Научная статья на тему 'Оценка эффективности дифференциальной диагностики гриппа методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени'

Оценка эффективности дифференциальной диагностики гриппа методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

CC BY
372
76
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Вопросы вирусологии
ВАК
CAS
RSCI
PubMed
Область наук
Ключевые слова
МУЛЬТИПЛЕКСНАЯ ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ / ОРВИ И ГРИПП / ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА / MULTIPLEX REAL-TIME POLYMERASE CHAIN REACTION / LABORATORY DIAGNOSIS / ACUTE RESPIRATORY VIRAL INFECTION / INFLUENZA

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Лободанов Сергей Александрович, Никонова А. А., Файзулоев Е. Б., Трушакова С. В., Забияка Ю. И.

Представлены результаты сравнительного анализа выявления вирусов гриппа в клинических образцах методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ) и методом изоляция вирусов в культуре клеток МDСК. В работе исследовали 267 образцов носоглоточных смывов от больных с симптомами гриппа, полученных в течение двух эпидемических сезонов (2008-2009 и 2009-2010 гг.). Вирусы гриппа были выявлены методом мультиплексной ПЦР-РВ в 104 образцах (в 48 ВГА и 56 ВГВ), культуральным методом в 84 образцах (в 35 ВГА и 49 ВГВ). Результаты обнаружения вирусов гриппа двумя методами совпали на 89,4%. На основании испытаний метода мультиплексной ПЦР-РВ на панели охарактеризованных клинических образцов была сделана оценка диагностической чувствительности выявления ВГА 94,3% и ВГВ 95,9%. Показано, что мультиплексная ПЦР-РВ не только не уступает в диагностической чувствительности методу выделения вирусов в культуре клеток, но в определенных условиях превосходит его.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Лободанов Сергей Александрович, Никонова А. А., Файзулоев Е. Б., Трушакова С. В., Забияка Ю. И.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Evaluation of the efficiency of differential diagnosis of influenza by multiplex real-time polymerase chain reaction

The paper gives the results of a comparative analysis of the detection of influenza viruses in clinical samples, by using multiplex real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and by virus isolation in MDCK cell cultures. The investigation employed 267 nasopharyngeal swab specimens obtained from patients with influenza symptoms during two epidemic seasons (2008-2009 and 2009-2010). Influenza viruses were found in 104 samples (48 with influenza A virus (IAV) and 56 with influenza B virus (IBV)) by multiplex RT-RCR and in 84 samples (35 with IAV and 49 with IBV) by a cultural technique. The results of detection of influenza viruses by the two methods showed 89.4% agreement. The diagnostic sensitivity of multiplex RT-PCR testing a panel of the clinical samples in question was estimated to be 94.3% for IAV and 95.9% for IBV. The diagnostic sensitivity of multiplex RT-PCR in virus detection was demonstrated to be not only highly competitive with virus isolation, but also superior to the latter.

Текст научной работы на тему «Оценка эффективности дифференциальной диагностики гриппа методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени»

2009. — Vol. 27. — P. 4079—4089.

8. He X. S., Holmes Т. Н., Zhang C. et al. Cellular immune responses in children and adults receiving inactivated or live attenuated influenza vaccines // J. Virol. — 2006. — Vol. 80, N 23. — P. 11 756—11 766.

9. He X. S., Holmes Т. Н., Sasaki S. et al. Baseline levels of influenza-specific CD4 memory T-cells affect T-cell responses to influenza vaccines // PLoS One. — 2008. — Vol. 3, N 7. — P. 2574.

10. Joly E., Hudrisier D. What is trogocytosis and what is its purpose? // Nat. Immunol. — 2003. — Vol. 4, N 9. — P. 815.

11. Kendal A. P., Pereire M. S., Skehel J. Concepts and procedures for laboratory-based influenza surveillance. — Atlanta, 1982. — P. В17—B35.

12. Lee L. Y., Ha do L. A., Simmons C. et al. Memory T cells established by seasonal human influenza A infection cross-react with avian influenza A(H5N1) in healthy individuals // J. Clin. Invest. — 2008 — Vol. 118, № 10. — P. 3478—3490.

13. Proposed WHO recommendations for the production and control of influenza vaccines (human, live attenuated). Available from http://www.who.int/vaccine_research/diseases/influenza/ Draft_WHO_recs_LAI V_2627_Feb09.pdf.

14. Romanova J., Krenn B. M., WolschekM. et al. Preclinical evaluation of a replication-deficient intranasal DeltaNSl H5N1 influ-

enza vaccine // PLoS One. — 2009. — Vol. 4. — P. 5984.

15. Roti M., Yang J., Berger D. et al. Healthy human subjects have CD4+ T cells directed against H5N1 influenza virus // J. Immunol. — 2008. — Vol. 180, N 3. — P. 1758—1768.

16. Rowe Т., Abernathly R. A., Hu-Primmer J. et al. Detection of antibody to avian influenza A(H5N1) virus in human serum by using a combination of serologic assays // J. Clin. Microbiol. — 1999. — Vol. 37, N 4. — P. 937—943.

17. Rudenko L., Desheva J., Korovkin S. et al. Safety and immu-nogenicity of live attenuated influenza reassortant H5 vaccine (phase I—II clinical trials) // Influenza Other Respi Viruses. — 2008 — Vol. 2 — P. 203—209.

18. Swain. S. L., Agrewala J. N., Brown D. M. et al. CD4+ T-cell memory: generation and multi-faceted roles for CD4+ T cells in protective immunity to influenza // Immunol. Rev. — 2006. — Vol. 211. — P. 8—22.

19. Welsh R. M., Selin L. K., Szomolanyi-Tsuda E. Immunological memory to viral infections // Annu. Rev. Immunol. — 2004. — Vol. 22. — P. 711—743.

20. World Health Organization. Epidemiology of WHO-confirmed human cases of avian influenza A(H5N1) infection // Wkly Epidemiol. Rec. — 2006. — Vol. 81, — P. 249—257.

Поступила 15.04.10

В ПОМОЩЬ ВИРУСОЛОГУ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 616.921.5-079.4:575.08

С. А. Лободанов1, А. А. Никонова1, Е. Б. Файзулоев2, С. В. Трушакова2, Ю. И. Забияка1, М. А. Калинкина2,

В. Т. Иванова2, Е. С. Шевченко2, В. В. Зверев, Е. И. Бурцева2

Оценка эффективности дифференциальной диагностики гриппа методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени

'НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова РАМН; 2ФГБУ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского Минздравсоцразвития России; 'Инновационно-технологический центр «Биологически активные соединения и их применение» РАН, Москва

Представлены результаты сравнительного анализа выявления вирусов гриппа в клинических образцах методом мультиплексной пЦр с детекцией в режиме реального времени (ПцР-РВ) и методом изоляция вирусов в культуре клеток MDCK. В работе исследовали 267 образцов носоглоточных смывов от больных с симптомами гриппа, полученных в течение двух эпидемических сезонов (2008-2009 и 2009-2010 гг.). Вирусы гриппа были выявлены методом мультиплексной ПЦР-РВ в 104 образцах (в 48 - ВГА и 56 - ВГВ), культуральным методом - в 84 образцах (в 35 - ВГА и 49 - ВГВ). Результаты обнаружения вирусов гриппа двумя методами совпали на 89,4%. На основании испытаний метода мультиплексной ПЦР-РВ на панели охарактеризованных клинических образцов была сделана оценка диагностической чувствительности выявления ВГА - 94,3% и ВГВ - 95,9%. Показано, что мультиплексная ПЦР-РВ не только не уступает в диагностической чувствительности методу выделения вирусов в культуре клеток, но в определенных условиях превосходит его.

Ключевые слова: мультиплексная ПЦР в режиме реального времени, ОРВИ и грипп, лабораторная диагностика

Evaluation of the efficiency of differential diagnosis of influenza by multiplex real-time polymerase chain reaction

S. A. Lobodanov1, A. A. Nikonova1, E. B. Faizuloyev1, S. V. Trushakova2, Yu. I. Zabiaka1, M. A. Kalinkina3, V. T. Ivanova2, E. S. Shevchenko2, V. V. Zverev1, E. I. Burtseva2

1I. I. Mechnikov Research Institute of Vaccine and Sera, Russian Academy of Medical Sciences; 2D. I. Ivanovsky Research Institute of Virology, Ministry of Health and Social Development of Russia; '“Biologically Active Compounds and Their Application” Center of Innovations and Technologies, Russian Academy of Sciences, Moscow

The paper gives the results of a comparative analysis of the detection of influenza viruses in clinical samples, by using multiplex real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and by virus isolation in MDCK cell cultures. The investigation employed 267 nasopharyngeal swab specimens obtained from patients with influenza symptoms during two epidemic seasons (2008-2009 and 2009-2010). influenza viruses were found in 104 samples (48 with

Контактная информация:

Лободанов Сергей Александрович, мл. науч. сотр.; e-mail: lobodanov@yahoo.com

42

influenza a virus (iAV) and 56 with influenza B virus (iBV)) by multiplex RT-RCR and in 84 samples (35 with iAV and 49 with iBv) by a cultural technique. the results of detection of influenza viruses by the two methods showed 89.4% agreement. the diagnostic sensitivity of multiplex RT-PCR testing a panel of the clinical samples in question was estimated to be 94.3% for IAv and 95.9% for iBv. the diagnostic sensitivity of multiplex RT-pCr in virus detection was demonstrated to be not only highly competitive with virus isolation, but also superior to the latter.

Key words: multiplex real-time polymerase chain reaction, acute respiratory viral infection, influenza, laboratory diagnosis

Острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ) и грипп - группа заболеваний, передающихся преимущественно воздушно-капельным путем, которая по своему удельному весу в структуре инфекционной патологии человека прочно занимает ведущее место. Традиционно гриппу уделяется наибольшее внимание, поскольку вирус гриппа вызывает эпидемии, поражая людей всех возрастов, а заболевание часто протекает с осложнениями. Вместе с тем известно, что такие респираторные вирусы, как вирусы парагриппа, аденовирусы, респираторно-синцитиальный вирус и другие, циркулируют в течение всего года, включая эпидемический период, обусловленный активизацией вирусов гриппа, в период которого заболевает от 5 до 15% населения [3].

Методами клинической диагностики врач не может с точностью определить возбудителя респираторного заболевания, поэтому лечение, как правило, является эмпирическим. С точностью идентифицировать возбудителя респираторного заболевания можно только при помощи лабораторных методов диагностики.

Цель работы - сравнительный анализ выявления вирусов гриппа в клинических образцах методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ) и методом изоляция вирусов в культуре клеток MDCK.

Материалы и методы

В работе были использованы лабораторные штаммы вирусов гриппа с известным титром A/Panama/2007/99, H3N2 (3 х 106 ТЦЦ/мл) и В/Ленинград/179/86 (108 ТЦД50/мл).

Исследовали 267 образцов носоглоточных смывов от больных с симптомами гриппа, полученных в течение двух эпидемических сезонов (151 образец в сезоне 2008-2009 гг. и 116 - в сезоне 2009-2010 гг.).

Изоляцию вирусов проводили в культуре клеток MDCK по методу H. W. Davies и соавт. [7]. Исходную суспензию клеток разводили до нужной концентрации ростовой средой (среда Игла (МЕМ) с двойным набором аминокислот и добавлением 5% фетальной сыворотки телят), разливали по культуральным матрасам и инкубировали в термостате при 36-37°С для роста монослоя клеток MDCK. Перед заражением монослой клеток дважды отмывали основной средой (среда Игла с глутамином и гентамицином), затем вносили вируссодержащую жидкость. Инкубация в термостате при 36-37°С длилась 30-60 мин. Затем добавляли поддерживающую среду (основная среда с 2 мкг/мл TPCK-trypsin) и ставили в термостат на 48-72 ч. Индикацию вируса осуществляли по полному цитопатическому действию (ЦПД) и последующему титрованию в реакции гемаг-глютинации (РГА). Гемагглютинирующую активность вирусов определяли по общепринятой методике. Были использованы эритроциты человека группы крови 0(1) в концентрации 0,75%. За гемагглютинирующий титр принимали последнее разведение, показавшее положительный результат.

В данном исследовании применяли лабораторный вариант мультиплексной ПЦР-тест-системы, предназначенной для одновременного выявления в клинических образцах 10 основных возбудителей ОРВИ - вирусов гриппа А (ВГА) и В (ВГВ), вирусов парагриппа типов 1,

2, 3, 4 (ВПГ1 - 4), аденовирусов (АДВ), респираторносинцитиального вируса (РСВ), риновирусов (РВ), энтеровирусов (ЭВ). В мультиплексной ПЦР-РВ для выявления продуктов амплификации использовали метод вы-щепления 5'-концевой метки (TaqMan Assay). Мишенью для выявления ВГА и ВГВ методом ПЦР-РВ служил М-ген (сегмент 7). Постановку ПЦР-РВ проводили в ам-плификаторе ДТ-96 («ДНК-Технология», Москва). Каждый образец анализировали в 3 пробирках на наличие нуклеиновых кислот (НК) 10 вирусов (в присутствии внутреннего положительного контроля). Подробно процедура постановки ПЦР-анализа описана в статье А. А. Никоновой и соавт. [4].

Результаты

Аналитическую чувствительность выявления ВГА и ВГВ методом мультиплексной ПЦР-РВ определяли на лабораторных штаммах вирусов гриппа А/Рапата/2007/99 (H3N2) и В/Ленинград/179/86 с известным титром. С этой целью анализировали последовательные 10-кратные разведения вирусного материала. Аналитическая чувствительность выявления ВГА и ВГВ составила 3 и 10 ТЦД50/мл соответственно.

В целом вирусы гриппа были выявлены методом мультиплексной ПЦР-РВ в 104 образцах (48 - ВГА и в 56 - ВГВ), культуральным методом - в 84 образцах (в 35 - ВГА и в 49 - ВГВ). Результаты выявления вирусов гриппа двумя методами совпали на 89,4% (с учетом положительных и отрицательных образцов в обоих тестах, но без учета сомнительных). Следует отметить, что выявление РНК вирусов гриппа в ПЦР-РВ не всегда подтверждалось выделением в культуре клеток. Были выявлены 22 образца, в которых методом мультиплексной ПЦР-РВ были обнаружены РНК ВГА и ВГВ (13 и 9 образцов соответственно), но получены отрицательные результаты при применении культурального метода. С целью подтвердить наличие в этих образцах РНК ВГА и ВГВ, их повторно анализировали методом ПЦР-РВ, но с праймерами и зондами, направленными к другим генам вирусов (к гену NS2 у ВГА и гену № у ВГВ) [12]. Во всех 22 спорных образцах было подтверждено наличие РНК соответствующих вирусов, что позволило исключить гипотезу о ложноположительных результатах в ПЦР-РВ. Кроме того, в 4 образцах наблюдали обратную картину, когда в культуре клеток MDCK были идентифицированы вирусы гриппа (в 2 - ВГА и 2 - ВГВ), а в ПЦР эти образцы были негативными.

Методом выделения в культуре клеток в 35 образцах были выявлены вирусы гриппа А(Н1Ш) и А(Н3№) (33 совпадения с ПЦР) и в 49 образцах - вирусы гриппа В (47 совпадений с ПЦР). Условно принимая образцы, в которых культуральным методом были обнаружены вирусы гриппа А и В, за «истинно положительные», с учетом количества совпавших результатов определяли диагностическую чувствительность метода мультиплексной ПЦР-РВ - рассчитывали долю совпавших результатов по отношению к «истинно положительным», выражая ее в процентах. На основании испытаний метода мультиплексной ПЦР-РВ на панели охарактеризованных клинических образцов была сделана оценка диагностической чувствительности выявления ВГА -94,3% и ВГВ - 95,9%.

43

Помимо вирусов гриппа, в 25 образцах методом ПЦР-РВ были выявлены и другие респираторные вирусы. В 10 образцах был обнаружен АДВ, в 5 - РСВ, в 2 - РВ, в 1 - ВПГ1, в 1 - ВПГ2, в 1 - ВПГ3, в 1 - ВПГ4, в 1 - ЭВ. Кроме того, были выявлены 3 случая смешанной инфекции: ВГА + РВ, РВ + ВПГ4, РВ + ВПГ3.

Обсуждение

В данной работе сравнивали результаты диагностики гриппа, полученные методами мультиплексной ПЦР-РВ и изоляции вирусов на культуре клеток MDCK. Следует отметить, что исследованные образцы содержали разные вирусы гриппа, отличавшиеся не только структурой внутренних белков, но и поверхностных (ге-магглютинин и нейраминидаза). Антигенные и другие свойства вирусов гриппа в 2008-2009 и 2009-2010 гг. сильно различались. В эпидсезоне 2008-2009 гг. в России циркулировали эпидемические штаммы, подобные эталонам А/Брисбен/59/07 (H1N1), А/Брисбен/10/07 (H3N2) и В/Малайзия/2506/04 эволюционной линии В/Виктория/2/87, с июня 2009 по 2010 г. - пандемические вирусы A(H1N1)v, подобные референс-штамму А/Калифорния/07/09, и эпидемические штаммы вирусов гриппа В, родственные эталону В/Брисбен/60/08 эволюционной линии В/Виктория/2/87 [1, 2].

Метод изоляции респираторных вирусов, в том числе вирусов гриппа, в культурах чувствительных клеток является признанным «золотым стандартом» диагностики. Вместе с тем он имеет ряд недостатков, включая высокую трудоемкость и продолжительность теста. Помимо изоляции вирусов на культуре клеток, широко применяют также иммунофлюоресцентные (ИФ) методы и различные модификации ПЦР, в том числе ПЦР-РВ. Использование ИФ-методов ограничено большим антигенным разнообразием респираторных вирусов. Преимуществами ПЦР-РВ являются высокая специфичность, чувствительность, универсальность процедуры, простота и удобство проведения анализа, автоматизация процессов, возможность выявления сразу нескольких патогенов в одной пробирке. Метод ПЦР позволяет выявить респираторные вирусы в 60-90% случаев ОРВИ [8, 10, 13].

По данным литературы, аналитическая чувствительность различных модификаций мультиплексной ПЦР-РВ для выявления вирусов гриппа значительно варьирует - от 0,01 до 15 ТЦД50/мл [5, 6, 11]. Показатели аналитической чувствительности выявления ВГА и ВГВ (3 и 10 ТЦД50/мл соответственно), полученные в настоящей работе, сопоставимы с литературными данными. Ряд авторов отмечают, что мультиплексная ПЦР-РВ не уступает в аналитической чувствительности моноспецифической ПЦР [6, 12], тогда как другие авторы указывают на пониженную чувствительность мультиплексного формата ПЦР-РВ [14].

В настоящей работе методом мультиплексной ПЦР-РВ в 4 вируссодержащих образцах (по данным метода изоляции вируса на культуре клеток) не выявлена РНК вирусов гриппа. По всей вероятности, эти образцы отличались низким содержанием вируса, недостаточным для выявления в ПЦР, однако высокой долей инфекционных вирионов, что обусловило успешное выделение вируса в культуре MDCK. В 22 образцах методом ПЦР достоверно была обнаружена РНК вирусов гриппа при отрицательном результате изоляции вирусов. Этот результат можно объяснить вероятным нарушением условий сбора, хранения или транспортировки инфекционного материала перед выполнением анализа, приведшим к инактивации вирусов при сохранении вирусной РНК. Если за «истинно положительные» принимать образцы позитивные по методу изоляции вирусов, то

диагностическая чувствительность выявления вирусов гриппа методом мультиплексной ПЦР-РВ составит около 95%. В то же время из 104 образцов, в которых была достоверно выявлена РНК вирусов гриппа, только 84 (81%) дали положительный результат в культуре клеток. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что мультиплексная ПЦР-РВ не только не уступает в диагностической чувствительности методу выделения вирусов гриппа в культуре клеток, но в определенных условиях превосходит его.

Стоит отметить, что выявление не только вирусов гриппа, но и других респираторных вирусов в образцах от людей, которым по клинической картине был поставлен этиологический диагноз гриппа, поднимает вопрос об адекватности назначаемой терапии, так как препараты для этиотропного лечения гриппа (ингибиторы нейраминидазы, ремантадин) в данном случае неэффективны. Известно, что, помимо вирусов гриппа, ОРВИ могут быть вызваны более чем 200 типами респираторных вирусов. Таким вирусам, как АДВ, РСВ, РВ, вирусы парагриппа, коронавирусы и некоторым другим, традиционно уделяется меньшее внимание. Отчасти это связанно с отсутствием средств специфической профилактики и препаратов для этиотропной терапии таких инфекций. В то же время АДВ, РСВ и вирусы парагриппа могут вызывать тяжелые поражения респираторного тракта (ларинготрахеобронхит, бронхиолит, пневмония и др.). Имеются также сообщения об исследованиях, свидетельствующих, что риновирусы могут вызывать поражения нижних дыхательных путей, «запуская» развитие таких тяжелых заболеваний, как бронхиальная астма и ХОБЛ [9].

В настоящей работе показано, что применение мультиплексной ПЦР-РВ позволяет дифференцированно выявлять основных возбудителей ОРВИ и эффективно дополняет классические вирусологические методы, благодаря чему мультиплексную ПЦР-РВ можно применять в эпидемиологических службах для быстрой расшифровки вспышек ОРВИ и мониторинга эпидемиологической обстановки.

Работа выполнена при финансовой поддержке Федеральной целевой программы «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009-2013 г.)» в рамках ОКР «Фарма» (Государственный контракт от 22 июля 2009 г. № 9411.1007500.13.979).

ЛИТЕРАТУРА

1. Иванова В. Т., Бурцева Е. И., Трушакова С. В. и др. Особенности этиологии эпидемии гриппа 2008-2009 гг. в России, начало новой пандемии // Всероссийская науч. конф. «Проблемы современной эпидемиологии. Перспективные средства и методы лабораторной диагностики и профилактики актуальных инфекций». - СПб., 2009. - С. 157-158.

2. Львов Д. К., Бурцева Е. И., Прилипов А. Г. и др. Распространение нового пандемического вируса гриппа А(Н1Ш)у в России // Вопр. вирусол. - 2010. - № 3. - С. 4-9.

3. Некрасов А. В., Пучкова Н. Г. Современная защита от гриппа H1N1v А/Калифорния/07/2009 // Вестн. Росздравнадзора. -2009. - № 6. - С. 27-31.

4. Никонова А. А., Успенская Е. С., Лободанов С. А. и др. Применение метода мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени для дифференциальной диагностики респираторных вирусных инфекций // Журн. микробиол. - 2009. - № 1. - С. 67-70.

5. Beck E. T., Jurgens L. A., Kehl S. C. et al. Development of a rapid automated influenza A, influenza B, and respiratory syncytial virus A/B multiplex real-time RT-PCR assay and its use during the 2009 H1N1 swine-origin influenza virus epidemic in Milwaukee, Wisconsin // J. Mol. Diagn. - 2010. - Vol. 12, N 1. - P. 74-81.

6. Bellau-Pujol S., Vabret A., LegrandL. et al. Development of three multiplex RT-PCR assays for the detection of 12 respiratory RNA viruses // J. Virol. Meth. - 2005. - Vol. 26, N 1-2. - P. 53-63.

44

7. Davies H. W., Appleyard G., Cunningham P. et al. The use of a continuous cell line for the isolation of influenza viruses // Bull. Wld Hlth Org. - 1978. - Vol. 56, N 6. - P. 991-993.

8. Freymuth F., Vabret A., Cuvillon-Nimal D. et al. Comparison ofmultiplex PCR assays and conventional techniques for the diagnostic of respiratory virus infections in children admitted to hospital with an acute respiratory illness // J. Med. Virol. - 2006. -Vol. 78, N 11. - P 1498-1504.

9. Gern J. E. The ABCs of rhinoviruses, wheezing, and asthma //J. Virol. - 2010. - Vol. 84, N 15. - P. 7418-7426.

10. Ruohola A., Waris M., Allander T. et al. Viral etiology of common cold in children, Finland // Emerg. Infect. Dis. - 2009. - Vol. 15, N 2. - P. 344-346.

11. Syrmis M. V, Whiley D. M., Thomas M. et al. A sensitive, specific, and cost-effective multiplex reverse transcriptase-PCR assay for the

detection of seven common respiratory viruses in respiratory samples // J. Mol. Diagn. - 2004. - Vol. 6, N 2. - P. 125-131.

12. Templeton K. E., Scheltinga S. A., Beersma M. F et al. Rapid and sensitive method using multiplex real-time PCR for diagnosis of infections by influenza A and influenza B viruses, respiratory syncytial virus, and parainfluenza viruses 1, 2, 3, and 4 // J. Clin. Microbiol. - 2004. - Vol. 42, N 4. - P. 1564-1569.

13. Tiveljung-Lindell A., Rotzen-OstlundM., GuptaS. et al. Development and implementation of a molecular diagnostic platform for daily rapid detection of 15 respiratory viruses // J. Med. Virol. - 2009. -Vol. 81, N 1. - P. 167-175.

14. Vernet G. Molecular diagnostics in virology // J. Clin. Virol. - 2004. - Vol. 31, N 4. - P. 239-247.

Поступила 24.03.11

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 615.45.03:616.36-002-022.6-078].012

Л. М. Веркина1, Н. Р. Телесманич1, Д. В. Мишин2,

А. Г. Ботиков2, Ю. М. Ломов1, П. Г. Дерябин2,

А. Н. Терентьев1, И. Р. Симонова1, А. Н. Наркевич1, Е. А. Березняк1

Конструирование полимерного препарата для серологической

диагностики гепатита С

'ФГУЗ Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора; 2ФГБУ НИИ вирусологии

им. Д. И. Ивановского Минздравсоцразвития России, Москва

Разработан новый иммунобиологический полимерный препарат для серологической идентификации гепатита С. Препарат позволяет выявлять специфические антитела в сыворотках крови больных гепатитом С, отвечает современным требованиям диагностических тест-систем, характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью. Препарат разработан на основе полиакролеиновых микросфер, в качестве сенситина использована культуральная концентрированная биомасса вируса гепатита С, содержащая полноценный набор антигенов вируса. Предложено использовать новый диагностикум при первичных (скрининговых) лабораторных обследованиях, основанных на серологическом выявлении суммарных антител к антигенам ВгС в реакции объемной агломерации (РАО). РАО может быть как одним из альтернативных методов при серологических исследованиях, так и дополнительным методом при применении комплекса диагностических приемов.

Ключевые слова: гепатит С, суммарные антитела, полимерный диагностикум, реакция объемной агломерации

Design of a polymer drug for serological diagnosis of hepatitis C

L. M. Verkina1, N. R. Telesmanich1, D. V. Mishin2, A. G. Botikov2, Yu. M. Lomov1, P. G. Deryabin2,

A. N. Terentyev1, I. R. Simonova1, A. N. Narkevich1, E. A. Bereznyak1

1Rostov-on-Don Antiplague Research Institute, Russian Inspectorate for the Protection of Consumer Rights and Human Welfare; 2D. I. Ivanovsky Research Institute of Virology, Ministry of Health and Social Development of Russia, Moscow

a new immunobiological polymer drug has been designed for the serological identification of hepatitis C. The drug is able to reveal specific antibodies in the sera of patients with hepatitis C, meets the current requirements of diagnostic test systems, and shows a high sensitivity and specificity. it is based on polyacroleinic microspheres; the concentrated cell culture biomass of hepatitis C virus (HCv), which contains an adequate set of viral antigens, is used as sensitin. A new diagnosticum is proposed to be used during primary (screening) laboratory studies based on the serological detection of total antibodies to HCv antigens in the volume agglomeration test. The latter is both one of the alternative methods during serological studies and an additional procedure when a set of diagnostic techniques is used.

Key words: hepatitis C, total antibodies, polymer diagnosticum, volume agglomeration test

Структура эпидемического процесса гепатита С в современный период имеет принципиально новые особенности. Это касается не только соотношения количества регистрируемых клинических форм этой инфекции, но и стадий их развития, а также выявляемых случаев сочетанных вариантов гепатитов с другими вирусными и бактериальными инфекциями. Чрезвычайно высокая интенсивность эпидемического процесса определяет выработку стратегии и тактики эпидемиологического

надзора, основополагающим звеном которого являются лабораторная диагностика и мониторинг с применением наиболее широкого спектра диагностических препаратов и методических приемов [5, 6]. Первичная диагностика гепатита С базируется на вариантах полимеразной цепной реакции, которая стала арбитражным методом диагностики вирусных гепатитов. Из серологических методов применяют только иммуноферментные системы разных поколений. Чувствительность

Контактная информация:

Веркина Людмила Михайловна, канд. мед. наук, зав. лаб.; e-mail: plague@aaanet.tu

45

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.