CC BY
28
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ АДАПТАЦИИ ВИРУСА ГРИППА А/ЖМ С ПАНДЕМИЧЕСКИМ ПОТЕНЦИАЛОМ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МОДЕЛЯХ МЫШЕЙ ЛИНИИ BALB/с И ЛИНИИ C57BL/6z
Е.А. Прокопьева12, М.В. Сивай12, А.В. Глущенко1, Л.В. Шестопалова2, А.М. Шестопалов1,2
1ФГБУ Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, г. Новосибирск
2 ФГБОУ ВПО Новосибирский национальный исследовательский государственный университет
Причиной пандемии XXI века стал вирус гриппа A (H1N1)pdm09, который вызывал заболевание от легкой степени тяжести до летальных исходов в зависимости от вирулентности штамма и наличия факторов риска у пациента. В связи с тем, что данный патоген обладал высокой степенью трансмиссивности (способность эффективно передаваться от человека к человеку), появилось опасение, что в случае усиления вирулентных свойств вследствие адаптации к организму человека, возникнет новый адаптированный вариант, обладающий весьма значительным эффектом на здоровье населения планеты. Целью работы явилось изучение особенностей течения гриппозной инфекции в условиях лабораторной адаптации вируса гриппа A (H1N1)pdm09 к организму мышей линии BALB/c и линии C57BL/6z.
В лабораторных условиях ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» был проведен эксперимент по увеличению вирулентности пандемичного вируса гриппа A (H1N1)pdm09 путем серийных «слепых» пассажей через легкие мышей линии C57BL/6z (n = 245). В результате работы был получен высокопатогенный штамм, вызывающий тяжелое заболевание и гибель мышей линии C57BL/6z, задепонированный под названием A/Tomsk/13-C57Bl_ 6z/2010-MA (H1N1) в государственную коллекцию вирусов РФ. Стопроцентная летальность для мышей линии C57BL/6z была достигнута к 12 пассажу, что значительно позднее по сравнению с полученным ранее адаптированным вариантом вируса гриппа на мышах линии BALB/c, среди которых 100%-ная смертность регистрировалась к 7 пассажу. С целью выявления особенностей течения гриппозной инфекции в четко дифференцированных друг от друга генетических группах было проведено перекрестное инфицирование. Результат эксперимента показал низкую вирулентность штамма A/Tomsk/13-C57Bl_6z/2010-MA (H1N1) для мышей линии BALB/с. Кроме того, проанализированы современные данные о роли отдельных сегментов генома в повышении вирулентности вируса гриппа в условиях лабораторной адаптации в ткани легких мышей. Обсуждается значение молекулярных основ и механизмов адаптации вируса гриппа.
КЛОНИРОВАНИЕ, СЕКВЕНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ГЕНА ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО НЕКРОТИЗИРУЮЩЕГО ФАКТОРА YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS
Е.К. Псарева12, Н.Ф. Тимченко1, К.А. Собянин2, Н.В. Смирнова2, С.А. Ермолаева2
1 ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова СО РАМН, г. Владивосток
2 ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи МЗ РФ, Москва
К настоящему времени есть сведения о нескольких белковых токсинах Y. pseudotuberculosis: термолабильном и термостабильном летальных белковых
токсинах (HLT, HST), цитотоксине YopE, суперантигене YPM, факторах, нарушающих проницаемость сосудов кожи — PF-раннем и PF-позднем, цитоток-сическом некротизирующем факторе (CNF), которые играют важную роль в патогенезе псевдотуберкулезной инфекции. CNF принадлежит к уникальной группе крупных цитотоксинов, модифицирующих Rho-белки, которые являются регуляторами ак-тинового цитоскелета клетки и активируют белки RhoA, путем дезаминирования Gln63.
Цель: клонировать ген cnf Y. pseudotuberculosis в клетки E. coli, провести секвенирование и анализ последовательности с целью изучения биологической активности очищенного рекомбинантного белка CNF.
В работе использован штамм Y. pseudotuberculosis 2517 III серовара (получен от H. Mollaret, Франция). Ген cnf амплифицирован в термоциклере, с использованием праймеров 5'-GTTGCAAACTTTCCGT-CCCCA-3', 3'-ACGGCGAACTTGATAATTGCTT-5', в качестве матрицы использовали лизат штамма 2517. ПЦР-продукт клонировали в вектор pCR 8GW-TOPO, несущий ген устойчивости к спектомицину, лигазную смесь трансформировали в штамм E. coli JM 109. Отбор проводили на среде LB, содержащей spect 100 мкг/мл. Клоны, содержащие вставку, определяли с помощью ПЦР. Выделенную рекомби-нантную плазмиду сиквенировали в ЦКП «Геном». Результаты секвенирования анализировали программой «Chromas Lite Application 2.1.1.0».
В результате клонирования получена реком-бинантная плазмида, содержащая вставку около 3000 п.н. Сравнение полученной последовательности с геном cnf Y. pseudotuberculosis, штамма YPIII, представленного в базе данных GenBank http://www.ncbi. nlm.nih.gov/nuccore/12018165, показал, что ген cnf штамма 2517 идентичен на 99,9%, и содержит 3 точечные мутации: A578G, A904G, G1183A, в результате которых в последовательности белка произошли аминокислотные замены Asn192Ser, Glu301Gly, Ala394Thr. Клоны предполагается использовать для получения рекомбинантного белка CNF с целью изучения биологических свойств токсина.
Планируется аналогичное исследование rnf в штаммах Y. pseudotuberculosis, выделенных в ходе эпидемических вспышек Дальневосточной скарлатиноподобной лихорадки — новой клинико-эпидемической формы псевдотуберкулеза, впервые выявленной на Дальнем Востоке России в 1960 гг. Предварительные результаты свидетельствуют о наличии у штаммов, связанных со вспышками ДСЛ, протяженной делеции в гене cnf (Timchenko N.F. et al., 2012).
ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТИВНОСТИ ТЕХНОЛОГИИ АЭРОЗОЛЬНОГО РАСПЫЛЕНИЯ ДЕЗИНФЕКТАНТОВ В МИНИМИЗАЦИИ ФАКТОРОВ, ОТВЕЧАЮЩИХ ЗА НАКОПЛЕНИЕ РЕЗИДЕНТНЫХ ШТАММОВ НА ОБЪЕКТАХ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ РОДДОМОВ
А.П. Ребещенко, А.С. Корначев, А.А. Вакарина, Л.В. Катаева
ФБУН Тюменский НИИ краевой инфекционной патологии Роспотребнадзора, г. Тюмень
Для повышения результативности биологической безопасности (ББ) роддомов апробирована технология дезинфекции помещений и оборудования
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
с помощью аэрозольного распыления генератором «Ультраспрейер» дезинфектанта на основе перекиси водорода. Объектом исследования являлся роддом № 2 г. Тюмени, где на основе технологии РОУС оказывалась медицинская помощь женщинам с беременностью с 36 недель без соматической патологии. Целью настоящего исследования являлась оценка результативности данной технологии в минимизации угрозы накопления на объектах производственной среды резидентными штаммами с высокой резистентностью к антибиотикам. В качестве измерителя результативности использовались данные бактериологических исследований смывов, отбираемых ежеквартально в процессе работы стационара с объектов производственной среды, рук и одежды персонала и родильниц. Группа наблюдения включала в себя результаты наблюдения за ББ роддома с мая по декабрь 2010 г. Моментом ее создания явилось начало использования в стационаре генератора «Ультраспрейер». Группа контроля охватывала период 2009 г. и первых четырех месяцев 2010 г., когда в стационаре дезинфекция осуществлялась рутинным методом орошения поверхностей. В группе наблюдения был отобран 301, а группа контроля включала 620 смывов.
Установлено, что технология аэрозольного распыления дезинфектантов уменьшила интенсивность контаминации объектов производственной среды неферментирующими грамотрицательными бактериями. В группе наблюдения шансы встречаемости этих микробов на объектах производственной среды по сравнению с группой контроля, снизились в 2 раза (ДИ 1,1—3,6). Кроме этого индекс полирезистентности (ИПР) к десяти индикаторным антибиотикам у микробов, обнаруженных в смывах, отобранных в опытной группе, был на 9,2% ниже, чем в группе контроля (28,4 против 37,56%). Наиболее значимые результаты получены в комнатах гигиены и санузлах, где ИПР бактерий сократился на 34,1% (с 41,9 до 27,6%). Ключевую роль в этом сыграл процесс, обеспечивающий ББ санитарно-технического оборудования, установленного в санузлах и комнатах гигиены.
ПОДХОДЫ К ОЦЕНКЕ РЕЗУЛЬТАТИВНОСТИ СИСТЕМЫ БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ АКУШЕРСКИХ СТАЦИОНАРОВ
А.П. Ребещенко, А.С. Корначев, А.А. Вакарина, Л.В. Катаева
ФБУН Тюменский НИИ краевой инфекционной патологии Роспотребнадзора, г. Тюмень
Профилактика инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи (ИСМП) в роддомах обусловлена результативностью системы биологической безопасности (ББ), которая призвана минимизировать факторы, обеспечивающие активизацию механизмов формирования и распространения резидентных штаммов (РШ), способных выживать в экстремальных условиях больниц. Цель исследования — разработка подходов к многоэтапной проспективной оценке результативности системы ББ роддомов в минимизации данных факторов. Разработанная оценка включала семь этапов. На 1-м измерялись шансы роста микробов в смывах с объектов производственной среды, критерий — рост бактерий на 100 смывов. На 2-м этапе оценивался уровень бактериального загрязнения объектов производственной среды (КОЕ микробов в одном смыве). На 3-м этапе определялись
шансы встречаемости отдельных бактерий (доля отдельных видов микробов в общем количестве бактерий, обнаруженных в смывах). На 4-м этапе измерялся уровень накопления РШ на объектах производственной среды. Для оценки использовался индекс полирезистентности (ИПР) к десяти индикаторным антибиотикам у микробов, обнаруженных в смывах. В ходе 5-го этапа оценивалась интенсивность колонизации РШ пациентов. Индикатор — ИПР у бактерий, выделенных от пациентов. На 6-м этапе измерялся уровень инфекционной заболеваемости пациентов, в пересчете на 1000 родов или живорожденных новорожденных. На 7-м этапе определялись шансы встречаемости родильниц, неудовлетворенных качеством медицинского обслуживания, включая обеспечение ББ. Критерий — частота встречаемости ответов, отражающих уровень неудовлетворенности родильниц качеством обслуживания. Результаты 1-го, 3-го и 7-го этапов оценки измерялись 95% доверительными интервалами отношения шансов в группах контроля и наблюдения. Итоги 2-го, 4-го, 5-го и 6-го этапов оценивались ^критерием и его значимостью, а также 95% доверительными интервалами разности величины критериев, выбранных для соответствующего этапа оценки, в группах контроля и наблюдения. С помощью разработанных подходов оценена результативность аэрозольного распыления дезинфектантов в минимизации угрозы накопления РШ на объектах производственной среды роддомов и колонизации этими штаммами новорожденных и родильниц. Оцениваемая технология показала позитивные результаты, обладающие высокой статистической значимостью, по пяти этапам оценки.
ОСТРОЕ ПОВРЕЖДЕНИЕ ПОЧЕК У ПАЦИЕНТОВ С ГЛПС ПО ДАННЫМ СПб КИБ им. С.П. БОТКИНА
В.Д. Ренев1, А.Г. Шевалдин1, Л.Р. Городничева2
1ГБОУ ВПО Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова МЗ РФ 2ГБУЗ Клиническая инфекционная больница им. С.П. Боткина, Санкт-Петербург
Введение. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) является одной из самых актуальных среди нетрансмиссивных природно-очаговых инфекций в Российской Федерации. За период 2011—2013 гг. в РФ зарегистрировано 17 217 случаев ГЛПС, в Санкт-Петербурге около 100 случаев. Острое повреждение почек (ОПП) как ведущий синдром ГЛПС часто определяет ее летальность и длительность пребывания больных в стационаре.
Цель. Проанализировать ОПП у пациентов с ГЛПС, госпитализированных в КИБ им. С.П. Боткина с 2011 по 2013 гг.
Материалы и методы. Проанализировано 50 историй болезни пациентов с ГЛПС, с применением описательно-оценочного метода. У 48 больных диагноз был подтвержден с помощью МФА, у 2-х — посредством ИФА.
Результаты. Основными клиническими проявлениями ГЛПС были: выраженный интоксикационный синдром с лихорадкой (100%), дискомфорт в поясничной области (44%), снижение суточного диуреза (28%), снижения остроты зрения (24%). У 88% ГЛПС протекала в среднетяжелой форме. Олигурический период ГЛПС отмечали у 28% больных, анурия была выявлена в 2 случаях. Средний
