CC BY
42УДК 579.64
Подбор микроорганизмов, способных биодеградировать бурый уголь, с целью дальнейшего их применения в ЭкоКосмоДоме
99
Произведён подбор микроорганизмов, способных биодеградировать бурый уголь, что ведёт к увеличению содержания в нём биологически активных веществ, которые положительно влияют на рост и развитие растений, - гуминовых кислот. Рассмотрены возможные стадии биодеструкции бурого угля; описаны исследования биомодификации бурого угля при помощи микроорганизмов, обладающих необходимыми ферментными системами для его использования в своей жизнедеятельности. Данные микроорганизмы могут быть задействованы в приготовлении высокоэффективной подкормки для растений -природного гумуса, который получен на основе бурого угля и который планируется применять в ЭкоКосмоДоме (ЭКД). Экспериментально изучена способность бактерий Acinetobacter pittii, Enterobacter cloacae, Microbacterium sp., Bacillus sp. и микроскопического гриба Trametes versicolor деградировать бурый уголь. Определена интенсивность биодеградации бурого угля в зависимости от его концентрации в питательной среде, типа микроорганизмов и времени проведения опыта. В результате эксперимента получены практические данные, которые свидетельствуют о высокой деструкционной активности микроскопического гриба Trametes versicolor и бактерии Bacillus sp. в отношении бурого угля.
Зыль Н.С.
Налётов И.В.
Заяц В.С.
ЗАО «Струнные технологии»,
г. Минск, Беларусь
Ключевые слова:
мелиорация пустынь, бурый уголь, гуминовые кислоты, биодеградация, биодеструкция, почвенные микроорганизмы, бактерии, микроскопические грибы, гумус, почва, ЭкоКосмоДом (ЭКД), замкнутая экосистема.
Введение
Бурый уголь образовался около 50 млн лет назад из торфа в процессе метаморфизма (углефикации) и является промежуточным звеном между торфом и каменным углём. Название бурого угля связано с тем, что он оставляет на фарфоровой пластине полосу коричневого цвета (в отличие от каменного угля, который рисует полосу чёрного цвета).
Состав бурого угля можно представить следующим образом:
• гумин - гуминовые вещества, нерастворимые ни в щелочах, ни в щелочном растворе пирофосфата натрия. Основная часть гумина - это растительные остатки высокой молекулярной массы;
• связанные (нерастворимые) гуминовые кислоты - гуминовые вещества, нерастворимые в щелочах, но растворимые в щелочном растворе пирофосфата натрия;
• свободные (растворимые) гуминовые и фульвовые кислоты - гуминовые вещества, растворимые в щелочах. Являются более биологически активными, чем нерастворимые гуминовые вещества;
• широкий спектр насыщенных и ненасыщенных углеводородов;
• растворимые минералы, микроэлементы в биологически доступной форме;
• нерастворимые минералы, микроэлементы в биологически малодоступной форме.
Общее содержание гуминовых кислот в буром угле в среднем составляет около 20-50 %, но в отдельных случаях достигает 86 %. Показатель зольности обычно находится в пределах 5-15 %, встречается также бурый уголь зольностью до 70 % [1]. Органическое вещество бурого угля имеет нерегулярную структуру и включает в себя
в том числе ароматические и полимерные фрагменты, которые обуславливают необходимость тщательного подбора микроорганизмов и продуманной организации условий их культивирования для биодеградации бурого угля.
Микробиологический состав бурого угля разнообразен и представлен различными типами микроорганизмов (например, бактерии родов Bacillus, Rhodococcus, Arthro-bacter, Micrococcus, Spirillum и Cytophaga, грибы родов Pénicillium и Trichoderma) [2, 3].
В дренажных водах открытого угольного карьера, в котором добывался бурый уголь, также обнаружено большое разнообразие микроорганизмов: грибы семейства Sporidio-bolaceae, простейшие группы Alveolata, Amoebozoa, зелёные водоросли рода Chlamydomonas, бактерии рода Acidi-philium, Sulfuriferula и Thiomonas. Наличие такого разнообразного микробиома в водах, насыщенных бурым углём, говорит как минимум о его нетоксичности в отношении данных микроорганизмов и теоретической возможности их использования при его биомодификации [4].
В настоящее время большая часть бурого угля применяется в качестве топливного сырья на угольных электростанциях различных типов, а также сырья для химической промышленности и сельского хозяйства. Дымовые выбросы от угольных электростанций и золошлаковые отходы создают экологическую угрозу для многих регионов ввиду неправильного обращения с данными продуктами сжигания бурого угля, которые при рациональном подходе могут быть задействованы в различных областях промышленности, в том числе в строительстве, сельском хозяйстве и др. [5, 6].
В энергетических целях бурый уголь необходимо сжигать без вреда для окружающей среды, перерабатывая все отходы в едином технологическом цикле. В итоге может быть достигнута максимальная экономическая эффективность подобного процесса без негативного влияния на экологию.
Биотехнологические методы являются альтернативным вариантом переработки бурого угля и обладают рядом преимуществ перед физико-химическими способами (в том числе перед сжиганием):
• в качестве сырья возможно также использование некондиционного, окисленного бурого угля, имеющего малую ценность как топливо ввиду невысокой калорийности и значительного содержания мелкой фракции [7, 8]. Не исключено, что биодеградация именно низкой степени метаморфизма более выгодна с экономической точки зрения, так как бурый уголь является менее ценным энергетическим сырьём [9];
• не создают отходов и экологически безопаснее;
• применимы при умеренных температурах и давлении, что снижает требования к оборудованию.
В результате биотехнологической переработки бурого угля могут быть получены гумус (органическое удобрение), биогаз, обессеренный бурый уголь, сорбенты тяжёлых металлов [10]. Производство гумуса из бурого угля видится наиболее перспективным направлением, так как в итоге создаётся ценная подкормка для растений, подпадающая под категорию органических [11].
Гумус, образованный из бурого угля при помощи переработки микроорганизмами (особенно в комбинации с различными видами вторичного сырья - навозом, птичьим помётом, пищевыми отходами), может эффективно использоваться при мелиорации пустынь [12].
Частое внесение большого количества минеральных удобрений способствует ускоренному разложению гумуса, что на начальном этапе даёт значительный рост урожайности - до двух раз. Однако со временем наступает предел увеличения плодородия, и использование минеральных удобрений становится причиной существенного уменьшения производства растительной продукции вследствие разрушения биоценоза почвы [13, 14].
Активное и ненормированное применение агрохимии ведёт к тому, что в почве, а вместе с этим и в сельскохозяйственных культурах накапливаются пестициды, нитраты и другие вредные и отравляющие вещества, которые затем попадают в организм человека [15].
Получаемый из бурого угля при помощи биотехнологии высокоэффективный гумус поможет в существенной мере снизить экологическую нагрузку на природу и сделать сельское хозяйство намного менее зависимым от агрохимикатов.
Цель данного исследования - изучение способности теоретически подобранных микроорганизмов биодегра-дировать бурый уголь; определение оптимальных условий, необходимых для данного процесса.
Механизм биодеградации бурого угля
Биодеградацию бурого угля можно условно разделить на две стадии:
• солюбилизация бурого угля и перевод его в более биодоступное состояние. Является лимитирующей, так как именно в ходе начальной солюбилизации сложнодегради-руемые соединения переходят в растворимое состояние. Это происходит главным образом вследствие деструкции органических полимеров и полиядерных ароматических углеводородов по ферментативному механизму. Кроме того, при солюбилизации бурого угля работают щелочной и хелаторный механизмы, которые переводят более низкомолекулярные соединения в растворимую форму;
• транспортировка и включение растворённых соединений в метаболизм клеток. Продукты первой стадии, представляющие собой более биодоступные фрагменты с меньшим молекулярным весом, вовлекаются в метаболизм микроорганизмов и трансформируются до конечных продуктов.
Известно, что основными ферментами, участвующими в биодеградации угля, являются лигнинпероксидаза, Mn-пероксидаза и лакказа [16].
В случае с микроскопическими грибами клетки мицелия выделяют необходимые ферментные системы, которые воздействуют на субстрат (в данном случае бурый уголь), вызывая его деструкцию. После происходит полное или частичное поглощение продуктов деструкции клетками микроскопического гриба.
Бактерии вырабатывают необходимые для разложения бурого угля ферменты во внешнюю среду и затем, как и грибы, поглощают образовавшиеся экзометаболиты; однако могут использовать и внутриклеточные механизмы деструкции.
Таким образом, для биодеградации бурого угля наиболее перспективным будет применение микроорганизмов, обладающих одним или несколькими ферментами из перечисленных.
Например, исследователями Национального научного центра (Польша) изучалась биосолюбилизация бурого угля при помощи адаптированного микроскопического гриба Fusarium oxysporum LOCK 1134. Использовалась жидкая питательная среда с добавлением 5 % бурого угля. Эксперимент проводился в течение 14 дней при перемешивании смеси со скоростью 180 об/мин. В конце биомодификации концентрация биосолюбилизированного бурого угля в данном растворе составила 1474 мг/л. При этом в контрольном опыте солюбилизация не наблюдалась [17].
Группой учёных из Академии Финляндии анализировались особенности выработки ферментов гриба Phlebia radiata при биодеградации искусственно полученного бурого угля. В данных исследованиях максимальная активность ферментов гриба отмечена при минимальной концентрации марганца в питательной среде (без его добавления), а степень минерализации субстрата составила 30 % за 18 дней. Культивирование проводилось при 28 °С на твёрдой питательной среде с недостатком азота [18].
В Институте химии и химической технологии Сибирского отделения Российской академии наук проводилась биодеструкция бурого угля в аэробных условиях при помощи адаптированных к бурому углю бактерий Acinetobacter calcoaceticus ВКПМ В-4833. В результате содержание свободных гуминовых кислот повышалось на 22,9-30,6 % по сравнению с исходным субстратом. В био-модифицированном субстрате обнаружены признаки наличия поверхностно активных веществ, не относящихся к гуминовым кислотам. Процесс культивирования занял 10-60 ч и проходил при температуре 29-30 °С; использовались аэрация и перемешивание; концентрация бурого угля в жидком субстрате составляла 20 % [7].
В другом эксперименте учёными Института биохимии им. А.Н. Баха Российской академии наук изучалась трансформация гуминовых веществ базидиальными грибами и Trametes hirsuta, Trametes maxima. Грибы выращивали в течение 30 суток при 28 °С и влажности 80-90 % на твёрдой минеральной питательной среде; концентрация высокоокисленного бурого угля - около 2,7 % по массе. В ходе данного опыта отмечено разрыхление поверхности частиц бурого угля, что является прямым свидетельством его биодеградации [19].
Эксперимент № 1
Для определения деструктивной активности в отношении бурого угля бактерий Acinetobacterpittii, Enterobacter cloacae, Microbacterium sp., Bacillus sp. использована минеральная среда с добавлением различных концентраций бурого угля (рисунок 1). В качестве положительного контроля (предполагается максимальный рост микроорганизмов) выступала минеральная среда с добавлением 10 % пивного сусла. Колбы после засева закрывались ватно-марлевыми пробками и устанавливались на орбитальный шейкер, в котором при включённом перемешивании со скоростью 120 об/мин происходило культивирование выбранных микроорганизмов на питательных средах с различными концентрациями бурого угля. В начале, середине и конце опыта выявлялось общее микробное число (ОМЧ); исходя из данного показателя, сделан вывод о деструктивной активности микроорганизмов в отношении бурого угля.
Состав экспериментальных питательных сред:
• среда № 1 (KH2P04 - 0,9 г/л; K2HP04 - 1,74 г/л; MgS04 х х 7H20 - 0,3 г/л; NaCl - 0,5 г/л; CaCl2 - 0,1 г/л) - контроль;
• среда № 1 + 0,5 % бурого угля;
• среда № 1 + 1 % бурого угля;
• среда № 1 + 2 % бурого угля;
• среда № 1 + 2,5 % бурого угля;
• среда № 1 + 5 % бурого угля;
• среда № 1 + 10 % пивного сусла - положительный контроль.
Объём экспериментальных сред - 1 л.
В ходе опыта контролировалось ОМЧ. Его подсчёт производился в начальной, промежуточной и конечной точках исследования (таблица).
Материалы и методы эксперимента
Для настоящего исследования отобраны микроскопический гриб Trametes versicolor и бактерии Acinetobacter pittii, Enterobacter cloacae, Microbacterium sp., Bacillus sp., обладающие необходимыми ферментными системами и/или агрономически ценными функциями, такими как фиксация азота, фосфатсолюбилизация и др.
Проведено два эксперимента. В одном определялась активность биодеструкции бурого угля бактериями видов Acinetobacter pittii, Enterobacter cloacae, Microbacterium sp., Bacillus sp., во втором - анализировалась способность к биодеструкции бурого угля микроскопического гриба Trametes versicolor индивидуально и совместно с бактериями Bacillus sp.
Рисунок 1 - Экспериментальные колбы с бурым углём
Таблица - ОМЧ деструкторов бурого угля в зависимости от времени и концентрации бурого угля
Микроорганизм и среда ОМЧ 04.01.2021 ОМЧ 11.01.2021 ОМЧ 18.02.2021
Acinetobacter pittii
Среда № 1 2,5 х 108 1 х 107 1 х 106
Среда № 1 + 0,5 % бурого угля 2,5 х 108 1 х 107 1 х 109
Среда № 1 + 1 % бурого угля 2,5 х 108 1 х 107 1 х 109
Среда № 1 + 2 % бурого угля 2,5 х 108 1 х 107 1 х 109
Среда № 1 + 2,5 % бурого угля 2,5 х 108 1 х 108 1 х 1010
Среда № 1 + 5 % бурого угля 2,5 х 108 1 х 108 1 х 1010
Среда № 1 + 10 % пивного сусла 2,5 х 108 1 х 108 1,5 х 1012
Enterobacter cloacae
Среда № 1 1 х 1010 1 х 109 5 х 109
Среда № 1 + 0,5 % бурого угля 1 х 1010 1 х 109 5 х 1010
Среда № 1 + 1 % бурого угля 1 х 1010 2 х 109 1,5 х 1012
Среда № 1 + 2 % бурого угля 1 х 1010 1 х 109 1 х 1010
Среда № 1 + 2,5 % бурого угля 1 х 1010 1 х 109 1 х 109
Среда № 1 + 5 % бурого угля 1 х 1010 5 х 109 5 х 109
Среда № 1 + 10 % пивного сусла 1 х 1010 2 х 109 2 х 109
Microbacterium sp.
Среда № 1 1 х 109 1 х 108 5 х 107
Среда № 1 + 0,5 % бурого угля 1 х 109 1 х 109 1 х 1010
Среда № 1 + 1 % бурого угля 1 х 109 1 х 109 2,5 х 1011
Среда № 1 + 2 % бурого угля 1 х 109 3 х 109 1 х 1012
Среда № 1 + 2,5 % бурого угля 1 х 109 1 х 1010 1 х 1010
Среда № 1 + 5 % бурого угля 1 х 109 5 х 109 7,5 х 1011
Среда № 1 + 10 % пивного сусла 1 х 109 3 х 109 1,5 х 1011
Bacillus sp.
Среда № 1 1 х 108 2 х 108 1 х 1010
Среда № 1 + 0,5 % бурого угля 1 х 108 1 х 109 5 х 1010
Среда № 1 + 1 % бурого угля 1 х 108 1 х 109 8 х 1011
Среда № 1 + 2 % бурого угля 1 х 108 1 х 109 1 х 1012
Среда № 1 + 2,5 % бурого угля 1 х 108 1 х 109 3 х 1012
Среда № 1 + 5 % бурого угля 1 х 108 1 х 1010 5 х 1012
Среда № 1 + 10 % пивного сусла 1 х 108 2 х 109 2 х 1011
Как видно из данных, представленных в таблице, количество микроорганизмов в культурах Acinetobacter pittii, Enterobacter cloacae, Microbacterium sp., Bacillus sp. после инкубирования в средах с бурым углём в большинстве случаев увеличилось на 1-3 порядка по сравнению с первоначальным количеством, внесённым в пустую минеральную среду. Это может говорить об использовании микроорганизмами органических соединений бурого угля в качестве источника углерода и других элементов питания и, следовательно, о деструкции ими бурого угля. Наибольший прирост биомассы показала культура Bacillus sp., наименьший -Acinetobacter pittii.
Измеренное количество микроорганизмов закономерно отличается в среднем в 10-500 раз при сравнении образца бурого угля с наибольшей концентрацией в питательной среде (5 %) с образцом с наименьшей концентрацией (0,5 %).
ОМЧ Acinetobacter pittii и Enterobacter cloacae сначала снизилось в промежуточной точке контроля, но к концу опыта возросло, что объясняется нетипичными условиями культивирования этих микроорганизмов, которые потребовали соответствующего времени на адаптацию. Аналогичную картину, вероятно, можно было бы наблюдать и с бактериями Microbacterium sp. и Bacillus sp., однако их адаптация могла бы произойти значительно быстрее.
При культивировании Enterobacter cloacae максимальное ОМЧ зафиксировано при концентрации бурого угля около 1 %. Очевидно, это вызвано наличием в буром угле веществ, замедляющих развитие данных микроорганизмов в определённых условиях. При концентрации 5 % ОМЧ Enterobacter cloacae несколько выше, чем при 2,5 %, что является признаком быстрой адаптации микроорганизмов по причине более интенсивного воздействия на них различных соединений, входящих в состав бурого угля. Схожий результат наблюдается и при выращивании бактерии Microbacterium sp., но здесь предельная концентрация приходится на образец, содержащий 2 % бурого угля.
ОМЧ Enterobacter cloacae и Bacillus sp. на питательной среде, содержащей 5 % бурого угля, составляет 5 х 109 и 5 х 1012, что выше, чем при выращивании с применением пивного сусла - 2 х 109 и 2 х 1011 соответственно. Это может говорить об их эффективности при биодеградации бурого угля даже при наличии в составе питательной среды сахаров или о том, что максимум роста пройден и наступила стадия отмирания.
В целом полученные данные свидетельствуют о достаточно продуктивном росте испытанных микроорганизмов на среде с бурым углём и, как следствие, о деструкции
угля микроорганизмами при использовании его в качестве источника питания.
Эксперимент № 2
Опыт проводился для определения на практике деструктивной активности в отношении бурого угля микроскопического гриба Trametes versicolor. Кроме того, исследовалась деструкция бурого угля грибом Trametes versicolor и бактериями Bacillus sp. при их совместном культивировании в одной питательной среде, так как Bacillus sp. показали наилучший рост в эксперименте № 1 и, являясь азотфиксаторами, они могут продуцировать дополнительный источник азота, необходимый для роста и развития микроскопического гриба.
В эксперименте использована минеральная среда с добавлением различных концентраций бурого угля, а также среда Сабуро в качестве положительного контроля. Колбы после засева закрывались ватно-марлевы-ми пробками и устанавливались на орбитальный шейкер, в котором при включённом перемешивании со скоростью 120 об/мин происходило культивирование выбранных микроорганизмов на питательных средах с различными концентрациями бурого угля. Длительность исследования составила шесть недель.
Состав экспериментальных питательных сред:
• среда № 1 (KH2P04 - 0,9 г/л; K2HP04 - 1,74 г/л; MgS04 х х 7H20 - 0,3 г/л; NaCl - 0,5 г/л; CaCl2 - 0,1 г/л) - контроль;
• среда № 1 + 5 % бурого угля;
• среда № 1 + 10 % бурого угля;
• среда № 1 + 20 % бурого угля;
• среда № 1 + 50 % бурого угля;
• среда Сабуро - положительный контроль.
В ходе эксперимента измерены:
• количество гуминовых кислот в буром угле питательной среды до и после культивирования (рисунок 2) [20];
• ОМЧ до и после культивирования. Устанавливалось методом определения количества мезофильных аэробных и факультативных анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) на твёрдой питательной среде [21].
Результаты измерения ОМЧ: во всех образцах количество бактерий на начало опыта составляло 1 х 107, а по его окончании колебалось в пределах 1,1-1,2 х 107, что говорит о возможном подавлении роста Bacillus sp. микроскопическим грибом Trametes versicolor, так как при схожих условиях культивирования (эксперимент № 1) бактерии Bacillus sp. росли намного активнее.
60
* 50
40
30
20
10
ИМ
№ 2
№ 3
Trametes versicolor
Варианты питательных сред ■ Trametes versicolor+ Bacillus sp.
№ 4
Чистый уголь
Рисунок 2 - Количество гуминовых кислот в образцах и исходном буром угле (содержание бурого угля в питательных средах № 1 - 50 г/л; № 2 - 100 г/л; № 3 - 200 г/л; № 4 - 500 г/л)
Выводы
и дальнейшие направления исследования
Биодеградация бурого угля - актуальная научная задача. Посредством данного процесса можно получить различные виды промышленных продуктов (гумус или органические удобрения, биогаз, обессеренный бурый уголь, сорбенты). Технологии биодеградации бурого угля экологически безопасны, однако требуют тщательного подбора микроорганизмов и условий культивирования.
Лимитирующей стадией биодеградации бурого угля является его солюбилизация по механизму ферментативного расщепления труднодеградируемых органических соединений (полиядерных ароматических углеводородов, полимерных структур), входящих в его состав.
На способность к биодеградации бурого угля протестированы микроорганизмы, обладающие подходящими ферментными системами: микроскопический гриб Trametes versicoior, бактерии Acinetobacterpittii, Enterobacter cloacae, Microbacterium sp., Bacillus sp. Из исследованных бактерий наиболее активный рост на среде с бурым углём показала Bacillus sp., ОМЧ которой увеличилось с 1 х ю8 до 5 х 1012 за две недели культивирования на минеральной среде с добавлением 5 % бурого угля, что делает её перспективной в качестве бактерии-деструктора бурого угля.
В процессе выращивания микроскопического гриба Trametes versicolor на минеральной среде, включающей бурый уголь в количестве 50 % (500 г/л), концентрация свободных гуминовых кислот в буром угле возросла более чем в три раза (анализы на содержание свободных гуминовых кислот образцов бурого угля после биодеградации проводились несколько раз для исключения технической ошибки).
Полученные данные, демонстрирующие многократный прирост свободных гуминовых кислот, делают микроскопический гриб Trametes versicolor перспективным в качестве микроорганизма-деструктора бурого угля и потому требуют дополнительных исследований.
Учитывая крайне незначительный прирост бактерий Baciilus sp. при их культивировании с микроскопическим грибом Trametes versicolor, можно сделать вывод, что Trametes versicolor подавляет рост Bacillus sp., значит, их совместное разведение нецелесообразно.
В дальнейшем планируется провести более углублённое теоретическое и практическое изучение биодеградации бурого угля при помощи микроскопического гриба Trametes versicolor и других микроорганизмов (в том числе водорослей и простейших) и проанализировать влияние полученного гумуса на рост и развитие растений.
Литература
1. Пурыгин, П.П. Гуминовые кислоты: их выделение, структура и применение в биологии, химии и медицине / П.П. Пурыгин, И.А. Потапова, Д.В. Воробьёв //Актуальные проблемы биологии, химии и медицины. - Одесса: С.В. Куприенко, 2014. - С. 180-196.
2. Буланкина, М.А. Микроорганизмы бурого угля / М.А. Бу-ланкина, Л.В. Лысак, Д. Г. Звягинцев // Известия Российской академии наук. Серия биологическая. - 2007. -№ 2. - С. 239-243.
3. Акимбеков, Н. Скрининг микроорганизмов, обладающих высокой солюбилизирующей активностью в отношении бурого угля Казахстана / Н. Акимбеков, А. Журбанова // Современная наука: актуальные проблемы теории и практики. Серия: Естественные и технические науки. -2019. - № 8. - С. 7-10.
4. Разнообразие эукариотических микроорганизмов в дренажных водах открытого угольного карьера / Е.В. Груздев [и др.]// Микробиология. - 2020. - Т. 89, № 5. - С. 623-628.
5. Исхаков, Х.А. Зола уноса - сырьё для производства тротуарной плитки / Х.А. Исхаков, А.Р. Богомолов // Вестник Кузбасского государственного технического университета. - 2010. - № 3 (79). - С. 98-100.
6. Исхаков, Х.А. Зола как почвенный субстрат / Х.А. Исхаков, М.М. Колосова, Г.Г. Котова//Проблемы обеспечения экологической безопасности в Кузбасском регионе: сб. ст: в 3 кн. - Кемерово: КузГТУ, 2005. - Кн. 3. - С. 60-62.
7. Аэробная переработка бурого угля штаммом Acine-tobacter calcoaceticus /И.П. Иванов [и др.]//Журнал Сибирского федерального университета. Химия. - 2014. -Т. 7, № 2. - C. 209-220.
8. Фоменко, Н.А. Применение окисленных бурых углей для повышения экологической безопасности утилизации золошлаковых отходов: дис.... канд. техн. наук: 25.00.36/Н.А. Фоменко. - М, 2019. - 110л.
9. Schmiers, H. Macromolecular Structure of Brown Coal in Relationship to the Degradability by Microorganisms / H. Schmiers, R. Köpsel // Fuel Processing Technology. -1997. - Vol. 52, No. 1. - P 109-114.
10. Юницкий, А.Э. Почва и почвенные микроорганизмы в биосфере ЭкоКосмоДома / А.Э. Юницкий, Е.А. Соловьёва, Н.С. Зыль // Безракетная индустриализация космоса: проблемы, идеи, проекты: материалы II междунар. науч.-техн. конф., Марьина Горка, 21 июня 2019 г / Астроинженерные технологии; под общ. ред. А.Э. Юницкого. - Минск: Парадокс, 2019. - С. 179-183.
11. Перечень средств, веществ, разрешённых к применению в растениеводстве при производстве органической продукции; кормовых добавок, микроэлементов, разрешённых для кормления животных при производстве органической продукции; разрешённых к применению при производстве органической продукции веществ или сочетаний нескольких веществ растительного, животного, микробиологического происхождения, обладающих фармакологической или биологической активностью, для осуществления ветеринарных мероприятий [Электронный ресурс]: постановление М-ва сельск. хоз-ва и продовольствия Респ. Беларусь., 15 марта 2019 г, № 19 // Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь. - Режим доступа:
https://mshp.gov.by/documents/plant/f2033de503c7l223. html - Дата доступа: 02.04.202l.
12. Abdel-Ghaffar, A.S. Aspects of Microbial Activities and Di-nitrogen Fixation in Egyptian Desert Soils /A.S. Abdel-Ghaffar //Arid Soil Research and Rehabilitation. -1989. -Vol. 3, No. 2. - Р. 281-294.
13. Филон, В.И. Исследование природы гумусовых веществ, подверженных непосредственному воздействию минеральных удобрений /В.И. Филон //Агрохимия. - 2004. -№ 8. - С. 61-65.
14. Zaker, M. Natural Plant Products as Eco-Friendly Fungicides for Plant Diseases Control - A Review/ M. Zaker // The Agriculturists. - 2016. - № 14 (l). - С. 134-141.
15. Юницкий, А.Э. Особенности проектирования жилого космического кластера «ЭкоКосмоДом» - миссия, цели, назначение /А.Э. Юницкий // Безракетная индустриализация космоса: проблемы, идеи, проекты: материалы II междунар. науч.-техн. конф., Марьина Горка, 21 июня2019 г. /Астроинженерные технологии; под общ. ред. А.Э. Юницкого. - Минск: Парадокс, 2019. - С. 51-57.
16. Sekhohola, L.M. Biological Degradation and Solubilisation of Coal / L.M. Sekhohola, E.E. Igbinigie, A.K. Cowan // Biodegradation. - 2013. - No. 24. - P. 305-318.
17. Improvement of Efficiency of Brown Coal Biosolubllization by Novel Recombinant Fusarium oxysporum Laccase / N. Kwiatos [et al.]//AMB Express. - 2018. - No. 8. -P. 133.
18. Manganese and Malonate Are Individual Regulators for the Production of Lignin and Manganese Peroxidase Isozymes and in the Degradation of Lignin by Phlebia radiata /A.M. Moilanen [et al.]//Applied Microbiology and Biotechnology. - 1996. - Vol. 45, No. 6. - P. 792-799.
19. Трансформация гуминовых веществ высокоокислен-ного бурого угля базидиальными грибами Trametes hirsuta и Trametes maxima / О.И. Кляйн [и др.]// Прикладная биохимия и микробиология. - 2013. - Т. 49, № 3. -С. 292.
20. Топливо твёрдое. Методы определения выхода гуминовых кислот: ГОСТ 9517-94. - Взамен ГОСТ 9517-76; введ. 01.011997. - Минск: Межгос. совет по стандартизации, метрологии и сертификации, 1996. - 9 с.
21. Продукты пищевые. Методы определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов: ГОСТ 1044415-94. - Взамен ГОСТ 1044415-75; введ. 01.011996. - М.: Стандартинформ, 2010. - С. 313-316.
