CC BY
7Российская оториноларингология № 6 (61) 2012
УДК: 617.51-001.4-003.93-089.843
ОСОБЕННОСТИ РЕПАРАТИВНЫХ ПРОЦЕССОВ В ЛОБНОЙ КОСТИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ПЛАСТИКЕ ДЕМИНЕРАЛИЗОВАННЫМИ КОСТНЫМИ ТРАНСПЛАНТАТАМИ В УСЛОВИЯХ ИНФИЦИРОВАНИЯ РАНЫ
А. Г. Волков, И. И. Ромашевская, Л. Б. Ящинский
REPARATIVE PROCESSES IN EXPERIMENTAL ANIMALS
FRONTAL BONE AT DEMINERALIZED BONE GRAFT PLASTICS
UNDER CONTAMINATED WOUND
A. G. Volkov, I. I. Romashevskaya, L. B. Yashchinsky
ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет
Минздравсоцразвития РФ»
(Зав. каф. оториноларингологии - засл. врач РФ, проф. А. Г. Волков)
Проведено исследование на 18 беспородных белых крысах для определения сроков окончания репаративных процессов в искусственно созданных ранах лобных костей черепа при имплантации костной ткани в условиях искусственного инфицирования ран тремя патогенными микроорганизмами. Для эксперимента был использован деминерализованный костный трансплантат из бедренной кости здоровых белых крыс. Оценку особенностей остеогенеза проводили по данным гистологического исследования тканей через 30 и 100 дней. Микроскопически ни в одной из групп животных по окончанию эксперимента не наблюдались признаки завершенного остеогене-за с формированием новообразованной относительно зрелой костной ткани.
Ключевые слова: белая крыса, деминерализованная кость, патогенные микроорганизмы, остеогенез, репаративные процессы.
Библиография: 17 источников.
We have investigated 18 outbred albino rats to determine the term of reparative processes in the artificially made wounds of frontal bones at bone tissue implantation under artificial contamination of wounds with three pathogenic germs. A demineralized bone graft made of femoral bones taken from sound albino rats, was used in the experiment. Bone formation peculiarities were assessed in accordance with a tissue histologic examination after 30 and 100 days. Microscopically, none of the groups of animals revealed upon completion of the experiment any signs of finished osteogenesis with a formation of neoformed osteoid and relatively mature bone tissue.
Key words: albino rat, demineralized bone, pathogenic germs, osteogenesis, reparative processes.
Bibliography: 17 sources.
В настоящее время спектр патогенных микроорганизмов верхних дыхательных путей несколько изменяется, в качестве патогенов начинает выступать уже не монофлора, а ассоциации нескольких возбудителей. И хотя признаки формирования ассоциаций патогенных и непатогенных микроорганизмов обнаруживались в дыхательных путях и описаны уже давно, в том числе и учеными ростовской научной школы [17], но только в последние два десятилетия некоторые представители этого класса микроорганизмов - Haemophilus influenzae, Moraxella catarhalis, Streptococcus pneumonie и др. - стали принимать весьма активное участие в развитии воспалительных процессов в дыхательных путях с более частыми осложнениями и неблагоприятными исходами [1, 2, 6, 7, 9, 10, 16].
В Ростовской ЛОР-клинике более 15 лет для пластики стенок околоносовых пазух и близлежащих структур лицевого скелета используются деминерализованные костные трансплантаты (ДКТ), которые имеют ряд положительных свойств - легкость моделирования, пластичность и упругость, возможность фиксации в ранах сложной конфигурации, а также обладают остеоиндуктивными свойствами [3, 8, 14].
Научные статьи
Кроме того, ряд исследователей утверждает, что в условиях инфицированного объекта пластики с помощью ДКТ не только не снижается скорость остеоиндукции, но и может возрастать
[1,11,15].
Принимая во внимание эти данные, мы решили исследовать в эксперименте особенности репаративных процессов при пластике с помощью ДКТ искусственно сформированного дефекта лобной кости при инфицировании раны, а в качестве возбудителей использовать культуры наиболее распространенных патогенов - Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumonie и Staphylococcus aureus.
Были отобраны 18 беспородных белых крыс массой 260-320 г. Они составили две группы -по 9 животных в каждой, из которых заражали одним возбудителем 3 особи. Крыс содержали раздельно в изолированных клетках. Питание животных осуществлялось типично, без использования каких-либо химических, фармацевтических и пищевых добавок.
Всех животных оперировали в один день. Перед операцией проводили стандартную подготовку трансплантата с предварительным замачиванием его в теплом физиологическом растворе в течение получаса. Каких-либо антибактериальных или других препаратов в физиологический раствор не добавляли.
Под эфирным наркозом после обработки шерсти и кожи растворами антисептиков в области лобных костей проводили разрез мягких тканей длиной около 2 см. Мягкие ткани от-сепаровывали от кости, а затем резецировали наружную пластинку и диплоё в виде округлого костного фрагмента в лобной кости диаметром 4 или 5 мм. Формирование фрагмента ДКТ, который мы намеревались установить в качестве импланта, осуществляли соответственно размерам костного дефекта. Сформированный фрагмент ДКТ промывали в стерильной дистиллированной воде и укладывали на место резецированной части лобных костей крысы. После этого всех 18 животных инфицировали одинаковыми дозами по 0,2 мл культурами соответственно Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumonie, Staphylococcus aureus, полученными в лаборатории инфекций верхних дыхательных путей ФБУН «Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии».
Заканчивали вмешательство ушиванием мягких тканей наглухо. Швы обрабатывали 1%-ной спиртовой настойкой йода. В период после вмешательства и до снятия швов каждую крысу держали в отдельной клетке. Один раз в 3 дня животное осматривали, проводили риноскопию и орофарингоскопию, о чем делали соответствующую запись в журнале наблюдений. Через 30 и 100 дней всех крыс, по 9 особей в группе, инфицированных разными возбудителями, выводили из эксперимента.
Пластинки костной ткани фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, декальцинировали в 10%-ном растворе азотной кислоты. После фиксации и деминерализации исследуемые образцы заливали в парафин, изготовленные парафиновые срезы толщиной 4-5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по методу ван Гизона. Гистологические срезы исследовали методом световой микроскопии.
В качестве контроля за ходом репаративных процессов мы брали данные, полученные нами при трансплантации ДКТ в лобные кости экспериментальных животных в условиях стерильной раны в течение 100 дней параллельно с исследованиями А. Р. Боджокова [1, 2].
Для удобства восприятия информации вместо фразы «края лобных костей в операционной ране и соприкосновения с ней трансплантата» мы в дальнейшем будем условно употреблять слово «перелом».
При осмотре препаратов, полученных через 30 дней у крыс, инфицированных Haemophilus influenzae, отмечались фрагменты костных отломков собственной ткани животных, окруженных структурами ДКТ, с фокальными явлениями резорбции, врастание в костные балки про-лиферирующих сосудов капиллярного типа, составляющих основу появившейся молодой грануляционной ткани. В то же время отмечалась резко выраженная гнойно-воспалительная инфильтрация с обилием нейтрофильных лейкоцитов с фокусами некроза, однако уже сформировавшиеся массивные грануляционные и фиброзные прослойки обеспечили сопоставление костных отломков со структурами ДКТ, инициируя начальную фазу заживления костного перелома.
Российская оториноларингология № 6 (61) 2012
У второй группы животных, инфицированных Staphylococcus aureus, на 30-й день после имплантации и инфицирования раны, отмечены признаки более выраженных остеолитических изменений за счет лакунарной резорбции костных структур, с наличием костных отломков, фрагментированных структур деминерализованного костного трансплантата, выраженной лейкоцитарной инфильтрации, очагов пролиферации молодых сосудов, врастающих в структуры ДКТ, т. е. воспалительный процесс выражен более сильно как по распространенности, так и по длительности. Одновременно отмечены: сформировавшаяся грануляционная ткань с элементами фиброза, как следующего этапа воспалительного процесса с элементами костной мозоли в стадии активного роста.
Свои особенности обнаружены в исследуемой выборке крыс, инфицированной Streptococcus pneumonie. В препаратах обнаружено наличие костных отломков, разрозненных структур ДКТ в виде мелких фрагментов с неровными контурами, соединенных широкими прослойками созревающей грануляционной ткани, усиленный неоангиогенез. В участках кости, подвергшейся травматическому воздействию, имеются полости, заполненные миелоид-ными элементами.
В каждой группе животных макро- и микроскопические изменения тканей были довольно близки друг другу и отличались незначительно и крайне редко. При сопоставле-нии проведенных наблюдений следует отметить наибольшую выраженность гнойно-воспалительной инфильтрации области перелома при инфицировании Haemophilus influenzae, при этом сочетавшуюся с более далеко зашедшими репаративными процессами. Наиболее выраженные изменения структуры ДКТ, участвующего в заживлении перелома, мы обнаружили у крыс, при экспериментальном моделировании которых применена культура Staphylococcus aureus. Инфицирование перелома пневмококковой флорой сопровождалось формированием прочной сосудисто-фиброзной фиксации костных отломков и структур ДКТ, протекая при менее выраженной гнойно-воспалительной реакции, что вызывает определенный интерес, учитывая характеристику микроорганизма, входящего в группу гноеродных бактерий.
Вторую группу проводимого эксперимента составили крысы, выведенные из опыта через 100 дней после моделирования инфицированного перелома.
При инфицировании места трансплантации культурой H. influenzae отмечено появление на месте перелома зрелой пластинчатой костной ткани с включениями остеоидных, слабо минерализованных структур, фокусы резидуальной воспалительной инфильтрации. На значительном протяжении сформировавшаяся кость окружена фибро-ретикулярными прослойками, формирующими механический каркас новообразованной кости. Среди костных структур имеются костно-мозговые полости, заполненные миелоидными элементами, среди которых встречаются мелкие остатки костных отломков в виде отшнуровавшихся островков.
Свои особенности были обнаружены при применении в качестве патогена культуры золотистого стафилококка. Процесс заживления значительно отставал от предыдущей группы животных и носил незавершенный характер. Имелись костные отломки, сопоставленные широкими прослойками фибро-ретикулярной ткани. Оссификация носила неупорядоченный, мозаичный характер. Новообразованные костные пластинки чередовались с элементами фиброзной ткани, содержащей значительное количество фибробластов, фиброцитов, хондроци-тов, рассеянными глыбками ДКТ. Таким образом, регенераторные изменения носили незавершенный, субстициональный характер, прочность новообразованных структур не обеспечивала полноценного замещения костного дефекта.
Довольно близкий по характеру регенерации костных дефектов процесс формирования усматривался в препаратах, полученных у крыс, инфицированных Str. Pneumoniae, когда были обнаружены обширные участки развития незрелой костной ткани остеоидного типа. Сама зона перелома оставалась полностью незамещенной костным веществом - фрагменты кости непосредственно соединялись первичной соединительно-тканной мозолью, представленной богато васкуляризованной малоклеточной фиброзной тканью, т. е. по сути перелом не срастался. Клеточный состав фиброзной ткани был представлен преимущественно фибробластами и фиброцитами. Среди костных пластинок определялись сформированные гаверсовы каналы, заполненные миелоидными элементами.
Научные статьи
Таким образом, через 30 дней после перелома лобных костей у группы животных, инфицированных Haemophilus influenzae, отмечены признаки более выраженного гнойно-воспалительного процесса, при этом репаративные изменения протекали достаточно бурно, по интенсивности не уступая двум другим выборкам. Возможно, это объясняется большим количеством биологически активных веществ, выделяемых клетками сосудисто-мезенхимального происхождения в очаге воспаления, к числу которых относятся и факторы роста и пролиферации клеток.
К 100-му дню регенерация костной ткани не закончилась ни в одной из изучаемых групп. В то же время у крыс, инфицированных Haemophilus influenzae, имелись наиболее выраженные репаративные процессы при трансплантации ДКТ в области лобных костей экспериментальных животных по сравнению с другими. Имелась новообразованная кость, замещающая сформированный дефект, неравномерной зрелости - с наличием структур остеоидного характера, со слабой минерализацией. Костная регенерация при инфицировании области операционной раны Streptococcus pneumonie и Staphylococcus aureus за 100-дневный период носила незавершенный характер, на значительном протяжении костный дефект замещался волокнистой фи-брозно-ретикулярной тканью, сформированные костные структуры на значительном протяжении имели незрелое строение.
Заключение. В сравнении инфицируемых и неинфицированных групп животных следует отметить, что во всех наблюдениях при инфицировании ран репаративная регенерация значительно отставала по сравнению со вторыми группами. Ни в одном из наблюдений не произошло формирования полноценной пластинчатой костной ткани зрелого строения, замещающей костный дефект. При отсутствии инфекционного агента в стерильной ране уже за 90-100 дней происходила перестройка структуры ДКТ с замещением трансплантата новообразованной костной тканью реципиента, формировалась полноценная система кровоснабжения, незрелые остеоидные структуры замещались зрелой пластинчатой тканью, формировались костно-моз-говые каналы, заполненные миелоидными элементами. Инфицирование костной раны указанными микроорганизмами не позволило получить и за 100-дневный послеоперационный период полноценного замещения костного дефекта с репарацией костных структур. Это позволяет прогнозировать более тяжелое, осложненное заживление переломов, требует дополнительной антибактериальной, противовоспалительной терапии, применения препаратов, активирующих анаболические процессы в костной ткани, коррекции питания.
ЛИТЕРАТУРА
1. Боджоков А. Р. Антибактериальные возможности трансплантата после пластики стенок лобных пазух (сообщение 1) // Вестн. оторинолар. - 2008. - № 5. Прил. - С. 139-140.
2. Боджоков А. Р. Материал выбора для пластики стенок околоносовых пазух при гнойных процессах в них // Рос. оторинолар. - 2009. Прил. 2. - С. 142-145.
3. Волков А. Г., Боджоков А. Р. Наш способ лечения переломов верхней стенки верхнечелюстной пазухи // Рос. ринология. - 2010. № 3. - С. 39-40.
4. Волков А. Г., Боджоков А. Р., Ромашевская И. И. Исследование остеогенеза лобной кости при трансплантации деминерализованной кости в условиях стерильной раны у экспериментальных животных (сообщение 1) // Оториноларингология. - Бас, Мойын Хирургиясы. - 2011. - № 1-2. - С. 21-23.
5. Волков А. Г., Боджоков А. Р., Ромашевская И. И. Исследование остеогенеза лобной кости при трансплантации деминерализованной кости в условиях стерильной раны у экспериментальных животных (сообщение 2) // Там же. - С. 23-24.
6. Горбунова Е. Д. Переломы стенок орбиты у детей: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - М., 2006. - 22 с.
7. Ерошенко А. Ю. Клинические проявления и тактика лечения заболеваний ЛОРорганов, вызываемых Haemophilus influenza: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Ростов н/Д, 2000. - 20 с.
8. Зотов Ю. В. , Касумов Р. Д., Савельев В. И. Хирургия дефектов черепа. СПб.: АЙЮ-Издательство, 1998. - 184 с.
9. Кравченко В. Ф., Кравченко Д. В., Кравченко А. В. Характеристика микробной флоры и антибактериальной терапии при риногенных орбитальных осложнениях / Совр. вопр. аудиологии и ринол: тез. докл. науч.-практ. конф. - М., 2000. - С. 159-160.
10. Красношлык И. В. Применение демиелизированных аллотрансплантатов при реконструктивной хирургии последствий тяжелой черепно-мозговой травмы (клинико-экспериментальное исследование): автореф. дис. . канд. мед. наук. - СПб., 2005. - 22 с.
11. Кривохатская Л. Д., Яловой С. Ф., Сивач В. А. Антибактериальные свойства костноматричных трансплантатов, насыщенных антибиотиками методом вакуумирования / II Всес. конф.: Актуальные вопр. клин. микробиол. в неинф. клинике: тез. докл. - Барнаул, 1988. - Ч. 1. - С. 156-157.
Российская оториноларингология № 6 (61) 2012
12. Ромашевская И. И. Остеогенез лобной кости при имплантации деминерализованного костного трансплантата у экспериментальных животных // Рос. оторинолар. - № 1 (56). - 2012. - С. 144-148.
13. Рязанцев С. В., Науменко Н. Н., Захарова Г. П. Принципы этиопатогенетической терапии острых синуситов: методич. рекомендации. - 2-е изд., доп. - СПб., 2006. - 42 с.
14. Савельев В. И. Деминерализованный костный трансплантат: его свойства, заготовка и возможности клинического применения / В кн.: Проблемы аллопластики в стоматологии. - М., 1984. - С. 10-15.
15. Тулупова И. Г. Клинико-экспериментальное обоснование использования деминерализованных костных алло-трансплантатов в челюстно-лицевой хирургии: автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Омск, 1988. - 24 с.
16. Ульянов В. В. Дифференцированная пластика посттравматических дефектов костей свода черепа у детей школьного возраста (клинико-экспериментальное исследование): автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Ростов н/Д, 2002. - 23 с.
17. Эссель А. Е, Мясненко А. М., Пантелеева Л. Г. Вирусобактериальные ассоциации. - Ростов н/Д: Изд-во Ростовск. ун-та, 1978. - 221 с.
Волков Александр Григорьевич - докт. мед. наук, профессор, зав. каф. болезней уха, горла и носа Ростовского
ГМУ, е-шаИ: vag@aaanet.ru; тел.: 8-863- 232-37-54; Ромашевская Ирина Игоревна - аспирант каф. болезней уха, горла и носа Ростовского ГМУ. 344000, Ростов-на-Дону, Ворошиловский пр., д. 105, ЛОР-кафедра; тел.: 8-863-2500-659;
Ящинский Леонид Борисович - ассистент каф. патологической анатомии Ростовского ГМУ, тел.: 8-918-557-96-67.
УДК: 616.28-008.55-08
ПОДХОДЫ К ЛЕЧЕНИЮ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОГО ПАРОКСИЗМАЛЬНОГО ПОЗИЦИОННОГО ГОЛОВОКРУЖЕНИЯ С ПОСЛЕДУЮЩЕЙ РЕАБИЛИТАЦИЕЙ БОЛЬНЫХ
B. А. Воронов1, О. В. Захаренкова1, А. Ф. Барсуков1,
C. В. Левин2, В. И. Бабияк2, В. Н. Тулкин2
APPROACHES TO THE TREATMENT OF BENIGN PAROXYSMAL POSITIONAL VERTIGO WITH SUBSEQUENT REHABILITATION OF PATIENTS
V. A. Voronov, O.V. Zakharenkova, A.F. Barsukov, S.V. Levin, V. I. Babiyak, V. N. Tulkin
1 ФГБУ «Санкт-Петербургский НИИ уха, горла, носа и речи Минздравсоцразвития России»
(Директор - засл. врач РФ, член-корр. РАМН, проф. Ю. К. Янов)
2 ГБОУ ВПО «Северо-Западный медицинский университет им. И. И. Мечникова Минздравсоцразвития России»
(Зав. каф. оториноларингологии - засл. врач РФ, член-корр. РАМН, проф. Ю. К. Янов)
На базе центра «Шум и Головокружение» СЗГМУ им. И. И. Мечникова проведено обследование и лечение 22 пациентов с каналолитиазом. В целях сокращения сроков вестибулярной реабилитации в качестве антигипоксанта применялся препарат цитохром С. После проведения курса лечения во всех случаях отмечены улучшение самочувствия пациентов, отсутствие расстройств равновесия. Купирование вестибулярной дисфункции происходило на 4-5-й день лечения.
Ключевые слова: отоневрология, головокружение, доброкачественное пароксизмальное позиционное головокружение, тест Дикса-Холпайка, позиционное маневрирование, маневр Epley, маневр Lempert, цитохром С. Библиография: 6 источников.
