CC BY
39УДК 661.185.1:547.99-54.386
ПАВ-полиэлектролитные комплексы на основе производных хитина
М. Ринодо, Н. Р. Кильдеева, В. Г. Бабак
МАРГЕРИТРИНОДО (M. RINAUDO) — профессор ассоциированной лаборатории Университета Ж.Фурье Научного центра по растительным макромолекулам Национального центра научных исследований Франции (CERMAV-CNRS, Гренобль, Франция). Область научных интересов: физическая химия полисахаридов, струк-турообразование в растворах производных хитина и хитозана. E-mail marguerite.rinaudo@cermav.cnrs.fr
НАТАЛИЯРУСТЕМОВНА КИЛЬДЕЕВА - доктор химических наук, профессор кафедры аналитической, физической и коллоидной химии Московского государственного текстильного университета им. А.Н. Косыгина. Область научных интересов: структурообразование в растворах биосовместимых полимеров, полимерные системы с контролируемым выделением биологически активных соединений. E-mail: kildeeva@mail.ru
ВАЛЕРИЙ ГЕОРГИЕВИЧ БАБАК - доктор химических наук, профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории физической химии полимеров Института элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова РАН (ИНЭОС РАН). Область научных интересов: нано- и микрокапсулирование биологически активных веществ, коллоидная химия, высококонцентрированные эмульсии, термодинамика микроскопических жидких пленок.
119991 Москва, ул. Вавилова, 28, ИНЭОС РАН, тел. (499)135-65-02, факс (499)135-50-85, E-mail babak@ineois.ac.ru
Введение
Взаимодействие между противоположно заряженными полиэлектролитами (или их взаимодействие с ПАВ) в водной среде приводит к самопроизвольному образованию интерполиэлектролитного (ИПК) или ПАВ/полиэлектролитного (ПАВ-ПЭК) комплексов, соответственно. В зависимости от различных факторов (соотношение между противоположно заряженными группами, концентрация полимера, концентрация электролита и т. д.) эти комплексы растворимы или нерастворимы в воде. Нерастворимые комплексы могут быть использованы для получения нано- и микрокапсул.
Образующийся при смешивании белка (желатина) и полисахарида (гуммиарабика) нерастворимый ИПК в виде нано- и микрочастиц был определен Бунгенбергом де Йонгом как коацерват [1, 2]. Такие комплексы на основе природных полимеров используют для формирования оболочек микрокапсул [3]. Образование плотного и бездефектного защитного слоя на поверхности микрокапсул возможно только при условии, что коацерватные капли нерастворимого ИПК обладают свойствами вязкоупругой жидкости, которая обволакивает микрокапсулы в результате хорошей адгезии к поверхности микрокапсул и коалес-ценции между капельками ИПК. Необходимым условием формирования жидкоподобных коацерватных капель является относительно низкая линейная плотность заряженных функциональных групп полиэлектролитов, что характерно для белков и полисахаридов, содержащих амино-группы и карбоксильные группы.
При взаимодействии синтетических полиэлектролитов с высокой плотностью заряженных групп образуются твердоподобные ИПК и затем наночастицы плотной структуры. Такого рода комплексы образуются между ДНК и катионными полиэлектролитами при получении векторов ДНК [4, 5]. При стехиометрическом соотношении зарядов ( = 1 = [+]/[-]) комплекс агрегирует и затем дает осадок; таким образом, получение капсул в результате классической коацервации в этом случае исключено. Разработанный недавно метод «послойного» образования ИПК на поверхности коллоидных частиц также способствует образованию плотной структуры микро- и нанокапсул [6]. Этот метод позволяет избежать образования осадка в объеме раствора в момент смешивания полиэлектролитов. Толщина стенок капсул в данном случае определяется количеством слоев противоположно заряженных полиэлектролитов.
Нано- и микрокапсулы, стенки которых состоят из нерастворимого комплекса типа ПАВ-ПЭК, впервые были получены при помощи метода, описанного в [7, 8]. Этот метод основан на образовании нерастворимого комплекса на границе раздела жидкость/жидкость в результате фронтальной диффузии противоположно заряженных соединений: хитозана и додецилсульфата натрия (ДСН) через межфазную поверхность [9]. Исследования свойств ПАВ-ПЭК в жидкой фазе и на границе раздела позволили подобрать оптимальные условия для образования стенок микрокапсул, состоящих из твердо-подобного физического геля [10—14]. Капсулы, образованные из геля ПАВ-ПЭК (хитозан-ДСН), применялись
для инкапсулирования ферментов (протеаза, уреаза) [15-17].
Несмотря на то, что механические и реологические свойства микрокапсул определяют их применение в различных областях, таких как медицина, катализ, сельское хозяйство, биотехнология, они никогда не изучались подробно по причине сложности такого исследования. Вязкоупругие свойства физических гелей ПАВ-ПЭК исследовали на плоских макроскопических слоях в условиях, идентичных тем, в которых были получены капсулы [18, 19]. Упругие свойства слоев ИПК измерялись косвенно с помощью атомного-силового микроскопа при деформировании микрокапсул сжимающей силой [20]. Было показано, что рН и концентрация соли сильно влияют на устойчивость и прочность этих капсул [21].
Недавно нами был разработан новый метод дила-тантной реометрии адсорбционных слоев в проточной кювете с непрерывным или периодическим потоком [22, 23], позволяющий проводить исследования вязкоупру-гих дилатантных свойств нерастворимых ПАВ-ПЭК и ИПК. Этот метод, основанный на исследовании скорости изменения поверхностного натяжения путем анализа формы висящей капли (или всплывающего пузырька), был модифицирован для случая образования межфазной пленки в результате послойной адсорбции противоположно заряженных компонентов. Пропуская через измерительную кювету последовательно потоки растворителя и растворов ПАВ (или полиэлектролитов) удается изучать кинетику формирования ПАВ-ПЭК (или ИПК) на межфазной границе и исключить влияние адсорбции таких комплексов, образовавшихся в объеме смешанного раствора.
На протяжении ряда лет нашими лабораториями проводились совместные исследования свойств электростатических комплексов как ИПК, так и ПАВ-ПЭК. В данной работе представлены результаты исследования электростатических комплексов между производными хитина и ПАВ.
Получение капсул на основе ПАВ-полиэлектролитных комплексов
Производные хитина
Хитин является природным полисахаридом, его получают из панцирей ракообразных. Хитин имеет молекулярную структуру гомополимера поли-^-ацетил-Э-глюкозамина), как правило, хитины частично дезацети-лированы. Наибольший интерес представляют производные хитина. Так, например, карбоксиметилирование хитина по ОН- группам позволило получить анионное производное — карбоксиметилхитин (КМХ), растворимое в воде в широком интервале рН. В результате обработки щелочью, приводящей к деацетилированию хитина, получают хитозан, растворимый в кислой среде при степени ацетилирования (СА) менее 0,5 из-за наличия группы Э-глюкозамина и протонирования КН2- групп при рН<6. Аминогруппа может быть легко модифицирована, что позволяет изменять физико-химические
свойства этого природного полимера в растворе [24]. Например, в результате алкилирования хитозана и кар-боксиметилхитинов были получены амфифильные полимеры. Свойства этих полимеров в растворе определяются равновесием между силами электростатического отталкивания, которое зависит от концентрации ионов, и гидрофобными взаимодействиями, зависящими от температуры и полярности растворителя. Кроме того, наличие алкильных цепей придает производным хитина поверхностную активность, которая способствует образованию физических гелей в растворе [12, 13].
Образование нерастворимых ПАВ-полиэлектролитных комплексов
Взаимодействия между водорастворимыми производными хитина и противоположно заряженными ПАВ ведут к образованию стехиометрических или нестехио-метрических комплексов ПАВ-ПЭК. Катионный хито-зан способен в кислой среде связывать жирные кислоты (олеиновая, линолевая, стеариновая, пальмитиновая, линоленовая кислоты), в результате чего образуются нерастворимые ПАВ-ПЭК. Это обусловливает его применение в пищевых добавках [25], косметике [26], при очистке сточных вод различных дистилляционных производств [27], в фармацевтике для увеличения адсорбции пептидов при назальном администрировании [28] и т. д. Было показано, что образование осадка нерастворимых комплексов хитозан—додецилсульфат натрия (ДСН) начинается при концентрации ДСН > 10-4 М.
На рис. 1 показана фазовая диаграмма смесей полиэлектролит/ПАВ. Область образования осадков уменьшается при уменьшении молярной массы полимера или при увеличении ионной силы раствора. Растворимые комплексы образуются только при концентрациях полиэлектролитов ниже 10-4 моль/л, хотя в зависимости от
Нерастворимые ПАВ-ПЭК
10
-i
10
10-2
10-3
10
10
-6
10
10-7 -8
10
' I I I HIHI-1 I ищи-1 I ИЩИ-1 I I ПНИ-1 I ищи-1 1 I вин—1 I ищи-1 I II щи
-8 -7 -6 -5 -4 -3 -2 -1 ,
10 10 10 10 10 10 10 10 1
Концентрация ПАВ, моль/л
Рис. 1. Фазовая диаграмма смесей полиэлектролит/ПАВ:
1 - хитозан/додецилсульфат натрия [29]; 2 - карбоксиметилхи-тин/додецилсульфат натрия [30]. ККМ - критическая концентрация мицеллообразования; ККА - критическая концентрация агрегации; КС - критический состав
Водный раствор хитозана+фермента
Рис. 2. Получение микрокапсул путем эмульгирования и формирования комплекса хитозан/ДСН :
а — схема эмульгирования, Сх = 0,1 моно-моль/л)
б — готовые микрокапсулы (Сдсн =0,1 моль/л:
концентрации ПАВ в растворе появляются различные молекулярные структуры (растворимые агрегаты, стабилизированные адсорбцией полимера мицеллы). Использование фазовой диаграммы позволяет оптимизировать экспериментальные условия в соответствии с условиями применения материалов на основе ПАВ-полиэлектролитных комплексов.
Образование микрокапсул из нерастворимых комплексов ПАВ-хитозан
Полые микрокапсулы, в которых водный раствор биологически активного соединения окружен стенками из комплекса ПАВ-ПЭК (рис. 2), получают в соответствии с ранее описанным методом [31]. Готовят эмульсию
Гель ^„^ПАВ-ПЭК
Рис. 3. Образование капсул с водной фазой внутри при прикапывании водного раствора хитозана в водный раствор ДСН
водной фазы, содержащей хитозан и ферменты, в масляной фазе (декан). В результате образуются капли диаметром порядка 200 мкм, которые осаждают в фазе, содержащей ДСН; нерастворимый ПАВ-ПЭК образуется на границе раздела фаз, что приводит к формированию микрокапсул.
Аналогичные микрокапсулы меньшего размера могут образовываться самопроизвольно при «эмульгировании» водного раствора хитозана в водном растворе додецилсульфата натрия. Образование эмульсии типа «вода-в-воде» возможно при достаточно высокой концентрации полимера. При этом спонтанно образуются т. н. «полимерсомы», содержащие внутри водную фазу со стенками из нерастворимых ПАВ-ПЭК . Методом прикапывания водного раствора хитозана в водный раствор ДСН получают микрокапсулы размером порядка 1 мм, стенки которых состоят из ПАВ-ПЭК (рис. 3). Если раствор хитозана содержит активные соединения (например, ферменты), то при смешивании с раствором ДСН он образует электростатический комплекс на границе раздела фаз, толщина которого 5 растет с увеличением времени контакта; таким образом, образуется устойчивая капсула с активными соединениями внутри.
Капсулы образуются по механизму ионотропного гелеобразования в результате встречной фронтальной диффузии ПАВ и полиэлектролита через поверхность раздела жидких фаз (рис. 4а). Для образования стехио-метрических гелеобразных комплексов потоки ПАВ |дСН и хитозана _|Х должны быть одинаковыми, а концентрации должны быть достаточно высокими для образования сетки полимерного геля на границе раздела фаз. Раствор хитозана должен быть полуразбавленным, а концентрация додецилсульфата натрия превышать 0,05 М (ККМ ДСН 8-10-3 М). Установлено, что критическая концентрация агрегирования (ККА), отвечающая образованию ми-целлоподобных агрегатов молекул ПАВ в комплексах, в 10—100 раз меньше, чем ККМ ДСН, и что число агрегирования N молекул в мицелле ДСН выше, чем в агрегатах.
В начале образования геля на границе раздела фаз рост толщины стенок
пропорционален (рис. 4б), что соответствует механизму диффузионного формирования стенок [7, 9]. Используя
б
а
Рис. 4 . Формирование гелеобразного слоя:
а — схема образования сетчатой структуры; б — динамика изменения толщины 8 гелеобразного слоя; СдСН=0,1М; РДСН=50 мл; 1 — Сх=0,1 мономоль/л; Рх=10 мл; 2 — Сх=0,05 мономоль/л; Рх=10 мл; 3 - Сх =0,05 мономоль/л; Кх=20 мл.
простое соотношение 8(/)=д/2Б7, был рассчитан эффективный коэффициент диффузии Б компонентов (в данном случае, хитозана): Б ~10-13—10-12 м2-с-1.
Интересно отметить, что стенки капсул имеют наноструктуру (рис. 5а), что было выявлено с помощью малоуглового рентгеновского рассеяния (МРР) [9]. Характеристическим размером данной структуры ё = 3,8 нм можно считать среднее расстояние между агрегатами в геле (рис. 5б). Объемная доля твердой фазы в таких физических ПАВ-ПЭК гелях составляет ~ от 30 до 50% [17].
Оценка модуля эластичности Е плоских слоев геля, полученных в тех же условиях, что и микрокапсулы, была проведена методом Герца по измерению деформации Аг слоя толщиной 8 ~ 300 мкм в зависимости от сжимающей силы /р, прикладываемой к этому слою стеклянным шариком радиусом Я = 1 мм [18, 19]. Мо-
а
дуль упругости Е, рассчитанный по формуле Герца
/р = 4
составил 104—105 Па, что соответствует эластическим свойствам физического геля, объемная доля твердой фазы которого ~ 50%. Характерное время релаксации напряжений в геле под нагрузкой было порядка тг ~102 с, что позволяет оценить эффективную вязкость п геля по соотношению п = Ет ~ 106—107 Па-с.
Кроме того, возможно связать модуль эластичности этих гелей Е с их упорядоченной структурой, определяемой из малоуглового рентгеновского рассеяния (МРР). Объемную концентрацию узлов сетчатой структуры V (рис. 5б) можно в первом приближении вычислить из соотношения Е ~ vЯT, откуда V~4—40 моль/м3. Учитывая стехиометрию комплексов в геле, можно
б
Рис. 5. Рентгеновская дифракция на геле комплекса хитозан/додецилсульфат натрия:
а — часть рентгенограммы комплекса; б — сетчатая структура стенки капсулы с характеристическим параметром ё
100
£ 80
о S К
о «
о ю о я
л
га
60
40 .
20 -
20 40 60 80 100 120 I, мин
Рис. 6. Высвобождение ферментов, инкапсулированных в капсулы из комплексов ПАВ-хитозан:
Время формирования капсул 30 мин; 1 - трипсин, 1 М №01; 2 - трипсин, 0,2 М №01; 3 — уреаза, 0,2 М №01
оценить концентрацию ДСН в геле как ~500 моль/м3. Соответственно, агрегационное число ДСН в агрегатах, играющих роль центров сетчатой структуры, равно Ыщ= Сзсз/у = 50. Отсюда можно найти расстояние между узлами ё ~ (уЛА)ч/3 = 3,5—7,5 нм, что соответствует результатам, полученным из данных рентгеновской дифракции (рис. 5 а).
В результате проведенных исследований мы предложили метод получения капсул из комплексов ПАВ с производными хитина для пролонгированного высвобождения белков [15, 16]. Было показано, что ферменты (трипсин, уреаза) сохраняют активность в присутствии хитозана, в то время как в присутствии ДСН они денатурируют. При помощи гель-хроматографии было показано, что трипсин образует электростатический комплекс с хитозаном, что не влияет на его активность. Скорость высвобождения ферментов из микрокапсул зависит от молярной массы белка и его взаимодействия с хитозаном; в частности, уреаза - фермент с высокой молекулярной массой диффундирует гораздо медленнее, чем трипсин с меньшей молекулярной массой; рост концентрации соли во внешней среде сильно облегчает высвобождение в результате диссоциации электростатического комплекса трипсин - хитозан (рис.6). Скорость диффузии также зависит от толщины 5 стенки капсулы (рис. 7). Толщина 5 растет с увеличением времени контакта между растворами хитозана и ПАВ, что дает возможность регулировать скорость диффузии ферментов.
Инкапсуляция ферментов комплексами ПАВ-ПЭК может представлять интерес для регенерации тканей, где требуется медленное высвобождение фермента в течение нескольких дней [32]. Додецилсульфат натрия можно заменить на различные жирные кислоты или аминокислоты. Капсулы с уреазой могут найти применение в качестве гетерогенных биокатализаторов для создания искусственной почки.
10
100 Время, мин
1000
Рис. 7. Влияние времени формирования капсул на кинетику высвобождения ферментов:
1 — 10 мин; 2 — 30 мин; 3 — 60 мин
Дилатантная вязкоупругость слоев ПАВ-ПЭК
Вязкоупругие свойства тонких слоев ПАВ-ПЭК исследовались методом дилатантной реометрии [33, 34], основанным на использовании капельного тензиометра (Traker, IT concept, Франция) [35]. Капля или пузырь заданного объема V (порядка 5—10 мм3) формируется на конце капилляра (рис. 8). Поверхность капли (или пузыря) подвергают периодической синусоидальной деформации малой амплитуды, что позволяет непрерывно измерять поверхностное (или межфазное) натяжение у и комплексный двухмерный модуль эластичности E межфазного слоя при больших временах формирования адсорбционных слоев (более 50000 с для достижения квазиравновесного состояния). Данный метод был описан ранее [33, 34, 36].
Модули эластичности определяли в интервале частот ю= 0,01—0,63 рад-с1 по методу, описанному в работе [37]. Модули сохранения £'(ю) и потерь £"(ю) были рассчитаны на основе модели с двумя временами релаксации:
^ (ю/Юо2 )2
£'(ю) = Eo1 (^J
+ E
(\2 о2 / \
Ю/Юо! ) 1 + (ю/®о2 )
2
(1)
Рис. 8. Схема установки дилатантной реометрии в проточной кювете
0
E" («О- E,,-^
1 +(со/О
- + £„.
««o
1 + («/«o1 )2 02 1 + («/«o2 )2
(2)
где Юо,- и Б0,- (, = 1, 2) - соответственно, характеристические частоты и модули, определенные из экспериментальных данных при изменении частоты в интервале Ю = 0,01-0,63 рад-с-1. «Кроссинг-частота» Юс, соответствующая пересечению кривых Е'(ю) и Е"(ю), является границей двух областей: ю>юс, в которой межфазный слой обладает свойствами твердого тела (Е>Е"), и ю<юс, со свойствами жидкости.
Метод дилатантной реометрии в проточной кювете [22, 23] позволяет осуществлять непрерывную смену жидкости в измерительной ячейке (рис. 8). Например, начальный водный раствор компонента с амфифильны-ми свойствами (катионный ПЭ, хитозан А) образует адсорбционный слой на границе раздела фаз вода/воздух. По прошествии некоторого времени ^ раствор А заменяется чистым растворителем (буферным раствором 8), а затем раствором второго, противоположно заряженного компонента В (ПАВ или полиэлектролит), который при взаимодействии с уже сформированным межфазным слоем полимера А образует электростатический комплекс (ПАВ-ПЭК или ИПК) на межфазной границе. Этот процесс можно воспроизводить многократно и получать многослойную систему. Данная методика также позволяет изменять рН и ионную силу раствора и изучать влияние этих параметров на свойства межфазных слоев.
На рис. 9 приведен пример изменения поверхностного натяжения на границе раздела фаз жидкость/воздух и компонентов Е и Е" комплексного модуля эластичности в зависимости от времени формирования адсорбционного слоя. Во время первой фазы, соответствующей образованию адсорбционного слоя хитозана (концен-
60
50 40
Раствор хитозана
Буфер
К
£ 30
Ч 20
10
0 -10
Раствор ДНС
/ ■ У
р />
20000
60000
100000 140000 f c
180000
Рис. 9. Изменение во времени поверхностного натяжения у, действительной Е и мнимой Е" составляющих комплексного модуля эластичности адсорбционного слоя хитозана и комплекса хитозан-ДСН:
25°С; ю=0,63 рад/с
трация 0,26 г/л), величина Б' непрерывно увеличивается до 40 мН/м при ^=70000 с, в то время как модуль Б'' достигает величины 10 мН/м (Б''<Б', что соответствует нашим последним результатам исследования комплексов полиэлектролитов и свойствам твердоподобного реологического тела в присутствии 0,1 М АсО№) [38]. Влияние частоты деформирования на модули в момент времени ^ представлено на рис. 10а. Кроссинг-частота юс имеет порядок 0,01 рад/с, времена релаксации ю01 = 0,8 рад/с и ю02 = 0,012 рад/с отвечают характеристическим модулям упругости Б01 = 9 мН/м и Б02 = 37 мН/м.
На втором этапе раствор хитозана замещают на ацетатный буферный раствор, затем в момент времени t =
o1
60
S
Щ 50
Éq 40 30
! 20 о
2 10
0
а Е
• И
Í' □ *
,.-" f ■ JL— Е И
0,01
1
40
bí
s
ч
30
20
10
Частота, ю, [рад/c]
0,1
Частота, со, [рад/с]
Рис. 10. Частотные зависимости модулей Е (ю) (□) и Е' (ю) (■) адсорбционных слоев хитозана:
Метод реометрии в проточной кювете; Сх = 0,26 г/л; [АсОН] = 0,3 М; САсШа = 0,1 М; СдСН = 10-4 моль/л. ю01=0.8 рад/с; Е01= 9мН/м; а — чистый хитозан, ю02=0,012 рад/с; Е02= 37мН/м; tf = 70.000 с; б — после добавления додецилсульфата натрия, ю02=0,001 рад/с; Е02= 28 мН/м; tf = 160.000 с. Точки — экспериментальные данные; пунктир — расчет по уравнениям (1) и (2).
0
90000 с вводят раствор додецилсульфата натрия. Образование электростатического комплекса ведет к уменьшению поверхностного натяжения и модуля E , в то время как величина модуля E" не изменяется. Межфазный гель становится более твердым, а кроссинг-частота 0)c (ff)c ~ 103 рад/с) и E01 (10 мН/м) сильно уменьшаются, в то время как величина E02 остается на уровне 28 мН/м. Данный метод успешно применялся в наших работах по исследованию полиэлектролитных комплексов хито-зан/сульфат хитозана [22, 23, 39].
Заключение
Настоящий обзор представляет результаты изучения формирования и свойств гелеобразных электростатических комплексов между противоположно заряженными полиэлектролитами и ПАВ. В данной работе рассматриваются примеры межфазных слоев (пленок), образованных производными хитина и ПАВ (ПАВ-ПЭК). Показано, что эти пленки имеют упорядоченную наноструктуру, в которой мицеллярные агрегаты, играют роль центров сетки физического геля.
Новый метод получения капсул с водным ядром позволяет осуществлять инкапсулирование ферментов без их денатурации. Исследована кинетика высвобождения ферментов и показано, что скорость диффузии зависит от их молярной массы, способности к комплек-сообразованию и ионной силы раствора. Предложены возможные области использования инкапсулирования ферментов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Bungenberg de Jong H.G., Kruyt H.R. Proc. Koninkl. Med. Akad. Wetershap, 1929, v. 32, p. 849—856.
2. Bungenberg de Jong H.G. In: Colloid Science. Amsterdam: Elsevier Publishing Company, 1949, v. 12, ch. 3, p. 232—258.
3. Babak V.G. Colloid Chemistry in Microencapsulation Technology. Sverdlovsk, Oural Univesity Press, 1991.
4. Kumar M., Behera A.K., Lockey R.F., Zhang J., Bhullar G., Cruz C.P.D.L., Chen L.-C., Leong K.W., Huang S.-K., Moha-patra S.S. Hum. Gene Ther., 2002, v. 13, p. 1415—1425.
5. Ercelen S., ZhangX., Duportail G., Grandfils C., Desbrieres J., Karaeva S., Tikhonov V., Mely Y., Babak V. Colloids & Surfaces B : Biointerfaces, 2006, v. 51, p. 140—148.
6. Donath E., Sukhorukov G.B., Caruso F., Davis S.A., Mohwald H. Angew. Chem. Int. Ed., 1998, v. 37, p. 2201—2205.
7. Babak V.G., Merkovich E.A., Desbrieres J., RinaudoM. Polym. Bull., 2000, v. 45, p. 77—81.
8. Babak V.G., Kildeeva N.R., Merkovich E.A., Desbrieres J., Rinaudo M. In: Euroforum «Biopolymers: Food and Cosmetic Aplications» (Polymerix 2000), Rennes, France 2000, p. 27— 38.
9. Babak V.G., Merkovich E.A., Galbraikh L.S., Shtykova E.V., Rinaudo M. Mendeleev Communs, 2000, v. 3, p. 94—95.
10. Babak V.G., Vikhoreva G.A., Anchipolovsky M.A. Mendeleev Communs, 1996, p. 73—75.
11. Babak V.G., Vikhoreva G.A., Lukina I.G. Colloids & Surfaces. A. Physicochemical and Engineering Aspects, 1997, v. 128, p. 75—89.
12. Babak V.G., Rinaudo M., Desbrieres J., Vikhoreva G.A., Michalski M.-C. Mendeleev Communs, 1997, v. 4, p. 149—151.
13. Rinaudo M., Auzely R., Vallin C., Mullagaliev I. Biomacro-molecules, 2005, v. 6, № 5, p. 2396—2407
14. Babak V.G., Lukina I.G., Vikhoreva G.A., Desbrieres J., Rinaudo M. Colloids & Surfaces A : Physicochem. and Eng. Asp., 1999, v. 147, p. 139—148.
15. Babak V.G., Kildeeva N.R., Merkovich E.A. In: 28th Int. Symp. on Controlled Release of Bioactive Materials, San Diego, California, USA, 2001.
16. Babak V.G., Kildeeva N.R., Merkovich E.A., Rinaudo M.. In: Chitin Enzymology 2001, Ed. R.A.A. Muzzarelli, Ated ed. Grottammare (Italy), 2001, p. 591—594.
17. Babak V.G. In: Chitin and chitosan. Production, Properties and Usage. Eds. K.G. Skryabin, V.P. Varlamov. Moscow: Nauka, 2003, p. 201—216.
18. Babak V.G.. In: Int. Symp. «Particles 2002». Medical/Biochemical Diagnostic, Pharmaceutical and Drug Delivery Applications of Particle Technology, Orlando, Florida, USA, 2002.
19. Babak V.G., Rinaudo M. Colloids & Surfaces B: Biointerfaces, 2007.
20. Lulevich V.V., Radtchenko I.L., Sukhorukov G.B., Vinogradova O.I. J. Phys. Chem. B, 2003, v. 107, p. 2735—2740.
21. Lulevich V.V., Vinogradova O.I. Langmuir, 2004, v. 20, p. 2874—2878.
22. Babak V.G., Auzely R., Rinaudo M., Khokhlov A.R. Mendeleev Communs, 2005, v. 15, p. 239-241.
23. Babak V., Auzely R., Khokhlov A., Rinaudo M. In: 4th World Congr. on Emulsions, Lyon, France, 2006, p. 193.
24. Desbrieres J., Rinaudo M., Babak V., Vikhoreva G. Polymer Bull., 1997, v. 39, p. 209—215.
25. Muzzarelli R.A.A. Carbohydrate Polymers, 1996, v. 29, p. 309—316.
26. Baschong W., Huglin D., Maier T., Kulik E. SOFW-journal, 1999, v. 125, p. 22—24.
27. Lalov I.G., Guerginov I.I., Krysteva M.A., Fartsov K. Water Res., 2000, v. 34, p. 1503—1506.
28. Tengamnuay P., Sahamethapata A., Sailasutab A., Mitrac A.K. Int. J. Pharmaceutics, 2000, v. 197, p. 53—67.
29. Vikhoreva G.A., Babak V.G., Galich E.F., Galbraikh L.S. Polymer Sci. Ser. A, 1997, v. 39, p. 617—622.
30. Vikhoreva G.A., Babak V.G., Lukina I.G., Galbraikh L.S. Ibid., 1998, v. 40, p. 201—205.
31. Merkovich E.A.. In: Moscow state textil university, 2001, p. 210.
32. Kildeeva N.R., Babak V.G., Vikhoreva G.A. Bull. of Moscow state university, Ser.2 Chemistry, 2001, v. 41, p. 423—425.
33. Babak V.G., Desbrieres J. Mendeleev Communs, 2005, v. 1, p. 35—38.
34. Babak V., Desbrieres J. Colloid and Polym. Sci., 2006, v. 284, p. 745—754.
35. Saulnier P., Boury F., Malzert A., Heurtault B., Ivanova T., Cagna A., Panaiotov I., Proust J.E. Langmuir, 2001, v. 17, p. 8104—8111.
36. Babak V.G., Boury F. Colloids and Surfaces A : Physicochem. and Eng.Asp., 2004, v. 243, p. 33—42.
37. Babak V.G., Desbrieres J., Tikhonov V.E. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Eng. Asp., 2005, v. 255, p. 119—130.
38. Babak V.G., Auzely R., Rinaudo M. J. Phys. Chem. B, 2007, (in press).
39. Babak V.G., Auzely R., Khokhlov A.R., Rinaudo M. Biomacro-molecules, 2008, (in press).
