Подходы к созданию иммунолипосом на примере доксорубицина Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

6

БИОТЕРАПИЯ

ПЕРВЫЙ ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЕ АНТИГЕН - СА125 ВАКЦИНЫ У ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ

Н.Г. Кор моги, К. П. Лактионов, М. В. Киселевский, С. М. Ситдикова, Б. С. Аманджолов,

Ю.С. Лебедин, А.Ю. Топтыгин, С. В. Чуканов, Ф.В Доненко Российский онкологический научный центр им Н.Н. Блохина РАМН,

ООО “Хема-Медика”

Согласно утвержденному на Ученом совете НИИ КО РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН протоколу клинических испытаний эффективности метода лечения больных злокачественными новообразованиями яичников введением аутогенного муцина содержащего антиген СА 125 начато клиническое испытание СА 125-вакцины. В настоящем сообщении приведены результаты изучения применения вакцины у 1 больной раком яичников Т3сНхМ0, (состояние после И курсов химиотерапии по схемам: РС, САР; прогрессирование заболевания, опухоль резистетна к соединениям платины, уровень СА 125 - 1180 Е/мл). Средний функциональный статус по ЕСОО был равен 4-3. Введение вакцины начато спустя 3 месяца после последнего курса химиотерапии. СА 125-вакцину получали методом аффинной очистки из биологического материала больной. Метод позволяет сохранить гликозилированную часть молекулы муцина в нативном виде, и, следовательно, в отличии от генно-инженерных способов получения опухоль-ассоции-рованных антигенов, антигенные характеристики молекулы максимально близки к исходным. Необходимое минимальное количество антигена СА 125 в вакцине составило 100 мкг/доза. Это количество было определено экспериментально при исследовании на животных и вызывало стойкий гуморальный ответ после однократного введения.

Вакцина введена больной 15 раз с интервалом 7-22

дня и постепенным увеличением дозы антигена с параллельным определением иммунного статуса, уровней онкомаркера и специфических антител. Побочных реакций отмечено не было. Наблюдалась легкая гиперемия на месте введения, которая полностью исчезала через 4-48 часа. После 3 введения наступило субъективное улучшение состояния больной (средний функциональный статус по ECOG был равен 2), отмечена положительная динамика по данным ультразвукового исследования.

Анализ образцов сыворотки крови показал следующие результаты: стабилизация уровня онкомаркера (диапазон колебаний уровня СА 125 - 1160.1 - 1858,8 Е/мл) в течение 6 месяцев, специфические антитела против антигена СА 125 не зарегистрированы, отмечено повышение уровня С-ре-активного белка. Последний показатель, по нашему мнению, возможно, может быть использован для подбора оптимальной дозы и режима введения вакцины.

В настоящем исследовании приведены результаты первого опыта использования муцина содержащего антиген СА 125 у онкологических больных. Следует отметить полное отсутствие каких-либо побочных эффектов. Полученные результаты вызывают определенный оптимизм, так как субъективное улучшение состояния больной сопровождалось уменьшением размера опухоли по данным УЗИ. Считаем целесообразным продолжение исследования.

ПОДХОДЫ К СОЗДАНИЮ ИММУНОЛИПОСОМ НА ПРИМЕРЕ ДОКСОРУБИЦИНА

М.А. Кортава, Т.Н. Палкина, Е.В. Толчева, Т.Н. Заботина, А.П. Полозкова, О.Л. Орлова,

З.С. Шпрах, А.Ю. Суровой* А.Ю. Барышников Российский Онкологический Научный Центр им, Н.Н. Блохина РАМН *Институт Биоорганической Химии им. М.М. Шемякина и А.Ю. Овчинникова

Наиболее перспективным направлением в изучении возможностей создания противоопухолевых агентов с направленной доставкой являются иммунолипосомы (антатело-свя-занные липосомы). Антитела располагаются на поверхности фосфолипидных мембран липосом диаметром 100-130 нм, внутрь которых загружается цитостатик. Антитело-связанные липосомы обладают всеми достоинствами сгерически стабилизированных, но у них есть важное преимущество - антитела обеспечивают их адресную доставку и присоединение к мембранным антигенам опухолевых клеток. Цель работы: получение иммунолипосом с доксорубицином.

Д ля получения липосом использовали фосфатидилхолин, холестерин, кардиолипин и модифицированный биотиновым эфиром полиэтиленгликоль. Липосомы были получены методом вакуумного выпаривания спиртового раствора липидов, с последующим суспендированием липидной пленки водным раствором доксорубицина. В качестве вектора были использованы моноклональные антитела к Т-клеточному антигену

CD5(IC080), меченые флуоресцентным красителем (FITC) и обработанные гидроксисукцинимидным эфиром.

Размер иммунолипосом измеряли на приборе Submicron Particle Sizer NICOMP-380. Средний размер многослойных липосом равен 869 нм. Затем липосомы уменьшали в диаметре экструзионным методом на приборе Mini-Extruder с последующим измерением их размера. Средний размер полученных липосом 133 нм. Липосомы освобождали от свободного доксорубицина методом гель-фильтрации, пропуская через колонку с Sephadex G-50 фосфатно-солевой буфер (PBS), pH 7,4.

Количество невключенного в липосомы доксорубицина определяли методом прямой спектрофотометрии, основанным на способности соединения поглощать излучение при длине волны 252±2 нм. Содержание свободного доксорубицина в отработанном фосфатно-солевом буфере составило около 15%.

Таким образом, изучены возможности получения иммунолипосом диаметром до 130 нм и методы загрузки препаратов на примере доксорубицина.

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

№1/том1/2003