CC BY
83
Литература/References
1. Арушанян Э. Б. Уникальный мелатонин. Ставрополь, 200б. [Arushanian E. B. Unikalnii melatonin. Stavropol, 2006. (In Russ.)].
2. Арушанян Э. Б. Ограничение окислительного стресса как основная причина универсальных защитных свойств мелатонина. Эксперим. и клинич. фармакология. 2012;75(5):44-49. [Arushanian E. B. Ogranichenie okislitelnogo stressa kak osnovnaya prichina universalnih zashitnih svoistv melatonina. Experimentalnaya i clini-cheskaya farmacologiya. - Exp. and Clin. Pharmacol. 2012;75(5):44-49. (In Russ.)].
3. Арушанян Э. Б., Батурин В. А. Хронофармакология антидепрессантов. Фармакология и токсикология. 1990;1(3-4):158-166. [Arushanian E. B., Baturin V. A. Hronopharmakologiya antidepresantov. Pharmacologi-ya and tocsikologiya. - Pharmacology and toxicology. 1990;1(3-4):158-166. (In Russ.)].
Сведения об авторах:
4. Арушанян Э. Б., Попов А. В. В низкой дозе мелатонин усиливает психотропную и хронотропную активность тофизопама у крыс. Эксперим. и клинич. фармакология. 2013;76(4):15-17. [Arushanian E. B., Popov A. V. V nizkoi doze melatonin usilivaet psihotropnuu I hrono-tropnuu aktivnost tofizopama u kris. Experimentalnaya i clinicheskaya farmacologiya.- Exp. and Clin.Pharmacol. 2013;76(4):15-17. (In Russ.)].
5. Батурин В. А., Арушанян Э. Б. Особенности синхронизирующего действия мелатонина на динамику цир-кадианной подвижности крыс. Журн. высш. нервн. деятельности им. И. П. Павлова. 1991;41(4):822-827. [Baturin V. A., Arushanian E. B. Osobennosti sinhroni-ziruushego deistvia melatonina na dinamiku cirkodian-noi podvignosti kris. Zhurnal visshei nervnoi deyatelnosti im. I. P. Pavlova. - Zh. Vyssh. Nerv. Deiat. Im. I. P. Pavlova. 1991;41(4):822-827. (In Russ.)].
Каминская Ольга Владимировна, ассистент, заочный аспирант кафедры фармакологии; тел.: (8652)354881; e-mail: kaminskaya.olga2014@yandex.ru
Попов Алексей Викторович, доктор медицинских наук, профессор; тел.: (8652)354881
© Коллектив авторов, 2018
УДК 616-003.215:616.718.19-08
DOI - https://doi.org/10.14300/mnnc.2018.13062
ISSN - 2073-8137
ОЦЕНКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТИОЛОВОГО МЕТАБОЛИЗМА ПЛАЗМЫ КРОВИ БОЛЬНЫХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ОРГАНОВ МАЛОГО ТАЗА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ АНТИОКСИДАНТНОЙ КОРРЕКЦИИ
И. М. Быков, К. А. Попов, И. А. Егорова, А. П. Сторожук
Кубанский государственный медицинский университет, Краснодар, Россия
ASSESSMENT OF INDICATORS OF THE THIOL METABOLISM OF BLOOD PLASMA OF PATIENTS WITH INFLAMMATORY DISEASES OF THE SMALL PELVIS ORGANS AT ANTIOXIDANT CORRECTION
Bykov I. М., Popov К. А., Egorova I. А., Storozhuk A. P. Kuban State Medical University, Krasnodar, Russia
В исследовании показаны возможности повышения информативности определения содержания тиоловых групп больных воспалительными заболеваниями органов малого таза. Для этого в плазме крови определяли с помощью реактива Эллмана содержание легкодоступных и труднодоступных тиоловых групп с последующим расчетом их соотношения. Лабораторные исследования проводили с интактным биологическим материалом или после действия на него пероксида водорода в тест-системе in vitro. Исследование содержания и соотношения разных фракций тиоловых групп показало увеличение доли фракции легкодоступных SH-групп при развитии патологического процесса. У больных разных групп было зафиксировано увеличение количества окисляемых пероксидом водорода тиоловых групп, что косвенно свидетельствует о сниженной антиоксидантной активности. Анализ эффективности проводимой терапии у больных хроническим эндометритом с двусторонним сальпингоофоритом показал наибольшую эффективность введения тиосульфата натрия, витаминов А и Е в дополнение к стандартной терапии.
Ключевые слова: тиоловые группы, тиолсодержащие белки, реактив Эллмана, антиоксиданты
The study has demonstrated the possibility of increasing the informative value of the determination of the thiol group content in patients with inflammatory diseases of the small pelvis organs. The content of easily accessible and inaccessible thiol groups was determined in blood plasma with the aid of the Ellman reagent with the subsequent calculation of their ratio. The experiment has been performed with intact biological material or after exposure to hydrogen peroxide in the in vitro test system. The investigation of the content and ratio of different fractions of thiol groups showed an increase of the fraction of easily accessible SH-groups. In patients of different groups an increased amount of thiol groups oxidized by peroxide was recorded, which indirectly indicates a decreased antioxidant activity. Analysis of the therapy effectiveness in patients with chronic endometritis with bilateral salpingo-oophoritis showed the greatest efficacy of sodium thiosulfate, vitamins A and E in addition to standard therapy.
Keywords: thiol groups, thiol-containing proteins, Ellman's reagent, antioxidants
МЕДИЦИНСКИЙ ВЕСТНИК СЕВЕРНОГО КАВКАЗА
2018. Т. 13. № 2
medical news of north caucasus
2018. Vоl. 13. Iss. 2
Для цитирования: Быков И. М., Попов К. А., Егорова И. А., Сторожук А. П. ОЦЕНКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТИОЛОВО-ГО МЕТАБОЛИЗМА ПЛАЗМЫ КРОВИ БОЛЬНЫХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ОРГАНОВ МАЛОГО ТАЗА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ АНТИОКСИДАНТНОЙ КОРРЕКЦИИ. Медицинский вестник Северного Кавказа. 2018;13(2):402-406. DOI - https://doi.org/10.14300/mnnc.2018.13062
For citation: Bykov I. М., Popov К. А., Egorova I. А., Storozhuk A. P. ASSESSMENT OF INDICATORS OF THE THIOL METABOLISM OF BLOOD PLASMA OF PATIENTS WITH INFLAMMATORY DISEASES OF THE SMALL PELVIS ORGANS AT ANTIOXIDANT CORRECTION. Medical News of North Caucasus. 2018;13(2):402-406. (In Russ.). DOI - https:// doi.org/10.14300/mnnc.2018.13062
АОС - антиоксидантная система ИК - интегральный коэффициент ХЭ - хронический эндометрит
Реакционоспособность белковых тиоловых групп варьирует в широких пределах, но, как правило, ниже, чем в низкомолекулярных тиолах. Различия в активности тиоловых групп в белках обусловлены различным их окружением в структуре макромолекулы. На основании различной реакционоспособности было предложено SH-группы делить на три типа: легкодоступные, труднодоступные и «скрытые», которые можно определить только после денатурации молекулы белка [1, 2, 3]. На сегодняшний день разработано большое количество методов определения содержания сульфгидрильных групп в биологическом материале [4, 5], но наибольшую популярность приобрел спектрофотометриче-ский метод с использованием реактива Эллмана (5,5-дитиобис-2-нитробензойная кислота) [1]. Большое количество работ подтверждают перспективность изучения тиолового звена антиокси-дантной системы (АОС) плазмы крови для оценки функционального состояния неспецифической резистентности организма [6, 7, 8, 9, 10]. Нами было выдвинуто предположение об информативности определения соотношения разных типов тиоловых групп белков биологических жидкостей организма и оценки их реакционной способности по взаимодействию с различными модификаторами, в том числе окислителями.
Цель исследования - разработка и апробация в клинических условиях у больных воспалительными заболеваниями органов малого таза способа оценки состояния тиолового метаболизма в плазме крови, позволяющего объективно определять состояние АОС организма и резистентности его к воздействию прооксидантных факторов.
Материал и методы. Объектом исследования был раствор человеческого сывороточного альбумина (НПО «Микроген», Россия), плазма крови практически здоровых лиц (контрольная группа, К, группа 1, п=25) и плазма крови больных с различными заболеваниями (основные группы) до или после лечения: больные с хроническим эндометритом (группа 2, ХЭ, п=34), со-четанным течением хронического эндометрита и саль-пингоофорита до лечения (группа 3, ХЭС, п=32) и после стандартной схемы лечения (группа 4, ХЭС-Т, п=24), а также после лечения с дополнительным применением средств антиоксидантной направленности: тиосульфат натрия 30 % по 10 мл в/в и витамины А 0,055 г/сут и Е 0,1 г/сут в течение 10 дней (группа 5, ХЭС-А, п=25).
Содержание SH-групп определяли в плазме крови или растворе человеческого сывороточного альбумина фотометрическим методом с использованием реактива Эллмана. Легкодоступными тиоловыми группами ^Нл) считали прореагировавшие (при рН=7,4) за первые 3 минуты, а с 3 по 30 минуты реакции считали труднодоступными ^Нт). Содержание белка плазмы крови определяли с помощью спектрофото-метрического способа [11].
ХЭС - хронический эндометрит и сальпингоофорит SH„ - легкоусвояемые тиоловые группы SH-r - трудноусвояемые тиоловые группы
Показатель соотношения легко- и труднодоступных тиоловых групп (К!) рассчитывали по формуле
К = SH / SHP (1)
Определение тиоловых групп проводили в ин-тактной плазме крови или растворе альбумина и в аналогичных образцах, но после воздействия раствором пероксида водорода в конечной концентрации 1,8х10-4 %. Исследование раствора альбумина также проводилось с предварительным внесением растворов пероксида водорода до получения конечных концентраций 3х10-6-1,8х10-4 %. После чего рассчитывали долю окисленных пероксидом водорода SH-групп по формуле
О % = ((SH-i - SH2)/SH1)x100, (2)
где SH - сумма тиоловых групп плазмы крови или раствора альбумина до воздействия Н2О2; SH2 - сумма тиоловых групп плазмы крови или раствора альбумина после воздействия Н2О2.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью программного обеспечения (Stat plus LE). Так как в большинстве случаев характер распределения отличался от нормального, данные были представлены в виде медианы и квартилей. При нормальном характере распределения данные представляли в виде среднего значения (М) и стандартного отклонения (а). Оценку значимости отличий между независимыми группами проводили с помощью непараметрического U-критерия Манна - Уитни. Оценку различий между зависимыми группами осуществляли с помощью критерия Вилкоксона. Различия считали статистически значимыми при p<0,05.
Работа выполнена в рамках государственного задания МЗ РФ (от 28.01.2015) «Осуществление прикладных научных исследований, в том числе проведение доклинических исследований лекарственных средств и клинических исследований лекарственных препаратов».
Результаты и обсуждение. Сравнение суммарного содержания тиоловых групп плазмы крови у больных с показателем контроля группы показало относительно невысокую информативность теста. Сниженные значения этого показателя на 13,2 % были отмечены только в группе 3 (табл. 1) у больных с сочетанным течением хронического эндометрита с сальпингоофоритом до проведения лечения. Это затрудняет дифференциров-ку тяжести изученных заболеваний и может навести на ложное представление об отсутствии у больных некоторых групп нарушений функционирования тиолового звена антиоксидантной системы. Для повышения информативности исследования тиолового звена АОС плазмы крови было предложено определять содержание легкодоступных и труднодоступных SH-групп, а также рассчитывать их соотношение. В итоге была установлена тенденция к снижению при развитии патологического процесса фракции труднодоступных сульфгидрильных групп при увеличении доли фракции легкодоступных. Для большей наглядности установленных изменений был рассчитан коэффициент соотноше-
ния SHл/SHт, обозначенный К1. Показано статистически значимое увеличение этого коэффициента. У больных 2-й группы данный показатель был увеличен в 4 раза, у больных 3-й группы - в 1,8 раза, 4-й группы - в 4,1 раза, а у больных 5-й группы данный показатель не отличался от значений контроля (табл. 1). Таким образом, все
полученные результаты хорошо согласовывались с клиническими представлениями о течении изученных заболеваний, кроме данных 3-й группы, в которой были зафиксированы менее значительные отличия от контроля, однако было снижено содержание суммарных тиоловых групп.
Таблица 1
Показатели содержания фракций тиоловых групп в плазме крови у больных хроническим эндометритом, сальпингоофоритом при проведении стандартной терапии и на фоне антиоксидантной коррекции
Исследуемые группы Внесение Н2О2 Показатели, Me (р25; р75)
SHсумма, е.о.п.х100/г белка БИл, е.о.п.х100/г белка БИт, е.о.п.х100/г белка Кl(SИл/SHт), отн. ед.
1 (К) нет 0,53 (0,51;0,55) 0,13 (0,11;0,15) 0,39 (0,37;0,40) 0,34 (0,30;0,40)
да 0,44о (0,41;0,45) 0,12 (0,11;0,15) 0,3Ю (0,29;0,33) 0,39 (0,32;0,52)
2 (ХЭ) нет 0,53 (0,50;0,56) 0,30* (0,25;0,34) 0,24* (0,17;0,29) 1,36* (0,97;1,75)
да 0,30*,0 (0,27;0,36) 0,19*,0 (0,14;0,21) 0,12*,0 (0,10;0,16) 1,47* (0,99;2,02)
3 (ХЭС) нет 0,46*,л (0,44;0,48) 0,16*,л (0,14;0,19) 0,29* (0,26;0,32) 0,60*,л (0,46;0,72)
да 0,09*,л,0 (0,06;0,19) 0,09*,л,0 (0,03;0,11) 0 -
4 (ХЭС-Т) нет 0,53# (0,50;0,56) 0,32*,# (0,31;0,34) 0,22*,# (0,17;0,24) 1,38*,# (1,14;1,90)
да 0,12*,#,О (0,11;0,19) 0,12#,0 (0,11;0,13) 0 -
5 (ХЭС-А) нет 0,56# (0,53;0,56) 0,15 (0,14;0,18) 0,39# (0,38;0,41) 0,36# (0,36;0,51)
да 0,39#,О (0,36;0,44) 0,15# (0,14;0,18) 0,26*,#,0 (0,22;0,26) 0,67*,#,0 (0,53;0,67)
Примечание: * - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя группы 1; л - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя группы 2; # - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя группы 3; ◊ - статистически значимые различия (р<0,05) внутри одной группы между значениями показателей без пероксида водорода и с его внесением в тест-систему.
Кроме того, было предложено определять показатели тиолового метаболизма в плазме крови после воздействия раствора Н2О2 in vitro. При этом ожидаемо снижалось содержание общих тиоловых групп у всех испытуемых, но отличалась степень их окисляемости (О%). Отличалась и степень изменчивости коэффициентов K^SH^SH-,-). Было установлено, что О% при развитии заболеваний достоверно возрастает, что характеризует сниженную антипере-кисную активность и соответственно более низкую резистентность плазмы крови к воздействию проок-
сидантных факторов. В контрольной группе процент окисленных пероксидом водорода тиоловых групп составил всего 13,5 %, во второй группе он уже возрастал до 36,4 % (табл. 2). Максимальное значение рассматриваемого показателя было достигнуто в группе 3 - 79,7 %. В 4-й группе О% составил 77,1 %, в группе 5 - 25,5 %. Коэффициент соотношения БНл/ БНт при этом достоверно возрастал, что подтверждает характер перераспределения БН-групп в легко/ труднодоступной фракциях при окислительном повреждении белков.
Таблица 2
Интегральные показатели функционального состояния тиолового звена антиоксидантной системы плазмы крови больных хроническим эндометритом, сальпингоофоритом при проведении стандартной терапии и на фоне антиоксидантной коррекции
Исследуемые группы Показатели, Me (р25; р75)
Кl(SИл/SHт), отн. ед. О%, отн. ед. ИК, усл. ед.
1 (К) 0,34 (0,30; 0,40) 13,5 (12,2; 17,7) 1,06 (0,68; 1,77)
2 (ХЭ) 1,36 (0,97; 1,75)* 36,4 (33,0; 38,0)* 27,3 (11,7; 37,9)
3 (ХЭС) 0,60 (0,46; 0,72)*,л 79,7 (78,9; 93,7)*,л 62,2 (59,4; 74,3)*,Л
4 (ХЭС-Т) 1,38 (1,14; 1,90)*,# 77,1 (70,9; 79,7)* 143,9 (107,9; 165,9)*,#
5 (ХЭС-А) 0,36 (0,36; 0,51)# 25,6 (21,9; 35,1)*,# 3,8 (2,6; 7,2)*,#
Примечание: * - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя группы 1; л - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя группы 2; # - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя группы 3.
Для одновременной оценки соотношения фракций тиоловых групп и их окисляемости был предложен интегральный коэффициент, более полно отражающий функциональное состояние АОС. Интегральный коэффициент рассчитывали по формуле
ИК=(К-|/0,34)х(0%/13,5)2, (3)
Результаты расчета ИК представлены в таблице 2. Развитие хронического эндометрита сопровождалось увеличением ИК в 26 раз, а при сочетанном его течении с двусторонним сальпингоофоритом ИК возрастал еще более значительно - в 58 раз. Проведение стандартной терапии сопровождалось даль-
МЕДИЦИНСКИЙ ВЕСТНИК СЕВЕРНОГО КАВКАЗА
2018. Т. 13. № 2
MEDicAL NEws of NoRTH cAucAsus
2018. Vоl. 13. Iss. 2
нейшим увеличением по сравнению с 3-й группой больных в 2,3 раза, что, возможно, связано с истощением АОС, вовлеченной в поддержание адекватного функционирования системы неспецифической резистентности на фоне интенсивного восстановления организма. Это также указывает на перспективность медикаментозного поддержания звена системы неспецифической резистентности с помощью средств антиоксидантной направленности. И действительно, введение в состав комплексной терапии тиосульфата натрия с витаминами А и Е способствовало снижению ИК до значений всего в 3,6 раза выше контроля.
Для обоснования полученных результатов была проведена серия экспериментов на растворе альбумина, в которых было показано, что эффект, сопоставимый с действием на плазму крови 1,8х10-4 % раствора пероксида водорода, достигается при воздействии на раствор альбумина 1,8х10-5 % раствора Н2О2, что свидетельствует о наличии в плазме крови других факторов, которые достаточно быстро и эффективно нейтрализуют используемый окислитель (табл. 3). Поэтому расчет окисляемости тиоловых групп оправдан с целью оценки общей антиперекис-ной активности плазмы крови. Кроме того, возрастало соотношение SHл/SHт в растворе альбумина, подтверждающее полученные результаты перераспределения тиоловых групп по фракциям в плазме
крови при окислительном повреждении, что наблюдается и при развитии исследуемых заболеваний. Однако рост К! имел определенные ограничения и наблюдался до группы 3 (в 2,1 раза), а затем стабилизировался. Между тем увеличение О% было непрерывным и составило в группе 2 - 6,8 %, в группе 3 - в 3 раза до 20 %, в группе 4 еще в 2 раза, достигая 40 %, и, наконец, в группе 5 возрастал еще в 1,5 раза - до 60 %. В итоге были получены следующие значения ИК для модельных растворов альбумина: в группе 2 - 0,33, в группе 3 коэффициент возрастал в 11,2 раза, в группе 4 - еще в 3,2 раза и в группе 5 показатель увеличивался еще в 2,2 раза. Анализ позволяет сделать вывод, что внесение пероксида водорода в концентрации 6х10-6 % является достаточно слабым прооксидантным фактором, однако уже значительно модифицирующим структуру молекулы альбумина. Увеличение концентрации Н2О2 в три раза соответственно в три раза увеличивало и количество окисленных SH-групп. В дальнейшем при увеличении концентрации Н2О2 еще в 3,3 раза Ик возрастал в 3,2 раза в 4-й группе и при очередном увеличении концентрации вносимого в тест-систему пероксида водорода в 3 раза ИК возрастал еще в 2,2 раза. Таким образом, ИК при значениях выше 1 адекватно отражал степень окислительных повреждений альбумина.
Таблица 3
Изменение различных показателей тиоловых групп при моделировании окислительного повреждения белков на растворе человеческого сывороточного альбумина
Исследуемые группы Показатели, (M±a)
SHсумма, е.о.п.х100/г белка Ki (SI-WSHt), отн. ед. О%, отн. ед. ИК, усл. ед.
1 (А) 0,644±0,025 0,42±0,02 0 0
2 (А/6х10-6 %Н2О2) 0,600±0,023* 0,72±0,03* 6,83±0,27* 0,33±0,02*
3 (А/1,8х10-5 %Н2О2) 0,513±0,019*Л 0,90±0,04*л 20,34±0,84*л 3,68±0,17*Л
4 (А/6х10-5 %Н2О2) 0,386±0,020*# 0,75±0,03*# 40,06±2,13*# 11,90±0,62*#
5 (А/1,8х10-4 %Н2О2) 0,256±0,016*о 0,72±0,04* 60,25±5,12*о 25,84±1,41*о
Примечание: * - статистически значимые отличия (р<0,05) от показателя группы 1; л - статистически значимые различия (р<0,05) показателей групп 2 и 3; # - статистически значимые различия (р<0,05) показателей групп 3 и 4; о - статистически значимые различия (р<0,05) показателей групп 4 и 5; А - раствор человеческого сывороточного альбумина.
Проведенные исследования показали при развитии патологического процесса увеличенное содержание фракции легкодоступных при сниженном содержании труднодоступных БН-групп по сравнению с контрольной группой. Такой эффект можно объяснить несколькими причинами. Во-первых, может увеличиваться скорость реакции труднодоступных тиоловых групп белков с реактивом Эллмана, так как первые его порции не расходуются на взаимодействие с поверхностными БН-группами. Таким образом, бывшие медленно реагирующие БН-группы переходят в разряд быстро реагирующих. Однако объяснить всё кинетическими параметрами не удается: скорость реакции не была бы такой медленной в условии избытка реагента - реакция с белками плазмы крови продолжается в течение 30 минут, а быстро реагирующими мы условно считаем тиоловые группы, прореагировавшие в течение первых 3 минут. Реакция с низкомолекулярными тиолами заканчивается за считанные секунды, а в молекуле белка лимитирующей стадией
Литература/References
1. Веревкина И. В., Точилкин А. И., Попова Н. А. Колориметрический метод определения БН-групп и ББ-связей в белках при помощи 5,5-дитиобис(2-нитробензойной) кислоты. Современные методы в биохимии : сб. науч. тр. М. : Медицина, 1977. [Verevkinа I. V., ТосЬн!кт А. I.,
является диффузия дитиобиснитробензойной кислоты к частично экранированным остаткам цисте-ина внутри трехмерной структуры макромолекулы. В связи с ведущим влиянием стерических факторов на скорость данной реакции основным механизмом изменения соотношения фракций тиоловых групп мы предполагаем конформационные перестройки молекул, ведущие к частичному ее «выворачиванию» при окислении поверхностных SH-групп.
Заключение. Анализ эффективности проводимой терапии у больных хроническим эндометритом с двусторонним сальпингоофоритом по данным предложенных нами показателей состояния тиолового звена антиоксидантной системы плазмы крови показал наибольшую эффективность введения тиосульфата натрия и витаминов А и Е в дополнение к стандартной терапии. У больных без применения антиоксидантов показатели тиолового метаболизма после лечения имели слабые тенденции к восстановлению нормальных значений.
Popova N. A. Kolorimetricheskiy metod opredeleniya SH-grupp i SS-svyazey v belkakh pri pomoshchi 5,5-ditiobis(2-nitrobenzoynoy) kisloty. V sb.: Orekhovich V.N. red. Sovre-mennye metody v biokhimii. M.: Meditsina, 1977. (In Russ.)].
2. Торчинский Ю. М. Сульфгидрильные и дисульфидные группы белков. М. : Наука, 1971. [Torchinskiy Yu. M. Thi-
ol and disulfide groups of proteins. M.: «Nauka», 1971. (In Russ.)].
3. Giustarini D., Galvagni F., Colombo G., Dalle-Donne I., Milzani A., Aloisi A.M., Rossi R. Determination of protein thiolation index (PTI) as a biomarker of oxidative stress in human serum. Anal. Biochem. 2017;538:38-41. https:// doi.org/10.1016/j.ab.2017.09.010
4. Брайнина Х. З., Харина Г. В., Захарчук Н. Ф., Иванова А. В., Ходос М. Я. Определение низкомолекулярных тиолов и дисульфидов в цельной крови и ее фракциях. Вестник Уральской медицинской академической науки. 2009;23(1):31-38. [Braynina Kh. Z., Kharina G. V., Zakharchuk N. F., Ivanova A. V., Khodos M. Ya. Determination of low-molecular thiols and disulfides in whole blood and its fractions. Vestnik Ural'skoy meditsinskoy akade-micheskoy nauki. - Bulletin of the Ural Medical Medical Science. 2009;23(1):31-38. (In Russ.)].
5. Camera E., Picardo M. Analytical methods to investigate glutathione and related compounds in biological and pathological processes. J. Chromatogr. B. Analyt. Tech-nol. Biomed. Life Sci. 2002;781(1-2):181-206.
6. Дыдышко Е. И., Охременко О. С., Левичкин В. Д. Динамика показателей иммуноантиоксидантного статуса у пациентов с гипотиреозом на фоне ТЭС-терапии. Кубанский научный медицинский вестник. 2014;4:50-54. [Dydyshko E. I., Okhremenko O. S., Levichkin V. D. Dynamics of indicators immunobiosensor status in patients with hypothyroidism on the background of TES therapy. Kubanskij nauchnyj medicinskij vestnik. - Kuban scientific medical bulletin. 2014;(4):50-54. (In Russ.)].
7. Нагоев Б. С., Камбачокова З. А. Состояние неспецифической резистентности организма у больных с генитальным герпесом. Клиническая лабораторная
10.
11
диагностика. 2011;(1):18-20. [Nagoyev B. S., Kamba-chokova Z. A. State of nonspecific resistance of the body in patients with genital herpes. Klinicheskaya laborator-naya diagnostika. - Russian Clinical Laboratory Diagnostics. 2011;(1):18-20. (In Russ.)].
Сыромятникова Е. Д., Грызунов Ю. А., Добрецов Г. Е., Ильяшенко К. К. Новые диагностические алгоритмы в раннем периоде острых отравлений психотропными препаратами. Клиническая лабораторная диагностика. 2014;59(12):25-28. [Syromiatnikova E. D., Gryzu-nov Yu. A., Dobretsov G. E., Il'yashenko K. K. New diagnostic algorithms in the early period of acute poisoning with psychotropic drugs. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. - Russian Clinical Laboratory Diagnostics. 2014;59(12):25-28. (In Russ.)].
Ющук Н. Д., Ахмедова М. Д., Васюк Ю. А. Диагностическое значение тиолсульфидного звена антиокси-дантной системы при бруцеллезе. Клиническая лабораторная диагностика. 2009;(7):10-11. [Yushchuk N. D., Akhmedova M. D., Vasyuk Yu. A. Diagnostic value of thi-ol-sulfide component of antioxidant system in brucellosis. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. - Russian Clinical Laboratory Diagnostics. 2009;7:10-11. (In Russ.)]. Ghezzi P., Bonetto V., Fratelli M. Thiol-disulfide balance: from the concept of oxidative stress to that of redox regulation. Antioxidants & Redox Signaling. 2005;7(7-8):964-972. https://doi.org/10.1089/ars.2005J.964 Камышников В. С. Справочник по клинико-биохими-ческим исследованиям и лабораторной диагностике. М. : МЕДпресс-информ, 2004. [Kamyshnikov V. S. Handbook of clinical and biochemical studies, and laboratory diagnosis. Moscow: «MEDpress-inform», 2004. (In Russ.)].
Сведения об авторах:
Быков Илья Михайлович, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, зав. кафедрой фундаментальной и клинической биохимии; тел.: 89182125530; e-mail: ilya.bh@mail.ru
Попов Константин Андреевич, ассистент; тел.: 89288824941; e-mail: naftalin444@mail.ru
Егорова Инна Анатольевна, соискатель; тел.: 89615817511; e-mail: inna5200@yandex.ru
Сторожук Александр Петрович, доктор медицинских наук, профессор; тел.: 89182125530; e-mail: ilya.bh@mail.ru
© Коллектив авторов, 2018 УДК 611.018.63-092.9
DOI - https://doi.org/10.14300/mnnc.2018.13063 ISSN - 2073-8137
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ДЕЦЕЛЛЮЛЯРИЗАЦИИ СЕРДЦА НИЗШИХ ПРИМАТОВ. МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА МАТРИКСА
А. С. Сотниченко \ Е. А. Губарева \ Е. В. Куевда \ И. С. Гуменюк \ Р. З. Накохов \ С. В. Орлов 2
1 Кубанский государственный медицинский университет, Краснодар, Россия
2 Научно-исследовательский институт медицинской приматологии, Сочи, Адлер, Россия
DEVELOPMENT OF NON-HUMAN PRIMATES HEART DECELLULARIZATION METHOD. MORPHOLOGICAL EVALUATION OF MATRIX
Sotnichenko A. S. 1, Gubareva E. A. 1, Kuevda E. V. 1, Gumenyuk I. S. 1, Nakohov R. Z. 1, Orlov S. V. 2
1 Kuban State Medical University, Krasnodar, Russia
2 Research Institute of medical Primatology, Sochi, Adler, Russia
Одно из направлений тканевой инженерии - разработка методик создания биоинженерных каркасов внутренних органов, сходных по основным биологическим характеристикам с нативными органами. Цель исследования - описать модифицированный детергент-энзиматический протокол с применением дезоксихолата натрия и ДНКазы для
