CC BY
12
УДК 612.127.2:616.61 - 006
ОЦЕНКА ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНОЙ АКТИВНОСТИ МОНОЦИТОВ НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ
ПОЧЕЧНО-КЛЕТОЧНОГО РАКА1
В. Н. Кощеев, А. В. Мошев, В. Д. Беленюк, И. И. Гвоздев
Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера СО РАМН
В статье описано применение хемилюминесцентного анализа для оценки функциональной активности различных субпопуляций моноцитов в динамике развития почечно-клеточного рака, на основании результатов которого удалось обнаружить ряд качественных изменений активности исследованных субпопуляций.
Ключевые слова: хемилюминесценция, иммунитет, рак почки, активные формы кислорода, метаболизм, моноциты.
Введение
На десятом месте в ряде стран мира в структуре заболеваемости злокачественными опухолями стоит рак почки, который составляет 3 % от всех злокачественных опухолей у взрослого населения планеты [1].
Лечение больных почечно-клеточным раком (ПКР) по-прежнему является одним из приоритетных направлений клинической онкоурологии. Так, в 10-15 % случаев при первичном обращении обнаруживаются отдалённые метастазы, что в значительной степени снижает вероятность благоприятного исхода. Частота заболеваемости среди мужчин в 1,5 раза выше, чем среди женщин, пик заболеваемости приходится на возрастной промежуток 60-70 лет.
В 2008 г. в России диагностированы 17 653 больных ПКР, при этом показатель смертности от этого заболевания достиг 8 370. По темпам прироста в нашей стране ПКР занимает первое место (41,35 %) в общей популяции, второе место (42,94 %) после рака предстательной железы у мужчин.
Существующие методы лечения онкологических заболеваний, такие как хирургическое вмешательство, химиотерапия и лучевая терапия, не способны в полной мере охватить все звенья патологического процесса. Следовательно, включение в процесс лечения методик, основанных на иммунобиологической терапии, может в значительной степени увеличить вероятность благоприятного исхода и улучшить качество жизни онкологических больных [2].
ПКР - иммуногенная опухоль, что позволяет изучать особенности функционально-метаболического состояния клеток иммунной системы при данном заболевании [3].
Особый интерес вызывает изучение моноцитарно-макрофагальной системы при данном заболевании, так как моноциты, эмигрируя в ткани, дифференцируются в макрофаги и дендритные клетки, которые участвуют в противоопухолевом иммунитете, действуя на опухолевые клетки, вырабатывая активные формы кислорода (АФК), а также активируют клеточный иммунитет [4].
В настоящее время известно, что популяция моноцитов неоднородна. По уровню поверхностной экспрессии корецепторалипопололисахарида CD14 и CD16 принято выделять три субпопуляции моноцитов: CD14+СБ16-, CD14lowCD16+, которые выполняют в организме различные функции. Субпопуляция CD14+CD16+ обладает ограниченной способностью к респираторному взрыву и фагоцитозу, однако активно продуцирует провоспалительные цитокины (ТОТа, ГЬ-1р, ГЬ-6). Благодаря этим особенностям моноциты CD14+CD16+ называют провоспалительными. Наиболее многочисленная субпопуляция CD14+CD16- (90-95 % всех моноцитов крови) характеризуется активной продукцией хемокинов (ГЬ-8, ССЬ2, ССЬ3), выраженной фагоцитарной и противомикробной активностью, но для этих клеток типичен низкий синтез провоспалительных цитокинов. Моноциты с фенотипом CD14lowCD16+ обладают повышенной тропностью к эндотелию и высокой миграционной активностью. В ответ на стимуляцию эти клетки демонстрируют низкую фагоцитарную и проти-вомикробную активность, слабый синтез провоспалительных цитокинов, однако конститутивно продуцируют ГЬ-ЖА, и в этой связи
профиль CD14lowCD16+ моноцитов иногда называют антивоспалительным [5].
В литературных источниках часто встречаются данные о наличии у моноцитов и макрофагов киллинговой способности в отношении опухолевых клеток, а также о наличии у них свойства поддерживать опухолевый рост. В этом процессе участвуют резидентные CD16 , в частности
CD14lowCD16+ моноциты. Они продуцируют биологически активную форму гормона кортизола - тетрагидрокортизола, который в комплекс с АпоА1 с ЛПВП3 стимулирует деление опухолевых клеток, ангиогенез и вызывает иммуносупрессию [6].
Для дифференциальной оценки уровня продукции моноцитами первичных и вторичных АФК использовали люцегинин- и люминолзависимый хемилюминесцентный анализ. Люцигенин окисляется и люминесцирует под влиянием преимущественно супероксидного аниона и опосредованно отражает активность НАДФ(Н)-оксидазы, а люминол в свою очередь легко окисляется при действии АФК, таких как 02, ОН-, 02-, Н202, N0, а также НОО-, возникающих при активации миелопероксидазы [7]. Гетерогенность клеточной популяции моноцитов по фенотипу входящих в неё клеток определяли методом проточной цитофлюориметрии.
1 Работа выполнена при финансовой поддержке КГАУ «Красноярский краевой фонд поддержки научной и научно-технической деятельности».
Таким образом, целью данного исследования являлось изучение уровней продукции первичных и вторичных АФК моноцитами крови и их субпопуляционного состава у больных ПКР на разных стадиях заболевания. Материалы и методы
На базе урологического отделения Красноярского краевого клинического онкологического диспансера им. А. И. Крыжановского обследованы 60 больных ПКР в возрасте 40-60 лет в период до выполнения радикальной нефрэктомии. У всех наблюдаемых пациентов диагноз РП подтверждён гистологически. Контрольную группу составили 40 здоровых доноров.
Моноциты периферической крови получали стандартным методом адгезии к плоским поверхностям из мо-нонуклеарных клеток, выделенных из гепаринизированной венозной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл-урографина (р = 1,077 г/см3). Исследование спонтанной и индуцированной хемилюминес-ценции (ХЛ) моноцитов периферической крови проводили по методу DеSоlеetаl. (1983). Пробы включали 200 мкл моноцитарной взвеси (1 млн/мл), 20 мкл донорской сыворотки (AB(IV) (Rhl-)), 240 мкл раствора Хен-кса (без фенолового красного) и 50 мкл люминола или 50 мкл люцигенина (100 мкг/мл, «Sigma»). Проба индуцированной ХЛ содержала 200 мкл раствора Хенкса и 40 мкл опсонизированного зимозана (2 мг/мл, «Sigma»). Затем пробы помещали в хемилюминесцентный анализатор «CL3606M» (СКТБ «Наука», Красноярск) и в течение 90 мин. оценивали спонтанную и индуцированную ХЛ-реакцию. Результаты ХЛ-анализа оценивали по таким параметрам, как время выхода на максимум интенсивности ХЛ, максимальное значение интенсивности ХЛ и площади под ХЛ-кривой. Усиление ХЛ, индуцированной зимозаном, оценивали по соотношению площади индуцированной к площади спонтанной и определяли как индекс активации [8].
Исследование фенотипа моноцитов крови проводили методом проточной цитометрии с использованием различных моноклональных антител (BeckmanCoulter, USA). Анализ окрашенных клеток проводили на проточном цитофлуориметре FC-500 (BeckmanCoulter, USA) [9].
Все исследования выполнены с информированного согласия испытуемых и в соответствии с этическими нормами Хельсинской Декларации (2001).
Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета прикладных программ «Statistica 7.0» (StatSoft, Inc., USA). Выборку описывали с помощью подсчёта медианы и интерквартильного размаха в виде 25 и 75 процентилей. Проверку гипотезы о статистической достоверности величин исследуемых показателей проводили с помощью критерия Манна-Уитни. Результаты
Показатели субпопуляционного состава моноцитов у больных ПКР третьей стадии значительно отличаются от условно здоровых лиц и больных ПКР первой стадии заболевания. В ходе исследований были зафиксированы снижение содержания в крови CD14+CD16+ моноцитов (p < 0,05) и резкое повышение CD14+CD16+ моноцитов (p < 0,05) по сравнению с контрольной группой. Увеличение содержания моноцитов с фенотипом CD14+CD16+ (провоспалительных моноцитов) свидетельствует о том, что в организме больных ПКР третьей стадии происходит активация воспалительных иммунных процессов. Также отмечено уменьшение количества моноцитов CD14+CD16+, несмотря на высокий уровень провоспалительных цитокинов.
Исследование люцегинин-зависимой хемилюминесценции показало увеличение функциональной активности моноцитов, выраженное в повышении интенсивности суммарной продукции супероксидного анион-радикала и ускорении его выхода во внеклеточное пространство, в группе с первой стадией ПКР относительно контроля (p < 0,05). Исследование люминол-зависимой хемилюминесценции достоверных отличий не выявило.
Исходя из того, что люцигенин не способен проникать через цитоплазматическую мембрану, можно предположить, что на мембранах моноцитов больных ПКР повышается активность НАДФН-оксидазы. Заключение
Таким образом, результаты проведённых исследований показали, что моноциты крови здоровых доноров и больных ПКР реагируют увеличением функциональной активности. С помощью метода люцигенин-зависимой ХЛ установлено, что у больных ПКР на мембране моноцитов активирован ферментативный комплекс НАДФН-оксидазы, тогда как уровень синтеза вторичных форм кислорода не отличается от контрольного диапазона. При исследовании субпопуляционного состава моноцитов были обнаружены значительные изменения субпопуляций в группе ПКР третьей стадии в отличии от ПКР первой и второй стадий.
Библиографический список
1. Галеев, Р. Х. Двусторонние опухоли и опухоли единственной функционирующей почки при поражении другой неонкологическим заболеванием / Р. Х. Галеев, Д. Д. Хамитов // Онкоурология. - 2011. - № 3. - C. 42-47.
2. Лесовой, В. Н. Современная иммунотерапия прогрессирующего почечно-клеточного рака / В. Н. Лесовой, П. В. Мозжаков // Международный медицинский журнал. - 2003. - N° 3. - С. 26-28.
3. Матвеева, В. Г. Особенности поверхностной экспрессии активирующих рецепторов врождённого иммунитета на субпопуляциях моноцитов / В. Г. Матвеева, А. С. Головкин, М. Н. Чернова // Медицинский академический журнал. - 2012. - № 3. - С. 87-89.
4. Ярилин, А. А. Иммунология / А. А. Ярилин. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 752 с.
5. Cros, J. Human CD14dim monocytes patrol and sense nucleic acids and viruses via TLR7 and TLR8 receptors / J. Cros, N. Cagnard, K. Woollard [et al.] // Immunity. - 2010. - V. 33. - № 3. - Р. 375-386.
6. Панин, Л. Е. Роль резидентных макрофагов в механизме клеточной пролиферации и опухолевого роста / Л. Е. Панин // Бюллетень сибирской медицины. - 2008. - Приложение 3. - С. 5-11.
7. Крюков, А. А. Генерация активных форм кислорода в моноцитах при адгезии к стеклу / А. А. Крюков, Г. Н. Семенкова, С. Н. Черенке-вич // Цитология. - 2006. - Т. 48. - № 2. - С. 2-12.
8. Шкапова, Е. А. Показатели люцигенин- и люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофилов крови у больных раком почки / Е. А. Шкапова, Л. М. Куртасова, А. А. Савченко // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010. - Т. 149. - № 2. -С. 239-241.
9. Хайдуков, С В. Подходы к стандартизации метода проточной цитометрии для иммунофенотипирования. Настройка цитометров и подготовка протоколов для анализа / С. В. Хайдуков // Медицинская иммунология. - 2007. - Т. 9. - N° 6. - С. 569-574.
© Кощеев В. Н., Мошев А. В., Беленюк В. Д., Гвоздев И. И., 2014
УДК 159.9
ПОКАЗАТЕЛИ ЛИЧНОСТНОГО АДАПТАЦИОННОГО ПОТЕНЦИАЛА ВОЕННОСЛУЖАЩИХ, ПРОХОДЯЩИХ ВОЕННУЮ СЛУЖБУ ПО ПРИЗЫВУ В ТЕЧЕНИЕ ОДНОГО ГОДА, НА НАЧАЛЬНОМ И ЗАВЕРШАЮЩЕМ ЭТАПАХ СЛУЖБЫ
М. В. Кулакова, Е. Н. Власова
Хакасский государственный университет им. Н. Ф. Катанова
В статье рассматриваются особенности динамики адаптационного потенциала военнослужащих, проходящих срочную службу по призыву в течение одного года, на начальном и завершающем этапах службы.
Ключевые слова: адаптация, адаптивность, адаптационный потенциал, военные срочной службы.
Механизмы и закономерности изменений физиологической, эмоциональной, познавательной и поведенческой сфер военнослужащих при попадании их в специфические условия несения службы привлекают внимание представителей многих научных областей, например, социологии, физиологии, медицины, а также психологии.
В психологии особое внимание уделяется процессу психофизиологической и социально-психологической адаптации военнослужащих к условиям военно-профессиональной деятельности. Данный процесс является многоэтапным и разносторонним, так же как и условия службы, которые предъявляют достаточно жёсткие требования к личности молодого человека, призванного на военную службу, могут быть различны.
В некоторых психологических исследованиях ситуацию военной службы по призыву относят к экстремальным условиям (Пепелев, 2001), связывая это с тем, что личность попадает в изменённые условия, где предъявляются повышенные требования к психологической устойчивости. Причины экстремальности в данной ситуации таковы: переход людей из свободного состояния на военную службу; расставание с семьёй; отказ от привычек, приобретённых ранее; отвращение и неприязнь к военной службе; страх наказания. Однако отмечается, что экстремальность данных условий не связана с риском для жизни и здоровья, а возникает вследствие перехода в непривычные условия.
В исследовании процесса социально-психологической адаптации военнослужащих рядового состава посредством опроса юношей призывного возраста и военнослужащих на начальных этапах службы А. С. Кислицына (2010) выделяет стресс-факторы, которые воздействуют на личность солдата в процессе службы. Главные из них - ограничение свободы, беззащитность, напряжённая и опасная деятельность и т. д. Это позволяет автору определить условия срочной службы в армии как модель трудной жизненной ситуации [1].
При поступлении на военную службу по призыву юноши переживают этап острых психических реакций (первичная дезадаптация или дестабилизация), на котором личность начинает испытывать на себе влияние психогенных факторов измененных условий существования: длится этот этап от трёх до пяти месяцев нахождения в воинской части. Далее наступает стадия «формирования адаптации», которая составляет до двенадцати месяцев военной службы. Стабилизация процесса адаптации наступает только в последние шесть месяцев службы, т. е. от полутора лет до конца службы [3].
В сложившихся социально-экономических условиях страны срок военной службы был сокращён до одного года. Вследствие этого, выделенные стадии адаптации военнослужащих не могут быть перенесены на солдат последних лет призыва и применены для понимания механизмов адаптационных трудностей в условиях срочной службы в течение одного года. Это отмечает Д. А. Ситмбетов (2011) в своём исследовании функционального состояния организма и заболеваемости солдат срочной службы, говоря о том, что у военнослужащих одного года службы стадия дестабилизации затягивается до девяти месяцев. Предположительно это связано с тем, что теперь военные срочной службы за более короткое время должны усвоить программу военно-профессиональной подготовки в прежнем объёме.
В основе успешности процесса психологической адаптации лежат адаптационные способности, или так называемый адаптационный потенциал личности, во многом детерминирующие его успешность.
В психологии адаптационный потенциал рассматривается по отношению к анализу свойств личности, которые определяют успешность процесса адаптации в различных видах деятельности (профессиональной, социокультурной среде, экстремальных условиях, в том числе и военной службе). В отечественной науке выделяются неодинаковые структурные компоненты адаптационного потенциала (Коновалова, 2000; Маклаков, 2001; Посо-хова, 2001 и др.), в том числе и в исследованиях, направленных на изучение процесса психофизиологической и социально-психологической адаптации военнослужащих различных категорий (проходящих военную службу
