CC BY
0
УДК 619:616.995.132
https://doi.org/10.31016/978-5-6050437-8-2.2024.25.41-45
ПЕРВИЧНЫЙ ЭТАП ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ТОКСОКАРОЗА
Андреянов О. Н.
доктор ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник лаборатории паразитарных зоонозов,
1980oleg@mail.ru
Успенский А. В.
доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАН, заведующий лабораторией паразитарных зоонозов,
a.v.uspensky@yandex.ru
Постевой А. Н.
кандидат ветеринарных наук, научный сотрудник лаборатории эпизоотологии и санитарной паразитологии,
apostevoy81@mail.ru
Аннотация
В статье описывается метод выделения личинок токсокар Toxocara canis из яйцевых оболочек. Личинки нематод могут служить специфическим антигеном в диагностике серологическими реакциями. Материалом для исследования служили культуры яиц токсокар, полученные из гонад самок нематод. Яйца токсокар хранили в 4,0%-ном растворе формалина или в 1,0%-ном растворе соляной кислоты. Половозрелых самок токсокар получали выделением гельминтов из кишечника тушек естественно зараженных плотоядных животных. Для искусственного выделения личинок токсокар из яиц применяли метод кратковременного инкубирования их в желчи жвачных животных. Культуру яиц нематод устанавливали на магнитной мешалке с подогревом. В пробу помещали магнит в пластике размером 1,5—3,5 см и включали подогрев до температуры 38±1 оС. После 30 минутной экспозиции личинок отмывали в физиологическом растворе. Для удобства, их можно поместить в аппарат Бермана при температуре 38±1 оС. Свежеполученный и хранившийся в течение 3-х месяцев материалы показали высокий процент выхода ли-
1 Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений — филиал Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр — Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К. И. Скрябина и Я. Р. Коваленко Российской академии наук» (117218, Россия, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28)
чинок из яиц. Хранившийся материал в течение 1-го года показал несколько худший результат.
Ключевые слова: желчь, личинки, яйца, Toxocara canis
PRIMARY STAGE OF TOXOCARA ANTIGEN PRODUCTION
Andreyanov O. N.
Doctor of Veterinary Sciences, Leading Researcher of the Laboratory of Parasitic Zoonosis,
1980oleg@mail.ru
Uspensky A. V.
Doctor of Veterinary Sciences, Professor, Corresponding Member of the Russian Academy of Sciences, Head of the Laboratory of Parasitic Zoonosis,
a.v.uspensky@yandex.ru
Postevoy A. N.
Candidate of Veterinary Sciences, Associate Researcher Laboratory of Epizootology and Sanitary Parasitology, ap ostevoy81@mail.ru
Abstract
The article describes a method for isolating Toxocara canis larvae from chorions. Nematode larvae can serve as a specific antigen in the diagnosis with serological reactions. The study material was cultures of Toxocara eggs obtained from female nematode gonads. Toxocara eggs were stored in a 4.0% formalin solution or a 1.0% hydrochloric acid solution. Sexually mature female Toxocara species were obtained by isolating helminths from the intestines of carcasses of naturally infected carnivores. For artificial isolation of Toxocara larvae from eggs, a method of their short-term incubation in the bile of ruminants was used. The nematode egg culture was put on a heated magnetic stirrer. A magnet in plastic of 1.5—3.5 cm was placed in a sample, and heating to 38±1 0C was turned on. After 30-minute exposure, the larvae were washed in the saline. For convenience, they may be placed in a Berman device at 38±1 0C. The materials freshly obtained and stored for 3 months showed a high percentage of larval yield from eggs. The stored material showed a rather worse result for the 1st year.
Keywords: bile, larvae, eggs, Toxocara canis
1 All-Russian Scientific Research Institute for Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plant — a branch of the Federal State Budget Scientific Institution "Federal Scientific Centre VIEV" (28, Bolshaya Cheremushkinskaya st., Moscow, 117218, Russia)
Введение. Последние годы, в связи с ростом численности домашних питомцев, их безнадзорным содержанием, доступностью к разным объектам и массивным загрязнением внешней среды фекалиями, токсокароз стал серьезной медико-социальной проблемой для многих стран мира. Высока загрязненность почвы, игровых площадок в детских дошкольных учреждениях, парках, дворах, пищевой зелени, овощей, ягод и грибов яйцами токсокар [2, 4, 5]. При обследовании населения на токсокароз в возрастной группе от 4 до 10 лет экстен-синвазированность (ЭИ) детей достигает 10,1% [1, 2]. С медицинской точки зрения, токсокароз (В83.0 по МКБ-10) — зоонозный тканевой гельминтоз с геооральным механизмом инфицирования, вызываемый миграцией личинок круглых червей из отряда нематод плотоядных млекопитающих, характеризующийся длительным рецидивирующим течением и полиорганным поражением, ведущую роль в патогенезе которого играют иммунопатологические реакции. В патологии человека наиболее изучена роль собачей токсокары — Toxocara canis, меньше кошачьей — T. mystax (cati). Высокий процент зараженности собак (сук, щенков) токсокарами является следствием пожизненного бессимптомного носительства личинок [2, 4]. Инвазирован-ные животные ежедневно загрязняют внешнюю среду миллионами яиц, при этом у щенка в фекалиях может находиться их около 100 тыс. на один грамм. Как кошачьей, так и собачьей токсокаре требуется несколько недель для созревания в сырых влажных условиях за пределами хозяина, прежде чем яйца станут инвазионными. Недавно вышедшие наружу с животного яйца гельминта никакой опасности не представляют. В процессе созревания яйца внутри его формируется живая личинка (личинка I-ого порядка). Для изучения эпидемиологического и эпизоотического фона зараженности человека и животных токсокарозом в диагностических исследованиях требуется качественный антиген. Первичный антигенный состав, контактирующий с будущим хозяином возбудителя, находится на поверхности личинок, сформированные внутри токсокарозного яйца. Диагностические тест-системы, вероятно, следует готовить из инвазионных личинок, локализованные в яйцевых оболочках.
Цель работы сводилась к получению полноценных, освобожденных от яйцевых оболочек жизнеспособных личинок Т. canis. Применение данного метода в практической медицине и ветеринарии позволит получить высоко специфический материал для создания диагностических тест-систем.
Материалы и методы. Материалом для исследования служили культуры яиц Т. canis, полученные из гонад самок нематод. Половозрелых самок токсокар получали выделением гельминтов из кишечника тушек естественно зараженных лисиц, волков, енотовидных и домашних собак, отстреленные на территориях охотхозяйств Центральной России. Яйца токсокар хранили в 4,0%-ном растворе формалина или в 1,0%-ном растворе соляной кислоты. Для искусственного выделения личинок токсокар из яиц применяли метод кратковременного инкубирования в желчи жвачных животных (крупного рогатого скота) на магнитной мешалке с подогревом [3]. Взвесь (суспензию, объемом 0,25 мл) свежеполученных или хранившихся яиц Т. canis с личинками 1-ой стадии помещали в химический стакан с желчью. Химический стакан с пробой помещали на платформу магнитной мешалки с подогревом. Далее, клали в суспензию магнит в пластике размером 1,5—3,5 см, включали подогрев до температуры 38±1 оС. Режим вращения перемешивающего элемента 50 об/мин устанавливали вручную. После 30 минутной экспозиции личинок отмывали в физиологическом растворе. Для удобства их можно поместить в аппарат Бермана при температуре 38±1 оС. Подсчет личинок и яиц проводили в счетной камере Могилевой-Котельникова, при микроскопирова-нии с увеличением х 10-40.
Результаты исследований. Основные результаты исследований представлены в таблице.
Таблица
Выход личинок токсокар Toxocara canis из яйцевых оболочек
№ опыта, пп Период хранения яиц с личинками Среда хранения инвазионного материала Всего яиц, экз. Выход личинок
Кол-во %
1 Свежий инкубируемый материал 4,0%-ный раствор формалина, 1%-ный раствор соляной кислоты 2 500 1 600 64
2 3 месяца 15 000 8 700 58
3 1 год 7 100 2 700 38
Свежеполученный материал и хранившийся в течение 3-х месяцев показали высокий процент выхода личинок из яиц. Хранившийся материал токсокар в течение 1-го года показал несколько худший результат.
Заключение. Для получения специфического диагностического антигена токсокар на первичном этапе личинок токсокар 1-й стадии из яйцевых оболочек можно выделять в желчи жвачных животных. Из свежеполученных инвазионных яиц токсокар выходит личинок несколько больший, чем из хранившихся.
Список источников
1. Конаныхина С. Ю., Лавров В. Ф, Ведунова С. Л., Эмбралидзе Л. К. Низко-авидные IgG-антитела в диагностике острой фазы токсокароза // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2004. № 2(15). С. 39-41.
2. Малышева Н. С., Самофалова Н. А, Григорьев Д. Г., Вагин Н. А., Елизаров А. С., Гладких К. А, Шуйкина Э. Е. Проблема токсокароза в современных условиях и совершенствование подходов к его профилактике // Ученые записки: электронный научный журнал Курского государственного университета. 2013. № 1(25). 7 с.
3. Прошин И. Г. К методике искусственного выделения личинок аскаридат из яиц // Медицинская паразитология. 1954. № 2. С. 126-131.
4. Сергиев В. П., Лобзин Ю. В., Козлов С. С. Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы). СПб.: Фолиант, 2016. 640 с.
5. Чернова Т. М, Булина О. В. Токсокароз в практике детского врача // Педиатр. 2010. Т. 1. № 2 С. 119-124.
References
1. Konanykhina S. Y., Lavrov V. F., Vedunova S. L., Embralidze L. K. Low-grade IgG in the diagnosis of the acute phase of toxocariasis. Epidemiology and vaccine prophylaxis. 2004; 15(2): 39-41. (In Russ.)
2. Malysheva N. S., Samofalova N. A., Grigoriev D. G., Vagin N. A., Eliza-rov A. S., Gladkikh K. A., Shuikina E. E. The problem of toxocariasis in modern conditions and the improvement of approaches to its prevention. Scientific notes: electronic Scientific Journal of the Kursk State University. 2013; 1(25): 7. (In Russ.)
3. Proshin I. G. To the method of artificial isolation of Ascaris larvae from eggs. Medical parasitology. 1954; 2: 126-131. (In Russ.)
4. Sergiev V. P., Lobzin Y. V., Kozlov S. S. Parasitic diseases of humans (protozoosis and helminthiasis). St. Peterburg, Foliant, 2016. 640 p. (In Russ.)
5. Chernova T. M., Bulina O. V. Toxocariasis in the children's doctor practice. Pediatrician. 2010; 1(2): 119-124. (In Russ.)
