CC BY
16
■ И I II II
■m
Новости клеточных технологий
В результате уже через 3 месяца после трансплантации аутогенных хондробластов наблюдали улучшение состояния тканей межпозвонковых дисков, проявляющееся в гидра тации тканей, увеличении высоты диска, что выявлено при магнитно резонансной томографии (режим Т2). Морфоло гическими методами было показано, что хондроциты выжи вают после трансплантации, пролиферируют (метка ВгсИД синтезируют белки межклеточного матрикса (протеогликан) и коллаген (I и II типов).
Уменьшение и полное исчезновение болевого синдрома наблюдали в течение двух лет (что соответствует рентгено логической картине восстановления диска). Клиническое со стояние пациентов значительно улучшалось по всем функ циональным шкалам, применяемым в исследовании. У всех
пациентов после трансплантации клеток не потребовалось последующее оперативное лечение, несмотря на неполное удаление тканей диска и высокую вероятность вторичной протрузии.
Таким образом, проведенное клиническое исследование в рамках первой фазы показало безопасность и эффективность трансплантации аутогенных хондробластов для восстановле ния тканей межпозвонкового диска у пациентов, подвергну тых их удалению малоинвазивным способом. Исследования по программе ЕигоОвс продолжаются. В настоящее время в про грамму включено 140 пациентов в нескольких медицинских центрах. В ближайшее время стоит ожидать отчетов о II и III фазах клинических испытаний из ряда других центров. На данный метод лечения возлагаются большие надежды.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Anderson D.G., Albert T.J., Fraser J.K. et al. Cellular therapy for disc degeneration. Spine 2005; 30(17 Suppl): S14 9.
2. Anderson D.G., Risbud M.V., Shapiro I.M. et al. Cell based therapy for disc repair. Spine J. 2005; 5(6 Suppl): 297S303S.
3. Antoniou J., Steffen T., Nelson F. et al. The human lumbar intervertebral disc: Evidence for changes in the biosynthesis and denaturation of the extracellular matrix with growth, maturation, aging, and degeneration. J. Clin. Invest. 1996; 98,996 1003.
4. Gorensek M., Jaksimovic C., KregarVelikonja N. et al. Nucleus pulposus repair with cultured autologous elastic cartilage derived chondrocytes. Cell Mol. Biol. Lett. 2004; 9(2): 363 73.
5. Gruber H.E., Johnson T.L., Leslie K. et al. Autologous intervertebral disc cell implantation: a model using Psammomys obesus, the sand rat. Spine 2002; 27(15): 1626 33.
6. Sato M., Asazuma T., Ishihara M. et al. An experimental study of the regeneration of the intervertebral disc with an allograft of cultured annulusfibrosus cells using a tissue engineering method. Spine 2003; 15; 28(6): 548 53.
Порготовип: A.B. Волков По материалам: Biomol, Eng. 2006 Epub,
Первое опубликованное наблюдение введения эмбриональных стволовых клеток человеку
Во всем мире активно ведутся дебаты о возможностях клинического применения эмбриональных стволовых кле ток (ЭСК) и их дериватов в будущем. Безусловно, ЭСК - это перспективный и практически неограниченный источник клеточного материала любого типа для целей регенератив ной медицины. С другой стороны, этот источник таит в себе ряд опасностей - потенциальный риск канцерогенеза и им мунного отторжения. Противники применения ЭСК в клинике считают, что эти риски избежать невозможно и будущие пер спективы связаны только с терапией взрослыми стволовы ми клетками. О намерениях применять дериваты ЭСК в кли нике неоднократно заявляли различные исследовательские группы. Сторонники этого подхода считают, что риска кан церогенеза можно избежать методами высокой очистки специализированных зрелых или прогениторных клеток от недифференцированных ЭСК, а иммунное отторжение пре дотвратить использованием технологии переноса клеточно го ядра реципиента в донорскую яйцеклетку. Однако до сих пор ни одного сообщения в научных журналах о трансплан тации ЭСК или их дериватов человеку не появлялось.
В недавнем номере журнала Transplantation Proceedings сообщается о первом введении ЭСК и их дериватов челове ку. Авторы из Institute of Transplantation Sciences (Gujarat, India) приводят клиническое наблюдение пациента - мужчины 40 лет с хронической почечной недостаточностью, которому выполняли трансфузию ЭСК с целью индукции толерантности к пересаженной почке. Подход авторов исследования осно вывался на данных о возможности достижения толерантности
к почечному аллотрансплантату методом введения больших доз гемопоэтических клеток от того же донора перед транс плантацией органа (1 3]. Трансплантация ЭСК и гемопоэ тических клеток вместе с обычным протоколом индукции, по мнению авторов, должна была усилить химеризм и ускорить наступление толерантности к донорскому органу без имму носупрессии в посттрансплантационном периоде.
Родственный донор почки - сестра пациента, также со гласилась на донацию костного мозга, «мобилизацию» гемо поэтических клеток в периферическую кровь и стимуляцию овуляции для забора яйцеклеток. В предтрансплантацион ном периоде пациенту вводили лейкоциты донора, а также нефракционированные клетки костного мозга в тимус, внут рипортально, внутрикостно и внутривенно на фоне иммуно супрессии по разработанным ранее протоколам (1 3]. ЭСК получали методом переноса ядра кумулюсной клетки этого же донора в энуклеированный ооцит. После выделения ЭСК из сформировавшейся бластоцисты выполняли их безсыво роточное кокультивирование с аутогенными нефракциони рованными клетками костного мозга для создания условий, индуцирующих гемопоэтическую дифференцировку.
Перед внутривенным введением клеточная суспензия представляла из себя смесь гемопоэтических и недиффе ренцированных ЭСК донора. Фенотипическая характерне тика клеточного трансплантата - 66,58% CD45V7,58% CD34^, ряд клеток имели маркёры ЭСК - слабопозитивны по SSEA 1, сильнопозитивны по SSEA4, Oct 3/4, TRA 1/60. Кариотипическая картина клеток перед трансплантацией
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, 1У< 1, 2007
А
I I I I I I
■ I I I
Новости клеточных технологий
была нормальной. Количество вводимых клеток 10 ООО/ кг веса реципиента. Трансплантацию почки выполняли че рез неделю после трансфузии клеток, совместимость органа 6/6 HLA.
Благодаря такому подходу авторам удалось добиться увеличения химеризма периферической крови с 1% (после стандартных протоколов индукции) до 8% (после трансфу зии ЭСК). Уровень химеризма крови исследовали методом идентификации X хромосомы (FISH). Через 100 дней после трансплантации донорский химеризм поддерживался на уровне 4%. Это позволило авторам полностью отказаться от иммуносупрессии после пересадки органа. Исследова тели заключают, что используемый протокол безопасен в течение всего времени наблюдения (100 дней). Признаки острого канальцевого некроза аллотрансплантата были не значительными, функции печени и донорской почки оста вались нормальными, признаков реакции «трансплантат против хозяина» не отмечали.
Впервые представленное клиническое наблюдение введения аллогенных ЭСК вызывает много вопросов. Пер вое, что вызывает опасения - потенциально высокий риск туморогенеза при использовании приведённого протоко ла выделения и трансплантации ЭСК. Так, исследователи указывают, что в клеточном трансплантате присутствовали клетки, несущие маркёры плюрипотентности - истинные
ЭСК. В этом плане было бы интересно узнать дальнейшую судьбу пациента и долгосрочный результат наблюдения. Вызывает сомнения протокол стимуляции гемопоэтической дифференцировки ЭСК, поскольку были использованы не фракционированные клетки костного мозга как индуктор, но не чистая стромальная фракция. Это могло привести к кон таминации ЭСК трансплантата гемопоэтическими С034^ и зрелыми иммунными клетками из костного мозга. Кроме того, в краткосрочной культуре (2 дня) не применялось ни каких гемопоэтических цитокинов. Авторы указывают, что не наблюдали никаких иммунологических нарушений, хотя клетки были аллогенными. С другой стороны, совмести мость донора и реципиента по Н1_А была полной - 6/6.
Тем не менее, основной результат, по мнению авторов заключается в достижении индукции толерантности и значи тельном увеличении химеризма именно благодаря введению ЭСК. Наблюдение уровня химеризма около 5% в течение 100 дней после трансплантации органа позволяет сделать поло жительный прогноз по индукции толерантности и ведению пациента без иммуносупрессии (1 3]. В данном наблюдении донорский химеризм поддерживался на уровне 4% через 100 дней, однако пациент восстановил функцию пересаженной почки и не принимал иммуносупрессантов. И самое важное, что используемый протокол был признан полностью безопас ным в течение всего времени наблюдения.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Trivedi H.L., Shah V.R., Vanikar A.V. et al. High dose allogeneic PBSC infusion a strategy to induce allograft hypo responsiveness in pediatric renal transplant recipients. Pediatr. Transplant. 2002; 6: 63 8.
2. Trivedi H.L., Shah V.R, Shah PR. et al. Mega dose unfractionated donor bone
marrow derived cell infusion in thymus and periphery an integrated clinical approach for tolerance in live related renal allograft. Transplant. Proc. 2001 ; 33(1 2): 71 6.
3. Trivedi H.L., Vanikar A.V., Modi P.R. et al. Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, mixed chimerism and tolerance living related donor renal allograft recipients. Transplant. Proc. 2005; 37(2): 737 42.
Подготовил A.B. Берсенев По материалам: Transplant. Proc. 2006: 38(9]: 3103-8
Лечение ишемии нижних конечностей методом трансплантации мобилизированных стволовых клеток периферической крови - результаты клинических испытаний в Японии
Ишемия нижних конечностей (ИНК) различного генеза является распространенным сосудистым заболеванием, которое может приводить к развитию гангрены, а в 20 30% случаев требует ампутации (1). Эффективность традицион ных методов лечения (простагландиновая терапия, шунтиро вание) зависит от сложности заболевания и сопутствующих факторов риска, среди которых распространены сахарный диабет и длительная история гемодиализа (2, 3].
Клеточная трансплантация может быть эффективным методом лечения ИНК, приводящим к восстановлению кро воснабжения мышц (4). Разными клиническими группами используются различные виды и источники клеток, методи ки их получения и введения. Различаются также критерии отбора пациентов и масштабность испытаний (4).
Японские исследователи Кадаатига А. е1 а1. недавно опуб ликовали результаты своей пятилетней работы, в которой
показана эффективность лечения ИНК путем транспланта ции аутогенных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), мобилизированных в периферическую кровь. Работа явля ется масштабным продолжением предыдущих исследова ний, в которых для лечения ишемии конечностей применяли трансплантацию мобилизированных стволовых клеток пе риферической крови СК ПК (5, 6].
В исследование было включено 92 пациента с разной сте пенью тяжести заболевания, подписавших информирован ное согласие на лечение. 68 пациентов имели многолетнюю историю прохождения гемодиализа по поводу почечной не достаточности. В отличие от предыдущих исследований, где сахарный диабет был исключающим критерием (10), в это испытание вошли 62 пациента с многолетней историей диа бета 2 го типа. Средний период наблюдения после лечения составил 9,3 месяца.
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, 1У< 1, 2007
