CC BY
45
УДК 619:616.9:578.824.11:615.371:57.083.3 Ключевые слова: бешенство, ИФА, антирабические антитела
Key words: rabies, ELISA, rabies antibodies
Сухарьков А. Ю., Чернышова Е. В., Назаров Н. А.
ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА ДЛЯ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИРАБИЧЕСКОй ВАКЦИНАЦИИ ЖИВОТНЫХ
the application potential of elisa for estimation of the effectiveness of animal rabies vaccination
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), Адрес: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец. Тел./факс: (4922) 26-38-77, 26-06-14, 26-19-14
Federal centre for Animal Health Address: 600901, Vladimir, Yur'evets. Tel./fax: +7 (4922) 26-38-77, 26-06-14, 26-19-14
Сухарьков Андрей Юрьевич, вед. биолог, аспирант
Sukhar'kovandrey Yu., Leading Biologist, Postgraduate Чернышова Елена Владимировна, вед. ветврач, аспирант chernyshova Elena V., Leading Veterinarian, Postgraduate Назаров Николай Алексеевич, к. б. н., вед. науч. сотрудник
Nazarov Nikolay A., Ph.D., Leading Research Scientist
Аннотация. Разработан непрямой вариант иммуноферментного анализа по определению антител к гликопроте-ину вируса бешенства в сыворотках крови животных. Диагностическая чувствительность разработанной тест-системы по отношению к базовому методу (реакции нейтрализации в культуре клеток) составила 90,6 %, а диагностическая специфичность - 95,2 %. Предложенный метод может быть использован для оценки эффективности антирабической вакцинации животных.
Summary. An indirect enzyme immunoassay option for determination of antibodies to rabies virus glycoprotein in the blood serum of animals has been developed. The diagnostic sensitivity of the developed test systems with respect to the basic method (neutralization test in cell culture) was 90,6 % and diagnostic specificity reached 95,2 %. The proposed method can be used for estimation of the effectiveness of rabies vaccination of animals.
Введение
Бешенство - остро протекающая инфекционная болезнь теплокровных животных и человека, характеризующаяся поражением центральной нервной системы и, как правило, неизбежной летальностью. Бешенство регистрируется на всех континентах земного шара, кроме Австралии и Антарктиды. Это заболевание практически ликвидировано на территории большинства стран Западной Европы, а также некоторых островных государств (Новая Зеландия, Великобритания, Япония). Российская Федерация стационарно неблагополучна по бешенству.
Основным способом борьбы с бешенством является профилактическая иммунизация животных с использованием антирабиче-ских вакцин [1]. Для оценки иммуногенно-сти антирабических вакцин, а также степени защищенности животных или людей от
бешенства необходимо определение уровня антирабических вируснейтрализующих антител в сыворотках крови. Необходимость определения уровня антирабических ви-руснейтрализующих антител связана также с требованием многих стран наличия сведений о количестве таких антител в крови у ввозимых в страну животных, уровень которых должен быть не ниже 0,5 МЕ/мл [9]. Основным методом оценки напряженности поствакцинального антирабического иммунитета у животных, рекомендуемым Всемирной Организацией Охраны Здоровья Животных (OIE), является реакция нейтрализации (РН) в культуре клеток [9].
Реакция нейтрализации достаточно трудоемкий метод, постановка которого занимает много времени (до 72 часов), требующая наличия специального оборудования и высококвалифицированного персонала. В ка-
честве альтернативы реакции нейтрализации для мониторинга эффективности антираби-ческой вакцинации OIE рекомендует твердофазный непрямой иммуноферментный анализ (ИФА) по выявлению антител к вирусу бешенства [9].
Сущность метода заключается в образовании иммунных комплексов специфичных антител с гликопротеином вируса бешенства, иммобилизированным на твердой фазе лунок иммунологического полистиролового планшета, и последующим выявлением данных комплексов с помощью универсального для иммуноглобулинов класса G коньюгата -белок А, меченный пероксидазой.
Положительными сторонами ИФА по сравнению с РН в культуре клеток являются отсутствие необходимости использования в реакции живого контрольного вируса бешенства, возможность исследования большого числа сывороток в короткие сроки, малый объем исследуемого материала, независимость от инфекционной контаминации сывороток, экономичность и простота выполнения исследований.
Целью данной работы являлась разработка тест-системы на основе непрямого имму-ноферментного анализа для количественного определения антител к гликопротеину вируса бешенства в сыворотках крови животных.
Материалы и методы
Вирус бешенства, штамм ВНИИЗЖ, очищали и концентрировали из культурального вирусного сырья, инактивированного диме-ром этиленимина [3]. G-белок извлекали из вируса бешенства методом деструкции ви-рионов тритоном Х-100 с последующим разделением антигенов высокоскоростным центрифугированием в ступенчатом градиенте плотности CsCl [6]. Концентрацию белка в полученных препаратах определяли по методу Лоури [8]. Степень чистоты полученных антигенов контролировали методом вертикального электрофореза в агарозном геле с додецилсульфатом натрия в денатурирующих условиях.
Рабочее разведение гликопротеина определяли методом титрования в ИФА с использованием антирабического им-
муноглобулина кролика [2], сыворотки неиммунного кролика и диагностических антител против иммуноглобулинов кролика, меченных пероксидазой, производства ГУ НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи.
В качестве блокирующего буфера (для блокирования свободных сайтов на твердой фазе иммунологического планшета) использовали казеин натриевую соль, разведенную на промывочном буферном растворе, в качестве которого использовали Трис-HCl буферный раствор с добавлением Tween-20 (ТБСТ).
Для учета результатов ИФА использовали универсальный пероксидазный конъюгат к иммуноглобулинам класса G - белок А, полученный из Staphylococus aureus и меченный пероксидазой хрена, и субстрат для пе-роксидазы - ортофенилендиамин.
Рабочее разведение универсального ко-ньюгата определяли в ИФА с использованием антирабического иммуноглобулина кролика [2]. За рабочее разведение универсального коньюгата принимали такое его разведение, при котором достигалось оптимальное соотношение величины оптического сигнала с антирабическим иммуноглобулином (за исключением разведений иммуноглобулина со сверхизбыточным по величине сигналом оптической плотности) к средней величине оптического сигнала в лунках, соответствующих разведению титруемого ко-ньюгата, куда не вносили иммуноглобулин.
В качестве калибровочной сыворотки использовали референтную антирабическую сыворотку собак с активностью 4 МЕ/мл, полученную из национального антирабическо-го центра серодиагностики Nancy, Франция. Положительным контролем служит эта же сыворотка, разведенная до 0,5 МЕ/мл, а отрицательным контролем - ТБСТ.
Уровни антител к гликопротеину вируса бешенства определяли в сыворотках крови собак, вакцинированных против бешенства. Пробы поступали в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из разных региональных ветеринарных лабораторий. Поступивший биоматериал до использования хранили при минус 20 °С.
Уровень антирабических вируснейтрали-зующих антител в сыворотках крови живот-
ных исследовали базовым методом, в РН на культуре клеток [9].
Результаты исследований
На рисунке 1 представлена схема постановки разработанного непрямого сэндвич-варианта ИФА.
Для сенсибилизации планшетов в лунки вносили по 100 мкл гликопротеина вируса бешенства, разведенного в карбонатно-би-карбонатном буфере (рН 9,5) до рабочей концентрации, и инкубировали в течение 19-20 часов при 4 °С. Сенсибилизированный планшет 3 раза отмывали ТБСТ. После этого в лунки приливали по 200 мкл блокирующего буферного раствора и инкубировали в течение часа при температуре 37 °С. Отмывали 3 раза ТБСТ.
Исследуемые сыворотки перед проведением анализа размораживали, тщательно перемешивали и центрифугировали в течение 20 минут при 4000 g. Надосадок использовали для исследования. В качестве положительного контроля использовали референтную антирабическую сыворотку собак с активностью 4 МЕ/мл, в разведении 1 : 800 на ТБСТ. В качестве отрицательного контроля
Рис. 1. Схема твердофазного непрямого ИФА для определения в сыворотках крови животных антител к гликопротеину вируса бешенства.
1 2 3 -i 5 6 7 S 9 10 II 12
А OIF 1/100 OIE 1/100 P p se ss S 16 S 16 S 24 S 24 S 32 S 32
И OIE 1/200 OIE 1/200 S 1 S 1 59 S 9 S 17 S 17 S 25 S 25 S 33 S 33
С OIE 1/400 OIE 1/400 S2 S 2 S 10 S 10 S 18 S 18 S 26 S 26 S 34 S 34
D OIE 1/SOO OiE 1/BOO S3 S3 S 11 S II S 19 S 19 S 27 S 27 S35 S 35
Е OIE 1/1600 OIE 1/1600 SJ S 4 S 12 S 12 S 20 S 20 S 25 5 28 S 36 S 36
F OIE 1/3200 OIE 1/3200 S 5 55 S 13 $13 S 21 S 21 S 29 5 29 5 37 S 37
С, OIE 1/6400 OIE 1/6.100 S6 S6 S 14 S 14 S 22 S 22 S 30 S 30 S 38 S 38
II N N s; S 7 S 15 S 15 S 23 S 23 S31 531 539 S 39
Рис. 2. Схема внесения контрольных препаратов и исследуемых сывороток. OIE - референтная антираби-ческая сыворотка с активностью 4 МЕ/мл; N - отрицательный контроль; Р - положительный контроль, с активностью 0,5 МЕ/мл; S - исследуемые сыворотки.
использовали ТБСТ. Для приготовления калибровочной сыворотки референтную анти-рабическую сыворотку собак с активностью 4 МЕ/мл разводили 1 : 100. Исследуемые пробы сывороток крови собак разводили 1 : 100 или 1 : 200. Контрольные препараты, калибровочную сыворотку и исследуемые образцы вносили по следующей схеме (рис. 2).
В лунки вертикальных рядов В1-Н1 и В2-Н2 вносили по 100 мкл раствора ТБСТ. Лунки Н1 и Н2 служили отрицательным контролем. В лунки А1, А2, В1, В2 вносили по 100 мкл калибровочную сыворотку, которую титровали с двукратным шагом в вертикальных рядах В1^1 и В2^2. В лунки А3 и А4 вносили по 100 мкл положительного контроля. В остальные лунки попарно вносили по 100 мкл исследуемых сывороток в соответствующем разведении. Планшет инкубировали в течение 2 часов при температуре 37 °С. Отмывали 3 раза ТБСТ.
В лунки планшета вносили по 100 мкл рабочего разведения универсального конъюга-та в ТБСТ. Инкубировали 1 час при 37 °С. Отмывали 3 раза ТБСТ.
Готовили раствор субстрат-хроматогена и вносили по 100 мкл на лунку. Инкубировали 20 минут при комнатной температуре в темноте, реакцию останавливали добавлением в каждую лунку 50 мкл 3н Н^04.
Реакцию учитывали на сканирующем спектрофотометре "BioRad PR 2100" при длине волны 492 нм.
Титры антител к гликопротеину ВБ в исследуемых сыворотках, выраженные в МЕ/мл, вычисляли с использованием математической модели линейной регрессии по следующей методике.
1. Вычисляли среднее значение оптической плотности (ОП) для каждого тестируемого образца и каждого разведения калибровочной сыворотки.
2. Вычисляли показатель натурального логарифма (1п) для каждого среднего значения ОП и 1п значения концентрации антител к вирусу бешенства для каждого разведения калибровочной сыворотки (с 4,0 до 0,0625 МЕ/мл, не принимая во внимание фактор разведения 1/100).
3. С помощью значений ln, полученных в отношении разведений калибровочной сыворотки, устанавливали линейную регрессию между показателями ln концентраций антител к вирусу бешенства (выраженным в МЕ/мл) и показателями ln оптической плотности каждой концентрации калибровочной сыворотки для расчета соответствующей математической модели (уравнения линейной регрессии).
Показатель ln концентрации антител к вирусу бешенства = a + Ьс , где:
с - показатель ln оптической плотности исследуемой пробы,
а - коэффициент уравнения, рассчитанный по формуле:
Еу Ех2 - Ех Ех у n Ех2 - (Ех)2 '
b - коэффициент уравнения, рассчитанный по формуле:
n Ех у - Ех Еу , n Ех2 - (Ех)2 ,
n - количество снимаемых показаний (разведений калибровочной сыворотки),
х - ln каждой оптической плотности, соответствующей разведению калибровочной сыворотки,
у - ln разведения калибровочной сыворотки, выраженного в МЕ/мл.
4. Для каждого опытного образца вычисляли среднее значение оптической плотности, а затем концентрацию антител к вирусу бешенства в образце, выраженную в виде МЕ/мл в соответствии со следующей моделью.
Концентрация антител к вирусу бешенства в образце (МЕ/мл) = е(а + Ьс),
с - показатель ln оптической плотности исследуемого образца.
При расчетах использовали программу Microsoft Excel.
Величина > 0,5 МЕ/мл считается достаточной для защиты от бешенства, согласно определению ВОЗ [9]. Если она < 0,5 МЕ/мл, то считается, что животное не имеет достаточного для защиты от бешенства уровня антител.
Для правильного учета получаемых результатов были определены валидационные параметры разработанного теста.
При проведении 12 тестов максимальная величина ОП в лунках (n = 57) с отрицательным контролем была 0,069. На основании этих данных валидационный порог для оптической плотности отрицательного контроля был определен как не превышающий величину 0,07.
При проведении 12 тестов минимальная и максимальная средняя величина ОП в лунках c положительным контролем составила, соответственно, 0,43 и 1,081. На основании этих данных валидационный предел для оптической плотности положительного контроля был определен, как 0,4-1,1.
Также для правильного учета результатов теста должно соблюдаться условие: ОПср 0IE1/100 > ОПср 0IE1/200 > ОПср 0IE1/400 > ОПср 0IE1/800 > ОПср 0IE1/1600 > ОПср 0IE1/3200 > ОПср 0IE1/6400, где OIE - калибровочная сыворотка.
Для определения диагностической чувствительности и специфичности разработанного теста было исследовано 74 сыворотки крови собак. Результаты определения антител к гликопротеину ВБ в сыворотках крови животных в ИФА и антирабических вирус-нейтрализующих антител в реакции нейтрализации в культуре клеток представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, из 53 сывороток крови, оказавшихся положительными в реакции нейтрализации, в ИФА было выявлено 48 сывороток, что составило 90,6 %, 5 сывороток в ИФА были определены как отрицательные. Из 21 отрицательных в РН сыворотки в ИФА 20 сывороток были определены как отрицательные (95,2 %), а одна - как положительная. При этом показатели активности этой сыворотки в реакции нейтрализации и в ИФА были достаточно близкими по величине.
При тестировании отрицательной референтной сыворотки крови собак (Nancy, Франция) в РН и ИФА был получен отрицательный результат (< 0,5 МЕ/мл).
Ряд положительных и отрицательных сывороток были тестированы в трех постанов-
Таблица 2.
Воспроизводимость результатов исследования сывороток крови животных
в разработанном ИФА
Таблица 1.
Результаты определения антител к гликопротеину ВБ в ИФА и вируснейтрализующих антител в РН в сыворотках крови животных
Статус сыворотки РН в культуре клеток ИФА
Положительные Отрицательные
Положительные 53 48 5
Отрицательные 21 1 20
Всего 74 74
Эксп. Статус в РН Статус в ИФА Результаты исследования в ИФА, МЕ/мл
Постановка 1 Постановка 2 Постановка 3 Коэф. вариации, %
682 - - 0,15 0,19 0,16 7,2
653 - - 0,29 0,31 0,23 8,7
480 + + 1,5 1,69 1,63 3,5
485 + + 2,41 2,95 3,25 8,6
490 + + 2,37 2,69 2,78 4,8
495 + + 2,33 2,6 2,71 4,4
498 + + 1,22 1,43 1,33 4,6
501 + + 1,34 1,46 1,68 6,7
Таблица 3.
Результаты исследования зашифрованных проб сывороток животных в иммунофер-ментном анализе для определения антител к гликопротеину вируса бешенства
Статус сыворотки РН в культуре клеток ИФА % совпадений результатов РН и ИФА
Положительные 21 21 100
Отрицательные 17 17 100
ках ИФА для изучения воспроизводимости метода. Результаты исследований представлены в таблице 2.
Как видно из таблицы 2, разработанный метод является воспроизводимым, все пробы подтвердили свой статус в ИФА. По результатам трех исследований коэффициент вариации не превысил 10 %.
В ФГБУ «ВНИИЗЖ» были проведены комиссионные испытания разработанных «Методических указаний по определению антител к гликопротеину вируса бешенства в сыворотках крови животных в иммунофер-ментном анализе».
При проведении комиссионной проверки в непрямом варианте ИФА исследовали
38 сывороток крови собак и кошек, вакцинированных против бешенства. Тестируемые сыворотки крови животных ранее были исследованы референтным методом, в реакции нейтрализации в культуре клеток, для определения их антирабического статуса. Результаты представлены в таблице 3.
Как видно из таблицы 3, результаты, полученные в ИФА, полностью совпали с результатами, полученными в реакции нейтрализации.
Обсуждение результатов
ИФА для определения уровней антираби-ческих антител в сыворотках крови используется во многих европейских лабораториях
для оценки эффективности вакцинации диких и домашних животных против бешенства. Этот метод позволяет быстро получать количественные результаты, которые коррелируют с результатами, полученными при использовании классического метода - реакции нейтрализации в культуре клеток [4, 5].
В настоящее время фирма Bio-Rad выпускает на коммерческой основе "PLATELLA™ RABIES II KIT" для определения антител к гликопротеину вируса бешенства, чувствительность и специфичность которого по отношению к РН по данным авторов составляет, соответственно, 98,6 % и 99,4 % при исследовании человеческих сывороток крови [7].
В мае 2007 г. OIE была организована вали-дационная проверка данного коммерческого набора [10]. По результатам этой проверки аналитическая чувствительность метода составила 0,125 МЕ/мл. Для определения диагностической чувствительности и специфичности были проведены исследования сывороток собак, кошек и лис - внутренние (Bio-Rad, Франция) и внешние (Nancy, Франция). Диагностическая чувствительность этого набора при исследовании сывороток крови собак, кошек и лис составляла соответственно 77,8 %, 81,8 %, 93,5 % по результатам внутренней проверки и 88,6 %, 89,8 %, 88,2 % по результатам внешней проверки, а специфичность набора составляла соответственно 99,5 %, 98,2 %, 96,5 % по результатам внутренней проверки и 99,2 %, 100 %, 97,1 % по результатам внешней проверки. Как видно из этих данных, на современном этапе диагностическая чувствительность метода может достигать 93,5 %, а диагностическая специфичность - 100 %.
Диагностическая чувствительность и специфичность разработанного в ФГБУ «ВНИ-ИЭЖ» ИФА для определения антител к гликопротеину вируса бешенства при исследовании сывороток крови собак составила, соответственно, 90,6 % и 95,2 %. При проведении исследований был получен ложноположительный результат в отношении одной из проб. Титр антител в данной сыворотке находился на уровне чуть выше 0,5 МЕ/мл и составил 0,567 МЕ/мл. Реальный титр, полученный в РН в культуре кле-
ток, находился в пределах от 0,25 МЕ/мл до 0,5 МЕ/мл. Возможность получения ложно-положительных результатов в ИФА возникает, когда активность антител колеблется в пределах чуть больше или меньше 0,5 МЕ/мл. Но, как правило, у домашних животных, вакцинированных против бешенства, титры антирабических вируснейтрализующих антител достигают более высоких величин. Поэтому разработанный ИФА может быть реальной альтернативой при исследовании антирабического статуса у домашних животных. Предложенный ИФА может использоваться для предварительного скрининга уровней серопреволентности в популяции диких и домашних животных при проведении широкомасштабного мониторинга и оценки эффективности антирабической вакцинации.
Заключение
Разработанный твердофазный непрямой вариант иммуноферментного анализа по определению антител к гликопротеину вируса бешенства в сыворотках крови животных является воспроизводимым, обладает диагностической чувствительностью до 90,6 % и диагностической специфичностью до 95,2 %. Возможность исследования большого числа сывороток в короткие сроки, малый объем исследуемого материала, независимость от инфекционной контаминации сывороток и экономичность делают метод перспективным для использования его при оценке эффективности антирабической вакцинации животных.
Список литературы
1. Метлин, А. Е. Оральная вакцинация диких плотоядных животных против бешенства / А. Е. Метлин, С. С. Рыбаков, В. В. Михалишин // Ветеринария. -2009. - № 8. - С. 18-25.
2. Назаров, Н. А. Получение антигенов и антител для диагностики бешенства / Н. А. Назаров, А. В. Молодкин, А. П. Пономарев [и др.] // Физика и радиоэлектроника в медицине и экологии: 7-я Между-нар. науч.-техн. конф. - Владимир, 2006. - Кн. 2. -С. 162-165.
3. Пономарев, А. П. Совершенствование метода очистки и концентрирования вируса бешенства / А. П. Пономарев, Н. А. Назаров, С. С. Рыбаков [и др.] // Материалы междунар. конф. Нейроинфекции: бе-
шенство, губкообразная энцефалопатия КРС, Крейт-цфельда-Якоба и др. прионные болезни; листериоз, болезнь Ауески, болезнь Тешена: тез. докл. - Покров, 2001. - С. 49-51.
4. Cliquet, F. Development of a qualitative indirect ELISA for the measurement of rabies virus-specific antibodies from vaccinated dogs and cats / F. Cliquet, L. M. McElhinney, A. Servat [et al] // J. Virol. Meth. -2004. - Vol. 117. - P. 1-8.
5. Cliquet, F. Standartisation and establishment of a rabies ELISA test in European laboratories for assessing the efficacy of oral fox vaccination campaigns / F. Cliquet, T. Muller, F. Mutinelli [et al] // Vaccine. - 2003. -. Vol. 21. - P. 2986-2993.
6. Dietzschold, B. Isolation and purification of a polymeric form of the glycoprotein of rabies virus / B. Dietzschold, J. H. Cox, L. G. Schneider [et al] // J. Gen. Virol. - 1978. - Vol. 40. - P. 131-139.
7. Feyssaguet, M. Multicenter comparative study of a new ELISA, PLATELIATM RABIES II, for the detection and titration of anti-rabies glycoprotein antibodies and comparision with the rapid focus inhibition test (RFFIT) on human samples from vaccinated and non-vaccinated people / M. Feyssaguet, L. Dacheux, L. Audry [et al] // Vaccine. - 2007. - Vol. 25. - P. 2244-2251.
8. Lowry, O. H. Protein measurement with Folin phenol reagent / O. H. Lowry, N. J. Rosebrough, A. L. Farr, R. J. Randall. // J. Biological Chemistry. -1951. - Vol. 193. - P. 265-275.
9. OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. Vol. 1. - 6nd ed. - Paris, 2008. -Chap. 2.1.13. - P. 304-323.
10. OIE. Procedure for validation and certification on diagnostic assays. - www.oie.int/fileadmin/Home/eng/ 0ur_scientific_expertise/docs/pdf/Abstract_20sheet_ 0IE_20Register_PlateliaRabiesII_v1.pdf.
r
НОУ ДО «Институт Ветеринарной Биологии» приглашает принять участие в семинарах в 2012/2013 учебном году:
I
«Рентгенодиагностика
мелких домашних животных»
Семинар проводится с 2009 года. Состоит из теоретической и практической частей. В курсе теории слушатели знакомятся с терминологией, физическими и техническими аспектами рентгеновского излучения, общими принципами работы рентгеновского аппарата, рентгенологической фотохимией, характеристикой рентгенодиагностики исследуемых органов, укладками для рентгенографического исследования отдельных анатомических областей, картиной в норме и при патологии.
За время практических занятий в рентгеновском кабинете каждый участник семинара обучается самостоятельно изготавливать рентгеновский снимок. Большая часть семинара посвящена развитию практических навыков - чтению рентгеновских снимков. На примере более чем 2000 снимков из архива Института Ветеринарной Биологии подробно описывается норма и патология скелетных структур, органов грудной клетки и органов брюшной полости.
По окончании курсов слушатели проходят тестовое занятие по комплексному чтению рентгеновских снимков и получают соответствующие сертификаты.
Курс рассчитан на слушателей с базовым ветеринарным образованием. Курсы пятидневные, с 11.00 до 17.00. Форма оплаты: безналичный расчет.
График проведения
2012 год: 1-5 октября, 26-30 ноября
2013 год: 21-25 января, 18-22 марта, 13-17 мая
«УЗИ-диагностика мелких домашних животных»
Семинар проводится совместно с НПП «Ра-текс» с 2006 года. Включает в себя теоретическую и практическую программы. В курсе теории слушатели знакомятся с общими принципами работы УЗ-аппаратов, датчиков, возможностями визуализации изображения внутренних органов брюшной полости, правилами укладки животных.
Отдельное занятие посвящено системам управления приборами УЗИ, правильному выбору настроек, созданию архивов и выдаче заключения.
За время проведения практических занятий каждый участник семинара обучается самостоятельно находить все органы брюшной полости, подлежащие визуализации, правильно их описывать, различать норму и патологию. Особое внимание уделяется развитию визуальных практических навыков - чтению эхограмм.
По окончании курсов слушатели проходят тестовое занятие и получают соответствующие сертификаты.
Базовый курс рассчитан на слушателей, начинающих обучение с нуля. Курсы пятидневные, с 11.00 до 17.00.
Для иногородних бронируется гостиница или общежитие. Форма оплаты: безналичный расчет.
График проведения
2012 год: 17-21 сентября, 15-19 октября, 12-16 ноября, 10-14 декабря
2013 год: 4-8 февраля, 4-8 марта, 1-5 апреля, 29 апреля - 3 мая, 27-31 мая
Для записи на семинары обращайтесь по тел. +7 921 095-89-27, (812) 927-55-92 Интересующие вас вопросы можно уточнить по электронной почте: invetbio@yandex.ru Вся информация о семинарах (график и место проведения, стоимость, программа занятий, отзывы слушателей) доступна на сайте: www.invetbio.spb.ru/seminars.html
J
