CC BY
35
скую и практическую помощь по вопросам профилактики карантинных и других особо опасных инфекций, соблюдения правил безопасной работы с использованием ПБА, подготовки специалистов.
Комплекс проводимых мероприятий по обеспечению биологической безопасности населения Москвы - субъекта Российской Федерации, где представлены в той или иной мере практически все виды источников биологической опасности, позволяет вывести определенный алгоритм действий органов и учреждений Федеральной службы в субъекте Федерации. Алгоритм действий включает:
- выявление на территории потенциальных источников биологической опасности (объекты возможного завоза, эпидзначимые объекты, в том числе, работающие с возбудителями инфекционных болезней человека и животных, природные очаги инфекций, популяции животных, грызунов и эктопаразитов);
- оценку условий, способствующих усилению биологической опасности, в частности возникновению и распространению инфекционных болезней (численность и плотность населения, миграционные процессы, наличие и состояние международных транспортных объектов, объектов массового сосредоточения людей, факторы природного и техногенного происхождения, влияющие на организм и его защитные системы);
- разработку комплекса мер обеспечения биологической безопасности, в том числе совершенствование систем санитарно-карантинного досмотра транспортных средств и грузов, контроля объектов, работающих с биоагентами, эпизоотолого-эпиде-миологического мониторинга за природными очагами и т. д.;
- контроль состояния материально-технической базы обеспечения биологической безопасности объектов, ее укрепление и совершенствование;
- определение порядка взаимодействия органов и учреждений Роспотребнадзора, в том числе противочумных учреждений, а также их взаимодействия с органами и учреждениями других ведомств по вопросам обеспечения биологической безопасности.
Представляется перспективным разработка методики оценки биологической опасности субъекта Федерации, административной территории или города.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Малюкова Т.А., Ляпин М.Н., Костюкова Т.А. и др. // Пробл. особо опасных инф. - 2004. - Вып. 2. (88). -С. 9-12. - 2. Нетесов С. В. // Мол. мед. - 2004. - № 4. - С. 4149. - 3. Онищенко Г. Г. // Эпидемиол. и инф. бол. - 2003. -№ 3. - С. 4-16. - 4. Онищенко Г.Г., Дроздов И.Г., Федоров Ю.М. и др. // Матер. VI Межгос. науч.-практ. конф. государств-участников СНГ. - Волгоград, 2005. - С. 7-8. -5. Онищенко Г.Г., Сандахчиев Л.С., Нетесов С.В., Мартынюк Р. А. // Вестн. РАН. - 2003. - Т. 73, № 3. - С. 195204. - 6. Основы государственной политики в области обеспечения химической и биологической безопасности Российской Федерации на период до 2010 года и дальнейшую перспективу. Пр-2194 от 04.12.03. - 7. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 17.11.2005 № 774 «Об организации и проведении мероприятий по профилактике чумы». - 8. Черкасский Б.Л., Бакулов И. А., Пчелинцев С.Ю. // Вестн. РАМН. - 2002. -№ 10. - С. 30-33.
V.E.Bezsmertny, S.M.Ivanova, N.N.Filatov, L.V.Rodina, L.A.Tsvil’, N.V.Ivanova
Defining the Approaches to Provide Biological Safety for the Townspeople of a Large City
Plague-Control Center of Rospotrebnadzor, Territorial Agency of Rospotrebnadzor for the City of Moscow
A complex of measures carried out for several years with the aim of securing biologic safety for the inhabitants of Moscow (which is a RF subject where practically all kinds of sources of biological hazards are existing to some degree) enables one to draw out a certain algorithm of steps that are to be undertaken by the organs and facilities of the Federal Service for the Surveillance in the Sphere of Consumers’ Rights Protection and Human Welfare in a Federative Subject.
Key words: biologic hazard, biologic safety, sources of biologic danger, particularly dangerous infectious diseases, quarantine infections, migration processes, sanitary protection of a territory, epidemiologic surveillance, preventive measures, infectious morbidity, bioterrorism events.
nocTynu^a 30.05.06.
УДК 616.988.21:004.2
А.К.Никифоров, И.А.Дятлов, С.А.Еремин, О.А.Волох, М.Н.Ляпин
ОЦЕНКА РИСКА КАК ОСНОВА ОБЕСПЕЧЕНИЯ БИОБЕЗОПАСНОСТИ РАБОТ С ПРОИЗВОДСТВЕННЫМИ ШТАММАМИ ФИКСИРОВАННОГО ВИРУСА БЕШЕНСТВА
Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов
Проведена оценка риска биологической опасности при освоении нового вида работ и обоснование введения комплекса мер, направленных на обеспечение безопасности экспериментатора и окружающей среды на этапах производства антирабического иммуноглобулина. Результаты оценки риска явились научным обоснованием для разработки методических указаний «Безопасность работы с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства».
Ключевые слова: биологическая безопасность, производство антирабического иммуноглобулина.
Обеспечение безопасности является важнейшим условием при проведении всех видов работ с использованием патогенных биологических агентов (ПБА) - возбудителей инфекционных болезней [10].
Одним из механизмов государственного регулирования данного вида деятельности является нормативно-методическое обеспечение. Нормативно-правовыми документами, регламентирующими условия
и правила всех видов обращения с ПБА I-IV групп патогенности [1, 3, 13], определены основные принципы безопасной работы с возбудителями инфекций. Для производственных подразделений, осуществляющих выпуск медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП), предусматривается разработка документов, определяющих режим безопасной работы с ПБА в конкретных условиях, учитывающих специфику микроорганизма, технологических процессов, масштабность производства [6].
Разработке подобных документов предшествует процедура оценки опасности, которая в последние годы получила широкое распространение под названием оценка риска [11, 12, 14]. Результатом ее выполнения является определение опасности для обоснования и выработки адекватных способов обеспечения безопасности работ с конкретным возбудителем в конкретных условиях, включая производственные.
Цель данного исследования - оценка риска биологической опасности при освоении нового вида работ и обоснование введения комплекса мер, направленных на обеспечение безопасности экспериментатора и окружающей среды на этапах производства антирабического иммуноглобулина. Особое внимание уделено организации работ, характеристике штаммов вирусов и манипуляциям в процессе производства МИБП.
Характеристика штаммов. В соответствии с действующими Санитарными правилами [1] вирус «уличного» бешенства относится ко II группе патогенности (опасности) [1, 4]. Понятие штамм «фиксированного вируса» бешенства встречается во многих литературных источниках и, по сути, обозначает аттенуированный штамм «уличного» бешенства. Фиксация - это определенный способ аттенуации, предложенный Л.Пастером в 1886 г. Аттенуация была достигнута многократным пассированием на лабораторных животных, в результате чего вирус утратил способность поражать периферические нервы [5]. Соответственно, штаммы фиксированного вируса бешенства «Москва» и «CVS», используемые в процессе изготовления и контроля «Иммуноглобулина антирабического из сыворотки крови лошади жидкого», согласно Санитарным правилам «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами» СП 1.2.731-99 относятся к III группе патогенности.
Для исключения возможности реверсии вирулентности Комитет экспертов ВОЗ рекомендовал следующие требования к производственным штаммам фиксированного вируса бешенства: тщательная регистрация истории пассажей; проведение в производстве не более 10 пассажей с момента последнего контроля его биологических свойств; минимальная патогенная активность для лабораторных животных при экстраневральном введении; антигенная специфичность и иммуногенная активность; контрольное изучение свойств производственного штамма фиксированного вируса бешенства после каждых 10 пассажей [15].
Фиксированный вирус бешенства должен иметь следующие основные признаки: короткий инкубационный период (4-5 дней); большую патогенность для
кроликов при интрацеребральном заражении; значительное ослабление способности образовывать тельца Негри; вызывать паралитическую форму бешенства без явлений возбуждения; накопление в ЦНС мышей до 6,0-7,0 ^ ЬБ50/0,03 мл; высокую троп-ность к ЦНС и низкую тропность к внутренним органам [8]. Производственные штаммы фиксированного вируса бешенства хранятся в ГИСК им. Л.А.Тарасевича и выдаются один раз в год учреждениям, имеющим право на работу с микроорганизмами Ш-ГУ группы патогенности.
Организация лаборатории. Лаборатории, работающие с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства «Москва» и «СУЗ», должны располагаться в отдельно стоящем здании или изолированной части здания с отдельным входом и соответствовать общим требованием, предъявляемым к вирусологическим лабораториям, предназначенным для работы с вирусами Ш-ГУ патогенности, изложенными в Санитарных правилах «Безопасность работы с микроорганизмами Ш-ГУ групп патогенности и гельминтами» СП 1.2.731-99 и «Методические рекомендации по проектированию вирусологических лабораторий» [9].
Производственные манипуляции. Определение степени опасности при экспериментах, связанных с заражением и вскрытием лабораторных животных, следует осуществлять на принципах моделирования и оценки принципиальной опасности и риска с позиций технического регулирования [7]. Методики заражения и вскрытия лабораторных животных при работе с фиксированным вирусом бешенства весьма специфичны и требуют подробного рассмотрения с позиций биологической безопасности.
При внутримозговом заражении кролика возникает возможность образования аэрозоля при разбрызгивании вирусной суспензии из шприца, а также нарушение кожных покровов экспериментатора когтями кролика или инъекционной иглой. Чтобы избежать травмирования экспериментатора во время внутримозгового введения вирусной суспензии, кролика надежно фиксируют на специальном станке, закрепляя с помощью матерчатых жгутов передние и задние конечности.
Прокол черепной коробки осуществляют с помощью стерильного шприца емкостью 2 мл и иглы размером № 20 (10x0,90). При проколе может происходить закупоривание просвета иглы костной тканью. В связи с этим при введении вирусной суспензии необходимо осуществлять плавное давление на поршень шприца. В случае возникновения явного сопротивления прекратить введение для предотвращения срыва иглы с канюли шприца и разбрызгивания заразного материала. При заражении крупных кроликов (2-2,5 кг) для прокола черепной коробки следует использовать шило из нержавеющей стали или троакар, что позволит исключить закупорку иглы костной тканью.
Все вышеперечисленное свидетельствует о большой вероятности возникновения аварийной ситуации с разбрызгиванием заразного материала или с повреждением кожных покровов экспериментатора на данном этапе производства. Поэтому при внутричерепном заражении кролика следует использовать
дополнительные средства защиты - респиратор (ватно-марлевая маска) и резиновые перчатки.
Следующий этап производственного процесса - операция по вскрытию черепа - еще более опасна в плане разбрызгивания заразного материала, образования аэрозоля и возможности ранения экспериментатора.
Для обеспечения безопасности на этом этапе, в первую очередь, необходимо обеспечить надежную фиксацию головы животного. Череп кролика помещают в специальное приспособление, состоящее из металлической платформы, и двух винтов, между которыми зажимается черепная коробка. Удерживая секционный нож в левой руке, правой рукой с помощью молотка вскрывают черепную коробку четырьмя прямоугольными разрезами. Сначала следует сделать разрез по линии соединяющей середины глаз, затем разрез в теменной области, а затем соединить эти два разреза перпендикулярными разрубами. Затем, отложив в сторону секционный нож и молоток, с помощью пинцета и ножниц высвобождают твердую мозговую оболочку и переднюю часть мозга отделяют на уровне обонятельной доли; пересекают продолговатый мозг позади мозжечка, приподнимают мозг, пересекают перекрест зрительных нервов и затем переносят его на стерильную чашку Петри для взвешивания.
Приведенное описание операции по вскрытию черепной коробки кролика демонстрирует всю опасность данной манипуляции для экспериментатора. Для защиты органов зрения и дыхания от брызг заразного материала, которые могут возникнуть при разрубании черепной коробки, необходимо дополнить противочумный костюм IV типа резиновыми перчатками, респиратором (маской) и защитными очками. Необходимо также использовать резиновые или прочные полиэтиленовые фартуки, которые легко дезинфицировать или уничтожить.
Приготовление рабического антигена для иммунизации лошадей осуществляется следующим образом: головной мозг кролика после взвешивания помещают в стерильную ступку или гомогенизатор и измельчают. При гомогенизации головного мозга кролика возникает аэрозоль из частиц заразного материала. Для обеспечения безопасности экспериментатора и защиты окружающей среды данный этап необходимо проводить в настольном боксе безопасности, оборудованным фильтрами тонкой очистки типа «Лайк» и системой вентиляции, обеспечивающей отрицательное давление.
Таким образом, в результате проведенной оценки риска выявлены наиболее опасные, в плане биологической безопасности, этапы процесса производства антирабического иммуноглобулина и предложены дополнительные меры для адекватной
защиты экспериментаторов и окружающей среды. Результаты оценки риска явились научным обоснованием для разработки методических указаний «Безопасность работы с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства» [2].
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности). Санитарно-эпидемиологические
правила СП 1.3.1285-03 // Бюл. норм. и метод. док. Госсанэпиднадзора. - 2003. - № 3 (13). - С. 45-144. - 2. Безопасность работы с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства. Методические указания. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2002. - 28 с. -3. Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами. Санитарные правила. СП 1.2.73199. / МЗ РФ. - М., 1999. - 4. Ботвинкин А. Д., Кузьмин И.В. // Биотехнология: состояние и перспективы развития: Матер. 3-го Моск. междунар. конгр. - М., 2005. - Ч. 1. - С. 24. -5. Груздев К.Н., Недосеков В.В. Бешенство животных. -М., 2001. - С. 304. - 6. Дятлов И. А. // Сан. охрана террит. государств содружества СНГ: пробл. биол. безопасн. и про-тиводейств. биотерроризму в совр. условиях: Матер. 4-й Меж-гос. науч.-практ. конф. государств-участников СНГ. - Волгоград, 2005. - С. 23-25. - 7. Ежов И.Н., Ляпин М.Н.,
Дроздов И.Г. // Мед. микробиол. - XXI век: Матер. Всерос. науч.-практ. конф. - Саратов, 2004. - С. 86-88. - 8. Методы лабораторных исследований по бешенству / ВОЗ. - Женева, 1975. - 9. Методические рекомендации по проектированию вирусологических лабораторий от 28 декабря 1990 № 15-6/51 / МЗ СССР. - М., 1991. - 10. Онищенко Г.Г., Дроздов И. Г., Малюкова Т. А. и др. // Пробл. особо опасных инф. -Саратов, 2005. - Вып. 2 (9). - С. 5-11. - 11. Основы биологической безопасности в лабораториях. 3-е издание / Публ. № 4552. - Канада, 2004. - С. 108. - 12. Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях. 3-е издание / ВОЗ. - Женева, 2004. - C. 190. - 13. Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Санитарные правила. СП 1.2.036-95. - М.: Госкомсанэпиднадзор России, 1995. -14. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. 4th edition. - Washington: U.S. Government printing office, 1999. -P. 250. - 15. WHO expert committee on rabies. - Geneva, 1972.
A.K.Nikiforov, I.A.Dyatlov, S.A.Yeremin, O.A.Volokh, M.N.Lyapin
Qualification of the Risks as the Basis for Assuring Biologically Safe Handling of the Rabies Virus Production Strains
Russian Anti-Plague Research Institute "Microbe", Saratov
Biological hazard risks were assessed from the viewpoint of mastering new kinds of jobs, and the introduction of the complex of measures directed to the assurance of the experimenter’s safety and protecting the environment was substantiated for different stages of antirabies immunoglobulin production. This assessment of the risks served as a scientific basis for designing the “Methodological Instructions for Safe Work with Production Strains of the Fixed Rabies Virus”.
Key words: biological safety, production of anti-rabies immunoglobulin.
nocTynu^a 27.04.06.
