CC BY
26
ЛИТЕРАТУРА
Кузнецов В. И. Ж. аналит. химии, 1947, в. 3, стр. 178. — Он же. Успехи химии, 1949, в. 1, стр. 75.—Лапин Л. Н. Вопр. мед. химии, 1956, в. 4, стр. 309.— Лапин Л. Н., Гейн В. О. Труды комиссии по аналитической химии. М., 1956, т. 7. стр. 217.
Поступила 23/1 1963 г.
-ЙГ &
ОЦЕНКА РЕАКЦИИ НАРАСТАНИЯ ТИТРА ФАГА ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ВОДЫ ОТКРЫТЫХ ВОДОЕМОВ
Врач-бактериолог В. А. Извозчикова, зав. лабораторией А. А. Жихарь, врачи-бактериологи И. Н. Медведева,, Л. Н. Кондрашова, С. П. Гришан
Из Ленинградской областной санитарно-эпидемиологической станции
Выделение патогенных микроорганизмов из воды представляет значительные трудности, поэтому индикация их в водоисточниках приобретает большой практический интерес.
Учитывая, что бактериофаг является спутником соответствующего микроба, наша лаборатория в течение ряда лет при исследовании воды на коли-титр производила определение бактериофага в воде, указывающего или на присутствие микроба в момент определения, или на недавнее нахождение его в воде, или во всяком случае на поступление соответствующего фага в воду. Последнее также является сигналом эпидемиологического неблагополучия данного населенного пункта, так как в настоящее время применение с профилактической и лечебной целью брюшнотифозного и дизентерийного фагов проводится только по эпидемическим показаниям.
Реакция нарастания титра фага, предложенная В. Д. Тимаковым и Д. М. Гольдфарбом, является методом индикации патогенных микроорганизмов.
Исследование открытых водоемов на реакцию нарастания титра фага мы проводили в соответствии с «Временными методическими указаниями о применении реакции нарастания титра фага для индикации брюшнотифозных и дизентерийных бактерий», утвержденными заместителем министра здравоохранения СССР В. М. Ждановым 1 /VII 1960 г.
Индикаторные фаги получали из Института эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалеи, а эталонные культуры брюшного тифа № 4446 и дизентерии Флекснера С № 170 — из Контрольного института имени Л. А. Тарасевича.
Часть опытов (176) мы провели без прогрева с применением адаптированных нами к стрептомицину эталонных культур тифа № 4446 и дизентерии Флекснера С № 170. Рост посторонней микрофлоры подавлялся добавлением стрептомицина.
Следует отметить, что изредка (в очень загрязненных водах) наблюдались проросты, мешающие четкому учету реакций.
Свободный бактериофаг определяли в воде по методике, опубликованной в журнале «Гигиена и санитария» (1952, № 2, стр. 7).
Методика бактериологического исследования воды на патогенную микрофлору была следующей. Воду в количестве 1—2 л отфильтровывали через мембранные фильтры № 3. Для мутных вод одновременно применяли фильтр № 5, накладывая его на фильтр № 3. Через каждый фильтр пропускали 80—100 мл воды. Фильтры накладывали по одному рга чашки со средами Плоскирева, Левина, Эндо и висмут-сульфитный
агар, делали веерный рассев стеклянной палочкой по всей чашке. Кроме того, фильтры помещали в среду накопления Кауфмана с такимрас-четом, чтобы среды было не меньше, чем воды, профильтрованной через фильтр.
Из посева на среду обогащения также делали высев на агар Плос-кирева и Левина. Для каждого исследования воды брали по 20—30 чашек с питательными средами. Чашки инкубировали в термостате при 37°.
После 18—20-часовой инкубации с каждой чашки снимали все колонии, отличающиеся по своему виду от типичной кишечной палочки, и переносили штрихом на чашку с агаром Левина или Эндо, которую также ставили в термостат при 37°. На одной чашке делали до 80—100 штрихов. На следующий день посевы просматривали и ставили агглютинацию на стекле со смесью сывороток № 1—2 и 3. Колонии, дающие агглютинацию с одной из сывороток, отвивали на трехсахарный агар с мочевиной и индикатором фенолротом (модификация И. С. Олькениц-кого, журнал «Лабораторное дело», 1958, № 5, стр. 40). В дальнейшем проводили идентификацию выделенной культуры.
В большинстве опытов одновременно с определением коли-титра, поисками брюшнотифозного и дизентерийного фагов и патогенных микроорганизмов (брюшного тифа и дизентерии) в воде определяли и реакцию нарастания титра фагов. Всего было исследовано 270 проб воды (табл. 1).
Таблица 1
Результаты определения реакции нарастания титра фагов в воде
Откуда взяты пробы воды
Число проб
Положительная реакция
брюшнотн-| днзенте-tj озны й фаг ри йны й фаг
Реки.....
Колодцы . .
Озера . ... Артезианские скважины Водопроводы
Бачки .....
Ведра . ... Ил . .... Канализация
5
1 1
6 2
Всего .
271
14
8
В 228 пробах ставили реакцию нарастания титра с брюшнотифозным и в 182 — с дизентерийным индикаторными фагами (всего 410 реакций). Реакция нарастания титра брюшнотифозного фага в 11 случаях была положительной в водах с коли-титром менее 100 и лишь в 3 случаях — с коли-титром более 111. Реакция нарастания титра дизентерийного фага во всех 8 случаях была положительной в водах с коли-титром до 10.
Свободный фаг при постановке этих реакций обнаруживался 53 раза, причем только в одном случае реакция была, неучитываемой (сплошной лизис на чашке свободного фага и в опыте), а в 52 случаях реакция была учтена, так как негативные колонии свободного фага резко отличались от негативных колоний индикаторного фага по своей величине. В 2 случаях реакция нарастания титра фага была положительной при наличии свободного фага.
При расшифровке 14 положительных реакций нарастания брюшнотифозного фага установлено, что 7 из них приходятся на эпидемическую вспышку в поселке, в котором заболело 11 человек и где выявлен хронический бактериовыделитель, в результате контакта с которым заболело 2 человека. Контакта с бактериовыделителем в остальных случаях установить не удалось. Инфицирование больных могло произойти в ре-. зультате употребления воды из зараженных колодцев и бачка с сырой водой в школе. Воду в бачок наливали из колодца, в котором обнаруже-
Таблица 2 Результаты определения реакции нарастания титра
брюшнотифозного фага
Откуда взята вода Коли-титр Реакция нарастания титра брюшнотифозного фага
всего положительных
Шахтные колодцы...... » »....... Бачок ..... Ведро ......... Артезианская скважина..... V' ДО 10 10—111 111 4—43 333 5 7 1 3 18 2 3 1 1 7
Таблица 3
Сравнительные данные определения патогенных микроорганизмов в воде, фага и реакции нарастания титра фагов
Число ' В том числе с
Исследование исследо- положитель-
ваний ными резуль-
татами
Определение патогенных микроорганизмов
в воде ..........
Определение брюшнотифозного фага в воде Определение дизентерийного фага в воде Определение реакции нарастания титра брюшнотифозного фага.......
Определение реакции нарастания титра дизентерийного фага........
на положительная реакция нарастания титра брюшнотифозного фага. В воде из ведра, которым наливали воду в бачок, а также в шахтных колодцах, водой которых пользовались больные, реакция нарастания титра фага была положительной (табл. 2).
Было также проведено 10 исследований воды Краснохолмского озера. Из 10 проб воды этого озера в 2 была положительной реакция нарастания титра брюшнотифозного и в 2 — дизентерийного фагов.
Из 202 исследований речной воды только в 5 реакция нарастания титра брюшнотифозного и в 6 дизентерийного фагов была положительной. Эти пробы были взяты у населенных пунктов, постоянно неблагополучных в отношении брюшного тифа и дизентерии.
В 194 пробах одновременно проводились исследования на обнаружение патогенных микроорганизмов (брюшного тифа и дизентерии) указанным выше методом. В 4 пробах мы выделили из речной воды две культуры дизентерии Флекснера С, одну культуру дизентерии Зонне и один штамм паратифа В (Шотмюллера). Культуры дизентерии во всех случаях выделены из посева фильтра на чашки со средой Левина, а культура паратифа В — из посева на чашки со средой Вильсона—
194 4
185 15
174 68
183 6
167 8
Блера. Реакции нарастания титра дизентерийного фага в этих пробах были отрицательными. В 2 пробах был обнаружен дизентерийный фаг, причем в пробе воды, из которой была выделена культура дизентерии Зонне, был обнаружен монофаг, лизировавший только культуры Зонне и не лизировавший культуры дизентерии Флекснера и Ньюкестл.
Все 3 дизентерийные культуры были испытаны на чувствительность к лечебному дизентерийному фагу и индикаторным фагам дизентерии Флекснера и Зонне, причем все они не только лизировались ими, но индикаторные фаги дизентерии Флекснера и Зонне размножались на этих культурах.
Отсутствие нарастания титра фага в этих пробах можно объяснить или высокой множественностью фаговых корпускул при малом количестве дизентерийных палочек, вследствие чего клетки были блокированы и в них не наступило размножения фага, а следовательно, и нарастания его титра, или неравномерным распределением микроорганизмов в воде,, вследствие чего не была обеспечена встреча индикаторного фага с искомым микроорганизмом.
В табл. 3 приведены сравнительные данные по определению патогенных микроорганизмов в воде, фага и реакции нарастания титра фага.
Отмечается зависимость положительных реакций нарастания титра фага от эпидемиологической ситуации в данной местности: 7 положительных реакций из 18 были в очаге брюшного тифа и лишь 14 из 350— в источниках водоснабжения, расположенных вблизи постоянно неблагополучных в санитарном и эпидемиологическом отношениях населенных пунктов.
В результате проведенных нами исследований мы считали, что по сравнению с предложенными ранее методами индикации патогенных микроорганизмов в воде реакция нарастания титра фагов является более совершенным методом. Однако, учитывая относительную сложность постановки этой реакции, нерационально ее применять при плановых санитарных исследованиях вод; следует использовать ее по эпидемиологическим показаниям.
Исследование воды открытых водоемов на свободный фаг как сигнальный метод, указывающий на циркуляцию вируса в той или иной местности, заслуживает внимания. Метод фильтрации воды через мембранные фильтры для обнаружения патогенных микроорганизмов несложен и перспективен при условии максимального снятия выросших на питательных средах колоний.
Поступила 9/Х1 1962 г .
Ъ Ъ *
