CC BY
14
9. Tagirov Kh.Kh. Carcass quality and yield attributesvof bull calves fed on fodder concentrate «Zolotoi Felutsen» / Kh.Kh. Tagirov, N.M. Gubaidullin, I.R. Fakhretdinov, F.S. Khaziakhmetov, R.Kh. Avzalov, I.V. Mironova, R.S. Iskhakov, L.A. Zubairova, A.F. Khabirov, N.V. Gizatova // Journal of Engineering and Applied Sciences. 2018. Т. 13. № S8. С. 6597-6603.
10. Сенченко О. В., Миронова И. В., Косил ов В. И. Молочная продуктивность и качество молока-сырья коров-первотёлок чёрно-пёстрой породы при скармливании энергетика Промелакт // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2016. № 1 (57). С. 90-93.
11. Тагиров Х., Миронова И. Использование глауконита в качестве кормовой добавки // Молочное и мясное скотоводство. 2008. № 1. С. 26-27.
12. Миронова И.В. Эффективность использования пробиотика БиоДарин в кормлении тёлок / И.В. Миронова, Г.М. Дол-женкова, Н.В. Гизатова [и др.] // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2016. № 3(59). С. 207-210.
13. Тагиров Х.Х., Фисенко Н.В. Качество и кормовое достоинство сенажа из люцерны с использованием консервантов Лаксил и Силостан // Вестник мясного скотоводства. 2017. № 3(99). С. 166-170.
14. Миронова И.В., Гизатов А.Я., Гизатова Н.В. Гематологические показатели тёлок казахской белоголовой породы при использовании кормовой добавки БиоДарин // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2015. № 5(55). С. 127-129.
Оценка действия гонадотропинов на коров-доноров при трансплантации зигот
Б.В. Гаврилов, к.в.н., И.А. Родин, д.в.н., профессор, Л.П. Вишнивецкая, аспирантка, М.И. Родин, аспирант, М.Г. Яковец, аспирантка, ФГБОУ ВО Кубанский ГАУ
В настоящее время животноводство является приоритетной областью сельского хозяйства, требующей внедрения современных технологий. Увеличение производства животноводческой продукции рассматривается как важная народнохозяйственная задача агропромышленного комплекса России [1-5]. При этом интенсификация воспроизводства в животноводстве и повышение продуктивности стада - основные направления в обеспечении населения мясной и молочной продукцией высокого качества [6, 7].
Скорость прироста продуктивности связана с плодовитостью и продолжительностью беременности. Трансплантация зигот - это метод, который поднимает животноводство на новый уровень. Метод позволяет максимально использовать генетический потенциал коров-доноров для создания в кратчайшие сроки высокопродуктивного стада, поскольку обеспечивает получение большого количества телят-трансплантантов от одного животного, наследующих необходимые племенные и продуктивные показатели.
Индукция полиовуляции - один из важных этапов трансплантации. В обычном половом цикле у коровы происходит чаще одна или две овуляции. Применение гонадотропинов в комбинации с простагландинами приводит к множественной овуляции.
Важнейшим условием проведения гормональной обработки коров-доноров является точность дозировки гормональных препаратов и чёткое определение сроков их введения. Сейчас в животноводстве используют гонадотропины гипофизарного происхождения, которые получают из гипофиза свиней и овец, а также рекомбинантным способом [8].
Французские специалисты считают, что для успешного вызывания суперовуляции соотношение фракций ФСГ и ЛГ имеет большое значение.
Важно учитывать индивидуальную чувствительность, она наступает через 40-50 час. после инъекции простагландина F2. Овуляции у коров-доноров могут быть растянуты по времени и быть больше 24 час., они происходят приблизительно через 24 час. после наступления охоты [9-12].
Целью исследования стала оценка эффективности схем гормональной обработки коров-доноров для индукции полиовуляции, при которой достигаются наиболее высокие качественные и количественные показатели результативности извлечения зигот.
Материал и методы исследования. Работа выполнялась в 2016-2018 гг. в условиях МТФ № 10 АО «Агрообъединение «Кубань». Для исследования по принципу пар-аналогов были скомплектованы две подопытные группы по 10 гол. в каждой. В опыте использовали коров с массой 550-680 кг, успешно прошедших акушерско-гинекологическую диспансеризацию и имеющих годовой удой выше 12000 кг.
В ходе эксперимента животные находились под клиническим наблюдением. До и после эксперимента проводились морфологические и биохимические исследования крови по общепринятым методикам в Усть-Лабинской зональной ветеринарной лаборатории.
Для индукции полиовуляции у коров применяли гормональные препараты ФСГ-супер и Плюсет. Для обнуления полового цикла внутримышечно вводился препарат Эстрофантин, обладающий лютеолитическим действием. На 7-е сут. от начала схемы во влагалище коровам вводили капсулы СИДР, содержащие в качестве действующего вещества прогестерон. Действие препаратов приводит к синхронизации охоты. С 12-х сут. коровам-донорам 8 раз вводили гонадотропины с интервалом 12 час. Через 48 час. от начала применения гонадотропинов применяли простагландин Ф2б двукратно с интервалом 12 час. Уже через 40-48 час. у животного проявлялся эструс и ещё через 12 час. проводили первое искусственное осеменение. Всего осеменя-
ли трёхкратно с 12-часовым интервалом. На 7-е сут. от момента первого осеменения проводили вымывание зигот и вводили Эстрофантин для обнуления полового цикла. В контрольной группе в качестве гонадотропного препарата использовали гипофизарный гонадотропин ФСГ-супер, в опытной группе — зарубежный гонадотропный препарат Плюсет, также имеющий гипофизарное происхождение (табл. 1).
Результаты исследования. В результате проведённого анализа было установлено, что показатели крови коров-доноров обеих групп до опыта находились в пределах физиологической нормы. После окончания, в день вымывания зигот, у животных обеих групп, положительно отреагировавших на гормональную обработку, была диагностирована эозинофилия (табл. 2). Причиной повышения уровня эозинофилов в крови коров-доноров стало введение в организм чужеродного белка в виде гормональных препаратов. Однако в крови особей контрольной группы число эозинофилов было выше, чем у сверстниц опытной. Это может свидетельствовать о плохой переносимости коровами-донорами препарата ФСГ-супер.
Результаты биохимического исследования крови до гормональной обработки показали, что у коров-доноров обеих групп они также были в пределах физиологической нормы. В день вымывания зигот у положительно отреагировавших коров-доноров в сыворотке крови были выявлены сопоставимо сходные показатели: общий белок — 72,65+0,09 г/л, альбумины — 38,11+0,47 г/л, глобулины — 44,16+0,78 г/л, общий кальций - 2,98+0,23 ммоль/л, неорганический фосфор — 1,89+0,26 ммоль/л, резервная щёлочность — 48+0,11 об.% СО2; каротин — 11,59+0,09 ммоль/л.
У коров-доноров контрольной и опытной групп было проведено для контроля ректальное обследование изменений в яичниках, определена реакция на гонадотропины в виде развития фолликулов разного диаметра, а перед вымыванием зигот установлено количество овуляторных ямок с формирующимися жёлтыми телами.
В случае положительной ответной реакции коров-доноров осеменяли. Для осеменения использовали замороженно-оттаянную сперму. Осеменение проводили ректоцервикальным способом трёхкратно с интервалами в 12 час. (табл. 3).
При вымывании зигот осуществляли учёт их количества, морфологические и качественные показатели. В контрольнойгруппе, где производилась обработка гонадотропным препаратом ФСГ-супер, у 20% животных отсутствовала суперовуляция, что характеризовалось наличием трёх и менее окулировавших фолликул. Вымывание зигот в этом случае проводить нецелесообразно, животные были исключены из опыта. В опытной группе, где в качестве гормонального препарата использовался Плюсет, отрицательная реакция яичников была отмечена у одной коровы-донора, что соответствовало 10%.
Отсутствие ответной реакции яичников предполагаемых коров-доноров может быть связано с различными факторами, как внешними стрессовыми, которым подвержены животные на производстве, так и состоянием организма животного и его индивидуальными особенностями, которые невозможно отследить на стадии формирования донорского стада. Также можно предположить, что на проявление полиовуляции у коров-доноров в группах оказывают влияние и гормональные препараты.
1. Гормональные схемы стимуляции коров-доноров
Период опыта, сут. Время Группа
контрольная опытная
-7 0 07:00 07:00 Эстрофантин, 3 мл СИДР, введение Фертагил, 2,5 мл Эстрофантин, 3 мл СИДР, введение Фертагил, 2,5 мл
4 19:00 ФСГ-супер, 2,5 мл в/м Плюсет, 3,0 мл в/м
5 07:00 19:00 ФСГ-супер, 2,0 мл в/м ФСГ-супер, 2,0 мл в/м Плюсет, 3,0 мл в/м Плюсет, 2,0 мл в/м
6 07:00 ФСГ-супер, 1,5 мл в/м Плюсет, 2,0 мл в/м
19:00 ФСГ-супер, 1,5 мл в/м Эстрофантин, 2,0 мл в/м Плюсет, 1,0 мл в/м Эстрофантин, 2,0 мл в/м
7 07:00 ФСГ-супер, 1,0 мл в/м Эстрофантин, 2,0 мл в/м Плюсет, 1,0 мл в/м Эстрофантин, 2,0 мл в/м
19:00 ФСГ-супер, 1,0 мл в/м Плюсет, 0,5 мл в/м
8 07:00 ФСГ-супер, 1,0 мл в/м Плюсет, 0,5 мл в/м
9 07:00 первое искусственное осеменение - Фертогил, 2,5 мл первое искусственное осеменение -Фертогил, 2,5 мл
19:00 второе искусственное осеменение -Фертогил, 2,5 мл второе искусственное осеменение -Фертогил, 2,5 мл
10 7:00 третье искусственное осеменение третье искусственное осеменение
16 вымывание зигот Эстрофантин, 3 мл вымывание зигот Эстрофантин, 3 мл
2. Показатели лейкограммы коров-доноров в день вымывания зигот (Х+$х)
Показатель Группа
контрольная опытная
Эритроциты, 1012/л 6,6±0,75 6,8±0,45
СОЭ 1,0 1,0
Лейкоциты, 109/л 6,07±0,12 6,83±0,17
Базофилы, 109/л 1,16±0,05 1,09±0,04
Эозинофилы, 109/л 9,75±0,9 8,49±0,11
Нейтрофилы:
юные, 109/л 0,73±0,08 0,66±0,10
палочкоядерные 4,09±0,07 4,16±0,12
сегментоядерные 23,49±0,51 21,32±0,21
Лимфоциты, 109/л 63,73±1,25 65,49±1,13
Моноциты, 109/л 3,10±0,16 3,79±0,06
3. Результативность обработок в группах, шт.
Показатель Группа
контрольная опытная
Положительно отреагировало Количествово жёлтых тел 8 68 9 75
На 7-е сут. от первого искусственного осеменения перед извлечением зигот коров-доноров фиксировали в станке, освобождали прямую кишку, наружные половые органы тщательно обмывали тёплой водой с мылом, дезинфицировали 70-процентным этанолом. Проводилась сакральная анестезия 2-процентным раствором новокаина. Вымывание зигот проводили посредством силиконового двуканального катетера, состоящего из трубки, конец которой имеет надувной баллончик для надёжной фиксации в роге матки, и шести отверстий, обеспечивающих введение промывной среды Дюльбекко в рог матки.
После извлечения зиготы с помощью бинокулярной лупы оценивали на пригодность для подсадки коровам-реципиентам по их морфологическим характеристикам, определяли стадии развития. Оценивали в соответствии с принятой классификацией и делили на пригодные (отличные, хорошие, удовлетворительные) и непригодные (неоплодотворённые и деформированные) (рис. 1).
У животных контрольной и опытной групп количество вымытых зигот от общего числа жёлтых
Рис. 1 - Оценка зигот:
а) отличные; б) хорошие; в) удовлетворительные; г) непригодные
тел на яичниках составляло соответственно 86,8 и 90,7% (табл. 4).
Число пригодных зигот было выше в опытной группе на 8 шт., непригодных оказалось меньше, чем в контрольной группе, на 1 зиготу.
Среди пригодных зигот преобладали зиготы хорошего качества и в контрольной и в опытной группе. В среднем число отличных и хороших зигот на 7 шт. больше было в опытной группе. Разница между числом удовлетворительных в обеих группах составляло 1 зиготу, с преобладанием их количества у животных в контрольной группе.
Среди непригодных зигот не выявлена существенная разница в количестве неоплодотворённых и дегенерированных.
Показатели эмбриопродуктивности в контрольной и опытной группах представлены на диаграммах (рис. 2).
В обеих группах коров-доноров преобладали стадия морулы и ранней бластоцисты, так как вымывание оплодотворённых яйцеклеток проводится на 7-е сут. после оплодотворения, а стадии ранней бластоцисты оплодотворённая яйцеклетка
4. Показатели эмбриопродуктивности в группах
Показатель Группа
контрольная опытная
Количество положительно реагирующих коров-доноров, гол. 8 9
Количество жёлтых тел, шт. 68 75
Извлечено зигот всего, шт. 59 68
Извлечено зигот на одного донора, шт. 7,4 7,6
Всего пригодных зигот, шт. 40 48
В том числе, шт.: отличных 13 16
хороших 19 23
удовлетворительных 8 9
Всего непригодных, шт. 19 20
Неоплодотворённых, шт. 4 5
Дегенерированных, шт. 15 15
контрольная группа
33%
количество положительно реагирующих , гол. количество жёлтых тел
извлечено зигот всего, п
извлечено на одного донора, п
всего пригодных, п
4%
опытная группа
33%
количество положительно реагирующих , гол.
количество жёлтых тел
36%
извлечено зигот всего, п
извлечено на одного донора, п
Рис. 2 - Показатели эмбриопродуктивности
достигается на 7-е сут. Наличие же остальных стадий развития зигот, начиная от ранней морулы и до бластоцисты, также объяснимо. Это происходит в результате трёхкратного осеменения коров-доноров, в результате оплодотворение всех вышедших из фолликулов яйцеклеток может растянуться на двое суток.
Существенной разницы в количестве зигот, находящихся в разной стадии развития, полученных от коров-доноров обеих групп, не установлено.
После проведения оценки жизнеспособности зигот на основании морфологических показателей уровня развития все отличные зиготы были подвергнуты криоконсервации. Зиготы с оценкой качества хорошие и удовлетворительные были подсажены в день вымывания животным-реципиентам, к которым предварительно была применена схема синхронизации полового цикла.
Выводы
1. Применение гормональных гонадотропных препаратов для эмбриопродукции является необходимым условием для организации трансплантации с целью производства ценного потомства с высокими генетически обусловленными продуктивными качествами.
2. Помимо теоретического обоснования способы стимуляции при трансплантации нуждаются в постоянном производственном изучении и сравнении с целью повышения рентабельности биотехнологического приёма.
3. Выход полноценных зигот у коров-доноров при применении препарата Плюсет на 8 зигот (16,7%) больше, чем при применении препарата ФСГ-супер.
4. Целесообразно более широкое применение препарата Плюсет как более эффективного при стимуляции коров-доноров.
Литература
1. Гизатова Н.В. Эффективность использования питательных веществ рациона тёлками казахской белоголовой породы при скармливании им пробиотической добавки БиоДарин / Н.В. Гизатова, И.В. Миронова, Г.М. Долженкова [и др.] // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2016. № 2(58). С. 104—106.
2. Косилов В.И. Влияние пробиотической добавки Биогу-митель 2г на эффективность использования питательных веществ кормов рационов / В.И. Косилов, Е.А. Никоно-ва, Д.С. Вильвер [и др.] // АПК России. 2016. Т. 23. № 5. С. 1016—1021.
3. Бозымов К.К. Технология производства продуктов животноводства / К.К. Бозымов, Е.Г. Насамбаев, В.И. Косилов [и др.] / Западно-Казахстанский аграрно-технический университет имени Жангир хана. Уральск, 2016. Т. 2. 530 с.
4. Косилов В., Мироненко С., Литвинов К. Мясная продукция красного степного молодняка при интенсивном выращивании и откорме // Молочное и мясное скотоводство. 2008. № 7. С. 27—28.
5. Мироненко С. Качество мяса молодняка казахской белоголовой породы и ее помесей / С. Мироненко, В. Крылов, С. Жаймышева [и др.] // Молочное и мясное скотоводство. 2010. № 5. С. 13—18.
6. Перевойко Ж.А., Косилов В.И. Воспроизводительная способность свиноматок крупной белой породы и её двух-трёхпородных помесей // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2014. № 6(50). С. 161—163.
7. Косилов В.И., Перевойко Ж.А. Воспроизводительные качества свиноматок крупной белой породы при сочетании с хряками разных линий // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2014. № 6(50). С. 122—126.
8. Назаров М.В., Гаврилов Б.В., Кондратьев А.В. Использование простагландинов и гормонов при искусственном осеменении коров // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2006. № 2. С. 52.
9. Бабенков В.Ю. Биотехнологические методы интенсификации воспроизводства молочного и мясного скота: автореф. дис. ... докт. биол. наук. Дубровицы, 2004. 46 с.
10. Мороз Т.А., Блохин С.Н. Реакция суперовуляции у коров костромской породы при применении высокоочищенного препарата ФСГ и суперфана // Биология воспроизведения и биотехнологические методы разведения: сб. научн. трудов ВНИИплем. М., 1992. С. 32—37.
11. Иванова Т.П., Мадисон Л.В. Качество эмбрионов в зависимости от сроков их извлечения и стадии развития // Биология воспроизведения и биотехнологические методы разведения: сб. трудов ВНИИплем. М., 1992. С. 46—49.
12. Гавриков А.М. Технология трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве: автореф. дис. ... докт. биол. наук. Дубровицы, 1995. 46 с.
