Научная статья на тему 'ПЕРВЫЕ СЛУЧАИ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА B СУБГЕНОТИПА D4 У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ, ОСТРЫМ И СКРЫТЫМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ B В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ'

ПЕРВЫЕ СЛУЧАИ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА B СУБГЕНОТИПА D4 У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ, ОСТРЫМ И СКРЫТЫМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ B В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

CC BY
80
12
Читать
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
VIRAL HEPATITIS B / HBV GENOTYPE / MOLECULAR EPIDEMIOLOGY / HBV D4 / HBV MUTATIONS / DAGESTAN REPUBLIC / ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ B / ГЕНОТИП ВИРУСА ГЕПАТИТА B / МОЛЕКУЛЯРНАЯ ЭПИДЕМИОЛОГИЯ / ВИРУС ГЕПАТИТА B D4 / МУТАЦИИ ВИРУСА ГЕПАТИТА B / РЕСПУБЛИКА ДАГЕСТАН

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Останкова Ю. В., Семенов А. В., Зуева Е. Б., Тотолян Арег А.

Цель исследования. Изучить молекулярно-генетическую структуру изолятов вируса гепатита B (ВГВ) D4, впервые выявленных на территории Российской Федерации. Материал и методы. В работе были использованы образцы плазмы крови пациентов из Республики Дагестан с ранее выявленным ВГВ субгенотипа D4. Для амплификации и секвенирующей реакции использовали перекрывающиеся пары специфических праймеров, совместно фланкирующие полный геном ВГВ. Результаты. Впервые на территории Российской Федерации выявлены изоляты ВГВ субгенотипа D4. Все 3 изолята относились к серотипу ayw2. У ВИЧ-инфицированного пациента с HBsAg-негативным скрытым ВГВ выявили мутации фармакорезистентности L80V и M204I. Показана высокая частота естественных полиморфных вариантов гена Pol у всех трех изолятов. В регионе Precore/Core у всех 3 изолятов обнаружили мутации Precore A1846T, C1858T и мутации Core E40D, N74T, N87S, I97F. В Х-регионе у всех 3 изолятов выявлены мутации V5L и P38S. Филогенетический анализ полноразмерного генома ВГВ показал, что изоляты сгруппированы вместе с изолятом субгенотипа D4 из Южной Африки. Заключение. Происхождение всех 3 пациентов с вышеуказанными изолятами из одного географического региона, филогенетическая близость нуклеотидных последовательностей полных геномов вирусов и ряд одинаковых мутаций и полиморфных вариантов в разных генах во всех 3 изолятах свидетельствуют о независимом однократном завозе вируса с последующим распространением. Пути распространения, а также частота встречаемости ВГВ D4 в Республике Дагестан остаются неизвестными и нуждаются в дальнейшем исследовании.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Останкова Ю. В., Семенов А. В., Зуева Е. Б., Тотолян Арег А.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
Предварительный просмотр
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

THE FIRST CASES DETECTION OF HEPATITIS B VIRUS SUBGENOTYPE D4 IN PATIENTS WITH CHRONIC, ACUTE AND OCCULT HEPATITIS B IN RUSSIAN FEDERATION

Aim. To study the HBV D4 isolates molecular genetic structure first identified in the Russian Federation. Materials and methods. Blood plasma samples of patients from the Dagestan Republic with previously detected HBV subgenotype D4 were used. For amplification and sequencing reactions, overlapping pairs of specific primers were used, jointly flanking the complete HBV genome. Results. For the first time in the Russian Federation, isolates of HBV subgenotype D4 were detected. All three isolates are ayw2 serotype. The pharmacoresistance mutations L80V and M204I were detected in an HIV-infected patient with HBsAg-negative occult HBV. The high frequency of natural polymorphic variants of the Pol gene was shown in all three isolates. In the Precore/Core region, all isolates detected Precore A1846T, C1858T, and Core E40D, N74T, N87S, and I97F mutations. In the X region, mutations V5L and P38S were detected in all three isolates. Phylogenetic analysis of the HBV full-sized genome showed that the isolates are grouped together with the D4 subgenotype isolate from South Africa. Conclusion. The origin of all three patients with the above isolates from the same geographical region, the phylogenetic proximity of nucleotide sequences, and a series of identical mutations and polymorphic variants in different genes in all three isolates indicate independent single importation of the virus with subsequent spread. The distribution routes, as well as the frequency of HBV D4 occurrence in the Dagestan Republic remain unknown and need further research.

Текст научной работы на тему «ПЕРВЫЕ СЛУЧАИ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА B СУБГЕНОТИПА D4 У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ, ОСТРЫМ И СКРЫТЫМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ B В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ»

https://doi.org/10.17116/molgen202038041180

Первые случаи выявления вируса гепатита B субгенотипа D4 у больных хроническим, острым и скрытым вирусным гепатитом B в Российской Федерации

© Ю.В. ОСТАНКОВА, А.В. СЕМЕНОВ, Е.Б. ЗУЕВА, АРЕГ А.ТОТОЛЯН

ФБУН «Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Санкт-Петербург, Россия

РЕЗЮМЕ

Цель исследования. Изучить молекулярно-генетическую структуру изолятов вируса гепатита B (ВГВ) D4, впервые выявленных на территории Российской Федерации.

Материал и методы. В работе были использованы образцы плазмы крови пациентов из Республики Дагестан с ранее выявленным ВГВ субгенотипа D4. Для амплификации и секвенирующей реакции использовали перекрывающиеся пары специфических праймеров, совместно фланкирующие полный геном ВГВ.

Результаты. Впервые на территории Российской Федерации выявлены изоляты ВГВ субгенотипа D4. Все 3 изолята относились к серотипу ayw2. У ВИЧ-инфицированного пациента с HBsAg-негативным скрытым ВГВ выявили мутации фармакорезистентности L80V и M204I. Показана высокая частота естественных полиморфных вариантов гена Pol у всех трех изолятов. В регионе Precore/Core у всех 3 изолятов обнаружили мутации Precore A1846T, C1858T и мутации Core E40D, N74T, N87S, I97F. В Х-регионе у всех 3 изолятов выявлены мутации V5L и P38S. Филогенетический анализ полноразмерного генома ВГВ показал, что изоляты сгруппированы вместе с изолятом субгенотипа D4 из Южной Африки. Заключение. Происхождение всех 3 пациентов с вышеуказанными изолятами из одного географического региона, филогенетическая близость нуклеотидных последовательностей полных геномов вирусов и ряд одинаковых мутаций и полиморфных вариантов в разных генах во всех 3 изолятах свидетельствуют о независимом однократном завозе вируса с последующим распространением. Пути распространения, а также частота встречаемости ВГВ D4 в Республике Дагестан остаются неизвестными и нуждаются в дальнейшем исследовании.

Ключевые слова: вирусный гепатит B, генотип вируса гепатита B, молекулярная эпидемиология, вирус гепатита B D4, мутации вируса гепатита B, Республика Дагестан.

ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ:

Останкова Ю.В. — https://orcid.org/0000-0003-2270-0889; e-mail: shenna1@yandex.ru Семенов А.В. — https://orcid.org/0000-0003-3223-8219; e-mail: alexvsemenov@yahoo.com Зуева Е.Б. — https://orcid.org/0000-0002-0579-110X; e-mail: ezueva75@mail.ru Тотолян Арег А. — https://orcid.org/0000-0003-4571-8799; e-mail: totolian@pasteurorg.ru Автор, ответственный за переписку: Останкова Ю.В. — e-mail: shenna1@yandex.ru

КАК ЦИТИРОВАТЬ:

Останкова Ю.В., Семенов А.В., Зуева Е.Б., Тотолян Арег А. Первые случаи выявления вируса гепатита B субгенотипа D4 у больных хроническим, острым и скрытым вирусным гепатитом B в Российской Федерации. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2020;38(4):180-187. https://doi.org/10.17116/molgen202038041180

The first cases detection of hepatitis B virus subgenotype D4 in patients with chronic, acute and occult hepatitis B in Russian Federation

© YU.V. OSTANKOVA, A.V. SEMENOV, E.B. ZUEVA, AREG A. TOTOLIAN

Saint-Petersburg Pasteur Institute Russian Federal Consumer Rights Protection and Human Health Control Service, Saint Petersburg, Russia ABSTRACT

Aim. To study the HBV D4 isolates molecular genetic structure first identified in the Russian Federation.

Materials and methods. Blood plasma samples of patients from the Dagestan Republic with previously detected HBV subgenotype D4 were used. For amplification and sequencing reactions, overlapping pairs of specific primers were used, jointly flanking the complete HBV genome.

Results. For the first time in the Russian Federation, isolates of HBV subgenotype D4 were detected. All three isolates are ayw2 serotype. The pharmacoresistance mutations L80V and M204I were detected in an HIV-infected patient with HBsAg-negative occult HBV. The high frequency of natural polymorphic variants of the Pol gene was shown in all three isolates. In the Precore/Core region, all isolates detected Precore A1846T, C1858T, and Core E40D, N74T, N87S, and I97F mutations. In the X region, mutations V5L and P38S were detected in all three isolates. Phylogenetic analysis of the HBV full-sized genome showed that the isolates are grouped together with the D4 subgenotype isolate from South Africa.

Conclusion. The origin of all three patients with the above isolates from the same geographical region, the phylogenetic proximity of nucleotide sequences, and a series of identical mutations and polymorphic variants in different genes in all three isolates indicate independent single importation of the virus with subsequent spread. The distribution routes, as well as the frequency of HBV D4 occurrence in the Dagestan Republic remain unknown and need further research.

Keywords: viral hepatitis B, HBV genotype, molecular epidemiology, HBV D4, HBV mutations, Dagestan Republic.

INFORMATION ABOUT THE AUTHORS:

Ostankova Yu.V. — https://orcid.org/0000-0003-2270-0889; e-mail: shenna1@yandex.ru Semenov A.V. — https://orcid.org/0000-0003-3223-8219; e-mail: alexvsemenov@yahoo.com Zueva E.B. — https://orcid.org/0000-0002-0579-110X; e-mail: ezueva75@mail.ru Totolian Areg A. — https://orcid.org/0000-0003-4571-8799; e-mail: totolian@pasteurorg.ru Corresponding author: Ostankova Yu.V. — e-mail: shenna1@yandex.ru

TO CITE THIS ARTICLE:

Ostankova YuV, Semenov AV, Zueva EB, Totolian Areg A. The first cases detection of hepatitis B virus subgenotype D4 in patients with chronic, acute and occult hepatitis B in Russian Federation. Molekulyarnaya Genetika, Mikrobiologiya i Virusologiya (Molecular Genetics, Microbiology and Virology). 2020;38(4):180-187. (In Russ.). https://doi.org/10.17116/molgen202038041180

Введение

Вирусные гепатиты являются 7-й по значимости причиной смертности во всем мире, и примерно 47% этих смертей связаны с вирусом гепатита B (ВГВ) [1]. По оценкам ВОЗ, в 2015 г. 257 млн человек жили с хроническим гепатитом B (определяемым по выявлению в периферической крови поверхностного антигена вируса гепатита B — HBsAg), но только 10,5% были осведомлены о своей инфекции и только 16,7% пациентов с установленным диагнозом получали лечение [2]. В Российской Федерации показана умеренная (2—7%) распространенность ВГВ. На территории РФ в период 1999—2017 гг. показано снижение заболеваемости острым вирусным гепатитом B (ОВГВ) и отмечена тенденция к росту хронического вирусного гепатита B (ХВГВ) в среднем до 9,28 на 100 тыс. населения и до 31,1 на 100 тыс. населения в Дальневосточном округе. На 31.12.15 в Северо-Западном федеральном округе число больных ХВГВ достигло 233 190 (прирост 5814 человек) [3].

В настоящее время ВГВ подразделяют на 9 генотипов (A-I), отличающихся по составу нуклеотидных последовательностей более чем на 8%, и на 48 субгенотипов (в пределах генотипов A-D, F), отличающихся на 4—7,5% [4—6], а также генотип J, филогенетически позиционирующийся между ВГВ человека и обезьян.

Изучение генетической гетерогенности ВГВ стало основной проблемой в исследованиях, направленных на понимание взаимосвязи между геновариантами вируса и широким спектром клинических и патологических состояний, связанных с инфекцией, ответом на антивирусную терапию и прогнозом заболевания [7, 8].

Многочисленные исследования показали, что разные генотипы и субгенотипы распределены неравномерно, могут преобладать в разных географических регионах, и это распределение часто является отражением международных миграций человека и отношений между людьми. Наиболее распространенным ге-новариантом ВГВ является генотип D с преобладанием в Юго-Восточной Европе, Средиземноморском бассейне, на Ближнем Востоке и на индийском субконтиненте [9]. ВГВ генотип D имеет самый короткий из всех вариантов ВГВ геном (3182 нт) и характеризуется делецией протяженностью 33 нт в начале региона pre-S1. По сравнению с другим широко распространен-

ным в мире генотипом А генотип D связан с более тяжелыми клиническими исходами цирроза печени и ге-патоцеллюлярной карциномой (ГЦК), а также с более низким ответом на лечение альфа-интерфероном; пациенты с ОВГВ, инфицированные генотипом D, имеют более высокий уровень хронизации, чем пациенты, инфицированные генотипами В и С [10]. В настоящее время генотип D представлен 10 субгенотипами ф1-010), из которых D1-D3 выявляют во всем мире, в то время как D4-D10 имеют ограниченное распространение [11]. Субгенотипы D3 и D6 были недавно перегруппированы в один субгенотип D3 [9].

В Российской Федерации распространен ВГВ генотипов D и А с преобладанием субгенотипа D2. Однако за счет активной миграции населения — как туристической, так и в первую очередь трудовой — на территории РФ не только обнаруживают случаи завозных изолятов из стран с высокой распространенностью хронических вирусных гепатитов, но и выявляют постепенные изменения в геноти-пической структуре ВГВ в регионах. Так, например, в Северо-Западном федеральном округе существенно возрос уровень встречаемости субгенотипов Б1 и Б3, характерных для стран Средней Азии [12, 13].

Эпидемия гепатита В в мире неоднородна, это сложный, динамический, все время развивающийся процесс, связанный с постепенно меняющейся генотипической структурой вируса в различных регионах мира. Крайне важно постоянно отслеживать разнообразие и распространение ВГВ, учитывать завозные изоляты, происходящие из стран с высокой распространенностью гепатотропных вирусов и зависящие от миграционных волн.

Во время исследования генетической структуры ВГВ в группе больных с хроническими вирусными гепатитами мы выявили изолят ВГВ, при анализе Рге-81/ Рге-82/8 региона генома которого установлено, что пациент был инфицирован редким субгенотипом D4, ранее не выявлявшимся на территории РФ, что вызвало интерес к настоящему исследованию. Позже мы обнаружили еще 2 случая заражения ВГВ D4.

Цель работы — провести секвенирование полного генома и изучить молекулярно-генетическую структуру изолятов ВГВ D4, впервые выявленных на территории Российской Федерации.

Таблица. Характеристика обследованных пациентов

Пол Год Г°д мани Регион рождения Регион проживания НВйАй Диагноз Коинфекция рождения фестации

М 1987 2010 Дербент, Р. Дагестан Каспийск, Р. Дагестан Да ХВГВ Нет

М 1989 2017 Махачкала, Р. Дагестан Махачкала, Р. Дагестан Да ОВГВ Нет

М_1985_2018_Каспийск, Р. Дагестан Ленинградская область Нет Скрытый ХВГВ_ВИЧ

Материалы и методы

В работе были использованы 3 образца плазмы крови, полученные в 2015, 2017 и 2018 г. соответственно от пациентов с характеристиками, представленными в таблице.

Амплификацию и последующее секвенирова-ние осуществляли с использованием nested-ПЦР. На первом этапе проводили асимметричную ПЦР с использованием протяженных олигонуклеотидов, а на втором этапе для повышения чувствительности проводили ПЦР с использованием продукта амплификации первой реакции и одной из пар внутренних (вложенных, гнездовых) перекрывающихся прайме-ров, совместно фланкирующих полный геном ВГВ (гены S, P, C, X). Секвенирующую реакцию проводили согласно инструкции к набору реагентов ABI PRISM BigDye Terminator v3.1. (Applied Biosystems, США) на прямых и обратных праймерах в трех повторах. Анализ продуктов секвенирующей реакции проводили с использованием генетического анализатора ABI Prism 3500 (Applied Biosystems, США).

Первичный анализ полученных в ходе секвени-рования фрагментов осуществляли с помощью программы NCBI Blast в сравнении с нуклеотидными последовательностями, представленными в международной базе данных GenBank. Выравнивание ну-клеотидных последовательностей проводили в программе MEGA 7.0, используя алгоритм ClustalW [14]. Для построения филогенетических деревьев и последующего филогенетического анализа рассматривали расстояния между последовательностями методом присоединения соседей, позволяющим оптимизацию дерева в соответствии с критерием «сбалансированной минимальной эволюции» (Neighbor-joining), для оценки достоверности построенных деревьев проведен бутстреп (bootstrap) для 1000 повторов.

Серологический подтип ВГВ определяли на основе аминокислотной последовательности HBsAg.

Для выявления возможной рекомбинации изо-лятов выполняли анализ с использованием инструмента генотипирования NCBI [15] и программного обеспечения RDP4 [16].

Результаты и обсуждение

Для всех 3 изолятов получены нуклеотидные последовательности полных геномов ВГВ, депонированные в международную базу данных GeneBank под номерами MN365238, MN365239, MN365240.

Все 3 изолята относились к серотипу ayw2, наиболее часто встречающемуся среди ВГВ D4.

Филогенетические отношения между исследованными изолятами и референсными последовательностями представлены на рис. 1.

Для лучшей дифференциации полученных изолятов мы выбрали в международной базе данных GenBank 33 полных генома ВГВ субгенотипа D4 и 14 рекомби-нантов D/E из разных регионов мира. При филогенетическом анализе выявленные нами изоляты образовали монофилетический кластер, связанный только с изолятом из Южной Африки (рис. 2), что предполагает однократное внедрение этого субгенотипа в регион и дальнейшее распространение в ограниченной группе.

Существенным ограничением такого анализа является недостаточная представленность в базе GenBank полноразмерных геномов ВГВ субгенотипа D4. В связи с этим мы сочли возможным провести филогенетический анализ изолятов по S-региону (рис. 3).

В связи с тем что изоляты данной работы при анализе по S-региону кластеризовались с рекомбинант-ными изолятами, был проведен анализ на рекомбинацию. При анализе нуклеотидных последовательностей полных геномов ВГВ на рекомбинации с использованием инструмента генотипирования NCBI все 3 изолята были определены как рекомбинантные D/E. Однако при анализе с использованием RDP4 рекомбинации не были выявлены, что в связи с более строгими ограничениями данной программы к оценке рекомбинаци-онных событий представляется более верным. По всей видимости, это связано с тем, что сходный фрагмент генома с ВГВ генотипа E наблюдается практически у всех полных нуклеотидных последовательностей ВГВ генотипа D, и в этом регионе генома ВГВ генотипов D и E группируются совместно. Таким образом, мы не можем отнести наши изоляты к рекомбинантам.

Ни один из пациентов, от которых были получены изоляты ВГВ, не подвергался противовирусной терапии ВГВ. Однако один из пациентов принимал антиретровирусную терапию в связи с инфекцией ВИЧ, причем терапия была вирусологически неэффективна в связи с низкой приверженностью пациента. Некоторые составляющие элементы антиретрови-русной терапии, применяемой у ВИЧ-инфицированных пациентов, могут стать причиной повышенной устойчивости к лекарственным препаратам не только ВИЧ, но и ВГВ, что особенно актуально при наличии скрытого HBsAg-негативного ВГВ, не идентифицируемого стандартными методами. При анализе нуклеотидных последовательностей участка гена

Рис. 1. Филогенетическое дерево исследованных изолятов ВГВ, выделенных от пациентов с ВГВ D4, проживающих на территории РФ, в сравнении с представленными в международной базе данных GenBank референсными последовательностями.

Референсные последовательности обозначены кодами GenBank с указанием генотипа/субгенотипа. Кружками обозначены образцы, исследованные в настоящей работе. Даны значения bootstrap >70%.

Pol генома ВГВ, ответственного за развитие лекарственной устойчивости вируса, только у ВИЧ-инфицированного пациента с HBsAg-негативным скрытым ВГВ мы выявили мутации, определяющие развитие фармакорезистентности к терапии нуклеот(з)идных аналогов — замещение аминокислот L80V и M204I. Мутации M204V и M204I являются наиболее частыми мутациями резистентности к ламивудину. Одной этой мутации достаточно, чтобы привести к фармакорезистентности, но часто она связана с компенсаторными мутациями, в том числе выявленной нами rtL80V/I, восстанавливающей функции вирусной полимеразы почти до уровней дикого типа. В присутствии мутаций, связанных с резистентностью

к ламивудину, развивается устойчивость к группе D-циклопентанте, то есть к энтекавиру. Таким образом, изолят MN365240 устойчив к ламивудину, тел-бивудину и частично устойчив к энтекавиру.

В анализируемом регионе гена Pol всех 3 изолятов показана высокая частота естественных полиморфных вариантов. Отметим, что максимальное количество мутаций как участка обратной транс-криптазы (9 мутаций), так и гена S (4 мутации) также выявили у ВИЧ-инфицированного пациента с HBsAg-негативным ВГВ. На участке обратной транскриптазы у всех трех изолятов представлены мутации Y135S, Q149K, R153W, F221Y, у пациентов с ОВГВ и скрытым ВГВ представлена также мута-

Рис. 2. Филогенетическое дерево исследованных изолятов ВГВ, выделенных от пациентов с ВГВ D4, проживающих на территории РФ, в сравнении с представленными в международной базе данных GenBank нуклеотидными последовательностями ВГВ субгенотипа D4 и рекомбинантов D/E.

Референсные последовательности обозначены кодами GenBank с указанием субгенотипа и региона происхождения изолята. Ромбами обозначены образцы, исследованные в настоящей работе. Даны значения bootstrap >70%.

ция A97T. На участке гена S во всех изолятах выявлены мутации T127P, L213T, а при ОВГВ и скрытом ВГВ — дополнительно мутация L88Q.

Область Precore/Core кодирует HBeAg, а мутации, влияющие на экспрессию HBeAg, являются клинически значимыми. При анализе региона Precore/Core у всех трех изолятов обнаружили мутации Precore A1846T, C1858T и мутации Core E40D, N74T, N87S, I97F, D153., R154. Такие мутации, как выявленная нами I97F/L, ингибируют образование нукле-окапсида ядра, а также способствуют прогрессирова-

нию заболевания, уклоняясь от врожденного иммунитета хозяина. Выявленная у всех изолятов A1846T в Precore области ассоциирована с развитием ГЦК, а также ранее была описана как высоко распространенная в пределах субгенотипа D4 [17].

В Х-регионе у всех 3 изолятов выявлены мутации V5L и P38S, связанные с тяжестью заболевания печени, ГЦК и циррозом. Так, мутация V5L впервые была описана в работе H. Kim и соавт., где показана ассоциация данной мутации с ГЦК у пациентов с ВГВ генотипа С [18].

Рис. 3. Филогенетическое дерево исследованных изолятов ВГВ, выделенных от пациентов с ВГВ D4, проживающих на территории РФ, в сравнении с представленными в международной базе данных GenBank нуклеотидными последовательностями ВГВ субгенотипа D4 и рекомбинантов D/E на базе S-региона.

Референсные последовательности обозначены кодами GenBank с указанием субгенотипа и региона происхождения изолята. Ромбами обозначены образцы, исследованные в настоящей работе. Даны значения bootstrap >50%.

Особый интерес в анамнезе пациентов представляет их общее происхождение из Республики Дагестан, а также проживание или регулярные визиты в указанный регион.

Данные о распространенности ВГВ в Северо-Кавказском регионе в целом и в Дагестане в частности крайне ограничено представлены в научной литературе. Так, показано, что в Республике Дагестан в 2004—2008 гг. из всех вирусных гепатитов доля ОВГВ у лиц 18—29 лет была наибольшей, пик обращаемости мужчин в медицинские учреждения по поводу ОВГВ приходился на 26 лет, при этом хронический ВГВ в 33% случаев регистрировался в возрасте 18—29 лет, т.е. трудоспособном детородном возрасте [19], что не противоречит информации о наших пациентах, возраст которых на момент выявления ВГВ 23—33 года, причем больному ОВГВ 28 лет. Наиболее

неблагополучной группой по обращаемости с ХВГВ является мужское городское население, показатель обращаемости в 4 раза больше, чем у сельского населения. Наиболее высокая заболеваемость отмечена в Махачкале, удельный вес — 40% от общего количества случаев (в 2014 г. — 42%) [20]. Еще одним фактором риска большей обращаемости населения по поводу вирусных гепатитов служит приморское расположение городов, а обследованные нами пациенты проживали/посещали именно приморские города — Махачкалу, Каспийск, Дербент.

На диспансерном учете по поводу ХВГВ в Республике Дагестан на 1.01.16 состояло 1858 больных, в том числе 86 детей [20]. Необходимо отметить, что сравнительно низкая выявляемость ВГВ в Республике Дагестан может быть связана как с методами диагностики (только НВ8^), так и с низкой ин-

формированностью, а значит и обращаемостью, населения в медицинские учреждения.

Интересно отметить, что среди выявленных в 2016 г. 15 больных ОВГВ все пациенты были взрослыми, причем все вакцинированы против ВГВ по возрасту, полный курс иммунизации получили 5 больных [20].

ВГВ субгенотипа D4 распространен в Папуа Новой Гвинее, в этнической микронезийской общине Соломоновых островов, Сомали, на Карибских островах Гаити и Мартинике, среди аборигенов Австралии, в Бразилии. Известно о встречаемости ВГВ D4 у коренного населения Арктики в Канаде [17], а также о его высокой распространенности (59%) в Галисии (Испания) [21]. В литературе представлены случаи выявления завозных изолятов ВГВ D4 в Бельгии, Англии, Беларуси [22—24]. Однако возникновение ВГВ D4 в иных географических ареалах исключительно за счет случайных завозов было опровергнуто в 2014 г., когда в Индии в штате Трипура у 19% больных ХВГВ обнаружили кластер уникальных изо-лятов D4, отличающихся от африканских и австралийских вариантов и циркулирующих, по всей видимости, на ограниченной территории [25].

Кластеризация выявленных нами изолятов в одной ветви филогенетического дерева, а также обнаружение ряда полиморфных вариантов и клинически значимых мутаций в нуклеотидных последовательностях разных генов всех 3 изолятов предполагают независимое однократное внедрение субгенотипа D4 из Африки в РФ.

Известно, что главную роль в кластеризации играет не столько географическая общность, сколько пути передачи инфекции, особенно когда речь идет о распространении редкого геноварианта вируса после однократного внедрения. Общий для пациентов регион проживания/происхождения подтверждает это, однако все 3 пациента отрицают свою принадлежность к таким группам риска, как потребители инъекционных наркотических веществ и мужчины, практикующие секс с мужчинами, отрицают рискованное сексуальное поведение, пользование услугами работниц сексуальной индустрии.

Таким образом, несмотря на очевидность завоза и последующего распространения ВГВ субгенотипа D4, путь инфицирования остается неизвестным, как и встречаемость этого геноварианта в регионе.

Поскольку молекулярно-генетические данные о ВГВ в Республике Дагестан практически не представлены, из методов диагностики ВГВ используется преимущественно ИФА, а характерная для ВГВ D4 низкая вирусная нагрузка по сравнению с суб-

ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES

1. Schweitzer A, Horn J, Mikolajczyk RT, Krause G, Ott JJ. Estimations of worldwide prevalence of chronic hepatitis B virus infection: a systematic review of data published between 1965 and 2013. Lancet. 2015;386(10003):1546-1555. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(15)61412-X

генотипами D1—D3 [25] ограничивает возможность использования коммерческих наборов для выявления вируса методом ПЦР, представляется очевидной необходимость дальнейшего внимательного исследования генотипической структуры ВГВ в Республике Дагестан.

Интересно, что при анализе научной литературы мы обнаружили в зарубежных журналах упоминание о встречаемости в России ВГВ редкого субгенотипа D4 [26] со ссылкой на работу T. Tallo и со-авт. [27]. По всей видимости, имела место ошибка, так как в указанном исследовании авторы описывали характерные для РФ субгенотипы D1, D2, D3, а при филогенетическом анализе и при сравнении аминокислотных остатков продуктов четырех ОРС ВГВ субгенотипов D1—D5 использовали полногеномные последовательности ВГВ из базы данных GeneBank, в том числе ВГВ D4 — AB033559, AB048702, AB048703.

Таким образом, мы сообщаем о первых случаях выявления ВГВ D4 в Российской Федерации.

Заключение

Впервые в Российской Федерации были выявлены изоляты ВГВ субгенотипа D4. Происхождение всех 3 пациентов с вышеуказанными изолятами из одного географического региона, филогенетическая близость нуклеотидных последовательностей полных геномов вирусов и ряд одинаковых мутаций и полиморфных вариантов в разных генах во всех 3 изолятах свидетельствуют о независимом однократном завозе вируса с последующим распространением. Пути распространения, а также частота встречаемости ВГВ D4 в Республике Дагестан остаются неизвестными и нуждаются в дальнейшем исследовании.

Финансирование. Работа не имела спонсорской поддержки.

Все процедуры, выполненные в исследовании с участием людей, соответствуют этическим стандартам институционального и/или национального комитета по исследовательской этике и Хельсинкской декларации и ее последующим изменениям или сопоставимым нормам этики.

От каждого из включенных в исследование участников было получено информированное добровольное согласие.

Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

The authors declare no conflicts of interest.

2. World Health Organization. Hepatitis B fact sheet; 2019. Accessed January 23, 2019. https://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs204/en/

3. Эсауленко Е.В., Сухорук А.А., Иванова Н.В. Возможность элиминации парентеральных вирусных гепатитов на территории Российской Федера-

ции и Северо-Западного федерального округа. Актуальные вопросы фундаментальной, клинической медицины и фармации. Под ред. Вебера В.Р., Сулиманова Р.А. Издательство: Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого; 2018.

Esaulenko EV, Sukhoruk AA, Ivanova NV. The possibility of eliminating parenteral viral hepatitis in the Russian Federation and the North-West Federal District. Actual issues of fundamental, clinical medicine and pharmacy. Edited by Weber V.R., Sulimanova R.A. Publisher: Novgorod State University named after Yaroslav the Wise; 2018. (In Russ.).

4. Kramvis A, Arakawa K, Yu MC, Nogueira R, Stram DO, Kew MC. Relationship of serological subtype, basic core promoter and precore mutations to genotypes/subgenotypes of hepatitis B virus. J Med Virol. 2008;80:27-46. https://doi.org/10.1002/jmv.21049

5. Lin C-L, Kao J-H. Hepatitis B Virus Genotypes and Variants. Cold Spring Harb. Perspect Med. 2015;5(5):a021436-a021436. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a021436

6. Norder H, Courouce A-M, Coursaget P, Echevarria JM, Lee S-D, Mushah-war IK, Robertson BH, et al. Genetic diversity of hepatitis B virus strains derived worldwide: genotypes, subgenotypes, and HBsAg subtypes. Intervi-rology. 2004;47(6):289-309. https://doi.org/10.1159/000080872

7. Araujo NM, Waizbort R, Kay A. Hepatitis B virus infection from an evolutionary point of view: how viral, host, and environmental factors shape genotypes and subgenotypes. Infect Genet Evol. 2011;11:1199-1207. https://doi.org/10.1016/j.meegid.2011.04.017

8. Yin J, Zhang H, Li C, Gao C, He Y, Zhai Y, et al. Role of hepatitis B virus genotype mixture, subgenotypes C2 and B2 on hepatocellular carcinoma: compared with chronic hepatitis B and asymptomatic carrier state in the same area. Carcinogenesis. 2008;29(9):1685-1691. https://doi.org/10.1093/carcin/bgm301

9. Yousif M, Kramvis A. Genotype D of hepatitis B virus and its subgenotypes: An update. Hepatol Res. 2013;43(4):355-364. https://doi.org/10.1111/j.1872-034X.2012.01090.x

10. Lin CL, Kao JH. The clinical implications of hepatitis B virus genotype: Recent advances. J Gastroenterol Hepatol. 2011;1:123-130. https://doi.org/10.1111/j.1440-1746.2010.06541.x

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

11. Zehender G, Ebranati E, Gabanelli E, Shkjezi R, Lai A, Sorrentino C, et al. Spatial and temporal dynamics of hepatitis B virus D genotype in Europe and the Mediterranean Basin. PLoS One. 2012;7(5):e37198. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0037198.

12. Останкова Ю.В., Семенов А.В., Буркитбаев Ж.К., Савчук Т.Н., Тотолян А.А. Результаты генотипирования вируса гепатита B у hbsag-негативных доноров крови в г. Астана, Казахстан. Инфекция и иммунитет. 2017;7(4):383-392.

Ostankova YuV, Semenov AV, Burkitbayev ZK, Savchuk TN, Totolian Areg A. Results of genotyping hepatitis virus B in HBsAg-negative blood donors in Astana, Kazakhstan. Russian Journal oof Infection and Immunity. 2017;7(4):383-392. (In Russ.). https://doi.org/10.15789/2220-7619-2017-4-383-392

13. Останкова Ю.В., Семенов А.В., Зуева Е.Б., Тотолян А.А. Распространенность оккультного гепатита B среди HBsAg-негативных лиц с ВИЧ в Великом Новгороде. ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2019;11(1):64-70. Ostankova YV, Semenov AV, Zueva EB, Totolian AA. The prevalence of occult hepatitis B among HBsAg-negative persons with HIV in Veliky Novgorod. HIV Infection and Immunosuppressive Disorders. 2019;11(1):64-70. (In Russ.). https://doi.org/10.22328/2077-9828-2019-11-1-64-70.

14. Kumar S, Stecher G, Tamura K. MEGA7: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 7.0 for bigger datasets. Molecular Biology and Evolution. 2016;33(7):1870-1874. https://doi.org/10.1093/molbev/msw054

15. Rozanov M, Plikat U, Chappey C, Kochergin A, Tatusova T. A web-based genotyping resource for viral sequences. Nucleic Acids Res. 2004;32(Web Server issue):W654-659. https://doi.org/10.1093/nar/gkh419

16. Martin DP, Murrell B, Golden M, Khoosal A, Muhire B. RDP4: Detection and analysis of recombination patterns in virus genomes. Virus Evol. 2015;1(1):vev003.

https://doi.org/10.1093/ve/vev003

17. Osiowy C, Larke B, Giles E. Distinct geographical and demographic distribution of hepatitis B virus genotypes in the Canadian Arctic as revealed through an extensive molecular epidemiological survey. J Viral Hepat. 2011;18(4):e11-19. https://doi.org/10.1111/j.1365-2893.2010.01356.x.

18. Kim HJ, Park JH, Jee Y, Lee SA, Kim H, Song BC, et al. Hepatitis B virus X mutations occurring naturally associated with clinical severity of liver disease among Korean patients with chronic genotype C infection. J Med Virol. 2008;80(8):1337-1343. https://doi.org/10.1002/jmv.21219

19. Атаев М.Г., Ибрагимова Э.И. Обращаемость за медицинской помощью в лечебные учреждения Республики Дагестан по поводу вирусных гепатитов. Проблемы экологической медицины. 2017;111-113. Ataev MG, Ibragimova EI. The appeal for medical assistance to medical institutions of the Republic of Dagestan about viral hepatitis. Problems oof environmental medicine. 2017;111-113. (In Russ.).

20. Пашаева С.А., Сулейманова С.Х., Джанмурзаева А.М., Билалова С.К., Хазарова АО. Эпидемическая ситуация по вирусным гепатитам на отдельных территориях страны. Актуальные вопросы инфекционных болезней в клинике и эксперименте. 2017;71-74.

Pashaeva SA, Suleymanova SKh, Dzhanmurzaeva AM, Bilalova SK, Khazaro-va AO. The epidemic situation of viral hepatitis in certain areas of the country. Actual issues of infectious diseases in the clinic and experiment. 2017;71-74. (In Russ.).

21. Costa JJ, Rodriguez J, Alba J, Rivadulla I, Perez-Del-Molino ML, Aguilera A. Prevalence and distribution of hepatitis B virus genotype D in Galicia (northwest of Spain): influence of age, sex and origin. Rev Esp Quimiot-er. 2016;29(5):269-272.

22. Pourkarim MR, Amini-Bavil-Olyaee S, Verbeeck J, Lemey P, Zeller M, Rahman M, et al. Molecular evolutionary analysis and mutational pattern of full-length genomes of hepatitis B virus isolated from Belgian patients with different clinical manifestations. J Med Virol. 2010;82(3):379-389. https://doi.org/10.1002/jmv.21726.

23. Sloan RD, Strang AL, Ramsay ME, Teo CG. Genotyping of acute HBV isolates from England, 1997-2001. J Clin Virol. 2009;44(2):157-160. https://doi.org/10.1016/j.jcv.2008.11.010.

24. Гасич Е.Л., Еремин В.Ф., Немира АС. Молекулярная эпидемиология генотипов вируса гепатита B, изолированных в Республике Беларусь. ВИЧ-инфекция и иммуносупрессии. 2016;8(4):43-54.

Gasich EL, Eremin VF, Nemira AS. Molecular epidemiology of hepatitis B virus genotypes isolated in Belarus. HIV Infection and Immunosuppressive Disorders. 2016;8(4):43-54. (In Russ.). https://doi.org/10.22328/2077-9828-2016-8-4-43-54

25. Banerjee P, Mondal RK, Nandi M, Ghosh S, Khatun M, Chakraborty N, et al. A rare HBV subgenotype D4 with unique genomic signatures identified in north-eastern India — an emerging clinical challenge? PLoS One. 2014;9(10):P.e109425.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0109425

26. Ozaras R, Inanc Balkan I, Yemisen M, Tabak F. Epidemiology of HBV subge-notypes D. Clin Res Hepatol Gastroenterol. 2015;39(1):28-37. https://doi.org/10.1016/j.clinre.2014.06.005

27. Tallo T, Tefanova V, Priimagi L, Schmidt J, Katargina O, Michailov M, et al. D2: major subgenotype of hepatitis B virus in Russia and the Baltic region. J Gen Virol. 2008;89(Pt 8):1829-1839. https://doi.org/10.1099/vir.0.83660-0

28. Litwin S, Toll E, Jilbert AR, Mason WS. The competing roles of virus replication and hepatocyte death rates in the emergence of drug-resistant mutants: theoretical considerations. J Clin Virol. 2005;34.(s1):96-107. https://doi.org/10.1016/S1386-6532(05)80018-6

Поступила в редакцию 30.09.2019 Received 30.09. 2019 После доработки 06.01.2020 Revised 06.01.2020 Принята к публикации 16.01.2020 Accepted 16.01.2020

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.