CC BY
6Иммуногистохимический анализ как метод повышения информативности первичной биопсии при подозрении на аденокарциному простаты
Авторы
Попов Сергей Валерьевич, doc.popov@gmail.com, СПб ГБУЗ КБ Святителя Луки, Санкт-Петербург Гусейнов Руслан Гусейнович, rusfa@yandex.ru, СПб ГБУЗ КБ Святителя Луки, Санкт-Петербург Орлов Игорь Николаевич, doc.orlov@gmail.com, СПб ГБУЗ КБ Святителя Луки, Санкт-Петербург ^рябин Олег Николаевич, skryabin_55@mail.com, СПб ГБУЗ КБ Святителя Луки, Санкт-Петербург Перепелица Виталий Владимирович, perepelitsa_vit@mail.ru, СПб ГБУЗ КБ Святителя Луки, Санкт-Петербург Катунин Александр Сергеевич, aleksandrkatunin@gmail.com, СПб ГБУЗ КБ Святителя Луки, Санкт-Петербург Яшева Софья Юрьевна, yashevasofi@mail.ru, СПб ГБУЗ КБ Святителя Луки, Санкт-Петербург Зайцев Артем Сергеевич, zaitsevurology@gmail.com, СПб ГБУЗ КБ Святителя Луки, Санкт-Петербург
Ключевые слова:
рак предстательной железы, иммуногистохимический анализ
Актуальность
Морфологические проявления рака предстательной железы (РПЖ) в 15-20% случаев сходны с таковыми при доброкачественных гиперпластических процессах в ткани простаты и/или с гистологической картиной атипической мелкоацинарной пролиферации (ASAP).
Цель
Изучить выявляемость РПЖ в биопсийном материале методом обзорного морфологического анализа и при иммуногистохимическом исследовании с применением моноклональных антител к ядерному белку р63, высокомолекулярным цитокератинам клона 34E12 и метилацил-КоА-рацемазе.
Материалы и методы
Ретроспективный анализ медицинских заключений по обзорному морфологическому и иммуноги-стохимическому (ИГХ) анализам биопсийного материала 852 пациентов, находившихся на обследовании и лечении в урологическом стационаре за период с 2013 по 2021 г.
Список литературы
Результаты
Практически в половине случаев ASAP, определенной при рутинном гистологическом исследовании биоптатов с гематоксилин-эозиновым окрашиванием, в процессе ИГХ-анализа с применением монокло-нальных антител к ядерному белку р63, цитокератинам клона 34E12 и -метилацил-КоА-рацемазе был верифицирован РПЖ. Число гистологических заключений о выявленной в рутинно окрашенных препаратах доброкачественной гиперплазии предстательной железы, сократилось на 11,02% в пользу гистологического диагноза РПЖ после ИГХ-исследовании.
Выводы
Иммуногистохимический анализ биопсийного материала с применением моноклональных антител к ядерному р63, высокомолекулярным цитокератинам клона 34Е12 и метилацил-КоА-рацемазе при подозрении на РПЖ, во-первых, конкретизирует микроморфологическую картину и демаскирует РПЖ; во-вторых, увеличивает выявляемость РПЖ; в-третьих, снижает встречаемость ложноотрицательных результатов.
Переоценка роли рецептора урокиназы uPAR в онкологии: подавление экспрессии uPAR снижает пролиферацию, но вызывает химиорезистентность, дормантность и метастазирование в клетках
нейробластомы
Авторы
Шмакова Анна Андреевна, anyashm@gmail.com, ФГБУ «НМИЦК им. академика Е.И. Чазова» Минздрава России, Москва
Климович Полина Сергеевна, lex2050@mail.ru, ФГБУ «НМИЦК им. академика Е.И. Чазова» Минздрава России, Москва
Рысенкова Карина Дмитриевна, karina_ry@mail.ru, ФГБУ «НМИЦК им. академика Е.И. Чазова» Минздрава России, Москва
Попов Владимир Сергеевич, galiantus@gmail.com, Факультет фундаментальной медицины ФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», Москва
Горбунова Анна Сергеевна, gorbunovaanna94@gmail.com, Факультет фундаментальной медицины ФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», Москва
Карпухина Анна Алексеевна, anna.karpukhina12@gmail.com, ФГБУН Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва
Карагяур Максим Николаевич, darth_max@mail.ru, Факультет фундаментальной медицины ФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», Москва
Рубина Ксения Андреевна, rkseniya@mail.ru, Факультет фундаментальной медицины ФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова», Москва
Семина Екатерина Владимировна, e-semina@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦК им. академика Е.И. Чазова» Минздрава России, Москва
Ключевые слова:
Upar, нейробластома, химиорезистентность, метастазирование, р53
Актуальность
Урокиназный рецептор uPAR (ген PLAUR) является мембранным рецептором, который связывает протеазу урокиназу uPA и участвует в ремодели-ровании матрикса, клеточной адгезии и миграции. Связываясь с урокиназой uPA, uPAR опосредует МАРК-зависимую сигнализацию, стимулирующую пролиферацию клеток, а фокусирование активного комплекса uPA/uPAR на крае мигрирующей клетки позволяет направлять процессы ремоделирования ма-трикса, облегчая инвазию. В сумме это определяет uPAR как перспективную мишень в онкологии, однако подходы, связанные с нокаутом или блокированием uPAR в клетках опухоли, могут иметь потенциальные риски. Нами впервые было обнаружено, что в клетках нейробластомы CRISPR/Cas9n-опосредованное подавление uPAR снижает пролиферацию [1], однако способствует эпителиально-мезенхимальному переходу [2], который может быть связан с метастазиро-ванием и химиорезистентностью [3].
Цель
Целью настоящей работы стало оценить влияние подавления uPAR на дормантность, химиочувстви-тельность и метастазирование клеток нейробластомы.
Материалы и методы
Мы использовали доступные данные транскрипто-мов, чтобы оценить экспрессию uPAR в первичных и рецидивирующих нейробластомах человека. Чтобы смоделировать снижение экспрессии uPAR, мы использовали подавление uPAR с помощью CRISPR/ Cas9 и shRNA в клетках нейробластомы Neuro2a и оценили их дормантность, химиочувствительность in vitro, а также рост опухоли и метастазирование in vivo.
Результаты
Мы показали, что высокая экспрессия PLAUR в первичном опухолевом узле предсказывает плохую выживаемость больных нейробластомой, однако рецидивирующие нейробластомы демонстрируют значительное снижение PLAUR. Подавление uPAR в клетках нейробластомы активирует р38 и увеличивает экспрессию р21, что указывает на дормантный фенотип этих клеток. uPAR-дефицитные клетки менее чувствительны к запуску апоптоза под действием цисплатина и доксорубицина и демонстрируют меньшую активацию р53 при повреждении ДНК. При подкожной имплантации мышам клеток нейробластомы с низкой экспрессией uPAR размер первичного опухолевого узла значительно снижается по сравнению с нейробластомой дикого типа (более чем в 10 раз, p <0,0001), но значимо (более чем в 2 раза, p <0,01) возрастает метастазирование клеток ней-робластомы в легкие.
Выводы
В онкологии урокиназная система считается привлекательной мишенью для разработки стратегий, направленных на диагностику и лечение рака, однако наши результаты убедительно показывают, что подавление uPAR может приводить к противоречивым результатам: с одной стороны, снижать пролиферацию клеток опухоли, однако с другой — приводить к запуску ЭМП, химиорези-стентности и дормантности, что в целом может объяснять устойчивость опухолевых клеток к химиотерапии или рецидив опухоли. Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проект № 20-015-00186).
Список литературы
1. Rysenkova K. D ., Semina E . V , Karagyaur M . N . et al . CRISPR/Cas9 nickase mediated targeting of urokinase receptor gene inhibits neuroblastoma cell proliferation // Oncotarget . 2018 . V 9 . N 50 . P. 29414-29430. doi: 10 ,18632/oncotarget . 25647. 2 . Semina E . V , Rubina K . A ., Shmakova A . A . et al . Downregulation of uPAR promotes urokinase translocation into the nucleus and epithelial to mesenchymal transition in neuroblastoma // Journal of cellular physiology. 2020 . V. 235 . N 9 . P. 6268-6286 . DOI: 10 . 1002/jcp . 29555 .
3 . 2022 Shmakova A . A ., Klimovich P S ., Rysenkova K . D . et al . Urokinase Receptor uPAR Downregulation in Neuroblastoma Leads to Dormancy, Chemoresistance and Metastasis // Cancers . 2022 . V. 16 . N 4 . P. 994. DOI: 10 . 3390/cancers14040994.
Активация аутофагической гибели клеток рака молочной железы при использовании ингибиторов PI3K/Akt/mTOR
Авторы
Григорьева Диана Дмитриевна, grigodidmit@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Жидкова Екатерина Михайловна, zhidkova_em@mail.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Жукова Ольга Игоревна, zukova2001@bk.ru, ФГБОУ ВО «МИРЭА — Российский технологический университет», Москва
Лылова Евгения Сергеевна, e.s.lylova@gmail.com, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Якубовская Марианна Геннадиевна, mgyakubovskaya@mail.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Лесовая Екатерина Андреевна, lesovenok@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Ключевые слова:
рак молочной железы, аутофагия, глюкокортикоиды, рапамицин, вортманнин
Актуальность
Рак молочной железы (РМЖ) — гетерогенная группа заболеваний, различающихся гистогенезом, генетическими нарушениями, клиническим течением и прогнозом. Химиотерапия РМЖ имеет широкий спектр недостатков (развитие инфекционных осложнений, гормональные нарушения и др.). Комбинация с синтетическими глюкокортикоидами (ГК) позволяет расширить терапевтический интервал и снизить общую токсичность основных терапевтических агентов. Однако один из побочных эффектов ГК — способность инициировать аутофагию, ведущую к выживанию трансформированных клеток [1].
Уровень аутофагии в клетке может быть подавлен при активации пролиферативного комплекса mTORC1, в связи с чем актуальной является оценка возможности введения в качестве адъювантов в терапию опухолей ингибиторов сигнального пути PI3K/Akt/mTOR для усиления аутофагии в клетках опухоли, вплоть до формирования аутолизосомы и гибели клеток.
Цель
Настоящая работа посвящена анализу действия ингибиторов PI3K/Akt/mTOR рапамицина и вортман-нина на ГК-индуцируемую аутофагию в клеточных линиях РМЖ.
Материалы и методы
Клеточные линии РМЖ культивировали в среде DMEM (для MCF-7) или КРМ1-1640 (для НСС-1954), содержащей 10% эмбриональной сыворотки телят, L-глютамин (2мМ), пенициллин и стрептомицин (по 50 ед/мл) (всё — «ПанЭко», Россия) при 37 °С в ат-
мосфере 5% СО2. Клетки рассаживали по 1 млн кл/ мл, после прикрепления вносили 10 нМ рапамицина, вортманнина (LC Labs, США) или 100 нМ декса-метазона (KRKA, Чехия) и инкубировали 24 ч. Для исследования совместного действия препаратов и ГК обработку дексаметазоном проводили по прошествии 4 часов инкубации с ингибиторами. Оптимальная схема обработки клеток была подобрана ранее [2]. При помощи Вестерн-блоттинга была оценена экспрессия ключевых мишеней белкового комплекса mTOR (p-4E-BP1 и pS6K), а также экспрессия белков Beclin-1 и Phospho-Beclin-1 (Ser93), которые являются основными маркерами, связанными с аутофагией в клетках злокачественных новообразований.
Результаты
Показано, что дексаметазон снижает эффективность вортманнина и рапамицина в отношении ин-гибирования mTOR в клетках РМЖ. В то же время дексаметазон способствует накоплению белка Phospho-Beclin-1 (Ser93) в клетках линии MCF-7, а инкубация обеих линий с комбинацией ГК и ингибиторов mTOR приводит к усилению экспрессии маркеров аутофагии в 2-3 раза.
Выводы
Поскольку длительный прием ГК приводит к слабой активации аутофагии, способствуя выживанию и формированию резистентности опухоли, представляется перспективным исследование эффектов ингибиторов PI3K/Akt/mTOR на гиперактивацию аутофагии для индукции клеточной гибели.
Финансирование: грант РНФ 17-75-20124.
