CC BY
47
ОЦЕНКА УРОВНЕЙ АНТИТЕЛ КЛАССА IgG К HELICOBACTER PYLORI ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ТЕЧЕНИЯ Нр-АССОЦИИРОВАННОЙ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ
И.В. Зверков, О.И. Иванова, Д.В. Володин, Е.В. Никушкин, В.М. Леонов, О.Н. Минушкин
УНМЦ УД Президента РФ
В качестве метода диагностики Нр-инфекции широко используют определение в крови титра антител к Н. pylori, в основном, класса IgG [2,3]. При этом полученные результаты у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки носят явно противоречивый характер [1,2]. Так, ряд авторов находят в крови высокие титры антител класса IgG к Н. pylori у Нр-позитивных больных и низкие титры - у Нр-негативных больных [1]. С другой стороны, эрадикационная терапия сопровождается исчезновением Н. pylori из слизистой оболочки желудка и одновременным повышением титра антител класса IgG к Н. pylori в крови у 90% больных [2].
Целью настоящей работы явилось исследование титров антител класса IgG к Н. pylori в крови и сравнение их со степенями Нр-обсеме-ненности в слизистой оболочке желудка для определения возможности использования серологического исследования в качестве диагностического теста.
Обследовано 86 больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки. Диагноз поставлен на основании жалоб, данных анамнеза и результатов эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС).
При ЭГДС у 56 пациентов проводили биопсию пилорического отдела желудка (по два кусочка ткани) для изучения степени обсемененности Н. pylori с помощью морфологической окраски по Гимзе без дифферен-цировки (один биоптат) и быстрого уреазного теста (другой). Из тела желудка брали по одному биоптату для исследования с помощью морфологической окраски по Гимзе без дифференцировки.
Быстрый уреазный тест (БУТ) оценивали по изменению окраски индикатора в течение 24 часов: если цвет индикатора изменялся до 1 часа, то степень обсемененности Н. pylori расценивалась как выраженная (+++), от 1 до 3 часов - как умеренная (++), от 3 до 24 часов - как слабая (+).
Для определения степеней обсемененности Н. pylori в слизистой желудка использовали методику, предложенную Л.И. Аруином (1994), при этом выделяли слабую степень Нр-обсемененности - до 20 микробов в поле зрения, умеренную степень - от 20 до 50 микробов и выраженную степень - 50 микробов и более в поле зрения. Применялся микроскоп фирмы «Ампливал» (Германия) при увеличении окуляра х400.
У 86 больных утром натощак брали венозную кровь, получали сыворотку, которую хранили в замороженном виде в пластиковых пробирках в холодильнике при темепературе -20°С. После накопления пластиковых пробирок с сывороткой крови в необходимом количестве, ее размораживали и проводили тест-систему фирмы «ЭкоЛАБ» (Россия) для
выявления антител класса IgG к Н. pylori методом прямого иммунофер-ментного анализа. С помощью спектрофотометра определяли оптическую плотность с ее последующим переводом по стандартной кривой в титры единиц.
Установлено наличие Н. pylori в слизистой желудка у 56 больных, при этом у 32 из них в разные сроки использовалась эрадикационная терапия (омепразол, кларитромицин и амоксициллин). После успешной эрадикации изучали в крови титры антител класса IgG к Н. pylori (у 27 больных прослежена динамика титра этих антител в течение 5-6 месяцев и у 5 - в течение 12 месяцев).
Эрадикационную терапию ранее не получали 54 больных (среди них у 24 пациентов изучали степени Нр-обсемененности слизистой желудка). Из этой группы 39 больных обследованы в стадии обострения и 15 - в стадии ремиссии. Полученные результаты представлены в таблице.
Уровни титров антител класса IgG к Н. pylori в крови у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки
Обследуемые больные Титры антител класса IgG к Н. pylori
M±m разброс
С обострением (п=39) 494,0±38,1 от 1073 до 143
С ремиссией(п=15) 431,2±43,0 от 867 до 109
Из таблицы видно, что уровни титров антител класса IgG к Н. pylori достоверно не различались между группами пациентов и не зависели от стадии болезни.
У 24 больных в гистологических препаратах слизистой желудка обнаружена разная степень Нр-обсемененности: отсутствие Н. pylori - у 2 больных, слабая степень (+) - у 13, умеренная (++) - у 4, выраженная степень (+++) - у 5 человек. Сравнение данных титра антител класса IgG к Н. pylori в крови со степенями обсемененности слизистой желудка позволило установить следующее. Обнаружена прямая корреляция уровня антител класса IgG к Н. pylori в крови и степенями обсемененности Н. pylori слизистой желудка (у 35% больных), при этом у пациентов с низкими титрами антител выявлена слабая степень обсемененности, а с высокими -выраженная степень. У 65% больных этой корреляции не было: высокие титры антител класса IgG к Н. pylori в крови выявлялись у больных со слабой степенью обсемененности слизистой желудка, низкий уровень этих антител в крови сочетался с выраженной степенью обсемененности Н. pylori. В этой группе у 2 больных с умеренно высоким титром антител класса IgG в крови (468 и 748 титров) в слизистой оболочке желудка Н. pylori не обнаружен.
Из 4 пациентов, у которых в крови тест на антитела класса IgG к Н. pylori был отрицательный, у 3 Н. pylori в желудке также не определялся; у одного из 4 пациентов степень обсемененности Н. pylori в теле и
пилорическом отделе желудка составила (+), то есть в среднем соответственно 6 и 8 микробов в поле зрения.
У 27 обследованных титры антител класса IgG к Н. pylori исходно составляли в среднем 602,4 ± 41,2, а через 5-6 мес. после эрадикацион-ной терапии они снизились до 197,6 ± 22,5.
Эффективность эрадикационного лечения (взятие образцов исходно и через 5-6 недель от начала курса лечения) достигнута у 26 из 27 больных (у одного больного исходная умеренная степень обсемененности Н. pylori слизистой желудка не изменилась). При этом уровни титров антител класса IgG к Н. pylori в крови через 5-6 месяцев сохранились у 23 больных (85%); у 9 из оставшихся (39%) титры антител были крайне низкими и не превышали так называемую «серую зону» - от 97 до 45 титров. У остальных 14 пациентов (61%) низкие титры антител класса IgG к Н. pylori в крови колебались от 412 до 97; через 12 месяцев после эрадикационного лечения крайне низкие титры этих антител в крови сохранились у одного из 5 больных, прослеженных в динамике.
Сравнительный анализ уровней антител класса IgG к Н. pylori в крови со степенями обсемененности Н. pylori в слизистой желудка показал отсутствие зависимости уровня антител от стадии болезни и степени обсемененности, а также наличие как ложноотрицательных, так и ложнополо-жительных результатов. Последнее обстоятельство может свидетельствовать о том, что один биоптат не всегда является достаточным для обнаружения Н. pylori и не всегда чувствительным или достаточным для наработки антител. Оно может быть также свидетельством «транзитного» варианта Н. pylori или его недавнего появления, когда сроки наработки антител были небольшими.
Процесс снижения и исчезновения антител класса IgG к Н. pylori в крови после успешного эрадикационного лечения является довольно медленным, и антитела у небольшой части больных сохраняются на протяжении года.
Оценивая полученные данные, в том числе результаты сравнительного изучения титра антител класса IgG к Н. pylori в крови, гистологических данных и быстрого уреазного теста, следует признать, что «золотым стандартом» диагностики Нр-инфекции следует считать сочетание гистологического и быстрого уреазного тестов. Определение титров антител класса IgG к Н. pylori в крови является ориентировочным тестом, дающим определенный процент ошибок. Он может использоваться только в сочетании с другими диагностическими тестами.
ЛИТЕРАТУРА
1. Catalano F. et al. // Digestión. - 1998. - V. 59 (Suppl. 3). - Р. 440.
2. Logar-CarG. etal. //Digestión. - 1998. -V. 59 (Suppl. 3). - P. 418.
3. Martin C. de Argila et al. // Gut. - 1996. - V. 39 (Suppl. 3). - Р. A225.
ВЛИЯНИЕ ПРОБНОГО ЗАВТРАКА НА РЕЗУЛЬТАТЫ 13С-УРЕАЗНОГО ДЫХАТЕЛЬНОГО ТЕСТА
A.M. Зякун, Г.В. Цодиков,Д.Ю. Матевосов
ИБФМ им. Г.К Скрябина РАН МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского
За прошедшие два десятилетия после открытия Helicobacter pylori разработано и предложено множество различных методов диагностики Hp-инфекции, которые делятся на две большие группы: инвазивные и неинвазивные. Маастрихтские соглашения 2000 и 2005 гг., регламентирующие диагностический алгоритм, отдают предпочтение неивазивным методам диагностики хеликобактериоза, рекомендуя при этом уреазный ды-хательный тест (УДТ). Высокая диагностическая точность, необременительность и абсолютная безопасность сделали 13С-УДТ, наряду с иммуноферментным анализом (ИФА) Н. pylori в кале, приоритетным методом диагностики Hp-инфекции. Однако эти рекомендации не исключают эндоскопические исследования, если они необходимы.
Суть 13С-УДТ заключается в том, что под воздействием фермента уреазы бактериальной клетки происходит гидролиз мочевины до иона-аммония и бикарбонат-иона. Образованный таким образом С02 обогащен изотопом 13С. Углекислота, меченная изотопом, всасывается в кровь, попадает в легкие и далее с выдыхаемым воздухом выводится из организма. Затем в собранных порциях выдыхаемого воздуха измеряется концентрация меченного углерода, входящего в состав углекислого газа. Разница в содержании 13С в выдыхаемом воздухе до приема тестовой 13С-мочевины и после ее приема отражает ферментативную активность Н. pylori [1, 3, 7].
Представленная схема отражает суть и основу настоящего метода.
13CO(NH3) + уреаза бактерий -» NH3+13C02 Сбор выдыхаемого воздуха —» Изотопный анализ 13С02
В организме здорового человека уреазная активность отсутствует. Присутствие в выдыхаемом воздухе пациента изотопа 13С, превышающее принятый контрольный уровень после приема 13С-мочевины, является доказательством уреазной активности и, соответственно, Нр-инфи-цированности (положительный результат теста). При отсутствии бактерий Н. pylori в организме человека тестовая 13С-мочевина проходит пищеварительный тракт без разложения и практически не влияет на соотношение изотопов углерода в выдыхаемом воздухе (отрицательный результат теста). Чрезвычайно важно определение величины условно выбранного контрольного уровня содержания 13С в выдыхаемой углекислоте для определения положительного и отрицательного результатов теста. Ряд исследований позволил установить контрольный уровень: он составляет 5%о [5]. Таким образом, пациент признается Нр-инфицирован-
