CC BY
47
УДК 619:616.995.132.6-092 ПАТОГЕНЕЗ ПРИ ТРИХИНЕЛЛЁЗЕ СВИНЕЙ, ВЫЗВАННОМ TRICHI-NELLA PSEUDOSPIRALIS, GARKAVI, 1972, ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЗАРАЖЕНИИ
А.Я. САПУНОВ доктор ветеринарных наук А.А. ИВАЩЕНКО, А.А. ПШЕНИЧНЫЙ кандидаты ветеринарных наук
Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт
Резюме
Изучено влияние экспериментального заражения pseudospiralis на организм свиней. У поросят, зараженных ^ pseudospiralis в дозе 2 личинки на г массы тела, снижалось количество эритроцитов и гемоглобина, альфа-глобулинов, Т-лимфоцитов, наблюдалось угнетение клеточного иммунитета, повышалось количество эозинофилов, нейтрофилов и общего белка.
Введение
Ареал распространения Trichinella pseudospiralis, Garkavi, 1972, впервые выделенного от енота-полоскуна (Pro-cyon lotor) на территории Дагестана и детально описанного Гаркави, довольно обширен. Так, к настоящему времени этот гельминт зарегистрирован у восьми видов млекопитающих животных, в том числе, и у человека, а чаще у хищных видов птиц на территории 7 стран четырёх континентов с экстен-синвазированностью от 1,1% домашних свиней в очагах трихинеллёзной инвазии северо-западного региона Кавказа и до 25-30%-ной экстенсивности заражения сов (Tuto novaechollan-diae) и луня болотного (Circus aerogi-nosus) с острова Тасмания (Австралия) (1-5). Трихинеллёз, вызванный T. pseudospiralis, в практическом плане ставит перед ветеринарно-санитарной службой совершенно новые задачи, связанные с необходимостью изучения патогенеза, разработкой новых
методов и средств диагностики, профилактики и организации мер борьбы. Широко используемый ранее комплекс противотрихинеллёзных мероприятий недостаточно эффективен и должен в обязательном порядке включать домашних, диких и синантроп-ных птиц.
Поэтому знание особенностей патогенеза при экспериментальном трихинеллёзе свиней, вызванном бескап-сульными трихинеллами, в определённой степени, позволило бы понять характер и глубину, раскрыть стадийность происходящих морфофункциональных изменений в органах, тканях и организме в целом; сущность и динамику адаптационно-компенсаторных процессов при трихинеллёзе, вызванном ^ pseudospiraПs.
Материалы и методы
Экспериментальные исследования проводили на предварительно дегель-минтизированных против круглых
гельминтов 8 поросятах крупной белой породы 3-месячного возраста живой массой 20 кг. Искусственное заражение животных проводили перорально 2-месячными личинками Т. pseudospiralis, ранее выделенными от спонтанно инвазированной домашней свиньи и прошедшими несколько пассажей на лабораторных животных. Доза заражения составляла 2 лич./г массы тела поросенка. Необходимое количество личинок получали путём переваривания тушек лабораторных животных в искусственном желудочном соке (6). В течение всего опыта (более 90 дней) поросята подопытной и контрольной групп содержались раздельно в закрытых деревянных станках необогреваемого кирпичного вивария, рацион кормления состоял из кормов растительного происхождения, что предотвращало возможность самопроизвольного заражения трихинеллами. Все подопытные и контрольные животные были пронумерованы индивидуальными ушными бирками.
С целью морфологических, биохимических и иммунологических исследований взятие крови у свиней осуществляли до и через 7, 12, 20, 30, 60 и 90 дней после заражения. Определение количества гемоглобина, эритроцитов, скорости оседания эритроцитов, лейкоцитов, лейкограммы, активности аспартат и аланинами-нотрансфераз, щелочной фосфотазы, уровня общего белка и его фракций проводили по общепринятым в гематологии и биохимии методам.
Для оценки иммунного статуса у свиней были исследованы следующие показатели: содержание Т-лимфоцитов,
ранних и поздних Е-розеткообразующих нейтрофильных гранулоцитов (Е-РОНР и
Е-РОНП) в крови методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана по Jondal (1972) в модификации Дзержинской (1982); реакция бактериального фагоцитоза нейтрофилов по методике Нестеровой (1996) на предметных стеклах с тест-культурой Staphylococcus aureus № 209; спонтанный и стимулированный NBT-тест (средний цитохимический индекс, процент фармазан-позитивных клеток и коэффициент мобилизации) также по методике Нестеровой (1996).
Результаты и обсуждение
У поросят контрольной группы концентрация гемоглобина в крови за весь период исследований колебалась в пределах 110,0±1,5-149,0±1,0 г/л, эритроцитов -4,2±0,2-4,8±0,2 млн./мкл, лейкоцитов 20;0±3,0-33,5±1,5 тыс./мкл, СОЭ - 2,0±0,54,0±0,9 мм/ч, процентное содержание эо-зинофилов - 1,5±0,5-5,0±1,0, палочкоядерных лейкоцитов - 1,5±0,5-3,5±1,3%, сегментоядерных - 24,1±8,0-31,5±7,5%, лимфоцитов - 49,0±6,0-60,0±4,0%, моноцитов - 3,0±1,0-4,5±0,5%, общего белка -6,20±0,20-7,25±0,05%, альбуминов -26,50±6,50-41,45±5,05%, альфа-глобулинов - 15,0±2,20-26,0±1,0%, бета-глобулинов - 14,8±0,10-22,60±1,30%, гамма-глобулинов - 21,75±1,35-31,50±0,50%, активность АсАТ - 0,47±0,11-0,66±0,06
ммоль/л, АлАТ - 0,41±0,07-0,48±0,12 ммоль/л, щелочной фосфатазы -2,35±0,21-2,57±0,43 ед./л, уровень Т-лимфоцитов - 26,5±0,5-45,5±7,5%, Т-лимфоцитарный индекс (ТЛИ) (Т-л/общие лимфоциты) - 38-87, количество нейтрофильных гранулоцитов, их рецепторный аппарат (ранние и поздние Е-розеткообразующие НГ) - Е-РОНР -33,0±1,0-72,5±13,5%, Е-РОНП - 37,0±0,969,5±9,5%, количество активно фагоцитирующих клеток - ФАН - 11,0±1,033,5±5,5%, микробицидные кислородзави-
симые системы нейтрофильных грануло-цитов (НГ) - по показателям спонтанного и стимулированного ИВТ-тест (средний цитохимический индекс спонтанный и стимулированный) - СЦИп -0,015±0,005-0,060±0,020, СЦИг
0,015±0,005-0,080±0,040, процент фарма-занпозитивных клеток (спонтанный и стимулированный) - ФРКСп -1,00±0,00-1,50±0,50, ФПКСТ -
1,00±0,00-1,50±0,50, - коэффициент мобилизации - КМ (ФПКст/ФПКсп) -0,75±0,25-1,50±0,50.
У поросят подопытной группы содержание эритроцитов на 7, 12, 20, 30 ,60 и 90-й дни после заражения составляло, соответственно, 4,5±0,1; 4,2±0,1; 4,2±0,1; 4,2±0,2; 4,1±0,1 и 4,1±0,2млн./мкл, гемоглобина -124,7±2,6; 118,6±1,3; 122,3±7,2;
117,0±9,6; 122,0±8,0 и 110,0±2,5г/л; СОЭ - 4,7±2,6; 5,0±2,1; 6,0±2,1; 2,7±0,3; 3,0±0,9 и 3,0±0,8мм/ч; лейкоцитов - 25,2±1,6; 24,8±2,6; 26,5±2,3; 27,8±3,4; 21,3±2,6; 15,8±0,6 тыс./мкл; эозинофилов - 8,3±1,2; 7,7±1,8;
9,3±1,2; 3,3±0,9; 1,0±0,3 и 4,0±0,9%; нейтрофилов палочкоядерных -2,3±0,3; 2,3±0,7; 4,0±1,0; 3,3±0,9;
1,0±0,2 и 1,0±0,2%; сегментоядерных - 59,7±5,0; 56,7±3,5; 22,7±3,7;
48,7±4,3; 37,0±2,0; 45,0±4,1%; лимфоцитов - 27,0±6,5; 42,3±5,9; 62,3±2,2; 31,0±3,6; 55,5±0,5 и 28,0±6,6%; моноцитов - 2,7±0,3; 4,7±0,6; 2,3±0,3; 3,7±0,3; 3,5±0,5 и 5,0±0,7%.
При этом биохимические показатели, представленные динамикой некоторых компонентов сыворотки крови, колебались следующим образом: уровень общего белка - 6,50±0,40; 6,60±0,30; 6,30±0,20; 6,20±0,10;
6,80±0,10; 7,20±0,1%; АсАТ -
0,9±0,01; 0,59±0,05; 0,88±0,15;
0,75±0,04; 0,79±0,01 и 0,64±0,04
ммоль/л; АлАТ - 0,41±0,02; 0,46±0,03; 0,64±0,10; 0,96±0,25; 1,30±0,02 и
0,81±0,12 ммоль/л; щелочной фосфо-тазы - 2,19±0,18; 1,62±0,15; 1,80±0,50; 1,49±0,29; 2,16±0,06 и 1,47±0,26 ед./л.
Содержание белковых фракций составило - альбуминов - 39,40±0,90; 40,50±2,80; 32,30±2,40; 36,10±2,0;
39,3±0,80; 45,70±3,30%; альфа-
глобулинов - 34,80±5,70; 24,90±4,80; 23,30±2,90; 20,80±1,20; 17,0±6,70 и 19,70±1,10%; бета-глобулинов -14,40±4,10; 16,20±3,00; 17,70±0,60;
19,30±1,20; 19,80±1,80 и 12,8±3,70%; гамма-глобулинов - 19,10±4,50;
18,30±4,40; 26,70±3,20; 23,20±0,40;
23,20±0,40; 18,85±1,65 и 21,80±0,30%; Т-лимфоцитов - 37,0±2,5; 56,7±8,9; 24,7±1,2; 36,7±0,8; 34,5±7,5 и
55,0±7,8%; ТЛИ - 137, 134, 39, 118, 62 и 196.
Кроме того, в сыворотке крови у животных данной подопытной группы изменялось количество нейтрофиль-ных гранулоцитов (ранние и поздние Е-розеткообразующие НГ) - Е-РОНр и Е-РОНп, соответственно, 27,0±1,7 и 32,7±0,8; 58,3±8,4 и 40,0±6,1; 34,0±3,0 и 39,7±3,5; 38,7±1,3 и 40,0±0,6;
47,0±1,3 и 42,5±13,5; 62,0±7,4 и
65,0±8,6%; активно фагоцитирующих клеток (ФАН) - 19,7±5,5; 12,7±0,9; 24,7±1,2; 20,3±2,6; 22,5±3,5 и
23,0±3,2%; величина среднего цитохимического индекса (спонтанного и стимулированного) - СЦИсп и СЦИст -0,046±0,012 и 0,040±0,015; 0,040±0,015 и 0,40±0,028; 0,070±0,025 и
0,060±0,020; 0,040±0,010 и
0,056±0,020; 0,030±0,010 и
0,030±0,010; 0,020±0,005 и
0,030±0,010; процент фармазанпози-тивных клеток (спонтанного и стимулированного NBT-тестов) - 1,30±0,33 и 1,60±0,34; 1,33±0,33 и 1,33±0,33;
1,0±0,00 и 1,33±0,33; 1,66±0,33;
1,60±0,60; 1,00±0,00 и 1,00±0,00;
1,00±0,00 и 1,00±0,00 (Р<0,05); коэффициент мобилизации 1,30±0,03;
1,16±0,44; 1,33±0,33; 1,00±0,28;
1,00±0,00; 1,00±0,00.
Анализ проведённых исследований показал, что при трихинеллёзной инвазии, вызванной бескапсульными видами трихинелл (свиной штамм), у поросят наблюдается колебание некоторых гематологических показателей. Количество эритроцитов и концентрация гемоглобина у подопытных животных находились в пределах физиологической нормы, однако, в сравнении с животными контрольной группы отмечалось некоторое снижение количества эритроцитов и гемоглобина. Регистрировали повышение на 25-88% скорости оседания эритроцитов. На фоне общего снижения числа лейкоцитов, лимфоцитов и гамма-глобулинов (в течение первых дней инвазии), увеличивалось количество эозинофилов, сегментоядерных ней-трофилов и содержания общего белка на 54-86% к 20-му дню инвазии; снижение содержания альфа-глобулинов после резкого его повышения к 7 дню заражения.
Активность аланинаминотранс-феразы снижалась через 7 дней после инвазирования с последующим повышением с 12-го дня инвазии. Коэффициент Де Ретиса почти на протяжении всего периода исследований оставался меньше 1 . Со стороны иммунной системы, являющейся одной из самых чувствительных мишеней при воздействии на организм различных факторов антигенной природы, у экспериментально инвазированных бескап-сульными трихинеллами поросят наблюдались существенные изменения
состояния Т- и В-звеньев иммунитета, заключающиеся в снижении числа популяции Т-лимфоцитов и в угнетении В-клеточного звена иммунитета у ин-вазированных животных по сравнению с интактными, а также повышении уровня функциональной активности системы нейтрофильных гранулоцитов, проявившейся, преимущественно, ростом числа эозинофилов в течение первого месяца после экспериментального заражения. Одновременно с количественным приростом нейтрофильных гранулоцитов и активацией их рецепторной функции, отмечалось существенное увеличение количества активнофагоцитирующих НГ, наиболее выраженное в период с 7 по 20-й дни инвазии. Следует также отметить, что при этом повышаются цитотоксические и киллерные свойства НГ, о чём свидетельствуют показатели спонтанного и стимулированного МБТ-теста.
Активизацию комплекса НГ, по-видимому, следует рассматривать как один из компонентов адаптационнокомпенсаторной системы организма животного, обеспечивающей защиту от паразитарной инвазии и обязательных условий успешной реализации специфических Т- и В-клеточных иммунных реакций.
Следовательно, результаты проведённых исследований свидетельствуют о супрессированном влиянии на организм свиней трихинеллёзной инвазии, вызванной «свиным» штаммом Т. pseudospiralis, по времени совпадающим с периодом миграции личинок этих гельминтов, и что, по видимому, является необходимым условием для их сохранения и выживания в организме хозяина.
Литература
1. Владимирова П.А. // Ветеринария . - 1965. - № 10. - С. 95-96.
2. Гаркави Б.Л. // Ветеринария. -1972. - № 10. - С. 99-100.
3. Пшеничный А.А Эпизоотоло-гические и клинико-патогенетические аспекты трихинеллёза птиц: Автореф. дис. ... канд. вет. наук. - Ставрополь,
2004. - 24 с.
4. Сапунов А.Я., Митникова О.А., Сапунов В.А. // Матер. междунар. на-уч.-практ. конф. «Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с болезнями сельскохозяйственных животных», посвящ. 70-летию Ставропольской НИВС. - Ставрополь, 1999. - С. 225-227.
5. Сапунов А.Я, Пшеничный А.А, Иващенко А.А. и др. // Ветеринария. -
2005. - № 7. - С. 28-31.
6. Obendorf D.Z. // J. Helminthol. Soc. Wash. - 1993. - V. 60.
Pathogenesis at experimental trichinel-losis at pigs caused by Trichinella pseudospiralis, Garkavi, 1972
A.J. Sapunov,
A.A. Ivashchenko, A.A. Pshenitchny
Summary
Influence of experimental infection by Trichinella pseudospiralis on organism of pigs is investigated. The quantity of erythrocytes and hemoglobin, alpha-globulines, T-lymphocytes was reduced, supression of cellular immunity was observed, the quantity of oesinophils, neutrophils and general protein raised in pigs infected by T. pseudospiralis in a doze of 2 larva on gramme of body weight.
