объектом исследования был базидиальный гриб I. rheades штамм 287, из коллекции грибных культур ЦКП «Биоресурсный центр» СИФИБР СО РАН, который культивировали на жидкой среде и древесных дисках Betula pendula Roth (Betulaceae). Среда и субстрат были стерилизованы и после этого инокулированы мицелием I. rheades. Культивирование на жидкой среде и на древесине проводили в течение 30 и 60 дней соответственно, при 25 ± 1 °С, в темноте.
Из полученных в ходе культивирования мицелия и культуральной жидкости выделяли фракции водорастворимых полисахаридов (ВРПС) с использованием методики Бабицкой с соавт. [15]. Перерастворение делали с использованием стерильной бидистиллированной воды и после пропускали через бактериальный фильтр с порами диаметром 22 мкм. Раствор общей полисаха-ридной фракции хранили при -20 °С.
Для оценки противовирусной активности использовали охарактеризованный ранее изолят ВКЭ 92М [16]. Культивирование ВКЭ производили в клеточной линии почки эмбриона свиньи СПЭВ (ФГБУ «НИИ гриппа» Минздрава России, Санкт-Петербург). Инфекционность вируса определяли с помощью титрования бляшкообразую-щих единиц в культуральной среде и выражали в виде lg БОЕ/мл. Поддержание культур клеток осуществляли на среде RPMI 1640 с добавлением антибиотиков и 5%-ной эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) HyClone (ThermoScientific, Великобритания).
Противовирусную активность определяли в соответствии с Гулд и Клегг [17] с модификациями. Для оценки ингибирующего действия экстрактов на вирионы ВКЭ, 100 мкл среды RPMI 1640 (без сыворотки), содержащей 30 000 БОЕ ВКЭ, смешивали с равным объёмом тестируемого экстракта в концентрации 8 мг/мл. Таким образом, рабочая концентрация экстрактов составляла 4 мг/мл. Референс-образец приготавливали, смешивая 100 мкл вирусной суспензии с равным объёмом стерильной бидистиллированной воды. В качестве положительного контроля использовали донорский иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита производства ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ (Томск). Исходный препарат разбавляли стерильной бидистиллированной водой до рабочей концентрации иммуноглобулина 1 мг/мл. Смеси инкубировали при 37 °С в течение 30 минут и затем определяли концентрацию инфекционного ВКЭ в каждом
образце, используя метод титрования БОЕ. Индекс ингиби-рования (ИИ) рассчитывали как разницу титра ВКЭ (в логарифмическом выражении) в референс-образце и титра ВКЭ в образце, обработанном исследуемым препаратом. Для каждого препарата и контрольных образцов проводили три независимых повтора эксперимента, результаты представляли в виде среднего значения трёх наблюдений. Для оценки внутригрупповой вариабельности результатов рассчитывали стандартное отклонение. Обработку результатов производили с помощью программы MS Office EXCEL (Microsoft, США). Исследования проводились в лаборатории, лицензированной для работ с возбудителями инфекционных заболеваний II—IV группы патогенности.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В ходе работы были получены фракции ВРПС из куль-туральной жидкости (BP-1), из мицелия, полученного на жидкой среде (BP-3) и из мицелия, выращенного на древесных дисках (BP-6), с выходом ВРПС 2,49, 0,08 и 1,06 г соответственно. При обработке флавивирусов препаратами, снижение титра вируса на 1 lg и более свидетельствует о наличии вируснейтрализующей или вирулицид-ной активности [17]. Индекс ингибирования экстрактов BP-1 и BP-3 составил 0,6 ± 0,05 и 0,06 ± 0,1 соответственно, что свидетельствует об очень низкой или отсутствующей ингибирующей активности. ИИ экстракта BP6 составил 5,56 ± 0,05. Этот показатель был сопоставим с индексом ингибирования специфичного иммуноглобулина против ВКЭ (также 5,56 ± 0,05) и стабильно воспроизводился в трёх независимых повторах, что свидетельствует о выраженной вирулицидной активности экстракта BP6. При обработке экстрактами BP-1 и BP-3 в концентрации 4 мг/мл не выявлено различий инфекционности ВКЭ с референс-образцом, тогда как экстракт ВР-6 полностью уничтожил ВКЭ (рис. 1). Различия между препаратами более чем в три раза превышали стандартное отклонение средних значений любого из препаратов (рис. 1).
6
О rf
m I-
5
4
i +|
3-
шО -&LÛ I от
2
1
ВР1
ВР3
ВР6 Референс Контроль
Рис. 1. Противовирусная активность экстрактов I. rheades в рабочей концентрации 4 мг/мл. BP-1 - экстракт из культураль-ной жидкости; BP-3 - из мицелия, полученного на жидкой среде; BP-6 - из мицелия, выращенного на древесных дисках; референс - стерильная бидистиллированная вода; контроль - иммуноглобулин человека против КЭ. Планки погрешностей отражают стандартное отклонение среднего по результатам трёх независимых экспериментов Fig. 1. Antiviral activity of I. rheades extracts at working concentration of 4 mg/mL. BP-1 - extract from culture medium; BP-3 - from mycelium obtained in a liquid medium; BP-6 - from mycelium grown on wooden discs; reference - sterile double distilled water; control - human immunoglobulin against tick-borne encephalitis. Error bars represent the standard deviation of the mean from three independent replications
Различия в вирулицидной активности экстрактов, полученных на разных субстратах, могут объясняться двояко. С одной стороны, могут существовать метаболические различия в синтезе соединений I. rheades на древесине берёзы, обусловленные наличием в субстрате богатого набора сахаров, отсутствующего в жидкой среде стандартного состава. B этом случае, вероятно, что синтез вирулицидных в отношении Bfâ компонентов экстракта мицелием I. rheades при жидкофазном культивировании возможен, если в среду добавить выделенные из берёзы поли- и моносахариды. С другой стороны, можно предположить, что вирулицидные вещества не являются основными метаболитами мицелия исследуемого гриба, а могут быть побочными продуктами разложения субстрата. Об этом свидетельствует наличие признаков вирусингибирующей активности в культуральной среде (препарат BP-1, ИИ = 0,6), её полное отсутствие в мицелии, выращенном на этой среде (BP-3, ИИ = 0,06), и ярко выраженное увеличение антивирусной активности при смене субстрата (BP-6, ИИ = 5,56).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Bирулицидные свойства экстрактов I. rheades определяются субстратом выращивания гриба. При этом экстракты мицелия, выращенного на стандартной культуральной среде, не проявляют антивирусных свойств, тогда как экстракты мицелия, выращенного на древесине, обладают ярко выраженными вирулицидными качествами. Для выяснения точного механизма противовирусного действия препаратов I. rheades необходимо определить физико-химические свойства и проанализировать компонентный состав экстрактов, а также установить, возможен ли синтез мицелием I. rheades вирулицидных в отношении B^ веществ из древесины других пород.
Конфликт интересов
Авторы данной статьи сообщают об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование
Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ и Правительства Иркутской области в рамках научного проекта № 20-44-380010.
ЛИТЕРАТУРА
1. Keener M.B., Ткачев С.Е., Савинова Ю.С., Демина T.B., Дорощенко E.K., Лисак ОБ., и др. Особенности экологии вируса клещевого энцефалита европейского субтипа на территории Сибири. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2017; 16(1): 22-25. doi: 10.31631/2073-3046-2017-16-1-22-25
2. Аитов KA, Бурданова Т.М., Bерхозина М.М., Демина T.B., Джиоев Ю.П., Козлова M.B., и др. вещевой энцефалит в Bос-точной Сибири: этиология, молекулярная эпидемиология, особенности клинического течения. Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2018; 7(3): 31-40. doi: 10.24411/23053496-2018-13005
3. Zhong X, Ren K, Lu S, Yang S, Sun D. Progress of research on Inonotus obliquus. Chin J Integr Med. 2009; 15(2): 156-160. doi: 10.1007/s11655-009-0156-2
4. Филиппова E.M., Мазуркова Н.А., Жбанов А.С. Тепляко-ва ТБ., Ибрагимова Ж.Б., Макаревич E.B., и др. Противовирусные свойства водных экстрактов, выделенных из высших базидиоми-цетов, в отношении пандемического вируса гриппа А(ЖЖ)2009. Научное обозрение. Биологические науки. 2014; (1): 129-130.
5. Гашникова Н.М., Kосогова Т.А., Пучкова Л.И., Балах-нин С.М., Теплякова ТБ. Противовирусная активность экстрак-
0
тов из базидиальных грибов в отношении вируса иммунодефицита человека. Наука и современность. 2011; (12-1): 12-18.
6. Шибнев В.А., Гараев Т.М., Финогенов М.П., Калнина Л.Б., Носик Д.Н. Противовирусное действие водных экстрактов берёзового гриба Inonotus obliquus на вирус иммунодефицита человека. Вопросы вирусологии. 2015; 60(2): 35-38.
7. Pan HH,Yu XT, Li T, Wu HL, Jiao CW, Cai MH, et al. Aqueous extract from a Chaga medicinal mushroom, Inonotus obliquus (higher basidiomyetes), prevents herpes simplex virus entry through inhibition of viral-induced membrane fusion. Int J Med Mushrooms. 2013; 15(1): 29-38. doi: 10.1615/IntJMedMushr.v15.i1.40
8. Теплякова Т.В., Булычев Л.Е., Косогова Т.А., Ибрагимова Ж.Б., Юрганова И.А., Кабанов А.С., и др. Противовирусная активность экстрактов из базидиальных грибов в отношении ортопоксвирусов. Проблемы особо опасных инфекций. 2012; 3(113): 99-101. doi: 10.21055/0370-1069-2012-3-99-101
9. Разумов И.А., Казачинская Е.И., Пучкова Л.И., Косогова Т.А., Горбунова И.А., Локтев В.Б., и др. Протективная активность водных экстрактов из высших грибов при экспериментальной герпесвирусной инфекции у белых мышей. Антибиотики и химиотерапия. 2013; 58(9-10): 8-12.
10. Горностай Т.Г., Хаснатинов М.А., Соловаров И.С., Дан-чинова Г.А., Боровский Г.Б. Противовирусные свойства водных экстрактов мицелия Inonotus rheades в отношении вируса клещевого энцефалита in vitro. В кн.: Бычков И.В., Казаков АЛ. (ред.) Актуальные проблемы науки Прибайкалья. Вып. 3. Иркутск: Изд-во ИГУ; 2020: 21-25.
11. Shang Z, Li XM, Li CS, Wang BG. Diverse secondary metabolites produced by marine-derived fungus Nigrospora sp. MA75 on various culture media. Chem Biodiversity. 2012; 9: 1338-1348. doi: 10.1002/cbdv.201100216
12. You BL, Lee HZ, Chung KR, Lee MH, Huang MJ, Tien N, et al. Enhanced production of ganoderic acids and cytotoxicity of Ganoderma lucidum using solid-medium culture. Biosci Bio-technolBiochem. 2012; 76(8): 1529-1534. doi: 10.1271/bbb.120270
13. Xu X, Zhu J. Enhanced phenolic antioxidants production in submerged cultures of Inonotus obliquus in a ground corn stover medium. Biochem Eng J. 2011; 58-59: 103-109. doi: 10.1016/j. bej.2011.09.003
14. Vlasenko VA, Ilyicheva TN, Teplyakova TV, Svyatchen-ko SV, Asbaganov SV, Zmitrovich IV, et al. Antiviral activity of total polysaccharide fraction of water and ethanol extracts of Pleurotus pulmonarius against the influenza A virus. CurrRes Environ ApplMy-col J Fungal Biol. 2020; 10(1): 224-235. doi: 10.5943/cream/10/1/22
15. Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Пучкова Т.А., Смирнов Д.А., Бисько Н.А., Поединок Н.Л. Влияние условий глубинного культивирования лекарственного гриба Ganoderma lucidum (Рейши) на образование полисахаридов. Биотехнология. 2007; (6): 34-41.
16. Хаснатинов М.А., Данчинова Г.А., Злобин В.И., Ляпунов А.В., Арбатская Е.В., Чапоргина Е.А., и др. Вирус клещевого энцефалита в Монголии. Сибирский медицинский журнал (Иркутск). 2012; (4): 9-12.
17. Gould EA, Clegg JCS. Growth, titration and purification of togaviruses. In: Mahy BWJ. (ed.) Virology: A Practical Approach. Oxford: IRL Press; 1985: 43-48.
REFERENCES
1. Kozlova IV, Tkachev SE, Savinova YuS, Demina TV, Doro-shchenko EK, Lisak OV, et al. The ecology features of tick-borne encephalitis virus of European subtype in Siberia. Epidemiology and Vaccinal Prevention. 2017; 16(1): 22-25. doi: 10.31631/20733046-2017-16-1-22-25. (In Russ.)
2. Aitov KA, Burdanova TM, Verkhozina MM, Demina TV, Dzhioev YuP, Kozlova IV, et al. Tick-borne encephalitis in Eastern Siberia: Etiology, molecular epidemiology and peculiarities of the clinical course. Infectious Diseases: News, Opinions, Training. 2018; 7(3): 31-40. doi: 10.24411/2305-3496-2018-13005. (In Russ.)
3. Zhong X, Ren K, Lu S, Yang S, Sun D. Progress of research on Inonotus obliquus. Chin J Integr Med. 2009; 15(2): 156-160. doi: 10.1007/S11655-009-0156-2
4. Filippova EI, Mazurkova NA, Kabanov AS, Teplyakova TV, Ibragimova ZB, Makarevich EV, et al. Antiviral properties of aqueous extracts isolated from higher basidiomycetes as respect to pandemic influenza virus A(H1N1)2009. Nauchnoe obozrenie. Biologicheskienauki. 2014; (1): 129-130. (In Russ.)
5. Gashnikova NM, Kosogova TA, Puchkova LI, Balakhnin SM, Teplyakova TV. Anti-viral activity extracts from basidial mushrooms regarding the virus human immunodeficiency. Nauka I sovremen-nost. 2011; (12-1): 12-18. (In Russ.)
6. Shibnev VA, Garaev TM, Finogenova MP, Kalnina LB, Nos-ik DN. Antiviral activity of aqueous extracts of the birch fungus Inonotus obliquus on the human immunodeficiency virus. Problems of Virology. 2015; 60(2): 35-38. (In Russ.)
7. Pan HH, Yu XT, Li T, Wu HL, Jiao CW, Cai MH, et al. Aqueous extract from a Chaga medicinal mushroom, Inonotus obliquus (higher basidiomyetes), prevents herpes simplex virus entry through inhibition of viral-induced membrane fusion. Int J Med Mushrooms. 2013; 15(1): 29-38. doi: 10.1615/IntJMedMushr. v15.i1.40
8. Teplyakova TV, Bulychev LE, Kosogova TA, Ibragimova ZhB, Yurganova IA, Kabanov AS, et al. Antiviral activity of extracts from basidiomycetes for orthopoxviruses. Problems of Particularly Dangerous Infections. 2012; 3(113): 99-101. doi: 10.21055/03701069-2012-3-99-101. (In Russ.)
9. Razumov IA, Kazachinskaya EI, Puchkova LI, Kosogova TA, Gorbunova IA, Loktev VB, et al. Protective activity of aqueous extracts from higher mushrooms against Herpes sipmlex virus type-2 on albino mice model. Antibiotics and Chemotherapy. 2013; 58(9-10): 8-12. (In Russ.)
10. Gornostay TG, Khasnatinov MA, Solovarov IS, Danchi-nova GA, Borovskii GB. Antiviral properties of water extracts of mycelium Inonotus rheades, against the virus of tick-borne encephalitis virus in vitro. In: Bychkov IV, Kazakov AL. (eds.) Actual problems of science in the Baikal region. Issue 3. Irkutsk: Izdatelstvo ISU; 2020: 21-25. (In Russ.)
11. Shang Z, Li XM, Li CS, Wang BG. Diverse secondary metabolites produced by marine-derived fungus Nigrospora sp. MA75 on various culture media. Chem Biodiversity. 2012; 9: 1338-1348. doi: 10.1002/cbdv.201100216
12. You BL, Lee HZ, Chung KR, Lee MH, Huang MJ, Tien N, et al. Enhanced production of ganoderic acids and cytotoxicity of Ganoderma lucidum using solid-medium culture. Biosci Bio-technol Biochem. 2012; 76(8): 1529-1534. doi: 10.1271/bbb.120270
13. Xu X, Zhu J. Enhanced phenolic antioxidants production in submerged cultures of Inonotus obliquus in a ground corn stover medium. Biochem Eng J. 2011; 58-59: 103-109. doi: 10.1016/j. bej.2011.09.003
14. Vlasenko VA, Ilyicheva TN, Teplyakova TV, Svyatchen-ko SV, Asbaganov SV, Zmitrovich IV, et al. Antiviral activity of total polysaccharide fraction of water and ethanol extracts of Pleurotus pulmonarius against the influenza A virus. Curr Res Environ Appl Mycol J Fungal Biol. 2020; 10(1): 224-235. doi: 10.5943/ cream/10/1/22
15. Babitskaya VG, Shcherba VV, Puchkova TA, Smirnov DA, Bisko NA, Poyedinok NL. Effect of the conditions for submerged culturing of the medicinal fungus Ganoderma lucidum (Rei Shi) on the polysaccharide production. Biotechnologia. 2007; (6): 3441. (In Russ.)
16. Khasnatinov MA, Danchinova GA, Zlobin VI, Liapunov AV, Arbatskaya EV, Tchaporgina EA, et al. Tick-borne encephalitis virus in Mongolia. Sibirskii Medicinskii Zhurnal (Irkutsk). 2012; 111(4): 9-12. (In Russ.)
17. Gould EA, Clegg JCS. Growth, titration and purification of togaviruses. In: Mahy BWJ. (ed.) Virology: A Practical Approach. Oxford: IRL Press; 1985: 43-48.
Сведения об авторах
Хаснатинов Максим Анатольевич - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории трансмиссивных инфекций, ФГБНУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека, e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0002-8441-3640
Горностай Татьяна Геннадьевна - кандидат фармацевтических наук, младший научный сотрудник лаборатории физиологической генетики, ФГБУН Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН, e-mail: [email protected], https://orcid.org/0000-0002-1120-2148
Соловаров Иннокентий Сергеевич - младший научный сотрудник лаборатории трансмиссивных инфекций, ФГБНУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека, e-mail: [email protected], https://orcid.org/0000-0001-9936-5330
Полякова Марина Станиславовна - ведущий инженер лаборатории физиологической генетики научный сотрудник лаборатории физиологической генетики, ФГБУН Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН; e-mail: [email protected], https://orcid.org/0000-0002-4125-0212
Данчинова Галина Анатольевна - доктор биологических наук, руководитель лаборатории трансмиссивных инфекций, ФГБНУ «Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека», e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0002-6705-3070
Боровский Геннадий Борисович - доктор биологических наук, профессор, главный научный сотрудник лаборатории физиологической генетики, ФГБУН Сибирский институт физиологии и биохимии растений СО РАН, e-mail: [email protected], https://orcid.org/0000-0002-5089-5311
Information about the authors
Maxim A. Khasnatinov - Dr. Sc. (Biol.), Leading Research Officer at the Laboratory of Transmissive Infections, Scientific Centre for Family Health and Human Reproduction Problems, e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0002-8441-3640
Tatyana G. Gornostai- Cand. Sc. (Pharm.), Junior Research Officer at the Laboratory of Physiological Genetics, Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry SB RAS, e-mail: [email protected], https://orcid.org/0000-0002-1120-2148
InnokentiiS. Solovarov - Junior Research Officer at the Laboratory ofTransmissive Infections, Scientific Centre for Family Health and Human Reproduction Problems, e-mail: keschass@ mail.ru, https://orcid.org/0000-0001-9936-5330
Marina S. Polyakova - Leading Engineer at the Laboratory of Physiological Genetics, Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry SB RAS, e-mail: poljakova.m@gmail. com, https://orcid.org/0000-0002-4125-0212
Galina A. Danchinova - Dr. Sc. (Biol.), Head of the Laboratory of Arthropod-Borne Infections, Scientific Centre for Family Health and Human Reproduction Problems, e-mail: [email protected], http://orcid.org/0000-0002-6705-3070
GennadiiB. Borovskii - Dr. Sc. (Biol.), Chief Research Officer at the Laboratory of Physiological Genetics, Siberian Institute of Plant Physiology and Biochemistry SB RAS, e-mail: borovskii@ sifibr.irk.ru, https://orcid.org/0000-0002-5089-5311
Вклад авторов
Хаснатинов М.А. - разработка дизайна исследования, планирование экспериментов, выполнение экспериментов, анализ, интерпретация и обсуждение результатов, подготовка публикации.
Горностай Т.Г. - разработка дизайна исследования, планирование экспериментов, выполнение экспериментов, анализ, интерпретация и обсуждение результатов, подготовка публикации.
Соловаров И.С. - выполнение экспериментов, анализ, интерпретация и обсуждение результатов, подготовка публикации.
Полякова М.С. - планирование экспериментов, выполнение экспериментов, анализ, интерпретация и обсуждение результатов, подготовка публикации.
Данчинова Г.А. - планирование исследования, анализ, интерпретация и обсуждение результатов, подготовка публикации.
Боровский Г.Б. - разработка дизайна исследования, планирование экспериментов, анализ, интерпретация и обсуждение результатов, написание рукописи.
Статья получена: 15.12.2020. Статья принята: 08.02.2021. Статья опубликована: 26.02.2021.
Received: 15.12.2020. Accepted: 08.02.2021. Published: 26.02.2021.
