CC BY
50
УДК 635.1/.8:579.869.1
ОВОЩНЫЕ РАСТЕНИЯ КАК ВОЗМОЖНЫЕ РЕЗЕРВУАРЫ ЛИСТЕРИЙ
Г.В. ГОДОВА, В.И. ПУШКАРЕВА*, Е.А. КАЛАШНИКОВА,
Е.Ю. БОРИСОВА, С.А. ЕРМОЛАЕВА*, В.Ю. ЛИТВИН*
(Кафедра микробиологии)
Увеличение случаев листериозных вспышек, связанных с употреблением контаминированных пищевых продуктов, в т.ч. растительных, дает основание предполагать, что овощные растения могут быть возможными резервуарами патогенных листерий. С помощью методов световой и электронной микроскопии обнаружены некоторые ультраструктурные особенности проникновения L. monocytogenes в клетки каллусной культуры моркови с проявлением цитотоксического эффекта.
Ключевые слова: патогенные бактерии, сапронозы, листериоз, овощные растения , клетки каллусных тканей, световая микроскопия, электронная микро-скопи
Грамположительные неспорооб-
разующие бактерии рода листерий включают патогенные для человека и животных Listeria monocytogenes; только для животных — L. ivanovii и 4 вида непатогенных, в числе которых L. innocua. Для листерий характерна убиквитарность: они распространены в различных почвах, богатых гумусом, соленых и пресных водоемах, сточных водах; регуля рно выделя ются из гидробионтов, от домашних и диких животных — овец, крупного рогатого скота, свиней, собак, кошек, грызунов и даже из растительных субстратов (силос, сено и т.п.). Существование листерий в широком диапазоне абиотических факторов, многообразные свя зи с большим кругом низших и высших эукариот свидетельствует о высокой экологической пластичности этих бактерий. Поскольку основным природным резервуаром листерий, как и других
возбудителей сапронозов, служат почвы и водоемы [9, 10], межпопуля -ционные взаимоотношения в их биоценозах наиболее значимы для циркуля ции и резервации данных микроорганизмов.
Несмотря на незначительный
удельный вес листериоза в инфекционной патологии: от нескольких де-ся тков до 2000 случаев в год по зарубежным данным [19, 22], в последнее дес тилетие проблема листериоза приобрела социально-экономическую значимость, так как помимо профессиональных рисков работников сельского хозяйства, боен, лиц, контактирующих с грызунами, отмечены крупные вспышки, свя занные с употреблением в пищу сыров, молочных и мя сных продуктов, «даров моря», а также салатов. Продукты, подозрительные на контаминацию листери -ми, должны изыматься из торговли целыми партия ми, что наносит эко-
и микробиологии имени
* Научно-исследовательский институт эпидемиологии Н.Ф. Гамалеи РАМН.
номический ущерб пищевой промышленности [5, 7].
Следует отметить, что заболеванию подвержены иммунокомпроме-тированные лица (онкологические и хронические соматотропные больные, старики, дети, беременные женщины и др.).
Длительный инкубационный период (до 70 дней), высокая летальность (22-44%), вертикальная передача от матери к плоду, а также внутрибольничные вспышки среди новорожденньга свидетельствуют о затруднительности этиологической расшифровки листериоза. Однако современные методы идентификации возбудителя, а также серо- и фаго-типирование бактерий, выделенны. из пищевы. продуктов и от больны., доказывают пищевой путь передачи листерий из общего источника.
Важной особенностью листерий вл етс и. пси.рофильность (размножение при температура. .оло-дильников), а также устойчивость к замораживанию, высушиванию, воздействию токов высокой частоты (микроволновые печи). Это лишь подтверждает общность свойств листерий с другими возбудител ми сапронозов-иерсиниозов, кампилобактериоза, рожи свиней и т.д. [10, 18, 21].
Следует отметить способность к внутриклеточной локализации ли-стерий в гепатоцита., селезеночны. макрофага., где они не полностью утилизируютс и распростран ютс с током крови по всему организму [23].
В природны. биоценоза. листерии активно поглощаютс простейшими, где также основным местом локализации я вля ются фагосомы — пищеварительные вакуоли. Внутриклеточные событи и здесь заканчиваютс незавершенным фагоцитозом, сопровож-дающимс гибелью клетки-.оз и-на [13].
Постановка вопроса о патогенны. бактери ., общи. дл млекопитаю-щи. и растений, имеет основания,
учитыва растущую роль овощных культур в заболеваемости иерсинио-зом, листериозом, эрвиниозом и другими инфекция ми, как и признанное значение кормов в инфицировании с.-х. животных [1, 6, 8, 10].
В опытах по изучению циркуля -ции иерсиний в агроценозах доказана, в т.ч. и экспериментальным путем, роль капусты, а также силоса, приготовленного из трав, произрастающих на полях орошения, как фактора передачи кишечных иерси-ний животным [3].
В наших работах по заражению кишечными иерсини ми проростков капусты, патогенными сальмонеллами — проростков салата и редиса, выращенных в почве, показано присутствие возбудителей в растени х на протя жении 21 и более сут [2, 16]. Опыт по скармливанию побегов капусты и салата, зараженных У. рБеи^-1иЪегси1ов1в, зеленоядным грызунам — полевкам — доказал наличие возбудителя в кишечнике (выделение с фекалия ми), а также поя вление антител в крови животных через 14 сут после кормления . Мы предположили, что существует принципиальна возможность передачи возбудителя алиментарным путем, а циркуля ция иер-синий по цепочке почва - растение -животное вполне реальна в природных экологических системах [10].
Детально расшифрованы (на по-пул ционном и ультраструктурном уровн х) взаимодействи псевдоту-
беркулезного микроба с растени ми (женьшенем, воробейником и капустой); доказано длительное существование бактерий в растени х (до 60 сут в капусте белокочанной) и фитопатогенное воздействие иерсиний на растительные клетки [11]. Можно предположить, что растения, как и другие хозя ева иерсиний в природе, способствуют циркуля ции возбу-дител и передаче его по пищевым цеп м из почвенных в наземные биоценозы.
По данным [24], листерии обнаружены в 21-44% проб растительности с полей, лесов и лугов, а немногочисленные отечественные данные свидетельствуют об изол ции листерий из растений различных биотопов в 8,6-24% проб, причем многие изоля -ты были патогенными дл мышей [1]. Экспериментально установлено размножение листерий в нестерильных растительных субстратах (корн х и наземных част х) и существование на протяжении многих лет, а также увеличение концентрации в силосе, что доказывает первичность почвы как резервуара листерий, откуда они могут проникать в растени и далее передаваться с кормами животным или с овощами человеку [1].
По данным [12], L. monocytogenes проникали в вегетативные органы пшеницы, выращенной в стерильной почве, через корневую систему, колонизировали их и сохран лись в высокой концентрации (107 КОЕ/г) на протяжении меся ца, вплоть до высы-хани растений. Однако конкретные механизмы, обеспечивающие возможность существования в растени-х, остаютс неизвестными.
Цель данной работы — изучение взаимодействи патогенных дл человека и животных Listeria monocytogenes и непатогенных L. innocua с растительными клетками на клеточном и ультраструктурном уровн х.
Материалы и методы
В экспериментах использованы: вирулентный штамм L. monocytogenes EGDe и непатогенные L. innocua (получены от J.A. Vazguez-Boland, Univ. Bristol). Листерии культивировали на жидкой и плотной среде BHI (Difco), а при высевах из каллусов — на селективной среде Palkam (Hi-media) при температуре 30°С в течение 1-3 сут.
Идентификацию и биохимические свойства изол тов листерий из растительных тканей оценивали на тест-
системах API-Listeria (Bio — Merieux); при сомнительных результатах посевов — с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), с парой родоспецифических, праймеров prsl — prs2, направля ющих амплификацию фрагмента гена prs, кодирующего белок фосфорибозилпирофосфатсинтазу, необходимый в общем метаболизме бактериальной клетки, не связанный с патогенностью. Нуклеотидные последовательности Prsl: gca ttg cgt gaa gct ggc gca ac; Prs2: cag aag cat ttt cat gaa c. Продукт длиной 220 н.п. получа-етс в ПЦР со всеми Listeria spp.
Каллусные ткани могут служить модельным объектом для детального изучени миграции патогенных бактерий в растения, так как эксперименты провод тс в контролируемых стерильных услови х при исключении внешних воздействий.
Каллусы моркови (Daucus carota) сорта Лосиноостровская -13 выращивали на среде Мурасиге — Скуга [4] в чашках Петри при влажности воздуха 70%, освещенности 5000 лк в течение 30 сут. Масса посадочного инокулюма растительных клеток со-ставл ла 0,25 г.
Бактериальную суспензию с помощью шприца вводили в агар под каждый каллус в дозе 107 м.к/мл. В качестве контроля оставляли каллусы, под которые вводили по 1,0 мл изотонического раствора NaCl.
Бактериологические исследовани
проводили в динамике (через 1-3-5 7 сут после заражения клеточных культур) путем высева суспензии из гомогенизированных в изотоническом растворе хлористого натри каллусов на селективную среду дл количественного учета листерий по КОЕ. Перед измельчением каждый каллус отмывали гентамицином (100 мкг/г) для элиминации наружных контаминантов с последующим отмыванием от антибиотика изотоническим раствором.
Микроскопические исследовани образцов проводили в проход щем
свете с помощью микроскопа Axio Imager Ml (Zeiss, Германия ) при максимальном увеличении Х2000. Микрофотоснимки сделаны цифровой камерой AxioCam MRm и обработаны с использованием программы AxioVision.
Электронно-микроскопические ис-следовани проводили стандартным методом: зараженные каллусы (кусочки диаметром 4 мм) через сутки фиксировали в 3% растворе глюта-рового альдегида в течение 2 ч при температуре 4°С, после чего дополнительно фиксировали 2 ч в 1%-м тетраоксиде осмия OsO4 (фиксаторы приготовлены на 0,1М фосфатном буфере). Обезвоживание образцов проводили в этиловом спирте в возрастающих концентрациях от 50 до 96%, затем в ацетоне, после чего заключали в эпонаралдитовую смолу. Тонкие и ультратонкие срезы делали на микротоме и дополнительно контрастировали в растворе уранил-ацетата [17] и цитрата свинца [20]. Готовые препараты просматривали с выборочной фоторегистрацией на трансмиссионном электронном микроскопе JEM -100B (Япония) при инструментальных уве-личени х от Х5000 до 30000.
Результаты и их обсуждение
Бактериологические исследования каллусов в первые сутки после заражения их листерия ми выя вили следующее: патогенные листерии (L. monocytogenes), также как и непатогенные (L. innocua) проникали в растительные ткани и их концентраци была практически одинаковой: 1,2х107К0Е/г и 5,4х107К0Е/г соответственно. Косвенным свидетельством колонизации в-ляется то, что смывы с поверхности образцов не содержали искомых бактерий, а лишь незначительное количество грибов-контаминантов (Peni-cillim sp. и Candida sp.). Каллусы не изменя ли цвета и выглядели как контрольные растени (под которые вносили изотонический раствор) (рис. 1а). Начиная с третьих суток, каллусы,
б
Рис. 1: а — стерильный каллус моркови; б — каллус моркови, зараженный бактериями Listeria monocytogenes
зараженные L. monocytogenes, останавливались в росте и желтели; при этом численность листерий оставалась высокой — 107 КОЕ/г (рис. 1б). Образцы, зараженные непатогенными листериями, сохраняли нормальный внешний вид, однако при посевах го-могената отмечена столь же высокая численность бактерий — 107 КОЕ/г. Через неделю каллусы, зараженные L. monocytogenes, представл ли собой мацерированные ткани, практически распавшиес ; посевы показали накопление листерий до 108 КОЕ/г. Напротив, каллусы, инфицированные непатогенными листериями, в эти сроки не испытывали видимого фи-
топатогенного воздействия. При этом сохранялась прежняя численность бактерий — 107 КОЕ/г. В более поздние сроки опыты не проводили, так как и опытные и контрольные каллусы погибли.
Попул ционна динамика патогенных и непатогенных листерий, взаимодействующих с каллусами моркови, показала, что микроорганизмы хорошо размножались в ассоциации с живыми клетками, однако при гибели каллусов, зараженных L. monocytogenes, их концентраци возрастала на порядок (до 108 КОЕ/г). Очевидно, бактерии использовали распавшиес ткани в качестве питательного субстрата.
Исследование культуральных,
морфологических и биохимических свойств изолятов листерий, полученных в ходе экспериментов, не вы вило изменени фенотипических свойств бактерий; лишь скорость роста культур замедл лась в сравнении с исходными на 10~16 ч при температуре 300С.
Микроскопия в проходящем свете и электронно-микроскопические исследования взаимодействия L. monocytogenes и L. innocua с клеточными культурами моркови
Взаимодействие листерий с каллусами моркови исследовали в динамике: через 18, 24 и 36 ч после заражения . В первые сутки морфология зараженных L. monocytogenes и контрольных клеток оставалась сходной. Клеточна культура была представлена морфологически гетерогенными клетками одинаковых размеров, с четко выраженной клеточной стенкой толщиной около 1 мкм. Большую часть клетки занимала цитоплазма, а в некоторых клетках были видны хлоропласты и ядро (рис. 2). В некоторых срезах отмечено проникновение листерий в межклеточное пространство без повреждения клеток-хозя ев (рис. 3). Интересно, что непатогенные L. innocua
б
Рис. 2. Каллусные клетки моркови: а — х5000, б — х2000
на этом этапе взаимодействия вели себя сходным образом: размножались в межклеточном пространстве, также не вызывая изменений клеток каллуса.
В более поздние сроки (ко вторым суткам) картина кардинально меня -лась. При взаимодействии с патогенными листери ми растительные клетки значительно увеличивались в размерах (рис. 4), при этом истончались клеточные стенки, которые образовывали значительное число вып чи-ваний, отмечено также и втягивание стенок внутрь клеток (рис. 5) . Вероятно, в этот срок активизировался процесс взаимодействия листерий с клетками за счет адгезии на их стенках, с последующим проникновением бакте-
Рис. 3. Listeria monocytogenes в межклеточном пространстве каллусной культуры моркови: 1 — клеточная стенка; 2 — каллусная клетка; 3 — Listeria monocytogenes;
4 — межклеточное пространство
Рис. 4. Электронная микрофотография увеличенной клетки каллуса моркови с бактериями L. monocytogenes внутри, х5000
Рис. 5. Изменение размеров и формы каллусных клеток при инфицировании их L. monocytogenes: 1 — клеточная стенка;
2 — каллусная клетка; 3 — цитоплазма,
4 — межклеточное пространство;
5 — Listeria monocytogenes
рий из межклеточного пространства путем разрушени их стенок и локализацией внутри вакуолей (рис. 6). Множество тонких срезов демонстрировали полное разрушение растительных клеток при значительном скоплении листерий. Интересно отметить, что отдельные клетки каллусов в от-
Рис. 6. Морфологические изменения клеток моркови под воздействием L. monocytogenes: 1 — отслоение цитоплазмы от клеточной стенки; 2 — Listeria monocytogenes в вакуоли
вет на действие бактерий формировали цитоплазму с электронно-плотным содержимым, по-видимому, за счет синтеза веществ липидной природы, а также формирования фенольных комплексов (рис. 7) в ответ на стресс, вызываемый L. monocytogenes.
- 4
5
Рис. 7. Деградированные каллусные клетки моркови под влиянием патогенных листерий (L. monocytogenes): 1 — клеточная стенка;
2 — каллусные клетки; 3 — запасные фенольные соединения; 4 — отслоение цитоплазмы от клеточной стенки;
5 — Listeria monocytogenes
Исследование взаимодействия непатогенных листерий с клетками каллуса не выя вило проникновения L. innocua за пределы клеточных стенок; бактерии локализовались вмежклеточ-ном пространстве, не оказывая цито-патогенного воздействия (рис. 8). Однако отмечаются небольшие отслое-ни цитоплазмы каллусных клеток в результате выделени в питательный субстрат определенных метаболитов L. innocua. Воздействие на клетки каллусных тканей стрессовых факторов (в виде клеток бактерий, токсинов, вирусов и др.) может приводить к изменению клеточного метаболизма.
Следует отметить, что ультраструктура как патогенных L. monocytogenes, так и непатогенных L. innocua
Рис. 8. Локализация L. innocua в межклеточном пространстве каллуса моркови, х2000
при взаимодействии с растительными клетками не изменялась по сравнению с исходной. Сохранялись основные клеточные структуры: клеточная стенка, характерная для грамполо-жительных бактерий, нуклеоид, цитоплазма и цитоплазматическая мембрана (рис. 9).
Рис. 9. Электронная микрофотография L. monocytogenes, х30000
2
1
3
Таким образом, популяционная динамика патогенных листерий, а также их взаимодействие с клетками каллуса моркови, исследованное методами микроскопии в проход -щем свете, а также трансмиссионной микроскопии, выявило цитопатоген-ное воздействие бактерий, не относя -щихся к паразитам растений, однако вызывающие тяжелые инфекции у человека и животных при алиментарном пути заражения. Напротив, L. innocua, не я вля ющиеся возбудителем болезней человека и животных, не оказывали также фитопатогенного воздействия на растительные клетки, хотя проникали в межклеточное пространство и сохран лись там в высокой концентрации.
Рост инфекционной патологии са-пронозной природы обусловлен способностью возбудителей к обитанию как в природных условиях (почвы и водоемы), так и в антропургических и техногенных очагах (свинокомплексы, фермы, овощехранилища, пруды орошения, погреба, сельскохозяйственные угодья и т.п.). Известны многочисленные вспышки заболеваний, св занные с употреблением продуктов питания, в т.ч. овощей (иерсиниоз, листериоз, эрвиниоз). Использование силоса, на основе трав, инфицированных иерсини ми или листери ми для откорма скота, приводит к заболевания м животных [1, 3]. Это привлекло внимание специалистов к растения м как возможным резервуарам возбудителей сапронозов и обусловило развитие нового направлени в микробной экологии [10].
Наиболее полно взаимоотноше-ни с растени ми охарактеризованы для Yersinia pseudotuberculosis и ря да культур: белокочанной капусты, женьшеня, кирказона, воробейника [11]. Установлена способность иерси-ний проникать в растительные клетки и размножаться в ассоциациях данных растений. Бактерии проникали, распространялись и размножались в
межклеточных пространствах культур, проникали через клеточную стенку в цитоплазму и, наконец, разрушали клетки.
В последние годы хорошо изучен патогенез листериозной инфекции, свя занный с наличием гена hly, кодирующего листериолизин, который воздействует на цитоплазматическую мембрану клеток как высших, так и низших эукариот (простейших) [14, 15]. Известно, что листериолизин я в-ляется важнейшим фактором патогенности листерий, активно влияющим на различные этапы взаимодей-стви возбудител с эукариотической клеткой.
В наших работах по взаимодействию L. monocytogenes с вегетирующими растения ми пшеницы [12] еще не было ответа на вопрос о локализации возбудителя, возможности фитопатогенного воздействи на растение и, тем более, об ультраструктурных механизмах проникновени бактерий в растительные ткани.
Данные эксперименты более полно раскрыли характер и результат воздействи патогенных листерий
на растительные клетки. В отношении непатогенных дл теплокровных L. innocua, геном которых полностью расшифрован и не вы влен ни один из факторов патогенности, можно предполагать, что они не оказывают вли ни на растительные клетки.
Особая группа микроорганизмов — возбудители сапронозов, к которым относятся L. monocytogenes, отлича-ютс полигостальностью (наличием
широкого круга хозя ев: от простейших до грызунов и других теплокровных), при этом у разных хозя ев они могут вызывать различные патологические процессы, что обозначается как полипатогенность.
Таким образом, установлено, что воздействие L. monocytogenes на растительные клетки происходило по сценарию адгези — инвази — колонизация, что является универсаль-
2. Выявлено цитотоксическое воздействие на растительные ткани патогенных для человека Listeria monocytogenes, но не относящихся к фитопатогенам;
3. Непатогенные бактерии Listeria innocua локализовались в межклеточном пространстве без проникновения внутрь клеток каллуса моркови.
Библиографический список
1. Гершун В.И. Экология листерий и пути их циркуляции в природном очаге // В сб. Экология возбудителей сапронозов. М., 1988. С. 80-85.
2. Годова Г.В., Туманова О.В. Персистенция сальмонелл в ризосфере и растениях. Доклады ТСХА, 2007. Вып. 279. Ч. 2. С. 187-190.
3. Гордейко В.А. Пути циркуляции и эпидемиологическое значение иерсиний в агроценозах // Канд. дисс. М., 1990.
4. Калашникова Е.А., Кочиева Е.З., Миронова О.Ю. Практикум по сельскохозяйственной биотехнологии. М.: Колос, 2006.
5. Карликанова Н.Р., Куваева И.Б. Листерии в молоке и молочных продуктах. Москва — Углич, 1999.
6. Колесникова В.В. Роль почвы в циркуляции возбудителя псевдотуберкулеза. XI Всесоюз. конф. по природной очаговости болезней. Тез. докл. М., 1984. С. 78-79.
7. Костенко Ю.Г., Шагова Т.С., Янковский К.С. Листерии — критерий безопасности мясных продуктов // Мясн. Индустрия, 1997. С. 23-24.
8. Кузнецов В.Г., Раковский В.И., Гребенщиков Л.А. и др. О роли овощей в эпидемиологии дальневосточной скарлатиноподобной лихорадки // Военномедицинский журнал, 1975. № 6. С. 49-52.
9. Литвин В.Ю., Пушкарева В.И. Факторы патогенности бактерий: функции в окружающей среде // ЖМЭИ, 1994. С. 83-87.
10. Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л., Пушкарева В.И. и др. Эпидемиологические аспекты экологии бактерий // М.: Фармарус-принт, 1998.
11. Персиянова Е.В. Характеристика взаимоотношений Yersinia pseudotuberculosis с растительными клетками. Автореф.
12. Пушкарева В.И., Литвин В.Ю., Троицкая В.В. Листерии в растениях: экспериментальное изучение колонизации, численности и изменчивости // ЖМЭИ, 1996. № 5. С. 10-12.
13. Пушкарева В.И. Патогенные бактерии в почвенных и водных сообществах. Докт. дисс. М., 1994.
14. Пушкарева В.И., Ермолаева С.А., Литвин В.Ю. Патогенные листерии и почвенные простейшие: сопряженность жизненных циклов // Успехи современной биологии, 2008. Т. 128. № 3. С. 245-251.
15. Тартаковский И.С., Малеев В.В., Ермолаева С.А. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторна диагностика. М.: Медицина дл всех, 2002.
16. Шустрова Н.М., Мисуренко Е.Н., Литвин В.Ю. О возможности передачи Yersinia pseudotuberculosis по цепочке почва — растение — животное // ЖМЭИ, 1992. № 4. С. 10-12.
17. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 1975.
18. Farber J.M., Sanders G.V., Johnston M.A. A survey of various foods for the presence of Listeria species, 1989 // J. Food prot. 52:456-458.
19. Farber J.M., Peterkin P.I. Listeria monocytogenes a food -borne pathogen // Microbiol., 1991. Rev. 55: 476-511.
ным дл патогенных бактерий при их взаимодействии с эукариотными клетками.
Выводы
1. Патогенные бактерии Listeria mo nocytogenes способны проникать в растительные клетки в условиях каллус-ной культуры.
20. Ly Thy M., Muller H.E. Interactions of Listeria monocytogenes, L.innocua and L.seeligeri with protozoans // J. Gen.and Appl. Microbiol., 1990. V. 36. N3. P. 143-150.
21. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as an electron opaque strain in electron microscopy // J. Cell. Biol., 1963. V. 17. No.1. P. 208-212.
22. Seeliger H.P.R. Listeriosen. Springer-Verlag KG. Berlin, 1958.
23. Slutsker L., Evans M.C., Schuchat A. Listeriosis. ASM Press, Washington, 2000. P. 83-106.
24. Vazquez-Boland J.A., Kuhn M., Berche P. Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants, 2001 // Clin. Microbial. Rev. 14: 584-640.
25. Weis J., Seeliger H.P.R. Incidence of Listeria monocytogenes in Nature, 1975. Appl. Microbiol. 21:516-519.
pe^H3eHm — K. c.-x. h. E.B. HbMbHeBa
SUMMARY
The increase in the number of listerious outbreaks connected with the use of contaminated food products including vegetables gives ground to suppose that vegetable crops can be possible reservoirs for pathogenic listeria. By the methods of light and electronic microscopy certain ultrastructural peculiarities of Listeria monocytogenes penetration into cells of carrot callus have been revealed, the cytotoxic effect having become apparent.
Key words: pathogenic bacteria, listeriosis, vegetables, callus tissue cells, light microscopy, electronic microscopy.
Годова Галина Владимировна — к. б. н., РГАУ - МСХА имени К.А. Тимиря -зева. Тел. 976-09-66.
Пушкарева Валентина Ивановна — д. б. н., НИИЭМ имени Н.Ф. Гамалеи.
Тел. 8-499-193-73-61.
Калашникова Елена Анатольевна — д. б. н., РГАУ - МСХА имени К.А. Тими-р зева.
Борисова Екатерина Юрьевна — РГАУ - МСХА имени К.А. Тимирязева.
Тел. 976-09-66.
Ермолаева Светлана Александровна — д. б. н., НИИЭМ имени Н.Ф. Гамалеи. Тел. 8-499-193-73-61.
Литвин Виктор Юрьевич — д. б. н., НИИЭМ имени Н.Ф. Гамалеи.
Тел. 8-499-193-73-61.
