CC BY
23
УКД 594.3-13
Л. М. Елчиева
ОТЛИЧИТЕЛЬНЫЕ ПРИЗНАКИ СТАДИЙ РАЗВИТИЯ ЛИЧИНКИ АМПУЛЛЯРИИ
Введение
В настоящее время в аквакультуру Астраханской области вносятся новые объекты, в том числе и ампуллярия Ротасеа bridgesii (Reeve). Несмотря на кажущуюся полноту информации о культивировании моллюсков, существует необходимость значительного увеличения фактических знаний в области цитологии и гистологии данного вида [1].
В связи с этим целью работы явилось изучение отличительных признаков стадий развития личинки ампуллярии.
Материал и методы исследований
Материалом исследований служили икринки ампуллярий, которые отбирались через суточные интервалы развития при температуре 25 °С, и капсулярный мешок, в котором располагаются икринки. Полученная икра помещалась в раствор Буэна, затем общепринятыми методами проводился ее гистологический анализ [2].
Результаты исследований и их обсуждение
Взрослые ампуллярии содержались в аквариумах - 10 л воды на две половозрелые особи. Ампуллярии получали корм растительного и животного происхождения. Растительный корм перед кормлением ошпаривали кипятком и рубили на мелкие кусочки. Воду меняли через трое суток. Температура воды в аквариумах была 25 °С.
На всех стадиях развития зародыш располагался в икринке, поглощая желток для своего развития. Икринки сначала были мягкими и эластичными. Во время кладки они опускались по генитальной складке ноги самки, приклеиваясь к стеклу при помощи слизи, выделяемой самкой. Впоследствии из слизи образовалась капсула для выделенных икринок. Через 20-30 часов кладка отвердевала. Яйца переставали быть глянцевыми еще во время икрометания; оболочка приобретала серебристо-матовый оттенок, а вся кладка в целом становилась серо-розоватой. Незадолго до выклева у молодых улиток яйца становятся серо-белыми с черной точкой.
Местоположение зародыша в желтке было непостоянным. Так, на стадиях бластулы и га-струлы зародыш располагался на периферии яйца, затем, при развитии прототроха с его мощным ресничным аппаратом, зародыш перемещался в центр икринки. Далее, с развитием ноги, на стадии трохофора зародыш свободно двигался внутри капсулы.
Икринки располагались в капсуле. Капсула икринок была образована соединительной тканью с разветвленной капиллярной системой, в которой скапливалась гемолимфа. Капилляры были довольно крупными, они анастомазировали друг с другом, образуя густую сеть. Среди капилляров находились в большом количестве крупные клетки, по-видимому стволовые, которые располагались группами, попарно или поодиночке. Эти клетки внешне были сходны со стволовыми клетками млекопитающих, находившимися в плаценте у белых мышей. Диаметр клеток составлял 21,5 ± 0,5 мкм, в центре клетки находилось довольно крупное ядро - 11,0 ± 2,0 мкм в диаметре, внутри ядра имеется ядрышко. Функция этих клеток еще не выяснена.
От стадии к стадии с ростом и развитием зародыша количество желтка в икринке уменьшалось (табл. 1).
Из таблицы видно, что размеры зародыша были непостоянными, меняясь от стадии к стадии. На стадии бластулы зародыш достигал в диаметре 207,0 ± 2,0 мкм, он состоял из довольно крупных клеток, затем, на стадиях гаструлы, частота деления увеличилась, размеры клеток уменьшились. Диаметр зародыша достигал 123,2 ± 2,8 мкм. На всех последующих стадиях, включая стадию 29 (вылупление), зародыш увеличивался в размерах.
Таблица 1
Параметры зародыша и икринки по стадиям развития при температуре 25-26 °С
Стадия развития Диаметр зародыша, мкм Длина зародыша, мкм Диаметр икринки, мкм Форма зародыша
8 бластомеров 247 і 0,8 - 2 821 ± 4,2 Округлая
14 бластомеров 250,8 і 2,3 - 2 780 ± 1,5 Округлая
16 бластомеров 154 і 2,3 - 2 668 ± 2,3 Округлая
32 бластомера 207 і 2 - 2 387 ± 4,2 Округлая
Г аструла с широким бластопором 145,2 і 2,9 - 1 974 ± 4,2 Округлая
Г аструла с щелевидным бластопором 108,5 і 2,8 - 1 471 ± 1,8 Округлая
Стадия двух зародышевых листков 123,2 і 1,4 - 1 425 ± 2,6 Слегка удлиненная
Закладка внутренних органов 198 і 4,4 - 1 302 ± 3 Округло-грушевидная
Ранняя трохофора 422 і 4 512 і 1,3 1 100 ± 2,1 Грушевидная
Средняя трохофора 368 і 2,3 651 і 0,2 900 ± 1,8 Зародыш разросся в кранио-каудальном направлении
Поздняя трохофора 502 і 3,2 762 і 4 762 ± 2,1 Округлая
Ранний велигер 540 і 2 897 і 5,2 605 ± 1,8 Овоидная
Средний велигер 723 і 2,5 1 010 і 3,8 510 ± 5 Овоидная
Поздний велигер 750 і 1,5 1 070 і 2,9 410 ± 4,4 Форма взрослого моллюска
Великонхо 923 і 1,3 1 120 і 1,6 300 ± 4,1 Форма взрослого моллюска
Переход к ножному движению 1 015 і 2 1 300 і 4,5 210 ± 1,5 Форма взрослого моллюска
Стадия 27 1 050 і 3 1 450 і 1,8 80 ± 1,2 Форма взрослого моллюска
Стадия 28 1 100 і 1,5 1 600 і 0,5 - Форма взрослого моллюска
Стадия 29 (вылупление) 1 160 і 2 1 860 і 1,5 - Форма взрослого моллюска
Наблюдения показали, что интенсивнее всего зародыш потреблял желток на стадии тро-хофоры, именно на этой стадии происходила закладка основных систем органов. К моменту вылупления желточная масса располагалась тонкой бороздой по периферии капсулы.
Было установлено, что развитие личинок ампуллярий при температуре 25-26 °С проходило в течение 18 суток, отсчет времени начинался с момента откладки икринок (табл. 2).
Каждая стадия имела ряд отличительных признаков. Отличительные признаки наблюдались как во внешнем, так и во внутреннем строении.
Таблица 2
Развитие зародыша Pomacea bridgesii (Reeve) до момента вылупления при температуре 25-26 °С
Стадия развития Время от начала кладки Отличительные признаки стадии
8 бластула Начальный отсчет времени Синхронное дробление, клетки крупные, отсутствие ядрышек
14 бластомер 5 мин Дробление асинхронное
16 бластомер 10 мин Дробление асинхронное
32 бластомер 20 мин Дробление неравномерное, спиралевидное, ядра клеток имеют ядрышки
Г аструла на стадии широкого бластопора 18 ч 20 мин Уплотнение клеток на анимальном полюсе
Г аструла на стадии щелевидного бластопора 22 ч 20 мин Бластопор щелевидный, клетки мезодермы внутри бластоцеля
2 зародышевых листа 24 ч 50 мин Зародыш состоит из двух зародышевых листков
Стадия начала закладки внутренних органов 2 сутки Форма овоидная, произошла закладка раковинной железы, протонефридиев, прототроха, апикальный орган имеет реснички, в центре зародыша располагаются «белковые клетки»
Ранняя трохофора 3 сутки Форма грушевидная, прототрох частично утратил реснички, апикальный орган утратил реснички, произошла закладка сердца, нейробласты образовали церебральные плакоды
Средняя трохофора 4 сутки Впервые появилась тонкая раковина над раковинной железой, отмечено усиленное разрастание ноги, прототрох редуцировался, заложились педальные нервные узлы
Поздняя трохофора 5 сутки Закладка органов чувств (глаз), разрастание мантии
Ранний велигер 7 сутки Закладка педальных ганглиев, начало торзиона, дифференцировка клеток миобластов ноги в миоциты
Средний велигер 8 сутки Заложились плевральные и висцеральные ганглии, появились зачатки радулы
Продолжение табл. 2
Стадия развития Время от начала кладки Отличительные признаки стадии
Поздний велигер 10 сутки Заложились париетальные и буккальные ганглии, первые признаки спиральности раковины, раковина покрывает всю заднюю половину личинки
Великонхо 12 сутки Произошла закладка всех ганглий, расстояние между комиссурами уменьшилось, торзионный процесс затронул весь висцеральный комплекс
Переход к ножному движению 15 сутки Сформировалась крышечка раковины
Стадия 27 16 сутки Зародыш способен прятаться в раковину, появился первый виток раковины
Стадия 28 17 сутки Появился второй виток раковины
Стадия 29 (вылупление) 18 сутки Полностью сформированная личинка
При исследовании серийных гистологических препаратов кладки было выявлено, что в среднем кладка ампуллярий содержит до 150 ± 3 икринок.
Развитие икринок протекало следующим образом.
В первые сутки развития количество икринок в кладке было 150 ± 3 шт. Из них развитие продолжило около 70 % икринок: 2 % находились на стадии двух бластомеров, 5 % - на стадии 8 бластомеров, 10 % - на стадии гаструлы, 10 % - на стадии 19 бластомеров и 43 % - на стадии закладки внутренних органов.
Вторые сутки развития протекали следующим образом. Развитие продолжило около 87 % икринок: 58 % - икринки на стадии закладки внутренних органов, 5 % - икринки на стадии ранней трохофоры, 24 % икринок находилось на стадии гаструлы, 20 % - на стадии поздней гаструлы, 4 % - на стадии двух зародышевых листков.
На третьи сутки кладки развитие наблюдалось у 72 % икринок: 68 % - икринки на стадии ранней трохофоры, 3 % - на стадии средней гаструлы, 2 % - на стадии закладки внутренних органов.
На четвертые сутки развитие продолжили 69 % икринок. Из них на стадии средней трохофоры было 54 % икринок, на стадии поздней трохофоры - 1,5 % икринок, на стадии ранней трохофоры - 3,5 % икринок.
Следует отметить, что разные участки кладки развивались следующим образом: 71 % выживших икринок приходился на центральную внутреннюю часть кладки. Нормальное развитие наблюдалось в центральной части кладки, у заднего конца кладки было отмечено замедление в развитии икринок, интенсивное развитие было отмечено в центральной наружной части кладки.
Заключение
Таким образом, исследования показали, что дробление икринок ампуллярий неполное, т. е. желток в дроблении участия не принимает. С момента появления кладки до вылупления личинки проходит 18 суток. В ходе своего развития личинка перемещается внутри оболочек икринки. Развитие икринок в капсуле протекает неравномерно, вылупление начинается из центральной наружной части кокона, затем из капсул переднего конца и в последнюю очередь -из капсул заднего конца кокона.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Волкова О. В., Елецкий Ю. К. Основы гистологии с гистологической техникой. - М.: Медицина. -1989. - 234 с.
2. Ромейс Б. Микроскопическая техника. - М.: Иностр. лит., 1954. - 246 с.
Статья поступила в редакцию 1.10.2009
DISTINCTIVE SIGNS OF LARVA AMPULARIIDAE
DEVELOPMENT STAGES
L. M. Elchieva
The peculiarities of the embryonic development of larvae ampulariidae Pomacea bridgesii in artificial conditions since the moment when capsules were layed up to their hatching, have been investigated. It has been established that development of larvae ampulariidae at the temperature of 25-26 °С lasts for 18 days. The foetus and capsule parameters have been specified according to their development stages. The peculiarities of external and inner structure of some development stages have been described.
Key words: veligere, trohofora, stage, epithelium, differentiation, development, egg.
