CC BY
11Ученые записки Таврического национального университета им. В. И. Вернадского Серия «Биология» Том 16 (55) №3 (2003) 109-112.
УДК 577. 151А 152
ОЦЕНКА ВИТАМИННОЙ ОБЕСПЕЧЕННОСТИ ЧЕРНОМОРСКИХ МИДИЙ
Могла М. Г.
Метаболизм витаминов в организме беспозвоночных практически не исследован. Биохимические превращения витаминов в тканях связаны с механизмами их проникновения через биологические мембраны и удерживанием их метаболитов мембранными структурами [1], В связи с этим целью нашей работы было исследование содержания витаминов и их метаболитов в организме черноморских мидий, В качестве тест-ткани был избран гепатопанкреас как основной орган депонирования витаминов в организме мидий.
Материалы и методы
Исследования проводились следующим образом. В £ аквариумов с мидиями {МуШих galloprovinciaHs) вносили в эквимолярных количествах (4,6 мкМ/л воды) витамины: "Б-липоевую кислоту, "Э-тиамин, иС-никотиновую кислоту, !4С-пантотеновую кислоту и рибофлавин - по одному витамину в каждый аквариум. Через 6 часов мидий вынимали, при 0 - 4 °С извлекали гепатопанкреас и гомогенизировали с 9 объемами 0,25 М сахарозы. Отбирали аликвотную пробу для определения белка и разделяли весь оставшийся гомогенат на две равные части. Одну часть сразу центрифугировали при 20000 g в течение 10 минут. Надосадочную жидкость сливали, а осадок суспендировали в 0,25 М сахарозе. Общий объем суспензии был равен объему пробы, взятой для центрифугирования. Другую часть гомогената центрифугировали для выделения митохондрий [2; 3; 4; 5]. Промытый осадок митохондрий, полученных из 1 г ткани, суспендировали в 10 мл 0>25 М сахарозы и использовали для исследований.
Витамины Вр В3, РР и N изучали при помощи метода радиоизотопной индикации, содержание витамина В2 - по методу С. Юденфренда [6].
Результаты исследований
Как свидетельствуют результаты, приведенные в таблице 1, метаболиты витаминов В,, В2, В3, РР и N в процессе выделения митохондрий из
но
Могла М. Г*
гепатопанкреаса мидий поступают в среду выделения с разной интенсивностью. Производные витаминов В2, В, и N удерживаются биомембранами не только во время промывания митохондрий, но и при гомогенизировании тканей. Об этом свидетельствует отсутствие статистически достоверной разницы между количеством витаминов в гомогенате и в седиментированной фракции, полученной во время центрифугирования при 20000 g в течение 10 минут. Следует отметить, что содержание метаболитов исследованных витаминов в мембранных структурах клеток выше, чем в их растворимой фракций. Отсутствие достоверных отличий в количестве данных витаминов в митохондриях до и после промываний свидетельствует об эффективном удерживании рибофлавина, пантотената и липоата мембранами митохондрий. Содержание производных витамина В1 в мембранных структурах после кратковременной гомогенизации уменьшается, В процессе последующих промываний митохондрий эти потери еще больше возрастают. Так, после первого 10-минутного промывания в митохондриях гепатопанкреаса остается 57,6 % от общего количества тиамина, а после 20-минутного промывания -15,3 %. В опытах с никотиновой кислотой наблюдается та же закономерность. После указанных двух промываний количество этого витамина в митохондриях составляет 61,9 % и 28,6 % соответственно.
Установлена статистически достоверная разница между содержанием общих метаболитов никотиновой кислоты и^иамина в гомогенате и в седиментированной фракции. Однако данный факт нельзя считать доказательством того, что метаболиты витаминов выходят из мембранных структур во время гомогенизации. Возможно, за 6 часов, которые прошли после введения, данные витамины включались не только в осаждаемые нами структуры, но также и в белки цитоплазмы. Таким образом, полученные нами результаты свидетельствуют о том, что метаболиты тиамина и никотиновой кислоты менее эффективно удерживаются мембранными структурами, чем метаболиты витаминов Вг, и N.
Таблица I
Выход метаболитов витаминов В,, В2, Вг РР и N из митохондрий гепатопанкреаса мидий в процессе выделения
органелл (мкг/мг белка) (п=9)
Витамины, Статисти- Метаболиты витаминов в расчете на исходный витамин
внесенные в ческие
среду показатели Гомогенат Седименги- Митохондрии Митохондрии Митохощцлш
рованная после 10-мин. после 20-мин.
фракция промывания промывания
в, М±м 0,383±0,059 0,036 ± 0,028 0,085+0,017 0,049 ± 0,015 0,013+0,006
Р1 - < 0,001 - - ...
Рг - — — <0,05 <0,01
Вг М+м 0,025+0,009 0,028±0,008 0,033±0,008 0,037±0,010 0,034±0,011
Р» - >0,05 - - -
Р2 — — — >0,05 > 0,05
В3 М±м 0,19б± 0,052 0,189±0,049 0,189+0,049 0,177+0,063 0,171+0,050
- >0,05 - - -
Р* — - - >0,05 >0,05
РР М±м 0,101 ±0,018 0,095+0,014 0,042+0,006 0,026±0,002 0,012±0,004
Р5 - > 0,05 - - -
р2 - - < 0,05 <0,01
N М±м 0,565+0,061 0,586^0,065 0,592+0,043 0,571+0,065 0,521 ±0,070
Р> - >0,05 - - --
Р? - - - >0,05 >0,05
Примечания: р^ достоверность разницы средних относительно содержания метаболитов б гомогенате, р2 - достоверность отличий по сравнению с непромытыми митохондриями
П2
Могла М. Г.
Список литературы
1. Розанов А. Я. Значение биомембран в метаболизме и реализации действия некоторых функционально-связанных витаминов // Укр. биох. журнал . - 1970. - Т. 42. - №3. - С, 302.
2. Вержбинская Н. А., Шапиро А. 3. Тканевой окислительный обмен мидий и его сезонные изменения // Физиология и биохимия беспозвоночных. - Л.: Наукат 1968. - С. 233 - 243.
3. Коростслева Н. Л. Свойства митохондрий при различных условиях культивирования / / Биохимия митохондрий: Тезисы докладов. - М.: Наука, 1976. С. 20.
4. Шапиро А. 3. Исследование цитохромной системы в тканях мидий Я Журнал эвол. биох. и физиол. - 1967. - Т. 3. - №1. - С. 31-34.
5. Шапиро А. 3. Энергетический обмен в тканях а^стиячатожаберного моллюска МкПиз gallйprovincia!is // Автореф. ... канд. дис, - Ленинград. - 1969. - С. 43.
6. Юденфренд С. Флуоресцентный анализ в биологии и медицине. - М.: Мир, 1965.
Поступила в редакцию 03.04.2003 г.
