CC BY
69
УДК 636.39.082.455 Подбор диагностических
наборов для определения гормонального уровня
Л.С. Малахова, канд. с.-х. наук ФГБНУ ВНИИОК С.В. Криворучко, науч. сотрудник В.А. Мещеряков, канд. вет. наук ФГБОУ ВПО СтГАУ
UDC 636.39.082.455
Selection of sets of instruments for
diagnosis for determination of
hormonal level
Mala^ova L.S., Cand. Agr. Sci.
FGBNU VNIIOK
Krivoruchko S.V., research worker Meshcheryakov V.A., Cand. Vet. Sci. Stavropol State Agrarian University
Исследование гормонального Research of the hormonal
статуса животных представляет status of animals represents scientific
научный интерес и большую interest and the great practical
практическую значимость: importance: there are opened
открывается возможность раннего possibility of early forecasting of
прогнозирования племенной и breeding and economic values of
хозяйственной ценности animal young, identification of
молодняка, выявления newborns with the lowered viability
новорожденных с пониженной and development of scientifically
жизнеспособностью и разработки based methods of active regulation
научно обоснованных методов by a cycle of reproduction of animals. активного регулирования цикла The studied sets of instruments
воспроизводства животных. for diagnosis of the different sires
Изучаемые диагностические when determining a progesterone at
наборы различных производителей female goats are rather objective and
при определении прогестерона у suitable for pilot and mass clinical
козоматок являются достаточно trials.
объективными и пригодными для According to the rules of GLP
экспериментальных и массовых (Good laboratory practice), each
клинических исследований. laboratory has to determine for itself
В соответствии с правилами GLP norm parameters, characteristic for
(хорошей лабораторной практики), the studied population. каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции. Ключевые слова: коза, зааненская порода, половой цикл, гормоны, прогестерон, диагностические наборы, ИФА-диагностика
Исследование гормонального статуса животных представляет определенный научный интерес и большую практическую значимость: открывается возможность раннего прогнозирования племенной и хозяйственной ценности молодняка, выявления новорожденных с
Key words: goats, Saanen breed, sexual cycle, hormones, progesterone, sets of instruments for diagnosis, IFA diagnostics
пониженной жизнеспособностью и разработки научно обоснованных методов активного регулирования цикла воспроизводства животных.
Во всем мире существует проблема диагностики стельности на ранних сроках. В Российской Федерации в инструкциях по воспроизводству сельскохозяйственных животных о диагностике стельности на ранних этапах отсутствуют какие-либо четкие указаний. Между тем в условиях промышленного или мелкотоварного козоводства возрастает необходимость выявления неоплодотворившихся животных как можно раньше после осеменения, а не спустя 75-90 дней, что имеет место при традиционном способе - наружном определении беременности. В то время как количественное определение прогестерона у коз уже на 20-22 день после осеменения дает возможность установления наличия или отсутствия беременности [2].
Прогестерон - гестаген с молекулярной массой 314.5 дальтон, секретируемый желтым телом, а также корой надпочечников и яичками, является предшественником для биосинтеза кортикостероидов и андрогенов. Являясь антагонистом эстрогенов, прогестерон вызывает характерные изменения эндометрия, необходимые для имплантации оплодотворенной яйцеклетки. Под воздействием прогестерона происходит формирование материнской и плодной плацент, в дальнейшем гормон активно участвует совместно с нейрогуморальными факторами в контролировании и поддержании беременности [1]. Уровень прогестерона в сыворотке крови является маркером функционального состояния репродуктивной системы и функции плаценты в течение беременности.
На сегодняшний день существует ряд методов лабораторной диагностики беременности. Эти методы неравноценны и отличаются рядом особенностей, большей или меньшей специфичностью и достоверностью. Они в разной степени сложны по технике выполнения и отличаются по времени наступления реакции.
Иммуноферментный анализ (ИФА) в настоящее время является одним из распространенных методов исследования. К явным преимуществам этого метода относится информативность и безвредность в работе для персонала, простота выполнения, доступность и стабильность реагентов, экспрессность и возможность автоматизации для проведения массовых анализов.
Метод определения основан на одностадийном твердофазном конкурентном иммуноферментном анализе с применением моноклональных антител к прогестерону. В лунки микропланшета, на поверхности которых адсорбированы специфические анти-Прогестерон-антитела, вносят исследуемый образец и конъюгат Прогестерон-пероксидаза. Прогестерон из образца конкурирует с конъюгированным антигеном за связывание с антителами на поверхности лунки. После отмывки активность фермента, связанного с поверхностью лунки микропланшета, проявляется и измеряется добавлением хромоген-
субстратной смеси, стоп-раствора и фотометрией при 450 нм. Интенсивность цветной реакции обратно пропорциональна количеству антигена в образце.
Необходимо отметить: на рынке достаточное количество диагностикумов как российских, так и зарубежных производителей для исследований гормонов в биологических жидкостях (сыворотка, плазма, слюна и т.д.) у человека. Однако найти аналогичные наборы для сельскохозяйственных животных, в частности коз, не представилось возможным. К тому же внедрение метода ИФА по настоящее время тормозится в связи с дефицитом методической литературы по интерпретации результатов анализа в клинической практике, а также отсутствием исследовательских работ в этом направлении.
Изучение данного вопроса позволяет дополнить информацию о диагностике гормонального уровня крови животных в течение полового цикла.
Основная задача исследований заключалась в определении динамики уровня прогестерона у коз зааненской породы с целью установления адекватности использования диагностических наборов различных производителей.
Материал и методика исследований
Исследования проведены в генофондном хозяйстве ФГБНУ ВНИИОК. Объектом исследований служили клинически здоровые зааненские козы репродуктивного возраста 1-3 лактации (n=40). Длительность естественного полового цикла у коз устанавливали путем выборки с использованием козла-пробника (в фартуке) [3].
Для изучения динамики уровня прогестерона в сыворотке крови коз с естественным половым циклом ежедневно на протяжении двух половых циклов в одно и то же время получали пробы крови.
Количественное содержание прогестерона в пробах сыворотки крови определяли методом иммуноферментного анализа на автоматическом биохимическом анализаторе «Chemy Well Comby» производства США, используя диагностические наборы:
- набор реагентов для иммуноферментного определения прогестерона в сыворотке крови человека (ИммуноФа-ПГ), разработанных ЗАО «НВО Иммунотех», Москва (1 группа);
- набор реагентов для иммуноферментного определения концентрации прогестерона в сыворотке крови человека («Прогестерон-ИФА-БЕСТ») производства ЗАО «Вектор-Бест», Ростов-на-Дону (2 группа);
- набор реагентов для иммуноферментного определения прогестерона в сыворотке и плазме крови собак и кошек, производитель ООО «^EMA», Москва (3 группа);
- набор реагентов для иммуноферментного определения прогестерона в сыворотке и плазме (Progesteron ELISA) производства DRG Instruments GmbH, Германия (4 группа).
Результаты исследований
Анализ полученных результатов показывает характерную изменчивость в уровне прогестерона в зависимости от дня полового цикла (табл.), при этом разница показателей между группами недостоверна и не имеет практического значения. В ходе постановки реакции характерных различий не установлено.
Следовательно, изучаемые диагностические наборы различных производителей для определения гормонов, в частности прогестерона, у козоматок являются достаточно объективными и пригодными для экспериментальных и массовых клинических ветеринарных исследований. Определяющим фактором для исследователей, скорее всего, будет стоимость диагностикумов.
Вместе с тем, в соответствии с правилами ОЬР (хорошей лабораторной практики), каждая лаборатория должна сама определить для себя параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.
Таблица. - Уровень прогестерона в сыворотке крови коз с естественным половым циклом (нмоль/л)_
Фазы Дни Группа (п=10)
полового полового
цикла цикла 1 2 3 4
Охота 0 0,9±0,02 1,2±0,24 1,0±0,04 0,9±0,15
1 1,5±0,36 1,1±0,16 1,4±0,26 1,2±0,51
Лютеиновая 2 1,7±0,11 1,9±0,62 1,9±0,62 1,5±0,02
фаза 3 4,0±0,19 3,9±0,12 4,1±0,12 4,2±0,10
4 3,4±0,46 3,7±0,41 3,7±0,11 3,8±0,21
5 10,5±0,14 10,1±0,23 9,9±0,50 9,7±0,34
6 11,0±0,15 10,8±0,27 10,4±0,70 10,6±0,12
7 10,2±0,66 10,8±0,15 11,0±0,25 11,7±0,09
8 13,7±0,34 14,8±0,23 14,1 ±0,13 13,9±0,15
9 12,1±0,29 10,8±0,42 11,8±0,22 12,3±0,19
10 17,5±0,15 17,8±0,25 17,3±0,27 16,7±0,23
11 17,9±0,26 18,1±0,22 18,0±0,34 18,5±0,24
Лютеолиз 12 19,3±0,50 19,6±0,46 19,2±0,31 19,5±0,36
Фолликулярн 13 18,1±0,24 18,6±0,27 18,0±0,21 19,3±0,15
ая фаза 14 17,8±0,11 19,2±0,15 18,2±0,35 19,0±0,11
15 17,0±0,16 16,9±0,19 16,6±0,11 16,4±0,28
16 8,5±0,56 8,0±0,35 9,0±0,15 10,1±0,10
17 6,2±0,15 6,1±0,11 6,3±0,31 8,5±0,12
Охота 0 1,2±0,10 0,9±0,07 1,0±0,12 1,1±0,15
1 0,9±0,05 0,8±0,07 0,9±0,10 1,1±0,08
Литература:
1. Айбазов, М.М. Уровень, соотношение и динамика половых гормонов у зааненских коз / М.М. Айбазов, Л.С. Малахова, А.Н. Черкесова //Овцы, козы, шерстяное дело, 2007. -№2. -С.52-53.
2. Малахова, Л.С. Уровень и динамика прогестерона у коз зааненской породы в различные периоды репродуктивного цикла /Л.С.Малахова, С.В.Криворучко, Е.М. Никитина //Ветеринарная патология, 2012. -Т.41. - №3. -С.16-19.
3. Малахова, Л.С. Ранняя диагностика беременности у молочных коз /Л.С.Малахова, С.В.Криворучко, Е.М. Никитина // В кн. «Животноводство и кормопроизводство». Сб. науч. трудов. Вып.4. Ставрополь, 2011. -С. 31-32.
