© КОЗЫРЕВА Л. А., ЕФРЕМОВ А.В., САМСОНОВА Е.Н.
УДК. 616-002:36-002.828
ОСОБЕННОСТИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТВЕТА У ДЕТЕЙ С РАЗЛИЧНЫМИ ФОРМАМИ МИКРОСПОРИИ
Л. А. Козырева, А.В. Ефремов, Е.Н. Самсонова
Новосибирский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н.,
проф. И.О. Маринкин; кафедра патологической физиологии и клинической патофизиологии, зав. - чл.-корр. РАМН А.В. Ефремов.
Резюме. В настоящем исследовании было проведено определение фагоцитарной активности, биоцидного потенциала нейтрофилов, содержание интерлейкина-1в, фактора некроза опухоли-а, интерлейкина-4 у 60 детей с различными формами микроспории. При единичных поражениях кожи и волосистой части головы. Наблюдалось повышение спонтанной и зимозан-индуцированной биоцидной активности нейтрофилов. При множественных и сочетанных формах микроспории отмечалось снижение биоцидного потенциала нейтрофилов. При всех формах микроспории установлено снижение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови и их способности синтезировать некоторые цитокины.
Ключевые слова: микроспория, фагоцитарная активность, биоцидная
активность, цитокины.
Козырева Людмила Александровна - аспирант каф. патологической физиологии и клинической патофизиологии НГМУ; е-таП: milena_kz@bk.ru.
Ефремов Анатолий Васильевич - член-корр. РАМН, зав. каф. патологической физиологии и клинической патофизиологии НГМУ; е-таП: АУБ 48@yandex.ru.
Самсонова Елена Николаевна - д.м.н., проф. каф. патологической физиологии и клинической патофизиологии НГМУ; е-mail: Elena-samsonova@mail.ru.
В природе существует около 500 видов грибов, которые представляют потенциальную опасность для здоровья человека, поскольку могут паразитировать в человеческом организме, вызывая локальные и даже системные грибковые заболевания. Неоспоримыми лидерами по частоте встречаемости и глобальности распространения среди прочих инфекционных заболеваний кожи являются грибковые заболевания. Не случайно их называют «всенародной заразой», «возмездием цивилизации». По данным различных авторов, последние 20 лет в мире наблюдается увеличение числа заболевших грибковами заболеваниями - микозами [1, 7, 17].
Внедрению грибковой инфекции в ногтевые пластинки и кожу способствуют разнообразные хронические заболевания, создающие «предиспозицию» к внедрению грибов извне за счет снижения активности метаболических процессов, иммунных реакций и интенсивности кровотока [2, 10, 14, 16].
В патогенезе грибковых заболеваний важную роль играют все звенья иммунной системы. Достоверно установлено, что у больных микозами в процессе инфекции и после выздоровления наблюдаются изменения клеточного и гуморального иммунитета, что связано со сложностью антигенного состава гриба и его изменчивостью, зависящей от условий существования и стадии микоза. Одним из первых в защите организма от инфекции проявляются фагоцитарные реакции, отвечая практически сразу на внедрение инфекционного агента. При этом фагоцитарные клетки не только препятствуют распространению чужеродных агентов в тканях человека, но и уничтожают их, параллельно стимулируя деятельность Т- и В-звеньев иммунитета [5, 8, 15]. На сегодняшний день патогенез заболеваний грибковой этиологии остается не до конца изученным, что и послужило предпосылкой для проведения данного исследовангия.
Материалы и методы
Обследовано 60 детей в возрасте от 5 до 12 лет с различными формами микроспории. У всех родителей обследованных детей было получено информированное согласие на использование данных обследования в научных целях и согласие этического комитета на проведение исследования. Все пациенты были разделены на 5 групп (по 12 человек в группе) в зависимости от степени тяжести и распространенности патологического процесса: 1 группа -поражение волосистой части головы (единичные элементы), 2 группа -поражение волосистой части головы (множественные элементы), 3 группа -поражение гладкой кожи (единичные элементы), 4 группа - поражение гладкой кожи (множественные элементы), 5 группа - сочетанные формы.
Для оценки способности нейтрофилов нарабатывать активные формы кислорода (потенциальной биоцидной активности фагоцитирующих клеток) использовали метод люминол-зависимой хемилюминесценции [4]. Измерения интенсивности хемилюминесценции (ХА) проводились на
биохемилюминометре «СКИФ-0301» (Россия). В качестве люминофора был использован очищенный препарат люминола («Serva», США). С целью оценки реактивности фагоцитирующих клеток в системе ХЛ-исследования использовали дополнительный стимул дрожжевой полисахарид - зимозан (Zymosan A, «Serva», США). Реактивность нейтрофилов оценивали по индексу стимуляции (ИС), который отражает соотношение спонтанного и индуцированного ХЛ-ответа. Единица измерения - усл.ед. Для оценки фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови использовали фагоцитарный индекс Гамбургера (процентное число фагоцитов, поглотивших частицы латекса) и фагоцитарное число Райта (среднее число частиц латекса, поглощенных одним фагоцитом). Определение содержания цитокинов IL-1 в, IL-4 и TNF-a в сыворотке крови выполнялось иммуноферментным методом с использованием реагентов ProCon («Протеиновый контур», Санкт-Петербург, Россия). Все измерения проводили с помощью автоматического вертикального
фотометра «Uniplan» фирмы Pikonn, Россия. Количественное содержание IL-1b, TNF-a, IL-4 в сыворотке крови выражали в пкг/мл.
Статистическую обработку результатов исследования осуществляли пакетом прикладных программ Exel 7,0 с использованием средней арифметической, ошибки средней, критерия Стьюдента. Различия принимались за достоверные при р<0,05.
Результаты и обсуждение
Снижение реактивности макроорганизма на фоне воздействия различных этиологических факторов, вызывающих воспаление, требует нового осмысления механизмов развития патологического процесса и подходов к тактике лечения. Ключевыми клеточными элементами, детерминирующими реактивность организма, являются нейтрофильные гранулоциты, которые относятся к числу наиболее реактивных клеток, отражающих любое отклонение в гомеостазе. Изменение активности нейтрофилов во многом зависит от состояния микроокружения, уровня медиаторов воспаления и острофазовых белков на уровне макроорганизма и непосредственно в очаге воспаления. В последние годы свободно-радикальное окисление (СРО) привлекает к себе все более возрастающий интерес исследователей и клиницистов. Нарушения СРО, в первую очередь его активация, являются ключевым событием в развитии целого ряда патологий. Развитие «оксидативного стресса» в результате реализации фагоцитарной функции полиморфно-ядерных лейкоцитов через продукцию активных кислородных метаболитов (90% микробиоцидности) в патогенезе развития воспалительного процесса занимает ключевую роль [3, 13]. В связи с этим, изучение окислительно-метаболической функции клеток-эффекторов воспаления играет центральную роль в понимании сути воспалительного процесса, в прогнозировании характера его течения, способствует разработке оптимальной тактики лечебных программ [6, 9].
В табл. 1 приведены результаты исследования спонтанной и индуцированной хемилюминесценции нейтрофилов периферической крови, оцениваемой по I sum у детей с различными формами микроспории. Спонтанная
хемилюминесценция в контрольной группе составила 0,57±0,041 усл. ед. В 1-й группе данный показатель был выше контрольных значений на 70% и составил
0,97±0,072 усл. ед. У пациентов 2-й группы спонтанная XЛ достоверно снижалась на 26% по отношению к контролю. В 3-й группе спонтанная XЛ составила 0,86±0,072 усл. ед, что на 50% выше контрольных значений. В 4-й группе спонтанная XЛ оказалась ниже от нормы на 40%. В 5-й группе была зарегистрированная самая низкая спонтанная XЛ - 0,19±0,014 усл. ед. Таким образом, самые высокие показатели были зафиксированы в 1-й и 3-й группе, самые низкие - во 2-й, 4-й и 5-й группах.
Индуцированная XЛ, оцененная по уровню I sum в контрольной группе составила 1,79±0,16 усл. ед. В 1-й группе данный показатель был на 200% выше конрольных значений и составил 5,41±0,37 усл. ед. Во 2-й группе данный показатель снизился до 0,99±0,079 усл. ед. В 3-й группе индуцированная XЛ была на 75% выше контрольных значений. В 4-й группе индуцированная XЛ равнялась 0,67±0,052 усл. ед. В 5-й группе была зафиксированная самая низкая индуцированная XЛ - 0,24±0,021 усл. ед. Таким образом, высокие показатели индуцированной XС были в 1-й и 3-й группах, а низкие во 2-й, 4-й и 5-й группах.
Индекс стимуляции нейтрофилов крови в контрольной группе был равен 3,14±0,29 усл. ед. В 1-й группе данный показатель повысился на 77% и составил 5,57±0,47 усл. ед. Во 2-й группе индекс стимуляции зафиксировался на уровне 2,35±0,21 усл. ед. В 3-й группе данный показатель был зарегистрирован на уровне 3,65±0,32 усл. ед. В 4-й группе исследуемый индекс стимуляции оказался сниженным относительно величины контроля. В 5-й группе индекс стимуляции нейтрофилов был самым низким и составил 1,26±0,11 усл. ед. Таким образом, индекс стимуляции нейтрофилов периферической крови был достоверно выше 1-й и 3-й группах, а во 2-й, 4-й и 5-й группах ниже по сравнению со значениями контрольной группы.
Показатель фагоцитарного индекса (табл. 2) у пациентов контрольной группы составил 39,61±2,47 усл. ед. У пациентов 1-й группы данный показатель
на 21% ниже контрольных значений. У пациентов 2-й группы исследуемый показатель составил 22,01±1,97 усл. ед., что ниже на 40% от аналогичных значений в контрольной группе. У пациентов 3-й группы фагоцитарный индекс снизился на 33% по сравнению с контролем. В 4-й группе фагоцитарный индекс был на 43% ниже контрольных значений. В 5-й группе был зарегистрирован самый низкий фагоцитарный индекс 19,33±1,84 усл. ед.
Содержание TNF-a в сыворотке крови (табл. 3) у пациентов контрольной группы составило 36,9±3,42 пкг/мл. У пациентов всех наблюдаемых групп отмечалось снижение содержания TNF-a в сыворотке крови. Минимальные значения были зафиксированы у пациентов с множественными очагами поражения гладкой кожи и при сочетанных поражениях гладкой кожи и волосистой части головы - 24,19±2,21 пкг/мл и 19,36±1,17 пкг/мл
соответственно. В 1-й группе исследуемый показатель снизился на 16% по сравнению с аналогичным показателем в контрольной группе. Во 2-й группе пациентов содержание TNF-a в сыворотке крови статистически значимо оказалось ниже времени контроля. В 3-й группе пациентов исследуемый показатель достоверно снизился по сравнению с параметрами контрольной группы на 21%. Содержание интерлейкина-1в в сыворотке крови у пациентов контрольной группы равно 44,26±3,41 пкг/мл. У всех обследованных пациентов с микроспорией отмечалось снижение данного показателя, минимальные значения были зафиксированы у пациентов с множественными очагами поражения гладкой кожи и волосистой части головы, а также при сочетанных поражениях. У пациентов 1-й и 3-й групп (с единичными очагами поражения) снижение содержания IL-1 в сыворотке крови было менее значительным.
Содержание интерлейкина-4 в сыворотке крови у пациентов контрольной группе составило 28,12±1,97 пкг/мл. У всех обследованных пациентов с микроспорией наблюдалось снижение данного показателя, минимальные значения были зафиксированы у пациентов с множественными очагами поражения гладкой кожи и волосистой части головы, а также при сочетанных поражениях (17,54±1,85 пкг/мл и 14,44±1,38 пкг/мл соответственно). У
пациентов 1-й и 3-й групп (с единичными очагами поражения) снижение содержания IL-4 в сыворотке крови были менее значительными (табл. 3).
Таким образом, у пациентов с микроспорией отмечаются разнонаправленные изменения функциональной активности нейтрофилов периферической крови. Во всех группах пациентов наблюдается снижение фагоцитарной активности нейтрофилов. Самые низкие показатели были зафиксированы при множественных и сочетанных поражениях кожи и волосистой части головы. О снижении функциональной активности нейтрофилов свидетельствуют и уровни исследуемых нами цитокинов в сыворотке крови (фактора некроза опухоли-a, интерлейкина-1 в и интерлейкина-4).
Необходимо отметить, что при единичных поражениях кожи и волосистой части головы отмечалось повышение биоцидного потенциала нейтрофилов, а при множественных и сочетанных поражениях кожи и волосистой части головы биоцидный потенциал нейтрофилов снижался, это может свидетельствовать либо об его истощении, либо об исходно низкой функциональной активности нейтрофилов, что и способствовало генерализации инфекции.
A. V. Efremov, l.A. Kozyreva, E.N. Samsonova Novosibirsk State Medical University
Литература
1. Бучинский О.И., Сергеев А.Ю., Мокина Е.В. и др. Современная эпидемиология грибковой инфекции - результаты проекта «Горячая линия» // Тез. докл. симпоз. «Новое в эпидемиологии, терапии и профилактике грибковых заболеваний человека» в рамках Медико-фармацевтического форума - М., 2002. - С. 75-76.
2. Дьяков Ю. Т. Сергеев Ю.В. Новое в систематике и номенклатуре грибов. - М., 2003. - С. 164-192.
3. Зенков Н.К., В.З. Ланкин, Е.Б. Меньшикова Окислительный стресс. - М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. - 343 с.
4. Зурочка А.В., Долгушин М.И. Метод регистрации перекисной
хемилюминесценции плазмы крови // Лабораторное дело. - 1985. - №10. -С.586-587.
5. Кубанова А.А., Потекаев Н.С., Потекаев Н.Н. Руководство по практической микологии. - М.: Финансовый издательский дом «Деловой экспресс». - 2001. - С. 71-85.
6. Маянский Д.Н. Цырендоржиев Д.Д., Макарова О.П.и др. Диагностическая ценность лейкоцитарных тестов. Ч.2. Определение биоцидности лейкоцитов / Д.Н.Маянский / Методические рекомендации. - Новосибирск, 1996. - 47с.
7. Мокина Е.В., Бучинский О.И., Сергеев А.Ю. и др. Первое массовое исследование эпидемиологии грибковых инфекций кожи и ногтей // Матер. конф., посвященной памяти А. Л. Машкиллейсона. - М., 2002. - С. 142-143.
8. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз: природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, диагностика и лечение. - М.: Триада-X, 2000. - 472 с.
9. Сергеев А. Ю., Сергеев Ю.В. Грибковые инфекции / Руководство для врачей. - М.: БИНОМ-Пресс, 2003. - 440 с.
10. Шкуpупий В.А., Филимонов П.Н., Куpунов Ю.Н. Эволюция ^анулем, индуц^ованных введением вакцины БЦЖ в экспеpименте // Пробл. туберкулёза. - 1998. - №6. - С. 63-65.
11. Beifuss B., Borelli C., Korting H.C. Mycological laboratory // Hautarzt. -2006. - Vol. 57, № 6. - P.487-488.
12. Dictar M.O. Maiolo E., Alexander B. et al. Mycoses in the transplanted patient // Med. Mycol. - 2000. - Vol. 38, № 1. - P. 251-258.
13. Halliwell B., Gutteridge J.M. Free radicals in biology and medicine. - Oxford, 1998. - P. 58-188.
14. Nardin M.E. Pelegri D.G., Manias V.G. et al Etiological agents of dermatomycoses isolated in a hospital of Santa Fe City, Argentina // Rev. Argent Microbiol. - 2006. - Vol. 38, № 1. - P.25-27.
15. Negroni R., Robles A.M., Arechavala A. Clinical problems in medical mycology: problem no.11. Generalized dermatophytosis with subcutaneous nodules // Rev. Iberoam. Micol. - 2004. - Vol. 21, № 3. - P.155-156.
16. Odom R. Pathophysiology of dermatophyte infections // J. Am. Acad. Dermatol. - 1993. - Vol. 28. - P.2.
17. Tortorano A.M., Peman J., Bernhardt H. et al. ECMM Working Group on Candidaemia. Epidemiology of candidaemia in Europe: results of 28-month European Confederation of Medical Mycology (ECMM) hospital-based surveillance study // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2004. - Vol .23,№ 4. - P.317-322.