CC BY
20
УДК 576.532
ФЕНОТИПИЧЕСКИЙ СОСТАВ МОНОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ПОЧКИ
А. В. Мошев, В. Д. Беленюк, И. И. Гвоздев
Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера Сибирского отделения РАМН
В статье представлены результаты исследования особенностей фенотипического состава моноцитов у больных почечно-клеточным раком (ПКР). Обследовано 73 больных ПКР (Т3N0М0, светлоклеточный тип). Исследование фенотипа моноцитов проводили методом проточной цитометрии. Отмечается, что изменения в субпопуляционном составе моноцитов при ПКР определяются увеличением количества клеток с фенотипом CD14lawCD16+ («неклассические»). Установлен дисбаланс в экспрессии активационных маркёров на моноцитах онкологических больных: снижается количество моноцитов, экспрессирующих HLA-DR-антиген, и повышается число клеток с экспрессией CD64.
Ключевые слова: онкологические изменения, почечно-клеточный рак, моноциты.
Введение. Злокачественные новообразования являются одной из основных причин смерти и инвалидизации населения развитых, а в последние годы и развивающихся стран. Экономические потери связаны со значительными затратами на социальное обеспечение и страхование в связи с высокой стоимостью лечения, профилактических и реабилитационных мероприятий, длительной, часто необратимой утратой трудоспособности. В 2013 году в России было выявлено 535 887 новых случаев злокачественного новообразования (54,2 % у женщин, 45,8 % у мужчин), что на 15,0 % больше по сравнению с 2003 годом (455 375), из них 20 892 случая рака почки (3,9 %) [1; 2; 3].
ПКР - иммуногенная опухоль, что позволяет изучать особенности функционально-метаболического состояния клеток иммунной системы при данном заболевании.
Особый интерес вызывает изучение моноцитарно-макрофагальной системы при данном заболевании, так как моноциты, эмигрируя в ткани, дифференцируются в макрофаги и дендритные клетки, которые участвуют в противоопухолевом иммунитете, действуя на опухолевые клетки, вырабатывая активные формы кислорода (АФК), а также активируют клеточный иммунитет [2; 4].
В настоящее время известно, что популяция моноцитов неоднородна. Дифференцировать субпопуляции моноцитов возможно по наиболее значимым поверхностным маркёрам [5; 6].
По уровню поверхностной экспрессии CD14 и CD16 принято выделять три субпопуляции моноцитов: CD14+CD16", CD14+CD16+ и CD14lowCD16+, которые выполняют в организме различные функции. Субпопуляция CD14+CD16+ обладает ограниченной способностью к респираторному взрыву и фагоцитозу, однако активно продуцирует провоспалительные цитокины (ТОТа, ^-1р, ^-6). Благодаря этим особенностям моноциты CD14+CD16+ называют провоспалительными. Наиболее многочисленная субпопуляция CD14+CD16" (90-95 % всех моноцитов крови) характеризуется активной продукцией хемокинов (ГЬ-8, С^2, С^3), выраженной фагоцитарной и противомикробной активностью, но для этих клеток типичен низкий синтез провоспалительных цитокинов. Моноциты с фенотипом CD14lowCD16+ обладают повышенной тропностью к эндотелию и высокой миграционной активностью. В ответ на стимуляцию эти клетки демонстрируют низкую фагоцитарную и противомикробную активность, слабый синтез провоспалитель-ных цитокинов, однако конститутивно продуцируют ^-ША, и в этой связи профиль CD14lowCD16+ моноцитов иногда называют антивоспалительным [5].
Функциональная активность моноцитов (в том числе и при опухолевом росте) осуществляется исходя из их количества и субпопуляционного состава в периферической крови. Субпопуляция «классических» моноцитов представлена крупными клетками с высоким уровнем фагоцитарной активности. Для данной субпопуляции характерны повышенный уровень экспрессии CCR2, CD36, CD64, CD62L и низкий уровень синтеза фактора некроза опухоли-а и интерлейкина-1, а также высокая активность ферментов, осуществляющих «респираторный взрыв» [5; 6]. «Неклассические» моноциты определяются как сравнительно небольшие клетки с низкой фагоцитарной и оксидазной активностью и, соответственно, с пониженным уровнем «респираторного взрыва». На их поверхности хорошо представлены CX3CR1, CD11c и HLA-DR, тогда как CD62L и CD64 практически отсутствуют. «Промежуточный» тип моноцитов определяется как «провоспалительный» в связи с активной продукцией провоспалительных цитокинов - Т№а, ГЬ-1р, ГЬ-6, на поверхности этих клеток HLA-DR, CD36 и CD64 представлены на высоком уровне [5; 6; 7].
Материалы и методы. Наше исследование проводилось на базе КГБУЗ «Красноярский краевой клинический онкологический диспансер имени А. И. Крыжановского». Были обследованы больные ПКР (Т3М0М0, светлоклеточный тип) в возрасте 40-55 лет до хирургического лечения (п = 73). Диагноз ПКР у всех больных верифицирован гистологически. В качестве контрольной группы было обследовано 83 практически здоровых людей аналогичного возрастного диапазона.
Исследование фенотипа моноцитов крови проводили методом проточной цитометрии на основе применения прямой иммунофлуоресценции цельной периферической крови с использованием моноклональных антител (BeckmanCoulter, USA), меченных FITC (fluoresceinisothiocyanate), PE или RD1 (phycoerythrin), ECD (phycoerythrin-TexasRed-X), PC5 (phycoerythrin-cyanin 5) и PC7 (phycoerythrin-cyanin 7) в следующей панели: HLA-DR-FITC/CD14-PE/CD45-ECD/CD64-PC5/CD16-PC7. Пробоподготовку осуществляли по стандартной методике [9; 10]. Лизис эритроцитов проводили по безотмывочной технологии с использованием реагента VersaLyse (BeckmanCoulter, США). Анализ окрашенных клеток проводили на проточном цитофлуориметре FC-500 (BeckmanCoulter, USA) [9]. В каждой пробе анализировали не менее 50 000 моноцитов.
Статистический анализ осуществляли в пакете прикладных программ Statistica 8.0 (StatSoftInc., 2007). Описание выборки производили с помощью подсчёта медианы (Ме) и интерквартального размаха в виде 25 и 75 процентилей (С25-С75). Достоверность различий между показателями независимых выборок оценивали по непараметрическому критерию Манна-Уитни. Достоверность различий в динамике лечения определяли по критерию Wilcoxon.
Результаты исследований. В результате проведения цитометрического анализа обнаружено, что у больных ПКР в периферической крови количество CD14+CD16- и CD14+CD16+моноцитов не отличается от уровня контрольной группы (табл. 1).
В то же время процентное и абсолютное содержание CD14lowCD16+ моноцитов повышено. У больных ПКР в периферической крови снижено относительное количество моноцитов, экспрессирующих HLA-DR-рецептор, но повышено процентное и абсолютное содержание моноцитов с экспрессией CD64. При этом уровень HLA-DR+CD64+моноцитов в крови больных ПКР снижен относительно контрольного уровня. Выявляются особенности в экспрессии активационных маркёров моноцитами крови у больных ПКР. Так, при ПКР в периферической крови больных повышается количество моноцитов, экспрессирующих CD64, но снижается содержание клеток с экспрессией HLA-DR и фенотипом HLA-DR+CD64+.
Таблица 1
Фенотипический состав моноцитов у больных ПКР (Ме (Q1 - Q3))
Показатели Контроль (n = 83) ПКР (n = 73) Р
Моноциты, 109/л 0,44 (0,35-0,56) 0,45 (0,34-0,63)
CD14+CD16-, % 33,9 (16,2-52,2) 35,1 (19,7-49,8)
CD14+CD16-, 109/л 0,15 (0,04-0,23) 0,13 (0,09-0,20)
CD14+CD16+, % 37,9 (19,5-59,8) 33,2 (24,5-51,5)
CD14+CD16+, 109/л 0,14 (0,05-0,25) 0,15 (0,09-0,26)
CD14lowCD16+, % 5,7 (3,9-10,1) 7,9 (5,0-11,2) 0,023
CD14lowCD16+, 109/л 0,02 (0,01-0,04) 0,03 (0,02-0,05) 0,033
HLA-DR+, % 88,0 (83,3-92,2) 83,0 (74,9-88,2) 0,007
HLA-DR+, 109/л 0,36 (0,28-0,45) 0,37 (0,27-0,49)
CD64+, % 87,8 (81,8 -92,8) 89,3 (85,1-94,5) 0,036
CD64+, 109/л 0,39 (0,31 -0,47) 0,35 (0,25-0,46) 0,001
HLA-DR+CD64+, % 87,9 (72,2 -98,9) 73,8 (58,4-79,8) < 0,001
HLA-DR+CD64+, 109/л 0,35 (0,29 -0,46) 0,29 (0,21-0,40)
Заключение. В целом, исходя из особенностей фенотипического состава моноцитов в периферической крови больных ПКР, можно заключить, что почечноклеточный рак влияет на изменение субпопуляционного состава моноцитов и уровень экспрессии ими активационных антигенов.
Библиографический список
1. Аполихин, О. И. Анализ урологической заболеваемости в Российской Федерации в 2005-2010 годах / О. И. Аполихин, А. В. Сивков, Т. В. Солнцева [и др.] // Экспериментальная и клиническая урология. - 2012. - № 2. - С. 4-12.
2. Куртасова, Л. М. Клинические аспекты функциональных нарушений нейтрофильных гранулоцитов при онкопатологии / Л. М. Куртасо-ва, А. А. Савченко, Е. А. Шкапова. - Новосибирск: Наука, 2009. -184 с.
3. Савченко, А. А. Основы клинической иммунометаболомики / А. А. Савченко, А. Г. Борисов - Новосибирск: Наука, 2012. - 263 с.
4. Ахматова, Н. К. Врожденный иммунитет: противоопухолевый и противоинфекционный / Н. К. Ахматова, М. В. Киселевский. - М.: Практическая медицина, 2008. - 256 с.
5. Головкин, А. С. Субпопуляции моноцитов крови при неосложненном течении периоперационного периода коронарного шунтирования / А. С. Головкин, В. Г. Матвеева, И. В. Кудрявцев [и др.] // Медицинская иммунология. - 2012. - Т. 14. - № 4-5. - С. 305-312.
6. Appleby, L. J.Sources of heterogeneity in human monocyte subsets / L. J. Appleby, N. Nausch, N. Midzi [et al.] // Immunol. Lett. - 2013. -Vol. 152. - №. 1. - P. 32-41.
7. Hristov, M. A flow cytometric protocol for enumeration of endothelial progenitor cells and monocyte subsets in human blood / M. Hristov, S. Schmitz, F. Nauwelaers [et al.] // J. Immunol. Methods. - 2012. - Vol. 381. - №. 1-2. - P. 9-13.
8. Кощеев, В. Н. Оценка хемилюминесцентной активности моноцитов на разных стадиях почечно-клеточного рака / В. Н. Кощеев, А. В. Мошев, В.Д. Беленюк [и др.] // Вестник Хакасского государственного университета им. Н.Ф. Катанова. - 2014. - № 8. -С. 49-51.
9. Савченко, А. А. Цитометрический анализ NK- и NKT-клеток у больных почечноклеточным раком / А. А. Савченко, А. А. Модестов, А. В. Мошев, Тоначева О.Г. [и др.] // Российский иммунологический журнал. - 2014. - Т. 8 (17). - № 4. - С. 1012-1018.
10. Хайдуков, С. В. Стандартизованная технология «Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов» / С. В. Хайдуков, Л. А. Байдун, А. В. Зурочка [и др.] // Медицинская иммунология. - 2012. - Т. 14. - № 3. - С. 255-268.
© Мошев А. В., Беленюк В. Д., Гвоздев И. И., 2015 УДК 616-091.8.13.37.831-005
ПАТОМОРФОЛОГИЯ ИНТРАКРАНИАЛЬНЫХ АРТЕРИЙ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ У БОЛЬНЫХ, УМЕРШИХ ОТ ОСТРЫХ НАРУШЕНИЙ МОЗГОВОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ
Х. А. Оллобердиев, А. Т. Джурабекова, К. В. Шмырина
Самаркандский государственный медицинский институт
В статье представлены данные комплексного патоморфологического анализа магистральных артерий головного мозга, проведённого у 50 умерших от острого нарушения мозгового кровообращения в возрасте 45—88 лет, в период с 1995 по 2015 годы. В ходе исследования выявлены патоморфологические особенности церебрального атеросклероза при сахарном диабете.
Ключевые слова: сахарный диабет, острое нарушение мозгового кровообращения, атеросклероз.
Введение. В последние годы особый интерес представляют острые нарушения мозгового кровообращения (ОНМК), сочетающиеся с различной висцеральной патологией [1]. По результатам исследований ряда авторов [2], при инсультах отмечена высокая летальность - от 10 до 35 %, а смертность от цереброваскулярных заболеваний уступает лишь смертности от болезней сердца и опухолей всех локализаций и достигает в экономически развитых странах 11-12 % [3].
Инсульты, развивающиеся у больных сахарным диабетом (СД), характеризуются тяжёлым течением и высокой летальностью. Сахарный диабет расценивается как второй по значимости после артериальной гипертензии фактор риска развития мозговой катастрофы [4]. Согласно международным исследованиям (исследование MRFIT), риск смерти от инсульта среди пациентов с СД был в 2,8 раза выше по сравнению с пациентами без сахарного диабета, при этом риск смерти от ишемического инсульта был выше в 3,8 раза, от субарахноидально-го кровоизлияния - в 1,1 раза и от внутримозгового кровоизлияния - в 1,5 раза [5].
Существенную роль в развитии цереброваскулярных нарушений играет патология магистральных артерий головы: сонных и позвоночных артерий, которые при СД часто поражаются атеросклерозом.
В структуре общей смертности от сахарного диабета удельный вес цереброваскулярных заболеваний как непосредственной причины летального исхода составляет 20-30 % , что почти вдвое превышает частоту мозгового инсульта в общей популяции [6]. Несмотря на проведённое в последние годы патофизиологическое и клиническое изучение мозгового инсульта, проблемы развития острых нарушений мозгового кровообращения у больных СД остаются малоизученными [7].
Патоморфологические исследования интрацеребрального сосудистого русла у больных сахарным диабетом, умерших от острого нарушения мозгового кровообращения, нашли отражение в многочисленных публикациях. Однако эти работы не носят системного характера, в большинстве случаев отражают лишь структурные особенности перестройки стенки артерий, что не позволяет в целом охарактеризовать особенности церебрального кровоснабжения в условиях диабетической микроангиопатии [6].
Отсутствует также объективная оценка капиллярно-паренхиматозных взаимоотношений в ткани головного мозга, что не обеспечивает адекватного представления о пато- и морфогенезе диабетической микроангиопатии. В связи с этим одним из приоритетных направлений современной медицины является прогнозирование риска возникновения и исходов заболевания.
Цель исследования. Изучить патоморфологию интракраниальных артерий при СД у умерших от острых нарушений мозгового кровообращения.
Материалы и методы. Объектом патоморфологического исследования явилось секционное наблюдение в Клинике СамМИ лиц в возрасте 45-88 лет, в период с 1995 по 2015 годы, среди них мужчин - 24, женщин - 26. Контролем служили две группы по десять наблюдений, одна из которых включала умерших без клинических и морфологических проявлений цереброваскулярной и эндокринной патологии (группа I); вторую, контрольную, группу составили умершие от острого нарушения мозгового кровообращения, не страдавшие СД (группа II). Причиной смерти 30 больных, страдавших инсулиннезависимым СД, явилось ОНМК, среди которых выделены группы наблюдений в зависимости от клинико-морфологического варианта инсульта, развившегося на фоне СД: в III группу вошли лица, скончавшиеся от ишемического инсульта (15), в IV группу - от геморрагического инсульта (табл. 1).
