CC BY
251
Клиническая медицина
Экспериментальная биология и клиническая диагностика
Профессор Камакин Н.Ф., Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ КРИСТАЛЛОГРАФИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Кировская государственная медицинская академия
Различные тест-методики для идентификации патологических состояний организма человека с использованием мочи и сыворотки крови, в том числе общий анализ, серологические реакции и другие исследования, достаточно широко используются в клинической диагностической практике [23]. Наибольшей чувствительностью и значительным спектром диагностируемых заболеваний обладают методы, рассматривающие сыворотку крови в качестве объекта изучения, однако они относятся к инвазивным [3]. Кроме того, нужно отметить, что для их проведения требуется определенный промежуток времени и наличие хорошо оборудованной лаборатории с достаточным наборов реактивом. Вследствие этого назрела необходимость разработки экспресс-методики, которую возможно было бы применить в качестве первичного теста при диагностике различных заболеваний. Причем, необходимыми требованиями при его выборе являются достаточная степень точности и возможность широкого применения без вложения значительных материальных средств [23, 25].
Данной проблемой заинтересовались специалисты различных областей медицины. Следствием этого стало бурное развитие саливадиагностики, которая, с одной стороны, была неинвазивной, с другой, позволяла получить быстро предварительные результаты.
На протяжении ряда лет некоторыми научно-исследовательскими лабораториями страны рассматривается вопрос кристаллизации биологических жидкостей организма человека [8].
Методы качественного определения химических соединений по данным признакам были предложены Т. Е. Ловицем еще в 1804 г [17]. Он в своей работе описал два оригинальных теста для качественного анализа структуры исследуемых веществ. Это «метод выветренных налетов солей» (кристаллических налетов), а также микрокристаллические реакции. Первый из вышеперечисленных и был положен в основу разработанного значительно позже способа качественного определения лекарственных препаратов [34]. Методика микрокристаллических реакций сейчас нашла применение в судебной медицине [34, 37].
Однако применение данных методик в качестве диагностического теста рассматривалась лишь немногими исследователями. Наиболее значительный вклад в изучение данной проблемы внесли сотрудники Московского областного научно-исследовательского клинического института (МОНИКИ) им. М. Ф. Владимирского [8, 9]. Ими был разработана методика кристаллоскопического анализа биологических субстратов, которая по сути представляла собой тезиграфический тест. Принципиальное отличие его от предложенного Т. Е. Ловицем [23] состоит в том, что в последнем случае для инициации многогранного процесса кристаллизации используются различные по химической природе вещества, в большинстве своем нейтральные соли, оригинальный же метод не требует добавления каких-либо реагентов.
В условиях развития представлений о кристаллизации биологических жидкостей человека актуальность приобретает вопрос о применимости ее при диагностике различных патологических состояний [1, 4, 7-9, 12-16, 24, 28-34, 36-37, 39-49]. В настоящее время в среде исследователей существуют несколько подходов к использованию данных свойств в диагностических и дифференциально-диагностических целях.
Методы в кристаллоскопии:
1) «Классическая» кристаллоскопия [18, 22, 30, 32]. Включает непосредственную кристаллизацию биологических жидкостей. Подготовка препаратов может проводиться как при комнатных условиях, так и в термостате (37-400С). Кроме того, возможно ускоренное высушивание микропрепаратов в потоке теплого воздуха при постоянных температуре и влажности.
2) Тезиграфия [4, 8-9, 14-16, 24, 28-29, 36-43]. Представляет собой дополнительное введение в высушиваемую биожидкость организма человека различных химических веществ с целью инициации процессов кристаллообразования. Для этого используют широкий спектр кристаллообразователей (№0, CaCl2, MgCl2 и другие), в большинстве своем обладающих комплексообразующими свойствами, причем причем их концентрации у различных авторов в значительной степени варьируют [8, 40-41].
• классическая тезиграфия - подразумевает рассмотрение дегидратации смеси биоматериала и базисного кристаллообразующего вещества как самостоятельного образца; требует сличения полученного результата с заранее имеющимися "паттернами" ("фотографический" подход) [8, 22, 33];
• сравнительная тезиграфия - включает применение дополнительного контрольного образца чистого базисного вещества в целях нивелирования различных экстернальных условий; дает возможность указывать на степень индукции (активации или депрессии) кристаллогенеза кристаллообразователя
3) Тезиокристаллоскопия [18-20]. Включает совместное применение указанных выше двух методик. Оценка производится по обоим методам. В данном случае достигается большая точность постановки первичного диагноза. Вещества, инициирующие кристаллообразование, не используются. Возможна ускоренная модифицированная сушка микропрепаратов.
4) Профильная дегидратация (по В. Н. Шабалину и С. Н. Шатохиной [42]). Подразумевает нанесение биологических жидкостей на предметное стекло, предварительно обработанное раствором лецитина определенной концентрации.
5) Вакуумная кристаллоскопия. (по Л. В. Савиной [31]) Приготовление (высушивание) препаратов производится в высоком вакууме.
6) Кристаллизация биологических жидкостей в закрытой ячейке. (по И. П. Антроповой, Я. Л. Габинской [1]) Применялось центрифугирование биоматериала.
7) Поясная кристаллоскопия [11-12]. Изучение поясов кристаллов и отдельных кристаллических образований.
8) Поляризационная микроскопия. (по Л. В. Савиной с соавт., 2003 [33]) Рассмотрение свободной кристаллизации сыворотки крови в поляризационном микроскопе.
9) Субстратная конгрегация (по Г. Г. Коротько, 2000 []). Моделирование кристаллообразования отдельных компонентов, являющихся составляющими биологических субстратов (липидов, белков, полисахаридов).
Такое многообразие методологических вариантов проведения теста, имеющего в своем основании дегидратацию биологических субстратов, связано, возможно, с тем, что использование различных подходов способствует лучшей идентификации получаемых результатов. Извлечение информации, сокрытой в совокупности метаболитов, их количественном и качественном соотношении в биоматериале, - одна из наиболее значимых и важных задач кристаллоскопической диагностики. С точки зрения многочисленных авторов [8, 39-43] преимущественная роль в раскрытии метаболических сдвигов состава сред организма человека отводится качественному компоненту с учетом детерминированных взаимоотношений между отдельными образованиями (кристаллической и аморфной природы). Количественному же компоненту уделяется значительно меньше внимания, хотя он и может служить критерием объективности наблюдаемых различий [22, 36].
В свете всего вышеперечисленного представляется интересным рассмотреть ранее игнорируемые стороны изучения кристаллизации биосубстратов как дополнительного первичного диагностического теста.
В связи с этим возникает необходимость разработки интегрального критерия оценки, включающего основные параметры кристаллогенеза фации любой биологической жидкости с учетом значимости каждого из них. Это при соответствующем математическом обеспечении анализа может позволить как регистрировать отклонения полученной тезиокристаллоскопической картины от характерной для здоровых людей, так и, возможно, прогнозировать течение данного заболевания (математическая модель). При этом может быть осуществлено исследование как классического кристаллоскопического, так и тезиграфического компонента.
Кроме того, интересные результаты могут быть получены при использовании в тезиграфическом тесте различных кристаллообразующих веществ с варьирующими концентрациями применяемых растворов.
Так, многими исследователями, в том числе МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского для изучения индуцированного биосубстратами кристаллогенеза уже рассмотрены 0,9% раствор [8], 1% раствор MgCl2 [37], 2% раствор [9, 24], т. е. спектр примененных веществ и их концентраций достаточно узок.
Вследствие высокой способности последних двух веществ, особенно хлорида меди (II), к комплексообразованию, представляется возможным исследовать применимость других ионов-комплексообразователей в качестве базисных веществ. К таковым, на наш взгляд, в частности, могут относиться хлорид железа (III), соединения никеля и т. д. Однако с позиций практического применения наиболее простым и доступным кристаллообразующим веществом является, несомненно, раствор хлорида натрия физиологической концентрации [15-16, 18, 20-22].
Если клиновидная дегидратация биоматериала в условиях изотонической среды достаточно физиологична, то применение гипо- и гипертонических растворов поваренной соли позволило бы моделировать протекание патологических процессов организма человека, приводящих к смещению водно-солевого гомеостаза [21-23, 26-27]. Это может способствовать изучению поведения биожидкостей при измененных параметрах экзо- и эндосред.
В целом важной стороной деятельности в области кристаллографических методов исследования, по нашему мнению, должно являться изучение изолированной кристаллизации отдельных компонентов картины, встречающихся в составе фаций. Способность некоторых химических соединений (оксалат кальция, фосфат кальция, карбонат кальция) образовывать различные по форме кристаллы и дендритные структуры дополнительно указывает на значимость микроокружения молекулы при дегидратации, что может быть связано как в целом с составом биосубстрата, так и с наличием/отсутствием (концентрацией) определенных его составляющих. Некоторые попытки исследований в данном направлении производятся в настоящее время школой Г. Ф. Коротько [32]. Так, Г. Г. Коротько осуществляет рассмотрение ступенчатой дегидратации экскретов и секретов организма человека в присутствии (и активном участии) различных белковых, липидных и углеводных компонентов [32]. Значимость в этом плане приобретают и последние работы Л. В. Савиной [33],
которая вводит понятие "модельного композита", т. е. эталонного образца потенциально входящего в состав кристаллизуемого биоматериала вещества, приготавливаемого из рабочих растворов (щавелевой кислоты, кальция, креатинина, мочевой кислоты, холестерина и т. д.). Все это способствует более точной идентификации визуально регистрируемых кристаллических и аморфных структур, а, следовательно, повышению специфичности обнаруживаемых сдвигов и их достоверности.
Моделирование образуемых структур и применение различных критериев оценки будет способствовать более четкой дифференциации изменений кристаллоскопической картины, хотя излишняя "перегрузка" ими приведет к значительному усложнению процесса анализа фации. Однако их должно быть достаточное количество для всесторонней характеристики последней. Если в отношении классической кристаллоскопии уже разработана идентификационная таблица, и дополнительные критерии будут играть лишь уточняющую роль, то в тезиграфическом тесте они выступают на главенствующие позиции. В связи с этим предлагается классификация критериев, которые могут быть использованы при рассмотрении тезиграфических фаций [19].
I. Основные.
Основной тезиграфический коэффициент Q (соотношение количества центров кристаллизации в опытном
и контрольном образцах).
II. Дополнительные:
1) равномерность плотности картины;
2) выраженность центральной и маргинальной зон;
3) ячеистость;
4) характер преобладающих структур (по аналогии с классической кристаллоскопией);
5) особенности побочных структур картины;
6) процентная доля типичных и атипичных образований среди преобладающих и дополнительных.
III. Исследование поясов кристаллизации (поясная кристаллоскопия).
Коэффициент Р (соотношение диаметров максимального и минимального пояса кристаллизации).
Биосистема дегидратирующейся среды организма человека способна чутко реагировать на изменившиеся экстернальные условия. Вследствие этого некоторые из предлагаемых различными авторами подходов имеют не только прикладное значение, но и могут оказаться полезными в ракурсе теоретических исследований физики кристаллизации биоматериала. Так, изучение кристаллогенеза в условиях вакуума, проводимое Л. В. Савиной [31], позволяет практически полностью изолировать и обособить формирующуюся фацию, что не всегда возможно при использовании метода клиновидной дегидратации в классическом ее варианте. Однако подобная среда с пониженным давлением может, в свою очередь, трансформировать процессы удаления излишков влаги и нарушить естественные процессы перераспределения органических и минеральных компонентов биожидкости. Этих недостатков лишена модель кристаллизации субстратов в закрытой ячейке, предложенная И. П. Антроповой и Я. Л. Габинской [1]. Она предусматривает лишь частичную изоляцию биоматериала с сохранением естественных условий микроокружения, одновременно позволяя нивелировать внешние воздействия могущие оказать влияние на динамику и, следовательно, результат кристаллообразования (изменение температуры, влажности окружающей среды, локомоции воздуха и т. д.). Данный метод удобен и прост, но не способствует ускорению удаления жидкой части анализируемой субстанции, хотя одним из основных преимуществ использования кристаллизации в качестве диагностического метода является быстрота получения требуемой информации. В связи с этим представляется наиболее выгодным применение варианта кристаллизации биожидкостей в открытой среде в равномерном потоке теплого воздуха, создающего, с одной стороны, нагревание фации, способствующее более быстрому удалению из нее водной фракции, не входящей в образующиеся кристаллогидраты [21], а, с другой стороны, оказывающего распределительное значение (установление четкой зональной дифференциации образца на центральную, интермедиатную и маргинальную области; устойчивое формирование поясов кристаллизации, также, как оказалось, имеющих определенное диагностическое значение) [19, 22].
Касаясь непосредственно диагностической стороны исследований в области кристаллографических методов, необходимо отметить важность унифицированного подхода к анализу микропрепаратов биожидкостей. Этого можно достичь при использовании единых способов оценки получаемых кристаллоскопических данных, целью чего и были разработаны сводная идентификационная таблица и общие критерии анализа тезиокристаллограмм [18-19, 22], описанные выше. Однако для большей наглядности и стандартизации представлений исследующих представляется важным подготовка соответствующего атласа тезиграмм и кристаллограмм, включавшего бы часто встречающиеся варианты кристаллографических картин, а также геометрических моделей основных структур, образуемых при дегидратации компонентов биосред организма человека.
Кроме того, унификации и упрощению проведения кристаллографических исследований может способствовать единая схема анализа: нахождение маркеров патологического процесса (воспаление, аллергия и т. д.) ^ установление группы заболеваний по характерным признакам ^ выход на конкретную патологию. Это будет полезно как в дифференциальной диагностике, так и при выполнении ориентировочного теста.
Важным фактором стандартизации результатов диагностической кристаллизации биологических субстратов организма может стать и единая форма заключения по кристаллоскопическому тесту, включающая
сведения о качественных и количественных сдвигах состава фации пациента по отношению к фации практически здоровых лиц (изменения количества и размеров структур, появление патологических для данной биожидкости образований и т. п.).
Работы, посвященные рассматриваемой проблеме, сейчас приобретают более физико-химическую, чем медицинскую направленность (изучение субмолекулярных процессов: потоки квантов, биоритмологически обусловленные локомоции) [40-41]. В связи с этим, исследования в области кристаллизации как первичного диагностического теста должны, на наш взгляд, быть продолжены и обобщены в цельную теорию. Для этого необходимо составить целостную картину биологических жидкостей организма человека с позиций морфологии их кристаллизации, что представляется возможным сделать, привлекая для анализа больший спектр исследуемого биоматериала (синовиальная жидкость, ликвор, назальный секрет, сперма, различные конденсаты и т. д.) [18, 41].
Итак, кристаллографические методы исследования биологических субстратов организма человека представляют собой в настоящее время динамичную отрасль медицинских знаний, способную дать значительную информацию как теоретическим наукам (физиологии, морфологии, микробиологии и др.), так и клиническим дисциплинам, однако будущее этого подхода, как и всей науки в целом, в интеграции опыта и знаний различных научных направлений.
Список литературы:
1. Антропова И. П., Габинский Я. Л. Кристаллизация биожидкости в закрытой ячейке на примере слюны // Клиническая лабораторная диагностика. - 1997. - №8. - С. 36-38.
2. Барер Г. М., Денисов А. Б., Михалева И. Н., Ревокатова И. П. Кристаллизация ротовой жидкости. Состав и чистота поверхности подложки // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1998. - Т. 126, №12. - С. 693-696.
3. Григорьев И. В., Чиркин А. А. Роль биохимического исследования слюны в диагностике заболеваний // Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - №6. - С. 18-20.
4. Гугутишвили Ц. Г., Симонишвили Л. М. Дифференциально-диагностические критерии оценки тезиграмм слюны здоровых детей и детей с гиперплазией небных миндалин и компенсированным хроническим тонзиллитом // Педиатрия. - 1990. - №12. - С. 78-79.
5. Денисов А. Б. Слюнные железы. Слюна. М., 2000. - 340с.
6. Денисов А. Б. Слюнные железы - тест-объект для оценки биосовместимости в стоматологии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2001. - Т. 131, №2. - С. 124-131.
7. Зубеева Г. Н., Мотылева И. М., Потехина Ю. П., Белова Л. М. Кристаллографический скрининг-метод в диагностике и лечении больных с мерцательной аритмией // Клиническая лабораторная диагностика. -
2001. - №9. - С. 10.
8. Каликштейн Д. Б., Мороз Л. А., Квитко Н. Н., Шмелева Н. Е., Павлов Б.А. Кристаллографическое исследование биологических субстратов // Клиническая медицина. - 1990. - №4. - С. 28-31.
9. Каликштейн Д. Б., Мороз Л. А., Черняков В. Л. Значение тезиграфического метода исследования мочи // Лабораторное дело. - 1981. - №2. - С. 79-81.
10. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. К методике тезиокристаллоскопии биожидкостей // Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. - №10. - С. 3.
11. Кирсанов А. И., Долгодворов А. Ф., Леонтьев В. Г. с соавт. Концентрации химических элементов в разных биологических средах человека // Клиническая лабораторная диагностика. - 2001. - №3. - С. 16-23.
12. Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В. Физические основы кристаллографического анализа в офтальмологии // Сб. тез. докладов межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием " Санкт-Петербургские научные чтения-2002". - СПб. -
2002. - С. 42-43.
13. Колединцев М. Н., Майчук Н. В. Результаты исследования слезной жидкости при ношении контактных линз // Сб. тез. докладов межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием "Санкт-Петербургские научные чтения-2002". - СПб. - 2002. - С. 45-46.
14. Кристаллографические методы исследования в медицине: Сб. науч. трудов 1-й Всероссийской научно-практической конференции. - М., 1997.
15. Кристаллоскопический метод исследования биологических субстратов: Метод. рекомендации / Л. А. Мороз, И. Л. Теодор, В. Е. Брык и др. - М., 1981. - 9с.
16. Кристаллографический метод исследования в гастроэнтерологии Информ. письмо. / Г. В. Плаксина, И. Л. Теодор, Д. Б. Каликштейн с соавт. - М., 1990. - 14 с.
17. Ловиц Т. Е. - Технол. журнал. - 1804. - Т. 1, №3. - С. 27.
18. Мартусевич А. К. Кристаллографический анализ: общая характеристика // Вятский медицинский вестник. - 2002. - №3. - С. 59-64.
19. Мартусевич А. К. Основные и дополнительные критерии оценки тезиграмм в первичной диагностике различной патологии // В кн.: Актуальные проблемы патофизиологии / Под. ред. проф. Н. А. Гавришевой, проф. В. И. Николаева. - СПб.: издательство СПбГМУ. - 2003. - С. 50-52.
20. Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Оценка качества жизни и тезиокристаллоскопической картины
биожидкостей у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки // Вестник Российского государственного медицинского университета. - 2003. - №1 (24). - С. 183.
21. Мартусевич А. К., Кошкин А. Н., Меснянкин С. А., Окатьева Н. В., Кулик В. А. Условия кристаллизации как один из факторов, влияющих на результат тезиокристаллоскопического теста // Сб. работ 68-й итоговой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН. - Курск: КГМУ, 2002. - Ч. I. - С. 42-43.
22. Мартусевич А. К., Кошкин А. Н., Окатьева Н. В., Меснянкин С. А. Применение кристаллизации жидкостей организма человека в качестве диагностического теста // Человек и вселенная. - 2003. - №2 (23). - С. 157-162.
23. Меньшиков В. В. Лабораторные тесты в клинической практике. М.: Медицина, 1988. - 428с.
24. Нефедова Н. Б., Цывенкова Л. А. Кристаллография в диагностике заболеваний гастродуоденальной системы у детей // Вопросы охраны материнства и детства. - 1985. - Т. 30, №10. - С. 61.
25. Павловская Н. А., Данилова Н. И. Оценка информативности лабораторных тестов и их комплексов в профпатологии // Клиническая лабораторная диагностика. - 2001. - №12. - С. 49-51.
26. Петрович Ю. А., Сухова Т. В. Резидуальный индекс слюны для оценки влияния антиоксидантов на баланс свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты при воспалении тканей ротовой полости // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2001. - №3. - С. 16-17.
27. Пикин С. А. Структурные превращения жидких кристаллов. - М. - 1981. - 269с.
28. Плаксина Г. В., Римарчук Г. В., Бутенко С. В., Горчакова Л. Н. Клиническое значение кристаллографического и кристаллоскопического метода исследования мочи // Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - №10. - С. 34.
29. Потехина Ю. П., Зубарев П. С., Страхов А. В., Бузоверя М. Э., Яхно Т. А., Щербак Ю. П. Кристаллография и вискозиметрия желчи при желчнокаменной болезни // Клиническая лабораторная диагностика. - 2001. - №3. - С. 33-35.
30. Савина Л. В. Кристаллоскопические структуры сыворотки крови в клинике внутренних болезней: Автореф. дисс... д. м. н. - Пермь, 1992. - 40с.
31. Савина Л. В. Структурообразование сыворотки крови в условиях вакуума // Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - №11. - С. 48.
32. Савина Л. В., Конуева О. В., Коротько Г. Г., Яковенко М. С., Новоселя Н. В. Кристаллоскопическая диагностика нарушений экзокринной функции поджелудочной железы у больных с хроническим панкреатитом / IV Международный конгресс "Парентеральное и энтеральное питание". - Москва, 2000. - С. 98.
33. Савина Л. В., Павлищук С. А., Самсыгин В. Ю. с соавт. Поляризационная микроскопия в диагностике обменных нарушений // Клиническая лабораторная диагностика. - 2003. - №3. - С. 11-13.
34. Сазонов А. М., Мороз Л. А., Каликштейн Д. Б. Кристаллографический метод исследования в медицине // Советская медицина. - 1988. - №6. - С. 27-34.
35. Семенова Т. Д. Исследование особенностей экскреции натрия, калия со слюной как метод оценки функционального состояния организма при экстремальных воздействиях. Автореф. дисс. . к. б. н. -М., 1972. - 18с.
36. Тарусинов Г. А. Кристаллографическое исследование мочи в диагностике и дифференциальной диагностике диффузных заболеваний соединительной ткани у детей // Педиатрия. - 1994. - №1. - С. 55-57.
37. Теодор И. Л., Мороз Л. А., Каликштейн Д. Б., Лесин В. Б., Погосян М. Г., Лященко В. И. Применение метода кристаллических налетов в диагностике некоторых патологических процессов // Лабораторное дело. - 1985. - №5. - С. 295-298.
38. Трифонов В. Д. Патогенетическое и диагностическое значение концентрации ионов в слюне и желудочном содержимом при хронических гастритах у детей // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - 2000. - №2. - С. 15-17.
39. Чеботарева В. Д., Мельник А. И., Бурлай В. Г., Степанова Л. С. Кристаллоскопический метод исследования в дифференциальной диагностике ревматических и неревматических кардитов у детей // Вопросы охраны материнства и детства. - 1986. - №9. - С. 61-65.
40. Шабалин В. Н., Шатохина С. Н. Морфология биологических жидкостей в клинической лабораторной диагностике // Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. - №3. - С. 25-32.
41. Шабалин В. Н., Шатохина С. Н. Морфология биологических жидкостей человека. - 2001. - 304 с.
42. Шатохина С. Н., Шабалин В. Н. Профильная дегидратация биологических жидкостей // Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - №9. - С. 38.
43. Шевердин Ю. П., Чумак П. Я. Кристаллографическое исследование крови у больных острым панкреатитом // Клиническая хирургия. - 1987. - №11. - С. 64-65.
44. Экстракорпоральная жидкокристаллическая диагностика холецистита / Лисиенко В. М., Запецкий Е. В., Кононенко Е. В., Минц Р. И. - Свердловск, 1989. - 381с.
45. Daems W. F. - Р. Ж. Биол. химия. - 1965. - №9. - С. 4-5.
46. Daems W. F. Thesigrafie. - Chem. courant. - 1964, 1963, 1970, 1977.
47. Scopinov S. A., Antropova I. P., Tarakhtyi E. A. // Mol. Mat. 1994. - Vol. 4. - P. 339-343.
48. Shabalin V. N., Shatokhina S. N., Yakovlev S. A. // Phys. Chem. Biol. Med. - 1995. - Vol. 2, № 1. - P. 37-49.
49. Shilkin G. A., Yartseva H. S., Medvedev I. B. et al. // Ophthalmosurgery. - 1997. - N 1. - P. 86-92.
