CC BY
25
I I I I I I
■ I I I
Новости клеточных технологий
была нормальной. Количество вводимых клеток 10 ООО/ кг веса реципиента. Трансплантацию почки выполняли че рез неделю после трансфузии клеток, совместимость органа 6/6 HLA.
Благодаря такому подходу авторам удалось добиться увеличения химеризма периферической крови с 1% (после стандартных протоколов индукции) до 8% (после трансфу зии ЭСК). Уровень химеризма крови исследовали методом идентификации X хромосомы (FISH). Через 100 дней после трансплантации донорский химеризм поддерживался на уровне 4%. Это позволило авторам полностью отказаться от иммуносупрессии после пересадки органа. Исследова тели заключают, что используемый протокол безопасен в течение всего времени наблюдения (100 дней). Признаки острого канальцевого некроза аллотрансплантата были не значительными, функции печени и донорской почки оста вались нормальными, признаков реакции «трансплантат против хозяина» не отмечали.
Впервые представленное клиническое наблюдение введения аллогенных ЭСК вызывает много вопросов. Пер вое, что вызывает опасения - потенциально высокий риск туморогенеза при использовании приведённого протоко ла выделения и трансплантации ЭСК. Так, исследователи указывают, что в клеточном трансплантате присутствовали клетки, несущие маркёры плюрипотентности - истинные
ЭСК. В этом плане было бы интересно узнать дальнейшую судьбу пациента и долгосрочный результат наблюдения. Вызывает сомнения протокол стимуляции гемопоэтической дифференцировки ЭСК, поскольку были использованы не фракционированные клетки костного мозга как индуктор, но не чистая стромальная фракция. Это могло привести к кон таминации ЭСК трансплантата гемопоэтическими С034^ и зрелыми иммунными клетками из костного мозга. Кроме того, в краткосрочной культуре (2 дня) не применялось ни каких гемопоэтических цитокинов. Авторы указывают, что не наблюдали никаких иммунологических нарушений, хотя клетки были аллогенными. С другой стороны, совмести мость донора и реципиента по Н1_А была полной - 6/6.
Тем не менее, основной результат, по мнению авторов заключается в достижении индукции толерантности и значи тельном увеличении химеризма именно благодаря введению ЭСК. Наблюдение уровня химеризма около 5% в течение 100 дней после трансплантации органа позволяет сделать поло жительный прогноз по индукции толерантности и ведению пациента без иммуносупрессии (1 3]. В данном наблюдении донорский химеризм поддерживался на уровне 4% через 100 дней, однако пациент восстановил функцию пересаженной почки и не принимал иммуносупрессантов. И самое важное, что используемый протокол был признан полностью безопас ным в течение всего времени наблюдения.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Trivedi H.L., Shah V.R., Vanikar A.V. et al. High dose allogeneic PBSC infusion a strategy to induce allograft hypo responsiveness in pediatric renal transplant recipients. Pediatr. Transplant. 2002; 6: 63 8.
2. Trivedi H.L., Shah V.R, Shah PR. et al. Mega dose unfractionated donor bone
marrow derived cell infusion in thymus and periphery an integrated clinical approach for tolerance in live related renal allograft. Transplant. Proc. 2001; 33(1 2): 71 6.
3. Trivedi H.L., Vanikar A.V., Modi P.R. et al. Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, mixed chimerism and tolerance living related donor renal allograft recipients. Transplant. Proc. 2005; 37(2): 737 42.
Подготовил A.B. Берсенев По материалам: Transplant, Proc, 2006; 38(9]: 3103-8
Лечение ишемии нижних конечностей методом трансплантации мобилизированных стволовых клеток периферической крови - результаты клинических испытаний в Японии
Ишемия нижних конечностей (ИНК) различного генеза является распространенным сосудистым заболеванием, которое может приводить к развитию гангрены, а в 20 30% случаев требует ампутации (1). Эффективность традицион ных методов лечения (простагландиновая терапия, шунтиро вание) зависит от сложности заболевания и сопутствующих факторов риска, среди которых распространены сахарный диабет и длительная история гемодиализа (2, 3].
Клеточная трансплантация может быть эффективным методом лечения ИНК, приводящим к восстановлению кро воснабжения мышц (4). Разными клиническими группами используются различные виды и источники клеток, методи ки их получения и введения. Различаются также критерии отбора пациентов и масштабность испытаний (4).
Японские исследователи Кадаатига А. е1 а1. недавно опуб ликовали результаты своей пятилетней работы, в которой
показана эффективность лечения ИНК путем транспланта ции аутогенных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), мобилизированных в периферическую кровь. Работа явля ется масштабным продолжением предыдущих исследова ний, в которых для лечения ишемии конечностей применяли трансплантацию мобилизированных стволовых клеток пе риферической крови СК ПК (5, 6].
В исследование было включено 92 пациента с разной сте пенью тяжести заболевания, подписавших информирован ное согласие на лечение. 68 пациентов имели многолетнюю историю прохождения гемодиализа по поводу почечной не достаточности. В отличие от предыдущих исследований, где сахарный диабет был исключающим критерием [10], в это испытание вошли 62 пациента с многолетней историей диа бета 2 го типа. Средний период наблюдения после лечения составил 9,3 месяца.
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, 1У< 1, 2007
■ И I II II
■тп
Новости клеточных технологий
ГСК мобилизировали из костного мозга с введением гра нулоцитарного колоние стимулирующего фактора (Г КСФ). Аферезный продукт содержал в среднем 40 миллионов CD34^ клеток. Без проведения дополнительной очистки сус пензию мононуклеаров разделяли на аликвоты по 0,5 1 мл и вводили в ишемические мышцы в 50 70 точек. Побочных эффектов во время и после процедуры не наблюдали.
Через месяц после введения субъективные ощущения улучшились в 86% случаев. На термографе наблюдали нор мальную температуру конечностей в 83% случаев, в отличие от исходных 30%. В 3D СТ стали видимыми артерии, которые до того практически не было видно (улучшение 82%). Авторы указывают, что в клеточная терапия позволила сохранить от ампутации 91% конечностей без признаков некроза.
У некоторых пациентов (в основном с признаками некро за до трансплантации и при IV стадии болезни) ампутаций пальцев избежать не удалось. При патоморфологическом исследовании удалённых тканей уже через 1 1,5 мес. после трансплантации обнаруживали признаки неоваскуляризации формирование капилляров в мышцах, в которые осуществ ляли инъекции. Кроме того, авторы показали скопление CD34^ клеток в этих областях.
Ученые приходят к выводу, что метод особенно эффек тивен у пациентов, анамнез которых не отягощён историей прохождения гемодиализа или сахарным диабетом. Паци ентам с диабетом 2 типа и с историей гемодиализа транс плантация показана при 1 3 степени тяжести заболевания, а при четвертой малоэффективна.
Следует отметить, что механизмы, обусловливающие те рапевтический эффект такой клеточной терапии, малоизу чены, что ещё раз подтверждает данная работа. Считается, что главную роль в терапевтическом ангиогенезе, который и является целью трансплантации, играют эндотелиальные клетки предшественники (ЕРС), экспрессирующие CD34, VEGFR 2 и vascular endothelial cadherin, значение которых было впервые описано Asahara et al. (7). Позже было пока зано, что из периферической крови и из костного мозга мож но выделять специфическую популяцию ангиогенных клеток
по экспрессии Flk 1 и АС 133 [8] и CD34 и KDR (9) соот ветственно. В самой ишемической мышце ЕРС могут спо собствовать ангиогенезу двумя путями: непосредственно дифференцироваться в эндотелиальные клетки и/или вы делять ангиопоэтические факторы (1). Теоретически, сус пензия клеток, вводимая пациентам в этом исследовании должна содержать ЕРС, однако эта популяция не была охарак теризована фенотипически. Тем не менее, авторы изучали из менение уровня сывороточного VEGF после трансплантации. У четырех случайно выбранных пациентов наблюдали по вышение его уровня на 176%.
Представленный отчёт о клиническом исследовании очень важен для методологического и клинического пони мания внедрения метода клеточной аутотрансплантации при хронической ишемии нижних конечностей. Авторы описы вают сравнительно простую, безболезненную, быструю (вся процедура вместе с введением занимает около 4 часов) и эффективную методику лечения ХИНК. Интересно, что ис следователи указывают на преимущества афереза на ап парате Cobe Spectra (Gambro) перед CS 3000 (Baxter Healthcare) в связи с меньшей контаминацией суспензии эритроцитами. Безусловным преимуществом работы являет ся более значительное количество пациентов, вовлечённых в исследование и более продолжительное время их наблю дения в посттрансплантационном периоде. Кроме того, авто ры показали, что метод может быть эффективен и у пациентов с ранними стадиями ХИНК (1 3 по Fontaine), отягощённой наличием сахарного диабета и историей гемодиализа в свя зи с почечной недостаточностью. Методики, связанные с пересадкой мононуклеарных клеток, обогащённых моби лизированной CD34^ фракцией, при равной клинической эффективности имеют безусловное преимущество перед получением и манипуляциями с костным мозгом для этих же целей (4), поскольку позволяют избежать наркоза и ряда осложнений, связанных с процедурой. Авторы работы ре комендуют метод для финальной стадии мультицентровых клинических испытаний и внедрение его в широкую клинику у пациентов с начальными стадиями ХИНК.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Но Т.К., Rajkumar V., Black D.C. et al. Critical Limb Ischemia Classification and Therapeutic Angiogenesis. International J. Angiology 2005; 14: 49 59.
2. Andreev A., Petkov D., Kavrakov T. An Amputation Alternative for Patients with Critical Limb Ischemia. International J. Angiology 2002; 11:636.
3. Q'Hare A.M., Hsu C.Y., Bacchetti P., Johansen K.L. Peripheral vascular disease risk factors among patients undergoing hemodialysis. J. Am. Soc. Nephrol. 2002; 13:497 503.
4. Берсенев A.B. Клеточная аутологичная трансплантация при ишемии нижних конечностей в клинике. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2005; 1: 40 3.
5. Kudo F.A., Nishibe Т., Nishibe М., Yasuda К. Autologous transplantation of peripheral blood endothelial progenitor cells (CD34~) for therapeutic angiogenesis
in patients with critical limb ischemia. Int. Angiol. 2003; 22; 344 48.
6. Huang P.P., Li S.Z., Han M.Z. et al. Autologous transplantation of peripheral blood stem cells as an effective therapeutic approach for severe arteriosclerosis obliterans of lower extremities. Thromb. Haemost. 2004; 91: 606 9.
7. Asahara T., Murohara T., Sullivan A. et al. Isolation of putative progenitor cells for angiogenesis. Science 1997; 275: 964 7.
8. Peichev М., Naiyer A.J., Pereira D. et al. Expression of VEGFR 2 and AC 1 33 by circulating human CD34~ cells identifies a population of functional endothelial precursors. Blood 2000; 95: 952 8.
9. Pelosi E., Valtieri М., Coppola S. et al. Identification of the haemangioblast in postnatal life. Blood 2002; lOO: 3203 8.
10. Higashi Y., Kimura М., Нага К. et al. Autologous bone marrow mononuclear cell implantation improves endothelium dependent vasodilation in patients with limb ischemia. Circ. 2004; 109: 1215 8.
Подготовил О. Дорошенко По материалам: J, Artif. Organs 2006; 9: 226-33
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том II, 1У< 1, 2007
