CC BY
12
ИММУНОЛОГИЯ, МОРФОЛОГИЯ, ПАТОМОРФОЛОГИЯ
УДК 618.19-006.6-06
ОСОБЕННОСТИ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ ФИБРОНЕКТИНА, Т И В-ЛИМФОЦИТОВ И СОСУДИСТОГО КОМПОНЕНТА КОММУНИКАЦИОННЫХ СИСТЕМ - ПОКАЗАТЕЛЬ ПРОГРЕССИИ ИНФИЛЬТРИРУЮЩЕГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ О. А. Голубев
Смоленский областной институт патологии
Оценка состояния клеточного и гуморального звеньев иммунитета занимает одно из важнейших мест при анализе морфогенетических потенций новообразований любых локализаций. Наибольшее число лимфоцитов различных классов, являющихся маркерами данных реакций, входят в состав периваскулярного клеточного инфильтрата [1] и коммуникационных систем, под которыми подразумеваются системы, состоящие из совокупности структурно-функциональных единиц: сосудов микроциркуляторного русла с их непосредственным клеточным окружением, вегетативных нервных терминалей также с их непосредственным клеточным окружением, обеспечивающих структурные основы гомеостаза в норме и патологии [2]. Противоопухолевая защита у онкологических больных в основном связана с реакциями клеточного иммунитета, в которых немаловажная роль принадлежит белку фибронектину как одному из основных факторов межклеточного взаимодействия и элементу неспецифической эффекторной системы иммунной реакции [3,6].
Цель настоящего исследования - показать значение сосудистого компонента коммуникационных систем в прогрессии РМЖ с учетом постлучевого патоморфоза.
Изучен операционный материал 50 больных РМЖ, которым до радикальной мастэктомии лучевую терапию (ЛТ) не проводили и 101 женщины с РМЖ, которым до оперативного вмешательства осуществлена ЛТ интенсивно-концентрированным методом с суммарной очаговой дозой 40 Гр на опухоль в молочной железе и суммарной очаговой дозой 20 Гр на подключично-подмышечную область. Подавляющее большинство опухолей (90%) отнесены ко II степени злокачественности, степень лучевого патоморфоза определена как II [5]. Вырезку кусочков проводили в день операции. Иссекали фрагменты из центральной части опухолевого узла и его периферических отделов, а также в 2-х и 4-х см от визуально определяемой границы опухоли. В дальнейшем все кусочки тканей фиксировали в 10% нейтральном формалине и подвергали стандартной проводке с заливкой в парафин. Из данных блоков готовили срезы толщиной 5-7 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином и использовали для обзорной микроскопии и микроморфометрии. Материал из всех четырех вышеуказанных зон у 10 женщин с РМЖ без предоперационной ЛТ (4 дольковых и 6 протоковых РМЖ) и 10 пациенток после ЛТ (6 дольковых и 4 протоковых РМЖ) подвергнут иммуногистохимическому исследованию, при котором изучали выявление фибронектина, Т и В-лимфоцитов около микрососудов, используя моноклональные антитела фирмы Shandon. Детекцию фибронектина оценивали по степени его ок-рашиваемоести, применяя бальную систему, а именно: 1 балл - отсутствие окраски; 2 балла- отсутствие окраски одних и окрашиваемость других зон стромы и клеток паренхимы в желто-коричневый цвет; 3 балла -окрашиваемость различных структур от светло-желтого до желтого цвета; 4 балла - окрашиваемость всех структур в желтый цвет; 5 баллов - окрашиваемость разных зон стромы и клеток паренхимы от желтого до коричневого цветов: 6 баллов - окрашиваемость в коричневый цвет различных структур тканей [4]. При этом осуществлялась дифференцированная оценка выявления фибронектина вблизи артериол, капилляров и ве-нул. Изучение детекции Т и В лимфоцитов проводилось по следующей методике.Параллельные срезы окрашивались (первая партия) гематоксилином и эозином и обрабатывались (вторая партия) моноклональными антителами к Т- и В- лимфоцитам. Вторая партия параллельных срезов подкрашивалась гематоксилином. Далее в произвольно выбранном участке находили гистотопографически удаленные друг от друга артериолу, венулу и капилляр. Вокруг каждой сосудистой единицы в 10-ти полях зрения при увеличении микроскопа в 900 раз производили подсчет абсолютного количества лимфоцитов, несущих на цитолеммах специфические антигены. Верификация клеток проводилась в непосредственной близости от стенок сосудов. Причем гисто-топографически сосуд старались поместить в центр поля зрения [2]. Проводился учет данных о количестве и локализации лимфогенных метастазов РМЖ.
Математическую обработку данных проводили на персональном компьютере IBM/AT с помощью пакета статистических программ "Statgraphics" Version 2.6 Copyright 1987 STSC, Inc. and Statistical Graphics Corporation.
Показано, что в центральных и периферических отделах опухолевых узлов РМЖ с преобладанием протокового, долькового компонентов и периопухолевых тканях фибронектин выявляется преимущественно в перикапиллярных и перивенулярных зонах (таб. 1). При этом одни участки стромы и клетки паренхимы окрашиваются в желто-коричневый цвет, а в других - окраска отсут-
ствует. Детекция фибронектина как до, так и после проведения ЛТ в данных зонах центральных и периферических отделов опухолевых узлов протокового РМЖ практически одинаковая. В перио-пухолевых тканях на расстоянии 2-х и 4-х см от визуально определяемой границы РМЖ с преобладанием протокового компонента после проведения ЛТ отмечено незначительное уменьшение детекции фибронектина вблизи венул и капилляров (в 2-х см от границы опухоли), а также ее увеличение вокруг сосудов всех типов в 4-х см от границы опухолевых узлов. В инфильтрирующих РМЖ с преобладанием долькового компонента после ЛТ отмечено уменьшение выявления фибронектина в 2-х см от опухоли в периваскулярных зонах по сравнению с аналогичными зонами до ЛТ (таб. 1, 2).
Таблица 1. Данные о выявлении фибронектина, Т и В - лимфоцитов вокруг сосудов микро-циркуляторного русла в тканях РМЖ и в периопухолевых тканях до проведения ЛТ (анализ по медианам)
Вид процесса Зона Протоковый рак Дольковый рак
Т-лф В-лф ФН Т-лф В-лф ФН
Артериола
Центр узла РМЖ 3,0 0 1,0 9,5 0 1,0
Периферия узла РМЖ 1,0 0 1,0 0 1,0 1,0
Ткань МЖ в 2 см от РМЖ 0 0 1,5 0 1,0 3,5
Ткань МЖ в 4 см от РМЖ 0,5 0 1,5 0 0 1,5
Венула
Центр узла РМЖ 34,5 2,0 1,0 25,0 2,5 1,5
Периферия узла РМЖ 29,5 2,5 2,0 10,0 0 1,0
Ткань МЖ в 2 см от РМЖ 2,0 0 2,0 1,0 0,5 3,5
Ткань МЖ в 4 см от РМЖ 1,5 0 2,0 1,0 0 2,0
Капилляр
Центр узла РМЖ 37,0 2,0 2,0 29,5 1,0 1,5
Периферия узла РМЖ 41,0 2,5 2,0 23,5 1,0 2,0
Ткань МЖ в 2 см от РМЖ 2,0 1,0 2,0 2,5 1,0 3,5
Ткань МЖ в 4 см от РМЖ 5,0 0 2,0 3,0 0 2,0
Условные обозначения: Т-лф - Т - лимфоцит, В-лф - В - лимфоцит, ФН - фибронектин
Количественные показатели В-лимфоцитов в перивенулярных и перикапиллярных пространствах периферических зон опухолевых узлов протоковых РМЖ выше, чем в дольковых (таб. 1).
Таблица 2. Данные о выявлении фибронектина, Т и В - лимфоцитов вокруг сосудов микро-циркуляторного русла в тканях РМЖ и в периопухолевых тканях после проведения ЛТ (анализ по медианам)
Вид процесса Зона Протоковый рак Дольковый рак
Т-лф В-лф ФН Т-лф В-лф ФН
Артериола
Центр узла РМЖ 0 0 1,5 2,5 0 1,0
Периферия узла РМЖ 3,0 0 1,0 0,5 0,5 1,0
Ткань МЖ в 2 см от РМЖ 0,5 0 1,5 0 1,0 1,5
Ткань МЖ в 4 см от РМЖ 1,0 0 3,0 1,0 0 2,0
Венула
Центр узла РМЖ 3,0 1,0 2,0 47,5 2,0 2,0
Периферия узла РМЖ 2,5 0,5 2,0 5,5 2,0 2,0
Ткань МЖ в 2 см от РМЖ 0,5 1,0 1,5 2,0 1,0 2,0
Ткань МЖ в 4 см от РМЖ 1,0 0 3,5 6,0 0 2,0
Капилляр
Центр узла РМЖ 3,5 1,0 2,0 42,5 1,0 2,0
Периферия узла РМЖ 86,0 0,5 2,0 79,5 4,5 2,0
Ткань МЖ в 2 см от РМЖ 1,0 3,0 1,5 1,0 1,0 2,0
Ткань МЖ в 4 см от РМЖ 1,0 0 3,5 9,0 0 2,0
Условные обозначения: Т-лф - Т - лимфоцит, В-лф - В - лимфоцит, ФН - фибронектин
После ЛТ в данных участках отмечается значительное уменьшение количественных показателей В-лимфоцитов вокруг венул и капилляров. В тканях РМЖ с преобладанием долькового компонента вблизи венул и капилляров на периферии опухолевых узлов отмечена прямо противоположная ситуация - после ЛТ количество В-лимфоцитов увеличивается. Предоперационная ЛТ не вызывает существенных изменений количественных показателей В-лимфоцитов в граничащих с узлами РМЖ тканях молочной железы.
До проведения ЛТ Т-лимфоциты преобладают в количественном отношении в периваскулярном инфильтрате около венул и капилляров в протоковом РМЖ и окружающих тканях. После ЛТ морфологическая картина изменяется коренным образом - максимальное число Т-лимфоцитов выявляется в периваскулярных зонах дольковых РМЖ и граничащих тканей (таб. 1, 2).
Результаты иммуногистохимического исследования коррелируют с данными лимфогенного мета-стазирования. Из общей группы наблюдений (151 пациентка) в 71 случае отмечены регионарные метастазы. При этом у больных с РМЖ, которые до оперативного вмешательства не подвергались ЛТ, лимфогенные метастазы обнаружены в 18 случаях (25%).У пациенток, которым до радикальной мастэктомии проведена ЛТ интенсивно-концентрированным методом регионарные метастазы найдены в 53 случаях (75%). Наибольшее число лимфогенных метастазов в нашей группе наблюдений (независимо от проведения предоперационной ЛТ) дает инфильтрирующий рак с преобладанием протокового компонента. В 74% случаев поражаются подмышечные лимфатические узлы, в 17% - подключичные и в 9% -подлопаточные. Одновременное поражение лимфатических узлов двух или трех локализаций отмечено при отсутствии предоперационной ЛТ в 4 наблюдениях, после ЛТ - в 14 случаях. Лимфогенное метастазирование в регионарные узлы 2-3 локализаций более характерно для РМЖ с преобладанием протокового компонента (78% подобных наблюдений).
Известно, что фибронектин осуществляет связывание фибрина и различных частиц с мембранами фагоцитов [3], стимулирует пролиферацию и миграцию опухолевых клеток [6]. Иммунные лимфоциты в большой степени определяют противоопухолевую резистентность [3].
Данные иммуногистохимического исследования подтверждают, что реакции противоопухолевой резистентности в центральных зонах узлов РМЖ являются в основном реакциями клеточного иммунитета. Можно думать, что большее содержание Т- лимфоцитов в перивенулярных и перика-пиллярных зонах центральных и периферических участков узлов РМЖ с преобладанием протоко-вого компонента с учетом данных о лимфогенном метастазировании аргументирует то, что воздействие цитотоксических Т- лимфоцитов не сдерживает прогрессии опухоли. ЛТ, проводимая по интенсивно-концентрированной методике, вызывает гибель части опухолевых клеток в центре и на периферии узлов РМЖ, усиление реакций клеточного иммунитета в перикапиллярных зонах на периферии опухолевых узлов протокового РМЖ, значительное увеличение числа Т-лимфоцитов в перикапиллярных и перивенулярных пространствах дольковых РМЖ. Однако изменения в строме периопухолевых тканей свидетельствуют о недостаточной эффективности данного метода ЛТ для создания условий, замедляющих или прекращающих злокачественную трансформацию в перио-пухолевых тканях. Более того, после ЛТ в периопухолевых тканях молочной железы, исследованных в 4-х см от видимых границ РМЖ с преобладанием протокового компонента, полуколичественные показатели детекции фибронектина в периваскулярных зонах даже увеличиваются, что согласуется с данными о лимфогенном метастазировании карцином.
Таким образом, особенности взаимоотношений внутритканевых регуляторов, в частности фибро-нектина и иммунных лимфоцитов с сосудистым компонентом коммуникационных систем могут рассматриваться в качестве объективных маркеров прогрессии и индивидуального прогноза РМЖ. Перед началом ЛТ должна обязательно проводиться пункционная биопсия опухолевого узла, так как при диагностике РМЖ с преобладанием протокового компонента, видимо, лечащему врачу стоит думать о радикальной мастэктомии без предварительного лучевого лечения.
Литература
1. Доросевич А. Е., Голубев О. А., Бехтерева И.А. Особенности клеточного микроокружения вокруг микро-циркуляторного русла в тканях рака молочной железы при местном радиационном воздействии как отражение биполярности (интеграции и дезинтеграции) стромального компонента //Актуальные проблемы онкоморфологии /Под ред. Н.М.Аничкова, А.Е.Колосова.- Санкт-Петербург: Киров, 1996.-С.29-35.
2. Доросевич А.Е., Голубев О., Абросимов С.Ю., Бехтерева И.А. //Вопр.онкол.-1998.-Т.44.-М.4.-С.398-402.
3. Клиническая иммунология и аллергология: в 3 томах. Т.1:Пер. с нем./Под ред. Л.Йегера.- 2-е изд., пере-раб. и доп.-М.:Медицина, 1990.- С.26-273.
4. Козлов Д.В. Иммуногистохимия макроглобулинов в паренхиме и строме рака молочной железы до и после лучевой терапии. Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - Челябинск, 1996.-47 с.
5. Лавникова Г.А., Гош Т.Е., Талалаева А. В. и др.// Мед. радиол.-1978.-Ш.-С.6-9.
6. Пальцев М.А., Иванов А.А. Межклеточные взаимодействия.- М.:Медицина, 1995. -С.32-33.
